人细胞融合肝癌疫苗的制备及其融合细胞百分率的检测

手术病人新鲜肝癌组织及部分脾脏，分离纯化、激活B细胞，应用PEG融合肝癌细胞与激活B细胞，经培养灭活制得肿瘤疫苗。同时测定了融合肝癌疫苗的融合率、冻存后复苏活细胞百分率。结果显示，3例融合细胞的融合率分别为66.84%、74.43%、76.55%，融合细胞经DMSO和甘油冻存后复苏活细胞百分率分别为95%、97%。研究表明，人细胞融合肝癌疫苗具有很高的融合率和冻存后复苏活细胞百分率，便于制备及储存，适合临床应用。     

CTLA4-Ig对变应性接触性皮炎小鼠模型的治疗作用

目的 探讨B7／CD28共刺激通路阻断剂CTLA4－Ig对变应性接触性皮炎的作用。方法 建立小鼠二硝基氟苯（DNFB）变应性接触性皮炎模型，以不同剂量的CTLA4－Ig进行静脉注射，通过检测小鼠耳廓肿胀度观察其对DNFB和FITC刺激的反应，并观察CTLA4－Ig的长期疗效，同时对治疗后的小鼠脾细胞进行体外淋巴细胞增殖实验。结果 CTLA4－Ig有明显的治疗作用，DNFB变应性接触性皮炎小鼠经治疗耳廓肿胀抑制率最高达69．7％，而且治疗的小鼠在激发后的14d用DNFB再刺激能产生无应答反应，但对FITC的再刺激表现为耳廓肿胀明显，过继转移CTLA4－Ig治疗小鼠的淋巴细胞能诱导受体鼠对DNFB的刺激产生特异性免疫耐受。结论 应用B7／CD28共刺激通路阻断剂CTLA4－Ig融合蛋白能有效地抑制接触性超敏反应，为临床治疗Ⅳ型变态反应性皮肤病如湿疹等提供一种新的可能的治疗策略。     

肝癌特异性细胞毒 T 淋巴细胞的实验及临床研究

诱导肿瘤特异性细胞毒性Ｔ细胞（ＴＳ－ＣＴＬｓ），观察其体外、体内的抗肿瘤作用及其特异性；评价其抗肝癌术后复发的临床应用价值。方法：用细胞因子体外短期刺激方法提高肝癌细胞的免疫原性，再与肿瘤浸润Ｔ细胞共同培养，辅以ＣＤ２８单抗共刺激，诱导ＴＳ－ＣＴＬｓ，检测其体内外抗肝癌作用及其效应机制；大量扩增后回输患者，观察其免疫学指标的变化并随访其术后复发情况。结果：体外研究表明，肝癌细胞经ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α诱导后ＭＨＣＩ类分子，ＩＣＡＭ－１及Ｂ７分子的表达增高，用此细胞辅以ＣＤ２８单抗刺激诱导产生的ＴＳ－ＣＴＬｓ体现了高度的对自体肝癌的杀伤活性及特异性，其杀伤活性由ＴＣＲ－ＣＤ３复合物、ＣＤ８、ＬＦＡ－１、ＩＣＡＭ－１及ＭＨＣＩ类分子所介导。体内研究的结果表明，ＴＳ－ＣＴＬｓ对ＳＣＩＤ小鼠人肝癌模型具有显著的抑瘤作用。１２例初步临床应用的结果表明，ＴＳ－ＣＴＬ对于提高机体的Ｔ细胞免疫功能，对于预防肝癌术后复发均具有良好作用，值得进一步深入研究和应用。结论：ＴＳ－ＣＴＬｓ作为一种新的肿瘤特异性免疫治疗方法可望进一步提高肝癌和其它实体肿瘤的外科综合治疗水平。     

肝癌细胞膜上转铁蛋白受体和去唾液酸糖蛋白受体数量的变化

采用体外反博（ECP）治疗10例阿尔茨海默型老年痴呆（SDAT）患者，从临床症状、仪器检查及血和脑脊侵液（CSF）中生物活性物质的改变等评价了ECP对SDAT的治疗作用。主要结果：体外反对8周后，SDAT患者的脑SPECT显像显示普遍性脑供血增加；血液超氧化物歧化酶（SOD）活力和强啡肽A1－13含量明显升高；CSF中生长抑素含量、SOD活力等明显增加；而脯氨酸和蛋氨酸浓度均明显下降。上述结果表明，体外反搏对SDAT确有积极的治疗作用．     

Smac在TRAIL诱导人骨肉瘤Saos-2细胞凋亡中的作用

目的:初步研究Smac在TNF相关的凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)诱导的人骨肉瘤Saos-2细胞凋亡中的作用.方法:观察细胞形态变化和以琼脂糖凝胶电泳分析TRAIL作用的Saos-2细胞DNA片段,利用流式细胞术及细胞计数法比较Smac或Bcl-2表达不同的细胞的凋亡程度,同时以Western 印迹半定量检测细胞胞质内Smac表达水平.结果:Saos-2细胞在TRAIL的作用下出现典型的凋亡样改变.在TRAIL作用Saos-2细胞时,Smac在胞质中的含量明显增加.在TRAIL作用24 h后,Smac在Saos-2细胞中过表达,细胞凋亡率由12.7%增加到31.4%.TRAIL作用Saos-2细胞48 h后,转染Bcl-2的细胞与转染空载体的Saos-2细胞相比,凋亡率显著降低(由24%降至15%),且胞质中Smac的表达水平也明显降低.结论:在TRAIL诱导的凋亡中Smac起促进作用,Bcl-2可以通过阻止Smac从线粒体释放到胞质中来抑制细胞凋亡.     

重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体蛋白的鉴定

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)是继TNF、FasL之后发现的具有诱导细胞凋亡能力的细胞因子配体．存在于细胞表面,在多种组织和细胞中广泛表达。人TRAIL由281个氨基酸组成,为Ⅱ型膜糖蛋白．胞外区可被半胱氨酸蛋白酶剪切到体液中．形成相对分子质量为19000     

DEFINITION AND MECHANISM RESEARCH OF NK CELLS AC-TIVATION THROUGH THE CD45 PATHWAY

为鉴定介导ＮＫ细胞激活的表面分子及其作用机制，本研究用一系列粘附分子单抗及配体体外刺激ＮＫ细胞，定量检测ＮＫ细胞ＩＦＮ－γ的分泌；检测了ＮＫ细胞经ＩＬ－２诱导后其异构体的变化及其不同异构体单抗对ＮＫ细胞的刺激作用；以ＣＤ２２α、ＣＤ２２β基因导入Ｂ７８Ｈ１细胞后观察转染细胞对ＮＫ细胞的粘附和刺激效应。结果表明：ＩｇＧ２ａ和ＩｇＧ１亚类ＣＤ４５单抗及其Ｆ（ａｂ）２均可独立刺激ＮＫ细胞释放ＩＦＮ－γ；ＮＫ细胞经ＩＬ－２培养诱导后其表面ＣＤ４５分子异构体的表达呈ＲＯ逐渐增加，而ＲＡ逐渐减少的特征；ＣＤ４５ＲＯ单抗可刺激ＮＫ细胞释放ＩＦＮ－γ；ＣＤ２２α、ＣＤ２２β转染细胞可粘附，但不能刺激ＮＫ细胞激活。结果提示：ＮＫ细胞可经ＣＤ４５ＲＯ途径激活并释放ＩＦＮ－γ，该途径与ＣＤ１６分子无关，ＣＤ４５分子的特异性配体并非既往所报道的ＣＤ２２，尚待进一步鉴定     

肝细胞癌变时神经节苷脂对转铁蛋白受体介导的内吞作用的影响

目的：研究肝细胞癌变时神经节苷脂ＧＭ３和ＧＤ３的变化对转铁蛋白受体介导的内吞作用的影响及其在促进肝癌生长中所起的作用。方法：采用放射性核素标记配体受体结合法，及洗脱法测定转铁蛋白与其受体的结合以及转铁蛋白受体介导的内吞作用；用ＭＴＴ比色法测定细胞生长情况。结果：（１）ＧＭ３抑制肝癌细胞的生长，ＧＤ３则促进肝癌细胞的生长；（２）这种影响与转铁蛋白对细胞的作用直接相关；（３）此相关作用不是通过影响转铁蛋白与其受体的结合，而是通过影响转铁蛋白受体介导的内吞作用而实现的。结论：肝细胞癌变时神经节苷脂组成的变化能明显加快转铁蛋白受体介导的内吞作用，增加肝癌细胞对转铁蛋白的摄取，从而促进肝癌细胞的生长与增殖。     

抗CD20单克隆抗体联合CHOP化疗方案治疗人B细胞淋巴瘤的实验观察

目的:以人B细胞淋巴瘤裸鼠皮下移植模型为基础,研究抗CD20单克隆抗体体内、体外活性,评价该抗体联合CHOP化疗方案治疗人B细胞淋巴瘤的有效性。方法:体内实验:建立人B细胞淋巴瘤裸鼠皮下移植模型。52只荷瘤鼠随机分为5组进行实验。用TUNEL法检测肿瘤凋亡,并绘制肿瘤体积曲线和裸鼠体质量曲线。体外实验:用CellTiter96 AQueous非同位素细胞增殖试验试剂盒检测抗CD20单克隆抗体、化疗和联合化疗对Raji细胞体外杀伤作用,并绘制剂量反应曲线。结果:体内实验:鼠抗人CD20单抗组及嵌合CD20抗体组均出现大量肿瘤细胞凋亡。联合治疗组疗效最佳,与其他组相比差异有统计学意义,P<0.05。化疗组及联合治疗组体质量下降明显,与其他组相比差异有统计学意义,P<0.05。体外实验:发现鼠抗人CD20单克隆抗体及嵌合型CD20抗体均可增加Raji细胞对化疗药物的细胞毒敏感性。结论:CD20单克隆抗体对B细胞淋巴瘤具有明显的抑制作用,可以诱发大面积肿瘤细胞凋亡,能提高肿瘤对化疗药物的细胞毒敏感性,且较常规化疗毒副反应小。