HPLC-ESI-MS法测定Beagle犬血浆中豆腐果苷浓度

目的：建立灵敏、准确的测定Beagle犬血浆中豆腐果苷浓度的液相色谱-电喷雾离子化-质谱联用（HPLC- ESI-MS）的分析方法，并将其应用于Beagle犬的药动学研究。方法：应用正丁醇作为提取剂的液-液萃取方法。色谱柱 为Luna C18 (150 mm×2.00 mm，3.5 μm)，流动相为乙腈和500 μmol?L-1的氯化铵，梯度洗脱程序。四极杆质谱，负 离子选择性离子检测方式，检测离子豆腐果苷和内标岩白菜素[M+Cl]-m/z分别为319.00 和363.05。结果：豆腐果苷的 最低定量限为5 ng?mL-1，本方法在5~2 500 ng?mL-1浓度范围内线性关系良好。被分析物的批内及批间变异在10.0 %以 内。豆腐果苷血浆样品在存储、制备和分析过程中稳定性良好。结论：本方法可以准确用来进行豆腐果苷临床前药动学 的定性、定量研究，并已经成功地应用于Beagle犬的药动学研究。     

HPLC-ESI-MS法测定Beagle犬血浆中豆腐果苷浓度

目的：建立灵敏、准确的测定Beagle犬血浆中豆腐果苷浓度的液相色谱-电喷雾离子化-质谱联用（HPLC- ESI-MS）的分析方法,并将其应用于Beagle犬的药动学研究。方法：应用正丁醇作为提取剂的液-液萃取方法。色谱柱 为Luna C18 (150 mm×2.00 mm,3.5 μm),流动相为乙腈和500 μmol?L-1的氯化铵,梯度洗脱程序。四极杆质谱,负 离子选择性离子检测方式,检测离子豆腐果苷和内标岩白菜素[M+Cl]-m/z分别为319.00 和363.05。结果：豆腐果苷的 最低定量限为5 ng?mL-1,本方法在5~2 500 ng?mL-1浓度范围内线性关系良好。被分析物的批内及批间变异在10.0 %以 内。豆腐果苷血浆样品在存储、制备和分析过程中稳定性良好。结论：本方法可以准确用来进行豆腐果苷临床前药动学 的定性、定量研究,并已经成功地应用于Beagle犬的药动学研究。     

HPLC-ESI-MS法测定Beagle犬血浆中豆腐果苷浓度

目的：建立灵敏、准确的测定Beagle犬血浆中豆腐果苷浓度的液相色谱-电喷雾离子化-质谱联用（HPLC- ESI-MS）的分析方法，并将其应用于Beagle犬的药动学研究。方法：应用正丁醇作为提取剂的液-液萃取方法。色谱柱 为Luna C18 (150 mm×2.00 mm，3.5 μm)，流动相为乙腈和500 μmol?L-1的氯化铵，梯度洗脱程序。四极杆质谱，负 离子选择性离子检测方式，检测离子豆腐果苷和内标岩白菜素[M+Cl]-m/z分别为319.00 和363.05。结果：豆腐果苷的 最低定量限为5 ng?mL-1，本方法在5~2 500 ng?mL-1浓度范围内线性关系良好。被分析物的批内及批间变异在10.0 %以 内。豆腐果苷血浆样品在存储、制备和分析过程中稳定性良好。结论：本方法可以准确用来进行豆腐果苷临床前药动学 的定性、定量研究，并已经成功地应用于Beagle犬的药动学研究。     

液相色谱-串联质谱法测定Beagle犬血浆中升麻苷H-1的浓度

目的:建立液相色谱-串联质谱的方法测定Beagle犬血浆中升麻苷H-1的浓度。方法:采用20(S)-人参皂苷Rg3为内标,血浆样品经液-液萃取后,以甲醇和水为流动相,梯度洗脱进行分离。通过液相色谱-串联质谱法以多反应监测(MRM)方式检测。用于定量的离子反应分别为m/z615.5→369.6(升麻苷H-1)和783.5→161.1(内标人参皂苷Rg3)。结果:血浆中升麻苷H-1的线性范围为0.5～1000 ng·mL-1,定量下限为0.5 ng·mL-1。在升麻苷H-1浓度为2.0,50,500ng·mL-1时的提取回收率分别为90.4%,94.0%,89.0%。方法的日内和日间精密度(RSD)分别为5.9%,4.7%,3.8%和10.8%,6.3%,7.8%。结论:该方法灵敏、准确,重复性好,可用于Beagle犬血浆中升麻苷H-1的浓度测定。     

LC-MS/MS法测定比格犬血浆中匹莫范色林浓度及药代动力学研究

目的建立一种高效、灵敏的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法测定匹莫范色林在比格犬血浆中的浓度并应用于药代动力学研究。方法血浆样品用甲基叔丁基醚(MTBE)液液萃取预处理,使用Agilent Eclipse XDB-C 18(4.6 mm×150 mm,3.5μm)色谱柱进行分离,流动相为乙腈(含0.1%甲酸)-水(含5%乙腈,0.1%甲酸)梯度洗脱,流速为1.2 mL·min-1,分流比为1∶1,质谱检测用电喷雾离子(ESI)源,正离子模式下采用多反应监测(MRM)模式,分析时间为4.5 min。使用WinNonlin 6.1软件的NCA模块计算药动学参数。结果匹莫范色林在0.05~20 ng·mL-1浓度范围内线性关系良好,定量下限为0.05 ng·mL-1,批内和批间精密度良好CV均小于7.1%(LLOQ均小于18.4%),准确度RE均在-6.6%~12.7%之内(LLOQ均在3.8%~19.9%)。结论本方法高效、灵敏、准确,成功用于比格犬血浆中匹莫范色林浓度的测定及其药代动力学研究。     

UPLC-MS/MS法测定大鼠血浆中的豆腐果苷

目的 建立超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定大鼠血浆中的豆腐果苷.方法 蛋白沉淀法分离血浆样品;采用BEH C18色谱柱,0.1％甲酸-乙腈-水为流动相,梯度洗脱,离子化方式为负离子电喷雾,多反应监测,药物的监测离子对为m/z329→121.结果 豆腐果苷浓度在2～1000 ng/mL范围内线性关系良好,日内及日间精密度均小于15％,基质效应小于15％.结论本研究建立的方法 可应用于豆腐果苷药动学和生物利用度研究.     

反相高效液相色谱法测定犬血浆中豆腐果苷的质量浓度

目的建立测定犬血浆中豆腐果苷质量浓度的反相高效液相色谱（RP—HPKC）法。方法以0．05mol／LNaH：PO。缓冲液（调pH=3．5）-甲醇（77：13）为流动相,犬血浆样品经乙腈沉淀蛋白萃取后,采用RP—HPLC法测定犬血浆中豆腐果苷的质量浓度。结果犬血浆中豆腐果苷质量浓度的线性范围为0．025—5．000μg／mL,平均相对回收率为88．16％-97．56％,日内和日间精密度的RSD均小于12．38％,豆腐果苷的检测限为10ng／mL。结论所建立的检测方法简便、快速、灵敏度高,适用于豆腐果苷的药代动力学研究。     

以氘代利伐沙班为内标物的UHPLC-MS/MS法测定Beagle犬血浆中利伐沙班及其药动学研究

摘要： 目的 建立测定Beagle犬血浆中利伐沙班浓度的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS) 法。 方法 以甲基叔丁基醚：二氯甲烷(2:1)沉淀蛋白处理血浆样品,D4-利伐沙班为内标, 采用 Thermo BDS HYPERSI L C18色谱柱（100×4.6 mm,2.4 μm）;流动相：A相为甲醇溶液（含0.015 mol/L甲酸铵和0.1%甲酸）; B相为水/甲醇(90/10)溶液（含0.015 mol/L甲酸铵和0.1%甲酸）,梯度洗脱。质谱条件为电喷雾离子源,正离子模式检测,扫描方式为多反应离子监测。用于定量检测的离子反应分别为 [M+H]+ m/z 436@30eV→m/z144.900（利伐沙班）和 [M+H]+ m/z 440@24eV→m/z144.900（D4-利伐沙班）。结果 血浆利伐沙班浓度在0.5-400 ng·mL-1范围内线性关系良好（r=0.9961）,定量下限为0.5ng/ml,批内批间精密度均<13%,提取回收率89.4%-96.5%,基质效应94.7%-97.2%。血浆样品冻存（-80℃）33d稳定性良好,反复冻融3次及提取后室温放置12h条件下,样品浓度均无显著变化。将本法应用于Beagle犬口服给予利伐沙班片后的药动学考察,主要药动学参数如下：tmax(2.11±1.133) h,Cmax(179.3±50.65) ng/ml, t1/2(10.05±4.34) h,AUC0-t(1161.6±339.74) h·ng·ml-1。结论 试验结果表明本法操作简单,灵敏度高,重现性良好,结果准确可靠,可用于测定Beagle犬血浆中利伐沙班浓度和其体内的药动学研究。     

UPLC-MS/MS法测定大鼠血浆中黄芩苷的浓度

目的建立UPLC-MS/MS法测定大鼠血浆中黄芩苷的浓度,并初步研究大鼠尾静脉注射黄芩苷纳米结晶后药动学特征。方法采用液液萃取法提取药物,以地西泮为内标,色谱柱为C8柱(100 mm×2.0mm,2.2μm),0.2%甲酸水溶液-甲醇为流动相,流速为0.4 mL·min-1。样品在三级四极杆串联质谱中经ESI源离子化后以多反应离子监测方式测定。结果黄芩苷的线性范围为5⁵ 000 ng·mL-1,定量下限为5 ng·mL-1,平均方法回收率在87.4%5 000 ng·mL-1,定量下限为5 ng·mL-1,平均方法回收率在87.4%¹00.9%,日内、日间变异系数均<15%。结论方法灵敏、准确、快速、专属性强,适用于黄芩苷的血药浓度测定和药物代谢动力学研究。     

RP-HPLC法测定Beagle犬血浆中的烟酸浓度及药动学研究

目的建立反相高效液相色谱法测定犬血浆中烟酸的浓度,并应用到烟酸缓释片在Beagle犬体内的药动学研究。方法采用高氯酸沉淀蛋白处理血浆样本;色谱条件:Megres C18柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相:甲醇-10mmol.L-1磷酸二氢钾缓冲溶液(3∶97,V/V),柱温:12℃,流速:0.8mL.min-1,检测波长:263nm;比格犬灌胃给药500mg烟酸缓释片。结果线性范围为0.200~35.0μg.mL-1(r≥0.9996),检测限为50ng.mL-1,方法回收率为98.4%;烟酸缓释片表现出明显的缓释效果。结论方法操作简单、专属灵敏、重现性好,适用于Beagle犬体内烟酸的药动学研究。     

液相色谱-串联质谱法测定比格犬血浆中淫羊藿苷元

目的:建立了测定比格犬血浆中淫羊藿苷元浓度的液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)。方法:血浆样品经酶水解,用液-液萃取法,以乙酸乙酯提取后,以乙腈-5%乙酸(70∶30)为流动相,用Zorbax C8柱分离,流速为0.6 mL.min-1,通过电喷雾离子化四极杆串联质谱,以多反应监测方式(MRM)进行检测。用于定量分析的离子分别为m/z369/313(淫羊藿苷元)和m/z331/315(麦黄酮,内标)。结果:淫羊藿苷元在比格犬血浆浓度测定方法的线性范围为2.5~250 ng.mL-1;日内、日间精密度(RSD)均小于13.3%,准确度(RE)在±5.5%之内。在临床前药动学研究中,应用此法测试了比格犬口服给药后的血药浓度。结论:本方法灵敏度高、专属性强,适合于淫羊藿苷元的临床前药动学研究。     

LC-IT-MS/MS法测定大鼠体内商陆皂苷甲浓度及其药动学研究

目的:建立测定SD大鼠体内商陆皂苷甲(EsA)血药浓度的高效液相-离子阱串联质谱方法;研究EsA在SD大鼠体内的药动学特征。方法:采用Diamonsil C18色谱柱(50 mm×2.1 mm,3μm),流动相为甲醇-水(含0.1%冰醋酸)(70∶30),流速为0.2 mL.min-1,采用ESI源,正离子检测模式,以人参皂苷Rg1为内标,血浆样品经正丁醇液液萃取后进样分析,测定大鼠血浆中EsA浓度,BAPP软件计算主要药动学参数。结果:在选定的色谱条件下,EsA和内标分离良好,没有内源性物质干扰。EsA在5～500 ng.mL-1范围内线性良好(r=0.998 3),最低定量限为5 ng.mL-1,提取回收率大于70%,日内和日间精密度小于10%。SD大鼠灌胃给予EsA 15 mg.kg-1后,其主要药动学参数AUC0～24 h为(1 013.85±82.73)ng.h.mL-1,AUC0-∞为(1 076.31±92.70)ng.h.mL-1,t1/2为(6.16±0.63)h,Cmax为(218.80±38.33)ng.mL-1,Tmax为(0.8±0.1)h。结论:本方法简便快捷、灵敏准确;本研究所获得的EsA在SD大鼠体内的药动学参数为EsA的临床应用提供了依据。     

胆碱非诺贝酸缓释胶囊在犬体内的药动学研究

目的 采用HPLC法测定Beagle犬血浆中非诺贝酸的浓度,初步研究胆碱非诺贝酸缓释胶囊在犬体内的药动学特征.方法 用乙腈直接沉淀血浆蛋白,以萘丁美酮为内标.采用Hypersil BDS C18色谱柱(200 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.2％磷酸(50∶50),检测波长为286 nm.6只Beagle犬单次口服胆碱非诺贝酸缓释胶囊135 mg,于后肢静脉取血,采用HPLC测定非诺贝酸的血药浓度,并用DAS2.0程序计算药动学参数.结果 非诺贝酸的血药浓度0.20 ～ 40.00 μg· mL-1与峰面积比的线性关系良好(r=0.999);相对回收率为88.22％ ～ 98.94％,绝对回收率为57.73％～58.65％;批内RSD＜6.76％,批间RSD＜5.05％.非诺贝酸在犬体内的药动学过程符合开放二房室模型,平均主要药动学参数t1/2α、t1/2B、V1/F、CL/F和AUC(0-t)分别为1.57h、13.25 h、8.28 L、1.12 L·h-1和127.34 μg·h·mL-1.结论 所用方法简便、灵敏、准确,适合于胆碱非诺贝酸缓释胶囊的药动学研究.非诺贝酸缓释胶囊在Beagle犬体内吸收和消除较慢,具有缓释特征.     

左旋氨氯地平片在Beagle犬体内的药动学研究

目的建立一种快速、灵敏测定Beagle犬血浆中左旋氨氯地平浓度的高效液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法,研究左旋氨氯地平片在Beagle犬体内的药动学。方法色谱条件采用Phenomenex Synergi Hydro-RP C18色谱柱(30 mm×2mm,4μm);流动相:0.1%甲酸水–0.1%甲酸甲醇,梯度洗脱;体积流量:0.6 m L/min;柱温:室温;进样量:20μL。质谱条件电喷雾离子源(ESI);多级反应监测(MRM);正离子模式;喷雾气温度(TEM):400℃;雾化气(GS1):344.95k Pa;加热辅助气(GS2):413.7 k Pa;气帘气(CUR):206.85 k Pa;碰撞气(CAD):68.95 k Pa;离子喷雾电压(IS):5 500V;扫描时间:200 ms;用于定量分析的MRM离子对分别为左旋氨氯地平m/z 409.0→238.1,内标硝苯地平m/z 347.0→315.2、347.0→271.3。6只Beagle犬灌服6.8 mg/kg苯磺酸左旋氨氯地平片后,以硝苯地平为内标,血浆样品经醋酸乙酯萃取。绘制左旋氨氯地平的药–时曲线,计算主要药动学参数。结果左旋氨氯地平在0.05~20.00 ng/m L线性关系良好,定量下限为0.05 ng/m L。批内、批间精密度RSD值均小于10%,平均提取回收率为89.3%~93.6%,基质效应为99.9%~102.7%。主要药动学参数Cmax=(6.47±0.72)μg/L,tmax=(2.3±0.5)h,t1/2=(11.0±4.6)h,MRT=(15.6±6.8)h,AUC0-t=(68.81±19.29)h·μg/L,AUC0-∞=(71.58±20.35)h·μg/L。结论本法特异、灵敏、准确、可靠,可用于Beagle犬血浆中左旋氨氯地平的药物浓度测定及左旋氨氯地平片药动力学研究。     

LC-MS/MS法测定Beagle犬血浆中曲札茋苷及其药动学研究

目的:建立LC-MS/MS法测定Beagle犬血浆中曲札茋苷的浓度,并用该方法研究其在Beagle犬体内的药动学特征.方法:以虎杖苷为内标,血浆样品采用甲醇沉淀的方式分离蛋白并离心取上清进样,色谱柱为Kromasil?C18柱(150 mm×2.1 mm).以10 mmol·L-1甲酸铵水溶液和乙腈为流动相,梯度洗脱,...     

人血浆中伏立康唑的LC-MS-MS法测定方法学研究

目的:建立测定人血浆中伏立康唑浓度的液相色谱-串联质谱联用法。方法:待测血浆0.5 mL经乙醚-二氯甲烷萃取,以甲醇-10 mmo.lL-1醋酸铵水溶液(80∶20)为流动相,流速为1.0 mL.min-1,液相色谱-串联质谱联用法多反应离子检测,正离子模式,用于定量分析的离子分别是伏立康唑m/z351.0→127.0[M H ]和地西泮m/z285.8→193.3[M H ]。结果:血浆中无干扰测定的内源性物质,每个样品分析时间小于5 min,线性范围为20.0~4 000 ng.mL-1,定量下限为20.0 ng.mL-1,批内、批间精密度均小于10%,提取回收率大于85%。结论:该法操作快速、简单、准确、灵敏度高,适用于临床药动学研究。     

两种长效曲普瑞林注射剂在Beagle犬体内的药动学研究

目的 研究两种长效曲普瑞林注射剂(达必佳3.75 mg及达菲林3.75 mg)在Beagle犬体内的药动学参数.方法 10条健康雄性Beagle犬随机分成2组,肌注达必佳或达菲林,采用经验证的LC-MS/MS法测定Beagle犬血浆中曲普瑞林浓度.使用DAS 3.2.2软件计算药动学参数.结果 达必佳和达菲林主要药动学参数Cmax为(11.95±2.127)与(27.93±8.752) ng/mL、Tmax为(1.2±0.4)与(0.7±0.3)h、T12为(244.7±99.25)与(239.6±87.50)h、AUC(0-t)为(758.8±111.9)与(492.3±125.9) ng·h·mL-1、AUC(0-x)为(778.9±101.3)与(515.6±125.3) ng·h·mL-1.结论 可采用LC-MS/MS法检测达必佳和达菲林的Beagle犬体内药动学参数.两药在Cmax、AUC(0-t)与AUC(0-x)有差异,但两者血药浓度维持在最低定量限(LLOQ)以上的时间均达到28d以上.     

LC-MS/MS同时测定曲美布汀和活性代谢物在Beagle犬体内的血药浓度及其药代动力学研究

目的:建立灵敏稳定的HPLC-MS/MS方法,用于测定Beagle犬血浆中的曲美布汀(TM)及N-去甲基曲美布汀(N-TM)含量,并研究曲美布汀片剂在健康Beagle犬体内的药代动力学。方法:样品处理采用液液萃取方法,选择西布曲明(IS)为内标。进行HPLC-MS/MS分析,采用ESI源,MRM离子检测模式,TM、N-TM和IS的检测离子对分别为m/z 388.2→343.2,m/z 374.2→195.2,m/z 280.3→125.1。单剂量给药300 mg后,测定犬血浆中TM及N-TM的浓度,并计算药代动力学参数。结果:血浆中TM及N-TM检测的线性范围分别为1～500 ng.mL-1(r=0.9959),0.2～100 ng.mL-1(r=0.9951),萃取回收率均高于85%,日内、日间RSD均小于10%。犬血浆中TM及N-TM Cmax分别为(192±32.1)ng.mL-1和(47.1±22.6)ng.mL-1,Tmax均为(0.667±0.258)h和(1.08±0.492)h,T1/2分别为为(10.8±4.27)h和(7.06±2.53)h。结论:该方法可简便、高效地测定犬血浆中TM及N-TM浓度,并应用于药代动力学研究。     

两种注射用盐酸尼非卡兰在Beagle犬体内的药动学比较

目的 比较两种注射用盐酸尼非卡兰在Beagle犬体内的药动学特征.方法 采用随机、交叉、自身对照的试验设计,将18只Beagle犬分别先后单次静脉注射两种盐酸尼非卡兰3.125 mg·kg-1,用HPLC法测定其血药浓度,用WinNonLin 6.3软件计算药动学参数并进行比较.结果 分别先后单次静脉注射相同剂量的盐酸尼非卡兰供试和参比制剂3.125 mg·kg-1后,犬血浆中尼非卡兰的AUC0→t分别为118.01±15.74、116.39 +47.66 μg·mL-1 ·min,AUC0-∞分别为119.84±15.40、118.50±46.80 μg· mL-·min,Cmax分别为5.31±2.28、4.45±2.27 μg· mL-1,Tmax分别为1.67±1.63、1.00 min,t1/2分别为34.90±4.53、34.76±9.77 min.结论 两种注射用盐酸尼非卡兰在Beagle犬体内的药动学过程无显著差异.     

LC/MS联用法测定人血浆中右美沙芬的浓度及其药动学研究

目的:建立以液/质联用法测定人血浆中右美沙芬浓度的方法,并研究其在健康人体的药动学。方法:以曲马多为内标,血浆样品经液-液萃取后,采用Zorbax Extend-C18色谱柱进行分离,通过Q TRAPTM四极杆-线性离子阱质谱仪,以多反应检测方式进行测定。结果:右美沙芬的线性范围为0.05~10.0ng.mL-1(r=0.999 5);平均相对回收率在97.7%~99.5%之间;日内、日间精密度的RSD均小于6.8%,右美沙芬的定量下限为0.05ng.mL-1。结论:本法快速、简便、准确、灵敏,适用于右美沙芬的人体药动学研究。