以氘代利伐沙班为内标物的UHPLC-MS/MS法测定Beagle犬血浆中利伐沙班及其药动学研究

摘要： 目的 建立测定Beagle犬血浆中利伐沙班浓度的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS) 法。 方法 以甲基叔丁基醚：二氯甲烷(2:1)沉淀蛋白处理血浆样品，D4-利伐沙班为内标, 采用 Thermo BDS HYPERSI L C18色谱柱（100×4.6 mm，2.4 μm）；流动相：A相为甲醇溶液（含0.015 mol/L甲酸铵和0.1%甲酸）; B相为水/甲醇(90/10)溶液（含0.015 mol/L甲酸铵和0.1%甲酸），梯度洗脱。质谱条件为电喷雾离子源，正离子模式检测，扫描方式为多反应离子监测。用于定量检测的离子反应分别为 M+H]+ m/z 436@30eV→m/z144.900（利伐沙班）和 M+H]+ m/z 440@24eV→m/z144.900（D4-利伐沙班）。结果 血浆利伐沙班浓度在0.5-400 ng·mL-1范围内线性关系良好（r=0.9961），定量下限为0.5ng/ml，批内批间精密度均<13%，提取回收率89.4%-96.5%，基质效应94.7%-97.2%。血浆样品冻存（-80℃）33d稳定性良好，反复冻融3次及提取后室温放置12h条件下，样品浓度均无显著变化。将本法应用于Beagle犬口服给予利伐沙班片后的药动学考察，主要药动学参数如下：tmax(2.11±1.133) h，Cmax(179.3±50.65) ng/ml, t1/2(10.05±4.34) h，AUC0-t(1161.6±339.74) h·ng·ml-1。结论 试验结果表明本法操作简单，灵敏度高，重现性良好，结果准确可靠，可用于测定Beagle犬血浆中利伐沙班浓度和其体内的药动学研究。

Determination of Rivaroxaban in Beagle Dog Plasma by UHPLC-MS/MS with Deuterium Substituted Rivaroxaban as Internal Standard and Its Application in Pharmacokinetics Studies