二甲基亚硝胺诱发大鼠肝纤维化发生机理的研究

目的:用二甲基亚硝胺(Dimethylnitrosamine,DMN)造模对肝纤维化发生机制进行探讨,为临床诊断和治疗提供理论依据。方法:采用电镜技术、免疫组织化学技术对肝纤维化形成过程中肝星状细胞的变化进行动态观察,并观察DMN造模后7、14、21、28天的肝重、体重及肝体比。结果:肝纤维化模型大鼠肝星状细胞可被激活、转化为成纤维细胞。随造模时间延长,大鼠肝重在注射DMN后第7天有明显的增加,随后逐渐减轻,到第28天达到最小。结论:肝星状细胞激活、转化在肝纤维化发生机制中起重要作用。     

草苁蓉及氧化苦参碱治疗肝纤维化的实验研究

目的:观察草苁蓉(BR)、氧化苦参碱(OM)治疗大鼠肝纤维化的疗效,为临床治疗提供理论依据.方法:二甲基亚硝胺(DMN)腹腔注射制作肝纤维化的大鼠模型,观察BR、OM治疗后大鼠血清ALT、PCⅢ和CⅣ的变化情况及肝组织的病理学改变.结果:BR、OM可明显提高肝纤维化模型大鼠血清ALT,降低模型大鼠血清PCⅢ和CⅣ(BR、OM组与模型组比较:P＜0.05);另外BR、OM组大鼠胶原纤维面密度和肝纤维化分级与模型组比明显减轻P＜0.05.结论:BR、OM对DMN造模的大鼠肝纤维化有治疗作用.     

桃核参术汤对大鼠肝纤维化形成过程中AngⅡ1型受体mRNA表达的影响

目的通过建立二甲基亚硝胺(DMN)诱导大鼠肝纤维化模型,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肾素-血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)1型受体(AT1R)mRNA表达在大鼠肝纤维化形成过程中的动态变化,观察桃核参术汤对DMN致大鼠肝纤维化形成的干预作用。方法采用DMN诱导的大鼠肝纤维化模型,给予大鼠1%的DMN(1mL/kg体重,1次/d,每周连续3d,共4周)腹腔注射。防治组同时用桃核参术汤干预治疗。模型组和防治组在开始注射DMN后的第14天、第28天、第42天处死动物,取肝组织备用。用RT-PCR法检测AT1RmRNA的表达变化。结果与各模型组比较,防治组大鼠肝组织的AT1RmRNA表达水平均显著降低,与模型组比较,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论桃核参术汤可以降低DMN大鼠肝组织的AT1RmRNA表达水平。     

核糖核酸抗肝纤维化的作用

腹腔注射二甲基亚硝胺(DMN)诱发大鼠肝纤维化,分别用国产RNA(4mg/kg)和C_0Q_(10)(2.5mg/kg)治疗,另设正常对照和病理对照组。治疗后30、60和90天活杀,作血清酶学、氨基酸检测,胶原纤维定量及电镜检查,结果表明RNA和C_0Q_(10)治疗组AST,γ-GT均在正常范围,A/G比值与病理对照组同期比较明显降低(P<0.01),RNA组ALT,MAO和ANG明显下降(P<0.01),血清氨基酸水平升幅较小(P<0.01),光镜检查也显示RNA治疗组肝细胞变性坏死程度,以及胶原纤维定量代表的肝纤维化程度都比较轻,有显著意义。电镜检查从超微结构水平也证实了上述结果。RNA有降酶保肝和抗肝纤维化的作用。     

益气活血解毒化痰方对DMN诱导的大鼠肝纤维化的预防和治疗

目的观察益气活血解毒化痰方对二甲基亚硝胺(DMN)诱导的大鼠肝纤维化预防和治疗作用.方法 DMN诱导大鼠肝纤维化,分别于造模初及结束时灌服益气活血解毒化痰方,以重组人干扰素α2b肌肉注射对照.90d后测定血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)活性,总胆红素(TBil)、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)含量,放射免疫分析法测定层粘连蛋白(Laminin,LN)、Ⅳ型胶原(collagen TypeⅣ,Ⅳ-C)、透明质酸(Hyaluronic Acid,HA)、Ⅲ型前胶原(Procollagen Type Ⅲ,PC Ⅲ)含量,同时苏木素-伊红(HE)染色及苦味酸-天狼星红染色,光镜下观察肝细胞损伤及胶原纤维增生程度.结果益气活血解毒化痰方预防性给药,能明显降低DMN诱导肝纤维化大鼠AST、ALT活性及TBil含量(P＜0.05),提高TP、Alb含量(P＜0.05),降低LN含量(P＜0.05);造模结束后治疗性给药,明显降低Ⅳ-C、HA含量(P＜0.05);预防及治疗给药均改善肝细胞损伤及胶原纤维增生程度,预防性给药明显降低纤维化计分(P＜0.05).结论预防性及治疗性服用益气活血解毒化痰方,均抑制DMN诱导的大鼠肝纤维化,而预防性给药能更好地阻止肝纤维化的形成和发展.     

黄芪甲苷抗二甲基亚硝胺诱导肝纤维化大鼠效应研究

目的探讨黄芪甲苷对二甲基亚硝胺(Dimethylnitrosamine,DMN)诱导肝纤维化大鼠模型的作用。方法选取27只雄性Wistar大鼠,随机分为正常组、模型组和黄芪甲苷组。模型组和黄芪甲苷组大鼠,采用腹腔注射DMN诱导肝纤维化模型,持续4周。于造模第3周开始,黄芪甲苷组在继续造模的同时予以黄芪甲苷干预,正常组和模型组给于等容量蒸馏水灌胃。4周末(即药物干预两周)处死全部大鼠,观察各组大鼠一般情况、肝组织病理学;检测各组大鼠血清肝功能水平、肝组织中羟脯氨酸(Hydroxypro鄄line,Hyp)含量;免疫组化法检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达情况。结果与正常组比较,模型组肝脏明显缩小,组织炎细胞浸润增加,胶原沉积明显增多,肝功能指标明显异常(P<0.01),提示纤维化形成。与模型组比较,黄芪甲苷可以显著改善肝脏病理,减轻肝脏胶原沉积及肝脏Hyp含量,降低血清ALT、AST、GGT水平及TBil含量,升高ALB含量,显著抑制肝组织α-SMA蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。结论黄芪甲苷具有显著保肝降酶抗肝纤维化形成作用,其机制可能跟抑制肝星状细胞的活化相关。     

吡咯烷二硫代氨基甲酸酯对肝纤维化大鼠肝组织核转录因子-κB表达的影响及意义

目的探讨吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)对二甲基亚硝胺(DMN)所致肝纤维化大鼠肝组织中核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响及其意义。方法雄性SD大鼠38只,随机分为正常对照组、DMN模型组和PDTC抑制组,DMN模型组和PDTC抑制组再各自随机分为2周及4周组,并腹腔注射DMN诱导大鼠肝纤维化模型,PDTC抑制组造模同时给予PDTC灌胃。应用化学发光凝胶电泳迁移率实验法检测肝组织NF-κB p65活性;采用实时定量聚合酶链反应法检测肝组织NF-κB p65 mRNA的表达;行苏木精-伊红染色光镜观察肝组织形态学改变;胶原纤维染色比较各组胶原面积。结果 DMN模型组和PDTC抑制组NF-κB p65活性及其mRNA表达均显著高于正常对照组(P<0.01),且随着时间的延长,4周组高于2周组(P<0.01,0.05)。与正常对照组比较,DMN模型组和PDTC抑制组均可见肝细胞炎症及明显胶原染色(P<0.01),且随着时间的延长,4周组肝细胞炎症及胶原染色强度重于或高于2周组(P<0.01,0.05)。同期比较PDTC抑制组在2周及4周时NF-κB p65活性及其mRNA表达均显著低于DMN模型组(P<0.01,0.05),胶原面积亦小于DMN模型组(P<0.01,0.05)。NF-κB p65活性、NF-κB p65 mRNA表达与大鼠肝组织胶原面积三者间呈正相关(r=0.747,0.658,0.844,P<0.01)。结论 NF-κB与大鼠肝纤维化密切相关;PDTC可能通过抑制NF-κB活性及其mRNA表达产生抗肝纤维化作用。     

三参提取物抗大鼠肝纤维化作用的研究

目的：研究三参提取物灌胃给药对大鼠肝纤维化的预防和治疗作用。方法：采用皮下注射四氯化碳（CCl4）和腹腔注射二甲基亚硝胺（DMN）诱导的2种大鼠肝纤维化模型,观察三参提取物对大鼠肝纤维化的影响。结果：三参提取物对2种肝纤维化大鼠有升高血清和肝脏中白蛋白（ALB）含量,降低血清中Ⅳ型胶原、总胆红素（TBiL）和肝脏中Hyp、丙二醛（MDA）含量,改善肝细胞损伤程度及肝纤维化、降低肝门静脉血压等作用。结论：三参提取物具有抗COL和DMN大鼠肝纤维化的作用,提示临床上可用于防治肝纤维化。     

肝纤维化形成与血清HA、LN、Ⅳ型胶原相关性的实验研究

目的 :研究肝纤维化形成过程中形态学与血清学的相关性。方法 :取雄性Wistar大鼠 ,随机分成 5组 ,即对照组和 4个中毒组 ,中毒组腹腔注射 DMN( 1 0 μl/kg) 1周连续注药 3d,持续 4周 ,制作大鼠的肝纤维化模型 ;对照组注射同样剂量的生理盐水。大鼠分别在 7、1 4、2 1、2 8d心脏取血 ,用 ELISA法测定在肝纤维化形成过程中血清 HA、LN、 型胶原动态变化。取其肝脏 ,动态观察在肝纤维化形成过程中的形态学变化 ,并对血清学与形态学进行相关分析。结果 :随造模时间的延长 ,DMN模型组大鼠 HA、LN和 型胶原的含量随时间的增加而增加 ,并且其含量间有显著性差异 ,形态学观察随造模时间的延长DMN模型组大鼠肝纤维化逐渐形成并加重。结论 :肝纤维化形成过程中血清 HA、LN、 型胶原动态变化与形态学的变化呈正相关     

HG颗粒对肝纤维化大鼠肝脏胶原纤维及羟脯氨酸含量的影响

目的:研究HG颗粒对二甲基亚硝胺(DMN)致肝纤维化大鼠肝脏胶原纤维及羟脯氨酸含量的影响.方法:80只SD大鼠,除正常对照组10只外,其余大鼠均腹腔注射DMN(2 mL/kg)3周,建立肝纤维化大鼠模型,存活动物按性别、体质量随机分为5组,分别给予蒸馏水或药物灌胃治疗.正常对照组:蒸馏水0.1 mL/kg;模型对照组:蒸馏水0.1 mL/kg;HG颗粒高、中、低3种剂量组:6 g、3 g、1.5 g生药/kg;复方鳖甲软肝片组:1 g/kg,1次/d,连续4周.后处死动物,取左叶肝脏检测大鼠肝脏胶原纤维及羟脯氨酸含量.结果:肝纤维化模型大鼠肝脏胶原纤维及羟脯氨酸含量均明显增高,HG颗粒治疗后有明显缓解.结论:HG颗粒对DMN肝纤维化模型大鼠具有显著的治疗作用.     

抗纤合剂抗肝纤维化的动物实验

以柴胡疏肝散加味的抗纤合剂具有清热解毒、疏肝解郁、利水活血,提高白蛋白的作用。研究抗纤合剂对SD大鼠DMN二甲硝胺模型的病理组织学,透明质酸及肝功能的影响。抗纤合剂能减轻DMN二甲硝胺模型的肝纤维化程度,降低血清透明质酸的浓度。抗纤合剂在DMN二甲硝胺模型的SD大鼠实验中抗大鼠肝纤维化有效,具有抗肝纤维化及降解胶原的作用。     

肝纤维化大鼠TGF-β1与TIMP-1 mRNA的表达及补肾柔肝方的治疗作用

目的:探讨中药复方补肾柔肝方对二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine,DMN)诱导大鼠肝纤维化后肝脏组织金属蛋白酶抑制因子1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)和转化生长因子β1(transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)的影响,以了解其对肝纤维化的治疗作用和分子机制.方法:雄性Wistar大鼠40只,随机分为正常对照组、模型组和治疗组,对模型组和治疗组运用DMN诱导大鼠肝纤维化.治疗组在造模4周后给予补肾柔肝方灌胃,剂量10 g·kg-1·d,共治疗4周.第8周末处死全部大鼠,对肝组织进行HE和天狼猩红染色观察,并采用RT-PCR半定量方法,检测大鼠肝组织TIMP-1及TGF-β1mRNA的表达水平.结果:肝组织病理学研究结果显示DMN可以成功诱导大鼠肝纤维化,模型组肝组织TIMP-1和TGF-β1mRNA表达明显增强,中药复方治疗组与模型组相比明显减弱,而正常对照组表达较少.结论:TIMP-1与TGF-β1mRNA的表达与肝纤维化的发生密切相关,中药复方补肾柔肝方对肝纤维化大鼠肝组织TIMP-1及TGF-β1具有明显的抑制作用,可达到抗肝纤维化的作用.     

DMN诱发大鼠肝纤维化库普弗细胞与肝星状细胞的分布

目的:探讨二甲基亚硝胺(DMN)诱发大鼠肝纤维化库普弗细胞与肝星状细胞的分布及其意义。方法:选取40只Wistar雄性大鼠连续4周腹腔注射10 g/L DMN制备肝纤维化模型。采用随机数字表法分为模型组(n=20)与正常组(n=20),两组均应用DMN进行肝纤维化造模。采用Reiman法测定大鼠第4周和第7周ALT、AST水平,免疫组化法测定两组大鼠库普弗细胞与肝星状细胞标志物ED1与α-SMA分布情况,收集并分析两组肝/体质量比、肝组织病理变化、胶原纤维面密度。结果:模型组第4周和第7周ALT、AST、面密度水平均高于正常组,差异均有统计学意义(P0.05);模型组第4周和第7周总蛋白(TP)、肝/体质量比水平均低于正常组,差异均有统计学意义(P0.05);两组第4周与第7周肝/体质量组内比较,差异均无统计学意义(P=0.11);模型组第4周和第7周光镜下可见ED1、α-SMA阳性细胞数量较多,主要分布于增生的纤维组织及纤维间隔弥漫部位。结论:DMN可导致大鼠肝功能障碍及弥漫肝硬化。大鼠肝纤维化模型的库普弗细胞可激活、活化肝星状细胞。     

荔枝核总黄酮抗肝纤维化作用的实验研究

目的观察荔枝核总黄酮(TFL)抗大鼠肝纤维化作用,并探讨其中的可能机制。方法以二甲基亚硝胺(DMN)腹腔注射制作大鼠肝纤维化模型;造模同时TFL给药组以TFL灌胃给药,秋水仙碱为阳性对照组,苏木素-伊红(HE)染色、马松染色观察大鼠肝纤维化程度,检测血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平,检测肝组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量,免疫组化检测肝组织核转录因子-κB(NF-κB)的表达。结果与模型组比较TFL给药组血清AST、ALT水平及肝组织MDA含量明显降低(P<0.05),SOD含量明显升高(P<0.05);TFL可明显抑制肝组织NF-κB的表达(P<0.05),改善大鼠肝纤维化程度(P<0.05)。结论 TFL具有显著的抗肝纤维化作用,减轻机体脂质过氧化反应及抑制NF-κB的表达可能参与了其抗肝纤维化作用的机制。     

柑桔素抑制二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝损伤[英]／Lee H Y…／／Biol Pharm Bull

柑桔素(naringenin，Nar)为柑桔苷(naringin)的苷元，是葡萄柚和番茄中的主要成分。曾报道柑桔素对特丁基氢过氧化物(t—BHP)诱导的大鼠肝细胞毒性有抑制作用。作者研究了该成分对二甲基亚硝胺(DMN)诱导的大鼠肝纤维化的抑制作用。     

茵陈蒿汤和茵陈四逆汤抗二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化的方证比较研究

目的：通过观察茵陈蒿汤和茵陈四逆汤对二甲基亚硝胺（DMN）诱导的大鼠肝纤维化模型的效应,探讨该模型的证候病机。方法：大鼠随机分为正常组、模型组、茵陈蒿汤组和茵陈四逆汤组,采用腹腔注射DMN 4周诱导大鼠肝纤维化,于造模第3周开始,各给药组在继续造模的同时予以相应的药物干预,正常组和模型组给以等量生理盐水。4周末杀鼠取材,观察各组大鼠一般情况、肝组织病理学、羟脯氨酸（Hyp）含量及肝功能变化。结果：与正常组相比,模型组出现显著的肝损伤和肝纤维化,肝组织Hyp含量显著升高（P〈0.01）,肝功能显著异常（P〈0.01）。与模型组比较,茵陈蒿汤可显著改善肝组织病理,降低肝组织Hyp含量及肝脏胶原增生程度（P〈0.01）,显著改善肝功能（P〈0.05或P〈0.01）;而茵陈四逆汤不但不能改善任何指标,而且还加重了DMN诱导的大鼠肝脏的炎症和肝纤维化。结论：茵陈蒿汤对DMN诱导的大鼠肝纤维化模型的治疗效果显著优于茵陈四逆汤;DMN诱导的大鼠肝纤维化模型在其形成期的病机以＂湿热内蕴＂为主,且湿热并重,与茵陈蒿汤方证高度相关。     

糖尿病对大鼠肝纤维化组织TIMP-1/MMP-1表达的影响

目的探讨糖尿病对大鼠肝纤维化组织金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)/金属基质蛋白酶-1(MMP-1)表达的影响。方法 40只健康雄性SD大鼠随机分为4组:正常对照组、糖尿病组、肝纤维化组、糖尿病肝纤维化组(双模型组),各10只。糖尿病组和双模型组大鼠腹腔注射链尿佐菌素(STZ)制作糖尿病模型;肝纤维化组和双模型组大鼠皮下注射40%的四氯化碳花生油溶液建立肝纤维化模型。四氯化碳最后一次注射后48h处死大鼠,心脏采血,自动生化检测仪检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、血浆清蛋白(ALB)和清蛋白/球蛋白(A/G);化学发光法检测肝纤维化指标透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原蛋白(PⅢNP)和Ⅳ型胶原(C-Ⅳ);VG染色观察大鼠肝组织变性坏死和纤维化的程度;RT-PCR检测肝脏组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、MMP-1和TIMP-1基因表达水平。结果与正常对照组和糖尿病组比较,肝纤维化组和双模型组大鼠血清ALT、AST、HA、LN、PⅢNP和C-Ⅳ浓度升高以及ALB、A/G下降,α-SMA、TIMP-1/MMP-1、TIMP-1基因表达增强,差异有统计学意义(P<0.05);与肝纤维化组比较,双模型组大鼠血清ALT、AST、HA、C-Ⅳ浓度和肝脏纤维化计分升高,α-SMA、TIMP-1、TIMP-1/MMP-1基因表达增强,差异有统计学意义(P<0.05)。结论高血糖促进了肝纤维化的发展,TIMP-1/MMP-1表达失衡加剧了肝细胞外基质(ECM)的沉积。     

水飞蓟素阻断二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化的实验研究

目的评价水飞蓟素对实验性二甲基亚硝胺(DMN)诱导的 Wistar 大鼠肝纤维化模型的效果。方法 Wistar 雄性大鼠61只随机分为正常对照组15只;DMN 模型组23只,DMN 10mg/kg,腹腔注射,1周2次,连续8周;水飞蓟素组23只,同样方法造模,造模之日起,即给予水飞蓟素(利加隆)50 mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃,1次/d,连续8周。实验8周,断颈处死大鼠,取血,检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白、总胆红素,取肝组织,测定肝组织羟脯氨酸含量;病理组织 Masson 染色,肝纤维化分级、积分。结果水飞蓟素组血清 ALT(128 U/L±25 U/L vs59 U/L±19 U/L,P<0.01);AST(246 U/L±61 U/L vs 159 U/L±39 U/L,P=0.001);总胆红素(平均秩次:37 vs 23,P=0.003)均显著低于模型组;与模型组比较,水飞蓟素组肝组织羟脯氨酸含量低42.6%,肝组织纤维化分级和积分显著改善(12.8±4.4 vs 6.2±2.4,p=0.001)。结论水飞蓟素可抑制肝脏炎症,保护肝脏功能,可部分阻断和逆转 DMN 诱导肝纤维化。     

复方肝毒清影响二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化的机制研究

目的探讨复方肝毒清的抗肝纤维化机制。方法以二甲基亚硝胺(DMN)制备大鼠肝纤维化模型,分别以去铁铵腹腔注射及高、低剂量复方肝毒清灌胃给药。观察去铁铵和复方肝毒清对大鼠肝功能、血清铁及肝组织病理学和转化生长因子-β1(TGF-β1)m RNA表达的影响。结果去铁铵与高、低剂量中药复方均能明显降低血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平及肝组织TGF-β1m RNA表达,与模型组比较,差异有统计学意义(均P0.01)。在模型组,伴随着肝星状细胞(HSC)大量活化,大鼠铁负载显著增加;铁沿纤维间隔分布,而且铁主要沉积于库普弗细胞和HSC。去铁铵及复方肝毒清能使肝组织铁负载明显减轻,胶原纤维沉积和肝细胞变性坏死明显改善。结论复方肝毒清的抗肝纤维化机制与其调节体内铁的代谢和转运及进一步抑制HSC活化有关。     

1998年度上海市医学科技成果简介(续)

HMG—CoA还原酶抑制剂防治实验 性肝纤维化和脂肪肝的研究(上海第二医科大学附属新华医院,国际先进水平) 应用大鼠肝贮脂细胞和大鼠、大白兔动物模型,研究羟甲基戊二酸单酰辅酶A(HMG—CoA)还原酶抑制剂辛伐他汀对肝纤维化和脂肪肝的影响。结果表明,辛伐他汀可抑制大鼠肝贮脂细胞的激活、胶原合成和层粘蛋白分泌,减轻大鼠和大白兔肝纤维化及大鼠脂肪肝形成程度。提示辛伐他