自噬在槲皮素诱导人乳腺癌MCF-7细胞死亡中的作用

目的研究自噬在槲皮素诱导的人乳腺癌MCF-7细胞死亡中的作用。方法用不同浓度的槲皮素处理人乳腺癌MCF-7细胞,采用MTT法测定槲皮素对MCF-7细胞增殖的抑制作用;应用MDC荧光染色观察给药后MCF-7细胞的自噬征象;应用JC-1荧光染色观察给药后MCF-7细胞的线粒体变化;检测乳酸脱氢酶（LDH）漏出率以观察用自噬特异性抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）阻断自噬后槲皮素抑瘤作用的变化。结果槲皮素对MCF-7细胞增长有显著的抑制作用,且此作用呈明显的时间、剂量依赖性;槲皮素给药后早期可诱导MCF-7细胞发生自噬及线粒体变化;在槲皮素给药前和给药后阻断自噬,槲皮素对MCF-7细胞的细胞毒性作用均增强。结论槲皮素能明显抑制MCF-7细胞的生长,并诱导其发生自噬,伴随线粒体发生变化。由槲皮素引发的自噬能够明显保护MCF-7细胞,减少因槲皮素导致的细胞死亡。     

芦荟大黄素介导的光动力诱导骨肉瘤MG63细胞自噬

目的 探讨芦荟大黄素(aloe emodin,AE)介导的光动力(aloe emodin-photodynamic therapy,AE-PDT)诱导骨肉瘤MG63细胞产生自噬,并探讨自噬和凋亡的关系。方法 将细胞分为AE-PDT对照组(Control组、AE组、LED组)和AE-PDT实验组。AE-PDT作用于人骨肉瘤MG63细胞后,采用CCK-8法检测细胞活性,2’,7’-二氯荧光二乙酸盐(2’,7’-dichlorofluorescin diacetate,DCFH-DA)荧光检测细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverin,MDC)染色检测细胞的自噬小体,透射电镜观察细胞的自噬体,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western印迹检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)和Beclin-1的表达。结果 AE-PDT能明显抑制人骨肉瘤MG63细胞的活性,且其抑制作用呈芦荟大黄素浓度-光动力能量剂量依赖性。AE-PDT实验组细胞内ROS水平和自噬小体均较3个对照组增高;透射电镜下可见典型自噬体;AE-PDT能诱导细胞产生自噬和凋亡,3-甲基腺嘌呤抑制自噬后能增加细胞的凋亡率(P<0.05);Western印迹检测LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin-1/β-actin的表达高于阴性对照组。结论 AE-PDT能诱导骨肉瘤MG63细胞产生自噬。AE-PDT作用早期,自噬能延缓凋亡的发生可能起保护性作用。     

姜黄素诱导人胃癌SGC7901细胞自噬性凋亡的研究

目的 观察姜黄素体外诱导人胃癌SGC7901细胞自噬性凋亡的作用,并探讨其可能的作用机制.方法 用不同浓度的姜黄素处理SGC7901细胞,MTT法检测细胞增殖;单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverin,MDC)荧光染色和Hoechst33342荧光染色观察细胞自噬和凋亡的发生;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测细胞凋亡相关蛋白NF-κB、自噬相关蛋白Beclin1及LC3Ⅱ的表达.结果 姜黄素可呈剂量依赖性明显抑制SGC7901的生长.MDC染色显示,40μmol/L姜黄素在作用12h后即可诱导SGC7901细胞发生自噬,24 h自噬减少;Hoechst33342荧光染色显示,40μmol/L姜黄素诱导凋亡在24 h最明显;流式细胞术显示,40μmol/L姜黄素作用24h时SGC7901细胞凋亡率明显增加.Western blot检测显示,姜黄素诱导SGC7901细胞自噬性凋亡过程中,凋亡相关蛋白NF-κB、自噬相关蛋白Beclin1及LC3的表达均上调.结论 姜黄素通过诱导自噬性凋亡抑制人胃癌细胞SGC7901的生长,其机制与NF-κB、Beclin1及LC3蛋白的表达上调有关.     

苦参碱诱导人肝癌细胞BEL-7402自吞噬性死亡

目的研究苦参碱诱导人肝癌BEL-7402细胞自吞噬和自吞噬性死亡作用。方法体外培养人肝癌BEL-7402细胞,应用MTT法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术测定细胞凋亡,自噬体标记物LC3免疫荧光定量检测自吞噬,透射电镜分析细胞自吞噬死亡超微结构改变。结果苦参碱抑制细胞增殖呈质量浓度依赖性,作用48h的IC50值为1.1mg/mL;0.6～1.6mg/mL苦参碱作用12h可诱导BEL-7402细胞凋亡逐渐增多,1.2mg/mL作用12h时细胞凋亡率达(44.88±0.78)%;1.2mg/mL苦参碱持续作用可以诱导自吞噬阳性细胞逐渐增多,作用12h时自吞噬阳性细胞达(63.16±0.29)%;超微结构显示细胞凋亡呈现自噬性细胞死亡特点。结论苦参碱体外能诱导BEL-7402细胞自吞噬和自噬性死亡。     

阿糖胞苷通过自噬途径影响K562细胞增殖凋亡的实验研究

目的 探讨阿糖胞苷(Ara-C)通过自噬途径影响人红白血病K562细胞株增殖、凋亡的作用及可能的机制.方法 采用CCK-8法检测不同浓度的Ara-C作用24 h和48 h后细胞增殖抑制率;流式细胞术(FCM)检测凋亡率和周期;Hoechest染色观察细胞核染色质的形态,吖啶橙染色观察细胞酸性自噬小泡;Western blot检测p38和p-p38蛋白表达变化;RT-PCR和免疫荧光检测自噬凋亡相关基因和蛋白的表达水平.结果 CCK-8检测发现不同浓度的Ara-C均能抑制K562细胞增殖,并呈浓度和时间依赖性;FCM检测显示Ara-C能增加细胞的凋亡和将细胞周期阻滞在S期;Hoechest染色发现Ara-C处理K562细胞后呈凋亡形态改变;吖啶橙染色发现Ara-C组细胞绿色荧光增强,细胞出现大量的酸性自噬小泡;RT-PCR检测发现Ara-C上调自噬关键基因Beclin-1、LC3A和LC3B表达;Western blot检测发现Ara-C增加磷酸化p38表达;免疫荧光检测发现Ara-C增加LC3表达.结论 Ara-C能够激活p-p38介导的K562细胞发生自噬,进而抑制细胞增殖和促进细胞凋亡作用.     

藁本内酯对骨肉瘤细胞凋亡的影响及其作用机制

目的 探讨藁本内酯对骨肉瘤细胞增殖、迁移、凋亡的影响及其作用机制。方法 DMEM培养基培养骨肉瘤MG-63细胞,采用细胞毒性实验观察藁本内酯对MG-63细胞增殖的影响;细胞划痕实验检测藁本内酯对骨肉瘤细胞迁移的影响;流式细胞仪检测不同浓度藁本内酯对骨肉瘤细胞周期的影响。明确藁本内酯作用MG-63细胞的浓度,将细胞分为对照组、顺铂（DDP）组,藁本内酯联合顺铂（DDP+LIG）组,顺铂联合自噬抑制剂（DDP+3MA）组。Western blotting检测自噬和凋亡相关蛋白LC3B、Beclin1、Bcl-2、Bax,细胞色素C以及通路蛋白ULK1、ATG3的表达情况。免疫荧光检测各组细胞LC3B蛋白的表达情况。结果 与对照组比较,20、40、80、160、320、640μmol/L藁本内酯作用下骨肉瘤细胞增殖均被抑制（均P <0.05）;与对照组比较,160μmol/L藁本内酯作用下骨肉瘤细胞迁移能力显著降低（P <0.01）。与对照组比较,40、80、160、320、640μmol/L藁本内酯作用下骨肉瘤细胞G2/M期细胞均显著阻滞（均P <0.05）。与DDP组比...     

自噬在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导甲状腺髓样癌TT细胞凋亡中的作用

目的 观察在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL）作用下甲状腺髓样癌TT细胞自噬发生情况,明确自噬在TRAIL诱导甲状腺癌TT细胞凋亡中的作用.方法 采用MTT法检测细胞增殖抑制率;MDC染色检测自噬的发生情况;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测相关蛋白的表达.结果 ①MTT实验显示：TRAIL对TT细胞增殖抑制作用弱,在浓度为250、500、1000、2000 ng/ml的TRAIL作用48 h后对TT细胞增殖抑制率分别为（3.02±1.82）％、（4.87±1.45）％、（7.51±1.57）％及（12.76±3.23）％;②TRAIL作用48 h后,胞内代表自噬小体的绿色荧光亮点明显增多,且随TRAIL浓度的增加而增加;③3-MA预处理TT细胞4h,TRAIL 500 ng/ml及1000 ng/ml的凋亡率分别为（17.83 ±1.54）％及（27.81±1.79）％,明显高于单用TRAIL（3.70±0.34、6.55 ±0.59）％与3-MA （7.71±0.64）％之和,差异有统计学意义（t=3.282,P＜0.05;t=7.830,P＜0.01）.④各实验组可见明显的caspase-8的活化裂解片段,自噬相关蛋白Beclin 1的表达明显减低.结论 甲状腺髓样癌TT细胞对TRAIL不敏感,TRAIL能诱导TT细胞内自噬发生,抑制自噬可明显改善TT细胞对TRAIL的敏感性.     

3-甲基腺嘌呤对人耐药大肠癌SW480细胞增殖及自噬活性的影响

目的：研究自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）对耐5-氟尿嘧啶（5-Fu）结肠癌SW480细胞增殖及自噬活性的影响,探讨自噬抑制剂在逆转结直肠癌耐药中的作用。方法：浓度递增筛选法诱导耐5-Fu（100kig／L）的SW480细胞株,用10umol／L浓度的3一MA处理后,再用5-Fu（浓度200μg／L）作用24h。采用CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡率,丹酰戊二胺（MDC）染色和电镜检测细胞自噬活性变化。结果：3-MA对耐药细胞自噬活性的抑制率达89．7％,增殖抑制率为9．6％,凋亡率为5．7％,与对照组比较差异具有统计学意义（P〈0．05）。经3-MA处理后,5-Fu对耐药SW480细胞增殖抑制率达71．6％±2．9％,凋亡率达36．6％土2．9％,而单用5-Fu细胞增殖抑制率仅为23．6％±2．9％,凋亡率仅为10．3％±2．5％,3-MA预处理后5-Fu对耐药细胞的增殖抑制率及凋亡率均明显增强（P〈0．05）,自噬泡数量显著减少,自噬活性明显降低（P〈0．05）。结论：3-MA单用时仅有较弱的抗肿瘤作用,与5-Fu联用时耐药细胞的增殖及自噬活性被显著抑制,增强了SW480耐药细胞对5-Fu的敏感性,提高了化疗效果。     

自噬及自噬性细胞死亡抑制紫杉醇诱导的胃癌细胞凋亡

目的明确自噬和自噬性细胞死亡在胃癌SGC-7901及BGC-823细胞紫杉醇处理过程中的存在,探讨其对紫杉醇诱导的凋亡敏感性的作用。方法流式细胞仪和MTT法分别检测紫杉醇诱导SGC-7901及BGC-823细胞的凋亡率和总死亡率,死细胞DAPI染色荧光显微镜检测非凋亡性细胞死亡,吖啶橙染色流式细胞仪和荧光显微镜分别定量、定性检测自噬和自噬性细胞死亡的存在,自噬特异性阻断剂3-甲基腺嘌呤和紫杉醇共同作用细胞后流式细胞术检测细胞死亡率和凋亡率的变化。结果紫杉醇处理SGC-7901及BGC-823细胞早期(24h内)可出现明显的细胞自噬性变化,自噬高峰期出现紫杉醇诱导3~6h,自噬性细胞死亡存在并可能是紫杉醇诱导的非凋亡性细胞死亡的主要形式,抑制紫杉醇诱导的细胞自噬可以促进紫杉醇诱导细胞凋亡的发生。结论紫杉醇可以诱导胃癌SGC-7901及BGC-823细胞自噬及自噬性细胞死亡,并且紫杉醇诱导的胃癌细胞自噬会拮抗胃癌细胞凋亡的发生,从而为胃癌化疗耐受提供新的解释,可能为胃癌治疗提供新的途径。     

吉西他滨诱导膀胱癌T24细胞自噬的实验研究

目的 观察吉西他滨(gemcitabine,GEM)处理膀胱癌T24细胞后引起凋亡的同时是否诱导T24细胞自噬的产生,并初步探究其自噬产生的机制,以及自噬与凋亡之间的关系.方法 体外培养T24细胞,应用CCK-8法测定细胞抑制率;Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、PARP的活化,自噬标志蛋白LC3-Ⅱ、底物蛋白P62和自噬潮,以及JNK通路相关蛋白Jnk1、P-Jnk、Bcl-2的表达情况;并通过透射电镜观察细胞超微结构自噬体的变化;Annexin V-PI双流式细胞术检测抑制自噬后细胞凋亡率的变化情况.结果 CCK-8检测结果显示吉西他滨能有效抑制膀胱癌T24细胞增殖;1.0 μg/mL吉西他滨处理T24细胞4h即可发生明显的自噬,透射电镜观察可见自噬体小体的形成;Western blot检测结果显示吉西他滨作用T24细胞后cleaved-Caspase-3、PARP和LC3-Ⅱ表达增高,P62表达降低;P-Jnk出现活化,Bcl-2发生降解;而抑制自噬后能显著增强吉西他滨诱导的膀胱癌T24细胞的凋亡.结论 吉西他滨介导膀胱癌T24细胞凋亡的同时又诱导保护性自噬,JNK信号通路参与调控其自噬的发生,抑制自噬可以明显增强膀胱癌T24细胞对吉西他滨的化疗敏感性.     

Expression of Beclinl in Osteosarcoma and the Effects of Down-regulation of Autophagy on the Chemotherapeutic Sensitivity

To explore the expression of Beclin1 in osteosarcoma and investigate the effects of down-regulation of autophagy on the chemotherapeutic sensitivity to cisplatin (DDP),the expression of Beclin1 in 28 specimens of osteosarcoma (group A) and 19 specimens of normal bone tissues (group B) were immunohistochemically detected. The expression of Beclin1 mRNA in MG63 cells treated with different concentrations of DDP was examined with RT-PCR. After down-regulation of autophagy in MG63 cells by an autophagy inhibitor,3-methyladenine (3-MA),the cell proliferation inhibition rate of MG63 cells treated with DDP was evaluated by using the MTT assay. The positive rates of Beclinl were 67.85% in group A and 94.73% in group B. Its expression was lower in osteosarcoma than in normal bone tissues,with a significant difference found between them (P＜0.05).RT-PCR showed that the expression of Bcclin1 mRNA in the cells treated with high-dose DDP were higher than that in the non-treated cells,and no significant difference in the expression of Beclin1 mRNA was found between the cells treated with low-dose DDP and the non-treated cells. There was a positive correlation between the level of Beclin1 mRNA expression and the concentration of DDP.MTT assay showed that the proliferation inhibition rates of the cell treated with 3-MA and DDP combined were substantially increased when compared with those treated with DDP alone (P＜0.01).This study demonstrated that autophagy may be implicated in the carcinogenesis of osteosarcoma,and DDP may induce autophagy in the MG63 cells. It also suggests that the down-regulated autophagy could increase chemotherapeutic sensitivity of DDP to osteosarcoma.     

紫铆因通过自噬途径促进骨肉瘤细胞凋亡及机制研究

目的研究紫铆因对骨肉瘤细胞凋亡及自噬的影响,并探讨自噬在紫铆因抗骨肉瘤中的作用。方法分别以不同浓度紫铆因作用骨肉瘤细胞24h和30滋mol/L紫铆因作用骨肉瘤细胞不同时间,使用CCK-8试剂盒测定细胞活性变化;Westernblot法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cleavedcaspase3及自噬相关蛋白p62、LC3、Beclin-1的表达情况;TUNEL染色检测骨肉瘤细胞的凋亡情况;透射电子显微镜检测自噬泡的产生;最后分别用自噬激动剂和自噬抑制剂预处理后再加入紫铆因作用于骨肉瘤细胞,并重复上述实验。结果紫铆因作用后,骨肉瘤细胞的活性明显下降,Bax、Cleavedcaspase3、Beclin-1、LC3II的表达增加,而Bcl-2、p62的表达降低,骨肉瘤细胞出现明显的凋亡现象,透射电子显微镜观察到紫铆因处理组有较多自噬泡产生;使用自噬抑制剂预处理骨肉瘤细胞后,紫铆因对骨肉瘤的凋亡效果被逆转,而使用自噬激动剂预处理骨肉瘤细胞后,紫铆因使骨肉瘤细胞凋亡的效果进一步增强。结论紫铆因可以降低骨肉瘤细胞活性并促进其凋亡;同时紫铆因可以激活自噬,促进骨肉瘤细胞凋亡。     

Expression of Beclin1 in osteosarcoma and the effects of down-regulation of autophagy on the chemotherapeutic sensitivity

To explore the expression of Beclin1 in osteosarcoma and investigate the effects of down-regulation of autophagy on the chemotherapeutic sensitivity to cisplatin （DDP）, the expression of Beclin1 in 28 specimens of osteosarcoma （group A） and 19 specimens of normal bone tissues （group B） were immunohistochemically detected. The expression of Beclin1 mRNA in MG63 cells treated with different concentrations of DDP was examined with RT-PCR. After down-regulation of autophagy in MG63 cells by an autophagy inhibitor, 3-methyladenine （3-MA）, the cell proliferation inhibition rate of MG63 cells treated with DDP was evaluated by using the MTT assay. The positive rates of Beclin1 were 67.85% in group A and 94.73% in group B. Its expression was lower in osteosarcoma than in normal bone tissues, with a significant difference found between them （P〈0.05）. RT-PCR showed that the expression of Beclin1 mRNA in the cells treated with high-dose DDP were higher than that in the non-treated cells, and no significant difference in the expression of Beclin1 mRNA was found between the cells treated with low-dose DDP and the non-treated cells. There was a positive correlation between the level of Beclin1 mRNA expression and the concentration of DDP. MTT assay showed that the proliferation inhibition rates of the cell treated with 3-MA and DDP combined were substantially increased when compared with those treated with DDP alone （P〈0.01）. This study demonstrated that autophagy may be implicated in the carcinogenesis of osteosarcoma, and DDP may induce autophagy in the MG63 cells. It also suggests that the down-regulated autophagy could increase chemotherapeutic sensitivity of DDP to osteosarcoma.     

姜黄素对顺铂抑制人成骨肉瘤细胞MG63增殖的影响

目的研究姜黄素对顺铂抑制人成骨肉瘤细胞MG63增殖的影响。方法采用噻唑蓝比色法检测姜黄素和顺铂不同浓度组合时对MG63细胞增殖的影响,荧光倒置显微镜观察药物作用后细胞形态的改变,流式细胞术检测细胞凋亡率的改变。结果随着姜黄素和顺铂的药物浓度逐渐升高,单药对MG63细胞的增殖抑制率呈上升趋势(P<0.05)。两药联合作用后细胞明显变形、发泡,细胞凋亡数进一步增加,细胞排列更加紊乱,大量细胞脱落悬浮于培养液中。结论不同浓度的姜黄素对顺铂抑制人成骨肉瘤细胞MG63增殖的影响不一样,可以是拮抗、相加或协同。     

IL-17A/IL-17RA通过上调自噬降低卵巢癌SKOV3细胞对顺铂敏感性

目的 探讨白细胞介素（IL）17A通过调控细胞自噬对卵巢癌细胞顺铂（DDP）化疗敏感性的影响。方法 体外培养卵巢癌SKOV3细胞并分别用不同浓度DDP（1、2、4、6、8、10、15、20 μg/mL）处理,MTT法测定细胞增殖活性以及IL-17A（100 ng/mL,处理24 h）对DDP 诱导SKOV3细胞凋亡的影响;流式细胞术检测人卵巢癌细胞SKOV3中IL-17A受体（IL-17RA）的表达水平;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1）检测细胞早期凋亡情况;IL-17RA 中和抗体（IL-17RA mAb）进行IL-17RA阻断实验;合成针对IL-17RA基因的siRNA片段（siRNA-IL-17RA）,转染SKOV3细胞,沉默IL-17RA表达;3-甲基腺嘌呤（3-MA）抑制细胞自噬水平;Western blot检测细胞凋亡相关蛋白（Bcl2、Bax、Cleaved Caspase3）、自噬相关蛋白（P62、Beclin-1）表达。结果 DDP可以增加卵巢癌SKOV3细胞IL-17RA表达水平;IL-17A降低SKOV3细胞对DDP的敏感性（P<0.05）;DDP诱导SKOV3细胞内自噬相关蛋白Beclin-表达增强,自噬降解底物P62蛋白减少;IL-17A/IL-17RA增强了DDP自噬诱导作用（P<0.05）;3-MA 阻断自噬后,SKOV3细胞凋亡率较干扰前明显升高,细胞抗凋亡蛋白Bcl2表达水平降低、凋亡蛋白Bax表达水平升高,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 IL-17A/IL-17RA可能通过上调DDP诱导的自噬水平降低人卵巢癌SKOV3细胞化疗敏感性。     

3-甲基腺嘌呤增强口腔鳞癌体外化疗药物敏感性的作用机制

目的：通过在口腔鳞癌Tca83细胞培养过程中加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）,观察顺铂（DDP）对口腔鳞癌Tca83细胞的杀伤作用,探讨3-MA增强口腔鳞癌化疗药物敏感性的作用机制。方法： 将对数生长期口腔鳞癌Tca83细胞分为对照组、3-MA处理组、DDP处理组、3-MA+DDP处理组和DDP+3-MA处理组,用MTT法检测细胞生存率,激光共聚焦显微镜检测自噬特异性蛋白LC3-Ⅱ的表达水平,Annexin V-FITC流式细胞术检测细胞凋亡率。结果：Tca83细胞株对顺铂IC₅₀值为5 mg/L;MTT检测,DDP组细胞生存率显著低于对照组和DDP+3-MA组 (P<0.05),高于3-MA+ DDP组 (P<0.05);细胞免疫荧光检测,3-MA组平均荧光强度显著低于其他4组（P<0.05）;流式细胞术检测,DDP组细胞凋亡率显著低于3-MA+DDP组 (P<0.05),高于DDP+3-MA组 (P<0.05)。结论：不同水平的自噬对口腔鳞癌细胞的作用不同,抑制细胞自身基础水平的自噬可增强DDP对Tca83细胞的杀伤作用,提示自噬抑制剂有望成为口腔鳞癌的化疗增敏剂。     

槲皮素联合顺铂对宫颈癌HeLa细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨槲皮素联合顺铂对HeLa细胞增殖及凋亡的影响。方法:不同浓度槲皮素及不同浓度槲皮素联合顺铂处理HeLa细胞24 h后,采用MTT检测细胞的增殖活性、流式细胞仪Annexin V-FITC/PI法检测细胞的凋亡情况、激光扫描共聚焦显微镜观察用PI荧光标记的细胞核的形态学变化。结果:槲皮素能抑制HeLa细胞增殖,且呈剂量依赖性;槲皮素联合顺铂与相同浓度顺铂单用处理HeLa细胞相比,前者对HeLa细胞的抑制作用更显著(P<0.01);不同浓度槲皮素与顺铂联合处理HeLa细胞与顺铂单用相比,前者显著提高了HeLa细胞的凋亡率(P<0.01)。结论:槲皮素可显著抑制HeLa细胞增殖并诱导其凋亡,槲皮素与顺铂联合应用具有一定的协同效应。     

融合自杀基因对骨肉瘤细胞作用的实验研究

目的观察单纯疱疹病毒-胸苷激酶/胞嘧啶脱氨酶融合自杀基因（HSV TK/CD）对骨肉瘤细胞增殖的影响。方法将含TK/CD的重组腺病毒载体感染人骨肉瘤细胞系MG 63细胞,测定感染效率后,分别给予不同浓度的前体药物和不同感染复数的自杀基因重组腺病毒,计算瘤细胞增殖抑制率,MTT法测定细胞存活率,并用流式细胞术和Hochest 33342 染色法分析杀伤机制。结果含自杀基因的重组腺病毒成功感染MG 63细胞;不同感染复数和不同前体药物浓度下,融合自杀基因系统对瘤细胞的杀伤作用明显强于单基因和双基因相加的作用 (P＜0.05);其杀伤机制为致细胞坏死和细胞凋亡。结论融合自杀基因HSV TK/CD对骨肉瘤细胞系MG 63细胞的生长有明显的抑制作用。     

抗坏血酸-聚乙烯亚胺复合碳点通过高尔基体应激对MG63细胞增殖、凋亡和氧化应激的影响

目的：探讨抗坏血酸-聚乙烯亚胺复合碳点（CDs）对人骨肉瘤MG63细胞增殖、凋亡和氧化应激等的影响,阐明抗坏血酸-聚乙烯亚胺复合CDs的细胞生物学特性。方法：以抗坏血酸和聚乙烯亚胺为原料,用微波法合成抗坏血酸-聚乙烯亚胺复合CDs。采用MTT法检测MG63细胞增殖率,流式细胞术检测不同细胞周期MG63细胞百分比。将MG63细胞分为空白对照组、转染阴性对照组、转染GOLPH3-siRNA组、CDs组、转染阴性对照+CDs组、转染GOLPH3-siRNA+CDs组。采用RT-PCR法检测各组MG63细胞中高尔基体磷酸化蛋白3（GOLPH3）的基因表达水平并计算基因沉默效率,流式细胞术检测各组MG63细胞凋亡率以及MG63细胞中活性氧（ROS）水平。结果：与空白对照组比较,随着CDs浓度的增加,MG63细胞的增殖率降低;在24和48 h时,CDs浓度大于40 mg·L^-1时,MG63细胞增殖率明显降低（P<0.05）;在72 h,CDs浓度大于20 mg·L^-1时,细胞增殖率明显降低（P<0.05）。与对照组比较,40 mg·L^-1CDs组G₀/G₁期MG63细胞百分比明显升高（P<0.01）,S期MG63细胞百分比明显降低（P<0.01）。倒置荧光显微镜下CDs具有一定的光致发光特性;与非碳点组（空白对照组、转染阴性对照组、转染GOLPH3-siRNA组）比较,碳点组（CDs组、转染阴性对照+CDs组、转染GOLPH3-siRNA+CDs组） MG63细胞凋亡率和细胞中ROS水平升高（P<0.05）。结论：CDs具有低毒性和光致发光特性,可以阻滞细胞周期,并促进细胞凋亡和ROS生成。GOLPH3具有抗凋亡和抑制ROS生成的作用,对细胞的存活起到一定的保护作用。     

抑制热休克蛋白70表达可增强宫颈癌细胞对顺铂化疗的敏感性

目的 探讨抑制宫颈癌Hela229细胞内热休克蛋白(HSP)70表达对顺铂(DDP)化疗敏感性的影响.方法 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)及集落克隆法测定各因素对Hela229细胞的抑制作用;溴化丙啶(PI)单染法及DAPI检测细胞的凋亡率;JC-1染色法测定线粒体膜电位(△Ψm)的变化;Western blotting测定相关蛋白的表达;建立裸鼠动物模型测定各因素体内的抑瘤作用.结果 宫颈癌细胞较正常宫颈细胞高表达HSP70;当HSP70抑制剂与顺铂合用,细胞的存活率较单用顺铂显著下降(P<0.01);PI与DAPI染色实验表明HSP70抑制剂能增加顺铂诱导的细胞凋亡率;JC-1染色结果显示,HSP70抑制剂处理后顺铂组细胞线粒体膜电位发生了明显的降低.Western blotting实验结果显示HSP70蛋白表达抑制剂与顺铂合用较单用顺铂显著增加促凋亡蛋Bax/caspase-3表达及caspase-3活化;明显降低抑制凋亡相关蛋白Bcl-2表达.裸鼠移植肿瘤模型结果表明HSP70抑制剂与顺铂合用能增强顺铂对模型小鼠肿瘤的抑制作用(P<0.01).结论 抑制HSP70表达可增强宫颈癌细胞对顺铂的敏感性,机制可能是通过抑制HSP70,进而调节凋亡相关蛋白的表达,促进宫颈癌细胞凋亡.HSP70有望成为宫颈癌基因治疗的一个新靶点.