散发型甲状腺髓样癌及正常甲状腺组织RET基因第13外显子碱基序列分析

目的 研究散发型甲状腺髓样癌酪氨酸激酶受体基因(RET)第13外显子的突变情况.方法 提取17例散发型甲状腺髓样癌和4例正常甲状腺组织基因组的DNA,PCR扩增该基因第13外显子全部序列,纯化目的 基因DNA后直接序列测定.结果 与Genebank比较全部散发型甲状腺髓样癌和正常甲状腺组织在RET基因第18973和18974位点之间均有一个鸟嘌呤插入,插入点位于该基因的第13外显子和第13内含子之间.结论 该位点处鸟嘌呤插入不是基因突变,可能为不同人种间基因组差异或Genebank存在错误.     

促甲状腺激素受体第十外显子基因突变与甲状腺癌发病的相关性

目的研究甲状腺癌发病是否与促甲状腺激素受体(TSHR)第十外显子基因突变有关。方法采用巢氏-多聚酶联反应-单链构象多态性分析方法(NEST-PCR-SSCP)及DNA测序方法,对76例甲状腺癌(其中10例滤泡型癌,65例乳头状癌,1例髓样癌)和44例对照组织TSHR第十外显子基因进行检测。结果经NEST-PCR-SSCP检测甲状腺癌TSHR第十外显子未发现明显带型异常,第三片段(即第3胞内环)取2例对照组织和5例甲状腺癌组织进行DNA测序,7例组织TSHR2000位点碱基均由C→T,使得所编码的601位氨基酸由组氨酸(CAT)→酪氨酸(TAT)(His→Tyr),余无明显基因突变。结论甲状腺癌TSHR第十外显子未发现基因突变,提示甲状腺癌发病与TSHR第十外显子基因突变无关;由于所测7例标本601位氨基酸均为酪氨酸,考虑中国人TSHR基因与国外人群存在差异。     

促甲状腺激素受体第十外显子基因突变与甲状腺癌发病的相关研究

〔摘要〕 目的 研究甲状腺癌发病是否与促甲状腺激素受体（TSHR）第十外显子基因突变有关。 方法 采用巢氏-多聚酶联反应－单链构象多态性分析方法（NEST-PCR-SSCP）及DNA测序方法,对76例甲状腺癌（其中10例滤泡型癌,65例乳头状癌,1例髓样癌）和44例对照组织TSHR第十外显子基因进行检测。结果 经NEST-PCR-SSCP检测甲状腺癌TSHR第十外显子未发现明显带型异常,第三片段(即第3胞内环)取2例对照组织和5例甲状腺癌组织进行DNA测序,7例组织TSHR2000位点碱基均由C→T,使得所编码的601位氨基酸由组氨酸(CAT)→酪氨酸(TAT)（His→Tyr）,余无明显基因突变。结论 甲状腺癌TSHR第十外显子未发现基因突变,提示甲状腺癌发病与TSHR第十外显子基因突变无关;由于所测7例标本601位氨基酸均为酪氨酸,考虑中国人TSHR基因与国外人群存在差异。     

细支气管肺泡癌患者EGFR基因突变的研究

目的探讨表皮生长因子受体（EGFR）基因酪氨酸激酶域体细胞在细支气管肺泡癌（BAC）患者中突变的相关因素。方法分析和检测本院37例细支气管肺泡癌石蜡包埋标本EGFR基因突变状况,采用PCR技术进行EGFR基因18、19、20和21外显子突变分析。结果37例BAC患者中有18例（48．6％）酪氨酸激酶域存在体细胞突变,其中3例（8．1％）为18外显子替代突变,5例（13．5％）为19外显子突变,7例（18．9％）为20外显子替代突变,8例（21．6％）为21外显子替代突变。结论EGFR基因与BAC密切相关。     

低密度脂蛋白受体功能与基因突变的关系

目的:分析家族性高胆固醇血症低密度脂蛋白受体(LDLR)功能变化,寻找基因突变位点;阐明该基因突变类型对LDLR功能的影响。方法:患儿及其父系、母系三代共30人检查血脂和临床表现,作系谱分析,确定该患儿符合家族性高胆固醇血症纯合子的诊断;培养患儿皮肤成纤维细胞,用受体的放射性配体结合技术.定量测定细胞的LDLR的功能;提取外周血基因组DNA对LDLR基因的相应外显子进行PCR-SSCP及DNA序列分析。结果:系谱分析发现11个杂合子及1个纯合子;纯合子患儿LDLR结合功能基本正常,但其内移和降解功能只有正常人的3.6％及1.7％;DNA测序结果证实患儿第17外显子的第599和600密码子间插入一个碱基G,导致框移突变;第842密码子发生CCA→CCG的无义突变。结论:首次报道了一个新的LDLR突变位点;初步明确该突变位点对患者的影响较为显著。     

FLT3-ITD突变检测及其临床意义

Fms样酪氨酸激酶-3（fms-like tyrosine kinase-3,FLT3）是Ⅲ型受体酪氨酸激酶家族成员,在约20%-30%的急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）患者中FLT3基因中外显子14和15存在内部串联重复（FLT3 in-tema]tandemduplication,FLT3-ITD）,近年来对于FLT3突变的检测、预后意义以及FLT3抑制剂的应用研究比较深入．本文对此作一综述。     

胃肠道间质瘤分子靶向治疗继发性耐药基因突变的研究

目的探讨胃肠道间质瘤(GIST)患者酪氨酸激酶受体(KIT)和血小板源性生长受体(PDGFRA)基因突变的特点,以及伊马替尼的继发耐药机制。方法对98例GIST患者肿瘤组织进行DNA抽提、聚合酶链反应(PCR)扩增和直接测序,检测KIT基因外显子9、11、13、17和PDGFRA基因12、18外显子突变;并对伊马替尼继发耐药的65例患者进行2次检测。结果 98例患者中,KIT突变79例(80.6%),其中外显子11突变61例(62.2%),外显子9突变18例(18.4%);PDGFRA突变3例(3.1%)。不同性别、年龄以及晚期GIST患者和潜在恶性的GIST患者间突变比较差异无统计学意义(P>0.05);而不同部位GIST的KIT外显子11突变发生率差异有统计学意义(P<0.05)。65例继发耐药病例中,4例患者发生二次突变,表现为KIT基因第17外显子密码子第2467位点的T为G所替换(T2467G),导致823密码子编码氨基酸由酪氨酸转变为天冬氨酸。结论 KIT基因突变在GIST患者中常见,不同部位间KIT外显子11突变发生率差异有统计学意义。伊马替尼继发耐药可能与KIT基因第17外显子密码子第2467位点T为G所替换(T2467G)相关。     

自身免疫性甲状腺病TSH受体基因第一外显子突变的研究

目的 探讨自身免疫性甲状腺病发病与TSH受体基因第一外显子突变之间的关系。方法 用PCR－SSCP方法对146例Graves病，30例桥本甲状腺炎患者外周血白细胞DNA TSH受体基因第一外显子突变进行筛查。结果 经PCR扩增后均出现明晰可辨的带型，SSCP分析176例无1例出现异常泳动。结论 PCR－SSCP分析未发现自身免疫性甲状腺病患者TSH受体基因第一外显子有突变，提示自身免疫性甲状腺病发病可能与TSH受体基因第一外显子突变无关。     

胃肠道间质瘤60例中c-kit和PDGFRA基因突变的检测

目的:探讨c-kit基因和PDGFRA基因在我国胃肠道间质瘤(GIST)中的突变状况.方法:用PCR扩增和直接测序的方法,检测60例GIST c-kit基因9号、11号、13号和17号外显子突变以及PDGFRA基因12号和18外显子突变.结果:60例GIST中kit基因突变率为63.3%,绝大多数为杂合性突变,少数为纯合性突变.其中以编码近膜区的11号外显子突变最为常见(58.3%);其次为编码胞外区的9号外显子突变(3.3%);偶见编码胞内酪氨酸激酶结构域的13号外显子突变(1.7%),是一个新的突变位点L641P;未检出17号外显子突变.11号外显子的突变位点多集中在5'端的经典热点(42.9%),表现为密码子第557-560的点突变和框内缺失.第二个热点位于11号外显子的3'端,为框内串联重复.后者主要发生在胃部,女性患者多见.60例GIST中PDGFRA基因突变率为5%,表现为编码胞内酪氨酸激酶结构域的18号外显子D842V点突变,且均为CD117阴性.未见编码近膜区的12号外显子突变.结论:CD117阳性GIST主要表现为c-kit突变,分布在11号外显子经典热点和3'端热点,后者与老年女性胃GIST相关.PDGFRA基因突变主要见于CD117阴性GIST,多发生在后腹膜,具高度侵袭危险性.     

EGFR基因在肺腺癌中突变的研究

目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR)基因酪氨酸激酶域体细胞在肺腺癌患者中突变的相关因素。方法:分析和检测64例肺腺癌石蜡包埋标本EGFR基因突变状况,采用PCR和序列分析技术进行EGFR基因18、19和21外显子突变分析。结果:64例PAC患者中有16例(25%)酪氨酸激酶域存在体细胞突变。其中2例(3.1%)为18外显子,7例(10.93%)为19外显子,7例(10.93%)为21外显子。结论:肺腺癌(PAC)患者肿瘤组织中EGFR基因突变主要集中于19、21外显子突变,女性高于男性。     

Ret-proto-oncogene analysis in medullary thyroid carcinoma

Introduction: Medullary carcinoma of the thyroid (MTC) is a rare tumour which occurs in both sporadic and hereditary forms. Mutations of the RET proto-oncogene have been identified in hereditary forms. The aim of our study was to confirm or exclude familial disease by examining for germline mutations in the RET proto-oncogene in patients with medullary thyroid carcinoma. Methods: Nine patients with medullary thyroid carcinoma and 4 of their children were studied. Peripheral blood was used to examine for mutations in the RET proto-oncogene. When this was not available, archival thyroid tissue was used. Results: Seven patients had clinically sporadic tumours, confirmed by mutational analysis of RET. Four children were at risk of being carriers of a mutated gene, as their fathers had histologically proven MTC and had tested positive for the mutation at codon 618 on exon 10 of the RET proto-oncogene. Three of these children carried the 618 mutation. To date, 2 have had a prophylactic thyroidectomy, the pathology of which revealed C-cell hyperplasia. One child had familial disease excluded by mutational analysis. One patient had a clinical diagnosis of MEN2B confirmed by detection of the 918 mutation on exon 16 of the RET proto-oncogene. Conclusions: RET proto-oncogene analysis is a reliable method of differentiating familial from sporadic MTC. Mutational information determines which family members of affected kindreds are at risk of developing the disease and can be used to affect clinical management.     

儿童甲状腺髓样癌1例

髓样癌是临床上比较少见的一种甲状腺恶性肿瘤,仅占国内甲状腺癌的5%～10%,而儿童甲状腺髓样癌更是罕见。甲状腺髓样癌（MTC）分为散发型和遗传型,遗传型为常染色体显性遗传,约占MTC总数的10%～20%,发病与RET原癌基因突变密切相关。髓样癌影像学无特异性,主要表现为占位性实性结节,不易与分化型甲状腺癌鉴别,但恶性程度相对较高,较早出现淋巴结转移,侵犯神经及脉管概率更高,远处转移的风险更大。故尽早采用足够手术范围切除或同时清除颈部淋巴结,与患者预后密切相关。我院收治1例儿童甲状腺髓样癌,女性,12岁,腺叶次全切除术后1年,对侧叶再次发现髓样癌结节,从而行二次手术。现将该患者完整诊疗经过报道如下,以期对该类疾病的临床诊治提供帮助。     

甲状腺肿瘤ras-p21及EBV LMP-1的表达及意义

目的研究ras癌基因及EBV感染在甲状腺癌中的意义。方法应用SABC免疫组化法对88例甲状腺肿瘤(乳头状癌34例,滤泡性癌17例,髓样癌5例,未分化癌8例,腺瘤24例)进行研究,观察ras癌基因蛋白产物p21及EBvLMP-1的表达情况。结果甲状腺癌p21的表达与甲状腺肿瘤良恶性有关,甲状腺癌p21阳性率(62.5％)明显高于甲状腺腺瘤(33.3％)(P<0.05)。甲状腺癌p21与组织学分型无关。LMI-1在甲状腺癌中的表达率为15.6％,癌周组织无表达。结论ras癌基因突变为甲状腺癌发生中的早期事件,p21检测可作为甲状腺滤泡性肿瘤良恶性鉴别的辅助指标,提示EBV感染与甲状腺癌的发生有关。     

Infrequent microsatellite instability mutator phenotype in Chinese hepatocellular carcinomas

Objective: In order to elucidate the molecular mechanisms that might be responsible for hepatocarcinogenesis, we examined microsatellite instability (MSI), mismatch repair gene hMLH1 mutation and methylation in hepatocellular carcinoma. Methods: Fifty-two cases of surgically resected sporadic hepatocellular carcinoma (HCC) were studied, hMLH1 mutation was examined by two-dimensional electrophoresis and DNA sequencing; hMLH1 methylation was determined by methylation-specific PCR (MSP); and MSI at BAT26 was analyzed by PCR-based methods. Results: MSI at BAT26 was found in 3 of 52 cases (5.8%) of the tumors analyzed. No hMLH1 mutation or hypermethylation was found in these 52 cancerous tissues. No correlation existed between MSI and clinico-pathological characteristics of the patients. Conclusion: Our results suggest that MSI at BAT26 is rarely associated with carcinogenesis of chinese HCC. The genesis of sporadic HCC may occur in an alternative pathway that is probably different from MSI pathway.     

应用非同位素PCR—SSCP方法检测甲状腺癌p53基因的突变

目的 探讨甲状腺癌组织中p53基因点突变。方法 应用非同位素PCR－SSCP技术检测39例不同类型甲状腺癌石蜡包埋组织中p53基因点突变。结果 10例分化甲状腺癌中4例（40％）、9例未分化甲状腺癌中6例（67％）出现异常电泳,表明这些病例相应DNA片段中发生了点突变,而5例乳头状癌和5例滤泡型癌均未见该基因的突变。10例出现异常电泳的甲状腺癌中9例（90％）同时呈现p53蛋白的表达。结论 非同位素PCR－SSCP是一简便、快速、有效的检测基因点突变的方法,p53基因点突变率与蛋白表达率基本相一致,p53基因的突变是分化型癌向间变型癌转化的关键性遗传改变。     

BRAF基因突变检测在甲状腺乳头状病变中的临床意义

目的探讨BRAF基因在甲状腺乳头状病变中的突变情况及临床意义。方法提取石蜡肿瘤组织中DNA,采用直接测序法分析24例甲状腺乳头状癌和30例甲状腺不典型乳头状腺瘤石蜡组织中BRAF基因突变的情况。结合临床资料进一步分析。结果 24例甲状腺乳头状癌,16例发现BRAF基因15外显子第600位密码子A/T杂合（V600E）,突变率为66.7%（16/24）。而30例甲状腺不典型腺瘤中未发现V600E病理性突变（0/30）。结论 BRAF V600E位点突变仅见于甲状腺乳头状癌,具有一定的特异性,可以用于帮助临床甲状腺乳头状增生良恶性的鉴别。     

应用聚合酶链反应-单链构象多态性分析检测散发性乳腺癌EMSY基因的突变

目的了解EMSY基因在散发性乳腺癌组织中的突变情况,探讨EMSY基因突变与散发性乳腺癌的关系。方法收集72例散发性乳腺癌组织及18例乳腺良性肿瘤患者的肿瘤组织,常规酚-氯法抽提组织DNA,并应用聚合酶链反应-单链构象多态性分析（PCR—SSCP）的方法,扩增其EMSY基因的20个外显子,然后根据构象改变来分析此基因突变情况。结果72例散发性乳腺癌组织以及18例乳腺良性肿瘤组织中,6例样本存在第9外显子SSCP条带的异常改变,测序结果为第9外显子区GCA（丙氨酸）中的A杂合性缺失,突变率为8．3％（6／72）。结论本课题研究提示广西散发性乳腺癌中存在着EMSY基因第9外显子的缺失突变,并且在乳腺癌患者中突变率高于乳腺良性肿瘤患者。     

散发性卵巢癌中BRCA1基因突变的研究

目的:检测BRCA1基因第2外显子和第20外显子在散发性卵巢癌中的突变情况,探讨其与卵巢癌发病的关系.方法:采用PCR-SSCP(聚合酶链反应-单链构象多态性分析)结合银染的方法,对36例无血缘关系的卵巢癌患者BRCA1基因第2、20外显子进行突变检测.结果:在外显子2和20的序列中未发现有突变.结论:在Ashkenazi犹太妇女中发现的两个突变热点185delAG和5382insC可能不是中国散发性卵巢癌患者的突变热点,说明外显子2和20上的序列对中国人群散发性卵巢癌发生的影响不大,有待于在中国散发性卵巢癌患者中寻找BRCA1基因的新的突变热点.     

散发性大肠癌中hMSH2基因突变研究

目的：探讨错配修复基因hMSH2在散发性大肠癌发生中的作用。方法：应用酚／氯仿法提取44例结直肠癌组织及其相应正常黏膜组织的DNA，用聚合酶链反应和单链构象多态性分析（SSCP）、DNA测序等方法对基因hMSH2外显子5、6、13、15进行突变情况检测，并结合临床病理资料进行分析。结果：44例散发性大肠癌患者中，2例发生hMSH2基因突变，突变率为4．54％。不同临床病理分期的hMSH2基因突变率差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：hMSH2基因可能在散发性大肠癌发生过程中起到一定作用，hMSH2基因突变与散发性大肠癌的临床病理分期无关。