左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症胎鼠海马神经元NR及mEPSC的影响

目的探讨左归降糖解郁方对模拟糖尿病并发抑郁(diabetes mellitus with depression,DD)症状态下胎鼠海马神经元N-甲基-D-天冬氨酸受体(n-methyl-d-aspartic acid receptor,NR)和微小兴奋性突触后电流(miniature excitatory postsynaptic current,mEPSC)频率及幅度的干预作用。方法取胎鼠(16～18 d)的海马,进行分离纯化和培养,用神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫细胞化学染色法鉴定。随机把海马原代神经元分6组:空白组、模型组、空白血清组、MK-801组、二甲双胍+氟西汀组、左归降糖解郁方组。根据分组,于空白组加10%的培养液;其他5组加15 mmol/L的高糖和50μmol/L的皮质酮予以造模;造模后,空白血清组、二甲双胍+氟西汀组、左归降糖解郁方组中分别加10%的空白血清、二甲双胍+氟西汀含药血清、左归降糖解郁方含药血清,MK-801组中加10μmol/L的MK-801,同时干预18 h。蛋白NR2A、NR2B的表达运用高内涵细胞成像技术(high content analysis,HCA)检测;海马神经元细胞的mEPSC采用全细胞膜片钳技术来记录,并对比不同组间神经元细胞的mEPSC频率和电流幅度。结果经镜下观察及NSE鉴定,所培养的细胞是海马神经元细胞,阳性率在95%以上。经HCA检测,空白组细胞的胞体明显,形态完整,突触之间形成丰富的神经网络。与空白组比,模型组和空白血清组的海马神经元细胞出现萎缩、突触断裂或神经网络消失,蛋白NR2A、NR2B的荧光值增强(P0.01);与空白血清组比,MK-801组、二甲双胍+氟西汀组、左归降糖解郁方组细胞突触间的连接恢复,蛋白NR2A、NR2B荧光值减弱(P0.01或P0.05)。膜片钳结果显示,对比空白组,模型组、空白血清组的mEPSC频率和幅度上升(P0.01);与空白血清组比,MK-801组、二甲双胍+氟西汀组和左归降糖解郁方组的mEPSC频率和幅度下降(P0.01)。结论左归降糖解郁方抗DD大鼠海马神经元细胞受损的保护作用机制,可能在于其能够调控DD状态下的海马神经元蛋白NR2A、NR2B的表达及突触可塑性功能。     

左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症海马NVU神经元的调控作用及其机制

目的探讨糖尿病并发抑郁症(DD)状态下谷氨酸(Glu)失衡对海马神经血管单元(neurovascular unit,NVU)中神经元GluR2、Beclin-1蛋白表达的影响,及左归降糖解郁方对其干预作用。方法原代分离、纯化和培养SD大鼠海马神经元、星形胶质细胞及脑微血管内皮细胞,构建海马NVU体外共培养体系,采用免疫细胞化学染色法进行细胞鉴定;采用高糖(150 mmol/L)联合皮质酮(200μmol/L)干预构建海马NVU细胞模型;将培养的细胞随机分组,未造模细胞分为正常组、空白血清对照组,造模细胞分为模型组、左归降糖解郁方(32. 82 g/kg)含药血清组和阳性药(氟西汀0. 18 g/kg+二甲双胍1. 8 mg/kg)含药血清组,除正常组与模型组给予等量培养液,其余组给予相应体积分数10%的含药血清或空白血清;采用酶联免疫吸附法检测各组海马NVU神经元培养液上清中Glu含量;采用免疫荧光染色与高内涵细胞成像分析技术(HCA)检测各组海马神经元内GluR2、Beclin-1蛋白表达情况;采用Tunel染色检测各组海马神经元凋亡情况。结果与正常组及空白血清对照组比较,模型组海马NVU培养液上清中Glu含量显著升高(P 0. 01),GluR2表达明显减少(P 0. 01),Beclin-1表达明显增加(P 0. 01),细胞凋亡明显增多;与模型组比较,阳性药含药血清组与左归降糖解郁方含药血清组Glu含量显著降低(P 0. 01),GluR2表达上调(P 0. 01),Beclin-1表达下调(P 0. 01或P 0. 05),细胞凋亡显著减少。结论左归降糖解郁方对海马NVU细胞模型中神经元GluR2、Beclin-1蛋白表达具有明显的调控作用,该作用可能与改善谷氨酸失衡有关,这可能是其抑制细胞自噬继而抗DD海马神经元凋亡的重要机制。     

左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症海马神经元CaMKⅡ及SynGap的调控作用

目的探讨左归降糖解郁方对模拟糖尿病并发抑郁症(DD)大鼠海马神经元钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca MKⅡ)、磷酸化认知缺陷突触相关蛋白(Syn Gap)的影响。方法原代分离、纯化和培养SD大鼠海马神经元,采用高糖联合皮质酮构建DD模型。将培养的海马神经元随机分为5组:正常组、模型组、左归降糖解郁方含药血清组、阳性药(氟西汀+二甲双胍)含药血清组和空白血清组。药物干预18 d后,采用尼氏染色检测各组神经元的损伤情况,免疫荧光染色与高内涵细胞成像分析技术(HCA)检测Ca MKⅡ、Syn Gap的表达。结果与正常组及空白血清组相比,模型组海马神经元内尼氏小体数量显著减少,神经网络、树突棘断裂或消失,Ca MKⅡ、Syn Gap表达明显下调(P0.01);与模型组相比,阳性药含药血清组与左归降糖解郁方含药血清组尼氏小体明显增加,神经网络、树突数量及突触连接均明显恢复,细胞内Ca MKⅡ、Syn Gap蛋白表达增加(P0.01或P0.05)。结论左归降糖解郁方对DD大鼠模型海马神经元突触可塑性相关蛋白Ca MKⅡ、Syn Gap具有明显的调控作用,这可能是其抗细胞损伤和神经变性的重要机制之一。     

左归降糖解郁方对大鼠海马神经元细胞的保护作用

目的观察左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症（DD）细胞模型海马神经元损伤的保护作用。方法建立DD细胞模型,并采用左归降糖解郁方含药血浆进行干预,阳性对照组采用二甲双胍合氟西汀含药血浆。药物干预24 h,NSE鉴定神经细胞,MTT测定细胞存活率,TUNEL染色测定凋亡小体,葡萄糖氧化酶-过氧化物酶（GOD-POD）法检测海马神经元细胞葡萄糖消耗情况。结果 NSE法鉴定海马神经元细胞纯度达93%以上;左归降糖解郁方组在第24、48、72 h细胞存活率分别为80.5%、78.7%、73.2%,与模型组比较差异具有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）,且其海马神经元细胞存活率在72 h时增加较二甲双胍合氟西汀组更明显（P〈0.05）;TUNEL染色显示左归降糖解郁方含药血浆组免疫阳性细胞数明显减少,凋亡率为13.2%;左归降糖解郁方可明显消耗培养基中葡萄糖浓度,从12 h开始与模型组相比差异均有显著性统计学意义（P〈0.01）。结论左归降糖解郁方对DD细胞模型海马神经元细胞具有保护作用。     

左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马NVU连接蛋白表达的影响

目的基于神经血管单元(NVU)探讨左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马紧密和缝隙连接蛋白表达的影响。方法 70只成年雄性SD大鼠高脂乳剂灌胃、尾静脉注射链脲佐菌素联合慢性不可预见性应激建立糖尿病并发抑郁症动物模型,并随机分为5组:模型组,二甲双胍+氟西汀组,左归降糖解郁方高、中、低剂量组,另取12只未造模大鼠作为空白对照组,于应激造模同时灌胃给药28 d。旷场实验和Morris水迷宫评价大鼠自主活动水平和学习记忆能力,透射电镜观察大鼠海马NVU形态结构,免疫组化和实时荧光定量PCR检测大鼠海马紧密连接蛋白Claudin-1、Occludin和缝隙连接蛋白43(CX43)、水通道蛋白4(AQP4)的表达量。结果与空白对照组相比,模型组大鼠自主活动次数和空间探索时间明显减少、逃避潜伏期明显延长(P0.01);透射电镜和病理结果显示模型组大鼠海马内皮细胞肿胀,血管周围紧密连接和缝隙连接紊乱,细胞排列松散,Claudin-1、Occludin、CX43和AQP4及其mRNA表达显著降低(P0.01)。与模型组相比,左归降糖解郁方高剂量组自主活动次数和空间探索时间显著增加、逃避潜伏期显著减少(P0.05、P0.01);海马区域细胞水肿减轻,血管周围紧密和缝隙连接恢复,细胞排列较为整齐均一,Claudin-1、Occludin、CX43和AQP4及其mRNA表达明显升高(P0.05、P0.01)。结论左归降糖解郁方能明显缓解大鼠抑郁样行为,其机制可能与增强大鼠海马紧密和缝隙连接蛋白表达,维持海马NVU整体结构与功能有关。     

左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马区星形胶质细胞谷氨酸转运体的影响

目的研究左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠星形胶质细胞兴奋性氨基转运体3(EAAT 3)、囊泡谷氨酸转运体2(VGLUT 2)表达的影响。方法采用高脂乳剂灌胃、尾静脉注射链脲佐菌素、28天慢性应激联合的方法复制糖尿病并发抑郁症大鼠模型,SD大鼠随机分为5组:糖尿病并发抑郁症组,二甲双胍+氟西汀组,左归降糖解郁方高、中、低剂量组,以正常大鼠为空白对照组,灌胃给药4周。药物干预后,采用Morris水迷宫检测大鼠空间学习能力,免疫组化双标法检测星形胶质细胞中EAAT 3、VGLUT 2的表达情况。结果与空白对照组比较,糖尿病并发抑郁症组大鼠逃避潜伏期延长(P0.01),EAAT 3表达下降,VGLUT 2表达升高,差异有统计学意义(P0.05);与糖尿病并发抑郁症组比较,二甲双胍+氟西汀组和左归降糖解郁方高剂量组大鼠逃避潜伏期缩短,差异有显著统计学意义(P0.01),且二甲双胍+氟西汀组和左归降糖解郁方高、中、低剂量组EAAT 3表达升高,二甲双胍+氟西汀组和左归降糖解郁方高剂量组VGLUT 2表达下降,差异有统计学意义(P0.05)。结论左归降糖解郁方可以改善糖尿病并发抑郁症大鼠海马区星形胶质细胞EAAT 3、VGLUT 2表达的紊乱状态。     

姜黄素对离体培养大鼠海马神经元突触传递的影响

目的 探讨姜黄素对离体培养的大鼠海马神经元突触传递的影响.方法 离体培养胚胎18 d SD大鼠海马神经元,9 d后加入姜黄素(终浓度10 μmol/L),继续培养24 h,采用全细胞膜片钳技术,自由记录模式,观察姜黄素对海马神经元自发兴奋性突触后电流(sEPSC)和微小兴奋性突触后电流(mEPSC)频率和幅度的影响.结果 (1)姜黄素干预的海马神经元sEPSC频率(1.4 Hz±0.5 Hz)明显高于对照组(0.8 Hz±0.4 Hz,P＜0.01);但姜黄素组海马神经元sEPSC幅度(1834 pA±244 pA)和对照组海马神经元sEPSC幅度(1721 pA±391 pA)比较差异没有统计学意义(P=0.115).(2)姜黄素干预的海马神经元mEPSC频率(6.4 Hz±0.8 Hz)明显高于对照组(5.1 Hz±0.9 Hz,P＜0.01);但姜黄素组神经元mEPSC幅度(34 pA±10 pA)和对照组海马神经元mEPSC幅度(30 pA±9pA)比较差异没有统计学意SL(P=0.057).结论 姜黄素可以增强海马神经元突触传递,这可以为最近研究发现姜黄素具有缓解脑缺血、改善AD大鼠认知功能提供神经电生理学依据.     

大鼠睾丸支持细胞对培养海马细胞的作用

目的 研究睾丸支持细胞对于体外培养大鼠海马细胞的促进生存作用.方法 新生SD大鼠海马细胞常规酶解分离培养,12～16 d SD大鼠支持细胞采用二步酶消化和低渗分离培养,海马细胞培养分为DMEM组、支持细胞培养液(SCM)组、与支持细胞共培养组.结果 SCM组和支持细胞共培养组生存贴壁神经元数量均高于单纯DMEM组,随着培养时间的延长,3组神经元数量均逐渐减少,但神经元的平均突起数量均随时间的延长而增多,且同一时间SCM组和支持细胞共培养组生存神经元数量及平均突起数量均显著高于DMEM组,支持细胞共培养组神经元树突数量较SCM组明显增加.结论 支持细胞及其产生的可溶性因子可促进培养的海马神经元的生存和促进突起生长.     

补肾化痰祛瘀法对血管性痴呆大鼠认知功能的保护作用

目的研究补肾化痰祛瘀方对血管性痴呆（VaD）大鼠认知功能的改善作用。方法在缺糖缺氧培养条件下,观察补肾化痰祛瘀方血清对体外培养的海马神经元的保护作用。用双侧颈总动脉永久性结扎法（2VO）制备VaD大鼠模型,造模前予灌胃治疗,Morris水迷宫测试治疗后VaD大鼠认知功能的改善情况,TUNEL染色测定各组大鼠海马脑组织内细胞凋亡的变化。免疫组织化学方法检测Bcl-2、Bax蛋白表达。结果在缺糖缺氧培养条件下,体外培养海马神经元出现大量的细胞凋亡,而预先加入补肾化痰祛瘀方的血清进行处理后,细胞凋亡率明显下降。补。肾化痰祛瘀方灌胃治疗的VaD大鼠,与未予治疗的VaD大鼠组相比,治疗组大鼠找到平台的潜伏期缩短（P〈0．01）,穿越平台次数增多（P〈0．01）;与痴呆组相比,补肾化痰祛瘀方治疗组大鼠脑组织海马区凋亡细胞数明显减少,抗凋亡基因Bcl-2蛋白表达显著增加,凋亡基因Bax蛋白表达降低,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论补肾化痰祛瘀方对大鼠体外培养和脑组织内海马神经元具有神经保护作用,补肾化痰祛瘀方治疗可以明显改善VaD大鼠的认知功能。     

丝素纤维与海马神经元的生物相容性细胞培养研究

目的:研究丝素与体外培养的大鼠海马神经元的生物相容性。方法:采用制备丝素与SD大鼠胎鼠海马神经元共培养7天,每天倒置显微镜观察,免疫细胞化学染色激光共聚焦显微镜观察、分析。结果:通过光镜观察,发现大鼠海马神经元与丝素纤维共培养3天后,海马神经元附着于丝素纤维,神经突起沿丝素纤维向远处生长、延伸;培养7天后海马神经元形成神经元网络,包绕丝素纤维。免疫细胞化学染色显示附着于丝素上的细胞为神经元。结论:海马神经元沿着丝素纤维包裹生长,提示丝素纤维与海马神经元具有良好的生物相容性。     

醒脾解郁方对抑郁大鼠行为学及海马与骨骼肌线粒体超微结构的影响

目的探讨醒脾解郁方对抑郁模型大鼠行为学及海马与骨骼肌线粒体超微结构的影响。方法将Wister大鼠平均分成5组,即空白对照组、模型组、舍曲林组、醒脾解郁高、低剂量组。采用28 d慢性不可预见应激(CUS)建立抑郁模型,治疗各组给予相应药物灌胃,连续给药28 d。模型组、空白对照组以蒸馏水代替药液。以大鼠体重变化、糖水偏爱及旷场实验进行抑郁行为学评价,采用透射电镜观察大鼠海马神经元、骨骼肌细胞线粒体超微结构变化。结果与空白对照组相比,模型组大鼠体重增长缓慢、糖水偏爱率下降、旷场运动总路程减少(P0.01);与模型组相比,醒脾解郁高、低剂量组及舍曲林组大鼠体重、糖水偏爱率、旷场中运动总路程均明显增加(P0.05)。透射电镜观察结果:模型组海马神经元及骨骼肌细胞均出现线粒体数目减少、形态肿胀、空泡变性,内嵴排列紊乱甚至溶解消失。醒脾解郁高剂量组海马神经元及骨骼肌线粒体接近正常,未见肿胀及空泡变性;醒脾解郁低剂量组与舍曲林组海马神经元及骨骼肌的线粒体形态轻度肿胀,内嵴部分紊乱。结论慢性应激导致抑郁的发生中,海马与骨骼肌均会出现线粒体结构的损伤,这可能是抑郁症极度疲劳和多系统症状的关键因素之一;醒脾解郁方能改善大鼠抑郁行为学及线粒体结构损伤,其中高剂量组一定程度上比舍曲林组有效果更好的趋势。     

低密度体外培养大鼠海马神经元的形态学观察

目的 :建立大鼠海马神经元低密度体外培养方法 ,并观察其发育分化过程中的形态学指征变化情况 .方法 :采用神经元与星形胶质细胞立体共培养方法 .首先以新生大鼠为实验材料培养纯化单层星形胶质细胞 ,随后以孕 18d胎鼠为实验材料 ,分离海马皮层 ,经胰酶消化制备单细胞悬液 .以(2～ 5 )× 10 3·cm-2 密度接种于包被有多聚赖氨酸的盖玻片上 ,而后采用无血清培养液与星形胶质细胞立体共培养 ,并对不同培养时间的神经元进行形态学观察 .结果 :利用低密度体外培养方法成功培养出海马神经元 ,其在不同发育分化阶段具有不同的形态学特征 .结论 :低密度培养的海马神经元不同发育分化阶段具有不同的形态学特征 ,为今后的相关研究奠定了基础     

瘦素对血管性痴呆大鼠认知功能的改善作用

目的 研究瘦素脑内注射对双侧颈总动脉永久性结扎(2VO)所致血管性痴呆(VaD)大鼠认知功能的改善作用.方法 在缺糖缺氧培养条件下,观察瘦素对体外培养的海马神经元的保护作用,以及Western Blotting检测海马神经元瘦素受体的表达.在大鼠海马区预注射瘦素的基础上,用2VO法制作VaD大鼠模型,Morris水迷宫测试瘦素治疗后认知功能的改善情况,Tunel染色测定各组大鼠海马脑组织内细胞凋亡的变化.结果 体外培养海马神经元上存在着瘦素受体的表达,在缺糖缺氧培养12h后,海马神经元出现大量的细胞凋亡,凋亡率为(72.96±6.25)%,而在瘦素预处理1μg和5μg组,细胞凋亡率分别为(46.33 ±7.85)%和(23.58±5.08)%,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01).瘦素脑内注射的VaD大鼠,与未予治疗的VaD大鼠组相比,VaD瘦素治疗组大鼠找到平台的潜伏期缩短(P<0.01),找到平台的平均速度加快(P<0.01),与痴呆组相比,瘦素治疗组大鼠脑组织海马区凋亡细胞数明显减少,差异具有统计学意义(P<0.01).结论 瘦索对大鼠体外培养和脑组织内海马神经元具有神经保护作用,脑内注射瘦素可以明显改善VaD大鼠的认知功能.     

胰岛素诱导低血糖对新生大鼠海马神经干细胞增殖和分化的影响

目的探讨胰岛素诱导低血糖对新生大鼠海马神经干细胞(NSCs)增殖和分化的影响。方法新生1日龄大鼠禁食24 h后腹腔注射胰岛素50 u.kg-1,血糖值<1.0 mmol.L-1后取脑海马组织在含碱性成纤维生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)和B27的无血清培养基中进行原代和传代培养,并分别对原代和传3代的细胞进行单克隆培养及诱导分化:单克隆培养细胞行巢蛋白(Nestin)免疫细胞荧光染色;诱导分化后的细胞分别行神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫细胞荧光染色,计数NSE阳性细胞比例。结果原代组培养细胞与传代组和对照组原代细胞相比生长较快;单克隆培养的细胞均Nestin阳性表达,诱导分化后的细胞分别呈NSE或GFAP阳性表达;原代组的细胞诱导分化为神经元的比例明显高于传代组和对照组(P<0.05);传代组的细胞诱导分化为神经元的比例与对照组传代细胞比较无统计学意义(P>0.05)。结论低血糖能够短暂地促进新生大鼠海马神经干细胞增殖及提高向神经元分化比例。     

醒脑解郁方对卒中后抑郁大鼠海马组织中Notch/Hes信号通路功能的影响

目的探讨醒脑解郁方对卒中后抑郁(PSD)大鼠海马组织中Notch/Hes信号通路功能的影响。方法将80只健康雄性无特定病原体级Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、百忧解组和醒脑解郁方组,每组20只。模型组、百忧解组和醒脑解郁方组大鼠采用大脑中动脉线栓法制备大鼠脑缺血模型,再给予多种慢性不可预见性刺激制备抑郁症模型;对照组大鼠不予任何干预。PSD模型制备完成后,对照组和模型组大鼠给予生理盐水2.5 m L灌胃,百忧解组大鼠给予百忧解1.8 mg·kg-1溶于2.5 m L生理盐水中灌胃,醒脑解郁方组大鼠给予醒脑解郁方150.0 mg·kg-1溶于2.5 m L生理盐水中灌胃,均为每日1次,连续灌胃28 d。药物干预第19、28天,每组各选择10只大鼠立即处死,分离海马组织,采用实时荧光定量聚合酶链反应法和Western blot法检测海马组织中Notch和Hes mRNA及蛋白表达水平,采用膜片钳技术检测Notch信号通路开放概率、电流幅度、开放时间和关闭时间。结果药物干预第19、28天,模型组、百忧解组和醒脑解郁方组大鼠海马组织中Notch和Hes蛋白及mRNA表达显著高于对照组(P<0.05),百忧解组和醒脑解郁方组大鼠海马组织中Notch和Hes蛋白及mRNA表达显著高于模型组(P<0.05),醒脑解郁方组大鼠海马组织中Notch和Hes蛋白及mRNA表达显著高于百忧解组(P<0.05)。对照组大鼠第28天海马组织中Notch和Hes蛋白及mRNA表达与第19天比较差异均无统计学意义(P>0.05);模型组、百忧解组和醒脑解郁方组大鼠第28天海马组织中Notch和Hes蛋白及mRNA表达显著高于第19天(P<0.05)。药物干预第19、28天,模型组、百忧解组和醒脑解郁方组大鼠海马组织中Notch信号通路开放概率、电流幅度显著高于对照组,开放时间显著长于对照组,关闭时间显著短于对照组(P<0.05);百忧解组和醒脑解郁方组大鼠海马组织中Notch信号通路开放概率、电流幅度显著高于模型组,开放时间显著长于模型组,关闭时间显著短于模型组(P<0.05);醒脑解郁方组大鼠海马组织中Notch信号通路开放概率、电流幅度显著高于百忧解组,开放时间显著长于百忧解组,关闭时间显著短于百忧解组(P<0.05)。对照组大鼠第19、28天海马组织中Notch信号通路开放概率、电流幅度、开放时间及关闭时间比较差异均无统计学意义(P>0.05);模型组、百忧解组和醒脑解郁方组大鼠第28天海马组织中Notch信号通路开放概率、电流幅度显著高于第19天,开放时间显著长于第19天,关闭时间显著短于第19天(P<0.05)。结论醒脑解郁方能够介导PSD大鼠海马组织中Notch/Hes信号通路活化,从而有效促进神经功能恢复。Notch/Hes信号通路有望成为药物作用的重要靶点。     

BK8644对河豚毒素引起的大鼠海马锥体神经元AMPA受体介导的微小兴奋性突触后电流频率和幅度的影响

目的观察L-型钙通道(LTC)开通剂BK8644对河豚毒素(TTX)引起的大鼠海马锥体神经元α-氨基-羟基-5-甲基-4-异唑-丙酸(AMPA)受体介导的微小兴奋性突触后电流(mEPSCAMPA)的影响,探讨LTC是否作为神经环路兴奋性的感受器在调节突触稳态中发挥作用。方法建立培养海马神经元的稳态可塑性离体模型,并采用膜片钳全细胞模式记录突触内自发的mEPSC。结果TTX组mEPSCAMPA的频率显著高于对照组(P<0.05),而mEPSCAMPA电流幅度无显著差异(P>0.05);BK8644组和TTX+BK8644组与对照组比较,mEPSCAMPA的频率和幅度均无显著差异(P>0.05);TTX+BK8644组与TTX组比较,mEPSCAMPA频率降低(P<0.05),电流幅度无显著差异(P>0.05)。结论BK8644可对抗TTX引起的mEPSCAMPA频率升高,提示L-型钙通道可能参与稳态突触可塑性的调节。     

骨髓基质细胞条件培养液对中脑神经干细胞分化的影响

目的 :探讨骨髓基质细胞条件培养液诱导中脑神经干细胞分化为高比例神经元的机制。 方法 :采用骨髓基质细胞条件培养液培养中脑神经干细胞 7d ,通过免疫细胞化学染色方法鉴别和计数神经元的数量 ,并与自然分化组、骨髓基质细胞膜片段组、骨髓基质细胞固定组以及骨髓基质细胞共培养组相比较。 结果 :用成年大鼠骨髓基质细胞的条件培养液体外培养新生大鼠中脑神经干细胞 ,神经干细胞分化为神经元比例 [(40 .5± 14 .5 ) % ]明显高于自然分化组 [(16 .6± 10 .5 ) % ]、骨髓基质细胞膜片段组 [(2 0 .8± 12 .5 ) % ]以及骨髓基质细胞固定组 ,但与骨髓基质细胞共培养组 [(36 .1± 9.7) % ]相比无统计学差异 (P >0 .0 5 )。 结论 :骨髓基质细胞条件培养液可明显提高神经干细胞分化为神经元的比例     

培元解郁方对糖皮质激素诱导大鼠抑郁模型TRP-KYN代谢的影响及神经元可塑性调节机制

目的研究培元解郁方对糖皮质激素诱导大鼠抑郁模型的抗抑郁作用,对色氨酸-犬尿氨酸(TRP-KYN)代谢的影响以及对海马和皮层神经元可塑性的影响。方法将70只雄性大鼠随机分为7组,每组10只,分别为空白组、模型组、氟西汀组、天丝饮组、四逆散组和培元解郁方中、高剂量组,糖皮质激素注射28 d建立大鼠抑郁模型,造模结束后进行敞箱测试和糖水消耗测试;采用HPLC-MS/MS技术检测血清色氨酸(TRP)、犬尿氨酸(KYN)、犬尿烯酸(KA)、喹啉酸(Q)含量,RT-PCR检测海马和皮层神经元内N-甲基-D-天冬氨酸受体(NR)、脑源性神经营养因子(BDNF)表达水平。结果糖皮质激素注射28 d后,与空白组比较模型组大鼠糖水消耗量、敞箱活动的总得分显著降低(P0.05),KYN/TRP、KYN/KA比值显著升高(P0.05),海马BDNF mRNA表达显著降低(P0.05),皮层NR mRNA表达显著升高(P0.05)。培元解郁方可显著提高大鼠糖水消耗量(P0.05),敞箱活动总得分(P0.05),降低KYN/TRP、KYN/KA比值(P0.05),升高KYN/Q比值(P0.05),升高海马BDNF mRNA表达水平(P0.05),降低皮层NR mRNA表达(P0.05)。结论培元解郁方可以通过下调TRP-KYN代谢,抑制神经毒性,提高神经保护;通过促进皮层和海马尤其是皮层的神经元可塑性发挥抗抑郁作用。     

香萱解郁方对血清剥夺诱导HT22细胞损伤模型的神经保护作用

探讨香萱解郁方含药血清对血清剥夺致小鼠海马神经元HT22细胞损伤模型的影响。方法 采用血清剥夺培养HT22细胞建立神经损伤体外模型,实验分为对照组、模型组和中药组［中药组A（含药血清15%浓度）、中药组B（含药血清20%浓度）］,各组血清剥夺12 h后,通过CCK8法检测各组细胞活力,确定15%浓度含药血清干预后细胞的存活率最高,设定为后续实验中药组的药物浓度。免疫荧光染色法检测神经元特异性微管蛋白（β-Tubulin Ⅲ）在各组中的表达,蛋白质免疫印迹法及qPCR法检测脑源性神经营养因子（BDNF）蛋白及其mRNA在各组中的表达。结果 在加药后培养12 h,中药组的细胞活力明显高于对照组与模型组（P＜0.001）。培养24 h,模型组细胞活力较对照组明显下降（P＜0.001）,中药组较模型组明显提高（P＜0.001）。培养36 h,模型组细胞活力较对照组显著下降（P＜0.001）,中药组较模型组明显提高（P＜0.001）。模型组BDNF蛋白含量及 BDNF mRNA表达量较对照组显著降低（P＜0.05,P＜0.001）,模型组少数神经元长出突起;中药组BDNF蛋白含量及BDNF mRNA表达量较模型组显著增加（P＜0.05）,中药组HT22细胞轴突突起长度和分支增加,β-Tubulin Ⅲ阳性表达明显增多。结论 香萱解郁方含药血清对血清剥夺诱导小鼠海马神经元HT22细胞损伤具有神经保护作用,可能与促进BDNF蛋白表达有关     

地黄饮子含药血清对大鼠BMSCs与NSCs共培养影响转归的研究

目的探讨以升麻为药引子的地黄饮子(CRD)含药血清对经过骨髓间充质干细胞(BMSCs)共培养后的大鼠神经干细胞(NSCs)的存活和分化的影响。方法建立BMSCs与NSCs共培养模型,在共培养体系中加入CRD含药血清,从培养第3天开始分别进行5-溴-2-脱氧尿嘧啶(Brd U)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质细胞纤维酸性蛋白(GFAP)、神经元特异性标志物微管相关蛋白2(MAP-2)、少突胶质细胞特异性表达蛋白标志物(MBP)免疫细胞化学双染色。采用流式细胞仪检测NSCs的存活率,利用细胞免疫荧光和Western blot法鉴定NSCs的分化情况,比较NSCs的存活率和分化率,分析CRD含药血清对共培养后NSCs的存活及分化的影响。结果与生理盐水对照组相比,中、高浓度CRD含药血清在BMSCs与NSCs共培养体系中第7天能显著提高NSCs存活率和NSE、GFAP、MAP-2、MBP活性(P0.01)。结论 CRD含药血清在BMSCs与NSCs共培养体系中能促进NSCs有效分化和提高NSCs存活率。