银杏叶提取物对帕金森病模型大鼠神经形态学的影响

目的探讨银杏叶提取物（EGb）对帕金森病（PD）模型大鼠神经形态学的影响,了解EGb时PD大鼠多巴胺（DA）能神经元的作用。方法以6-OHDA部分损毁内侧前脑束的方法建立类似于人类PD早期的大鼠模型,通过Nissl染色及免疫组织化学方法观察PD大鼠黑质DA能神经元形态学的改变,并对尼氏体积分光密度（IOD）定量分析。结果GEb组尼氏染色下脑组织病理改变均较模型组轻。模型组尼氏体10D值低于正常组（P〈0.05）;GEb组尼氏体10D值高于模型组（P〈0.05）。模型组SNc、VTA区TH阳性细胞数明显减少,染色变浅,形状不规则,DA残存神经元百分比明显降低。EGb组损伤侧SNc、VTA区TH阳性细胞数增加,染色变深,形状规则,DA神经元残存数量明显升高。结论EGb能够抑制脑黑质DA能神经元的数量减少,减轻PD大鼠的神经元变性,对PD模型大鼠DA能神经元具有保护作用。     

APO诱导6-OHDA所致 PD 模型大鼠的旋转行为及其形态学改变

目的探讨不同时间点阿朴吗啡（APO）腹腔注射6-OHDA所致帕金森病模型大鼠的行为学及中脑腹侧被盖区（VTA）形态学变化。方法6-OHDA单侧一点注射大鼠右侧SNc，特异性毁损DA能神经元；术后1、7、14、21d腹腔注射APO，观察旋转行为；利用Nissl染色、免疫组织化学ABC法，观察各时间点VTADA能神经元形态学变化和TH表达情况。结果APO诱发PD大鼠模型异常旋转行为，Nissl染色见PD大鼠左侧中脑VTA有神经细胞肿胀、坏死等变化，VTA TH^＋神经元数量减少。结论APO能诱导6-OHDAPD模型大鼠的旋转行为，其强弱可能与TH^＋神经元数量直接相关。     

早期帕金森病大鼠模型的建立

目的 探索建立早期帕金森病（Parkinson disease,PD）大鼠模型.方法 成年大鼠单侧纹状体内注射6-羟多巴胺（6-hydroxydopamine,6-OHDA）.注射后第7天,通过姿势不对称性、前肢始动不能、前肢使用不对称性、阿朴吗啡诱发旋转实验进行行为学评估.观察组织学变化,取鼠脑黑质节段（n=6）,固定、石蜡包埋、连续冠状切片.焦油紫（Nissl）染色显示黑质神经细胞;抗酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH）抗体免疫组织化学染色显示黑质多巴胺（DA）能神经元,光镜下观察并进行细胞计数,统计学分析处理数据.而且,使另一部分模型动物（n=6）继续存活到第28天,鉴定所选动物模型的可靠性.结果 纹状体内注射6-OHDA后第7天,动物行为学出现有意义改变,黑质内神经细胞出现肿胀等变性坏死的早期形态变化,DA能神经元出现有意义减少;注射后的第28天,行为学改变更加显著,神经细胞大量减少,DA能神经元数量减少到92%.结论 纹状体内注射6-OHDA后第7天,通过行为学方法能确定早期PD动物模型.     

APP-17肽对大鼠多巴胺能神经元的保护作用

目的观察APP-17肽对大鼠多巴胺能神经元变化的影响。方法SD雌性大鼠分4组：对照组、帕金森病（PD）模型组、PD治疗组、APP-17肽预防组。PD以黑质多巴胺能神经元变性和减少为特征。以6-羟多巴胺单侧损毁大鼠脑内多巴胺能系统可建立PD动物模型。通过阿普吗啡诱导旋转，观察行为学改变，并经过高压液相法检测大鼠脑内纹状体和黑质多巴胺及其主要代谢产物水平，可反映多巴胺减少或恢复程度。4周后灌注固定，取大脑组织冰冻切片，作TH免疫组织化学染色。结果（1）行为学检查：APP-17肽预防组及PD治疗组旋转次数明显低于PD模型组。（2）多巴胺及代谢产物含量检测：APP-17肽预防组及PD治疗组代谢产物含量均有明显增加，接近对照组。（3）TH免疫组织化学染色：APP-17肽预防组及PD治疗组多巴胺能神经元数目与正常大鼠相似，明显多于PD模型组。结论APP-17肽对大鼠多巴胺能神经元具有防治和保护作用。     

痴呆模型大鼠中脑腹侧被盖区多巴胺能神经元的形态学改变

目的观察铝中毒痴呆模型大鼠中脑腹侧被盖区(VTA)多巴胺(DA)神经元的形态学变化,探讨中枢多巴胺递质在学习、记忆中的作用.方法以慢性铝中毒方式建立痴呆模型,以酪氨酸羟化酶(TH)为DA神经元的阳性标记物,采取免疫细胞化学ABC法观察中脑VTA TH免疫反应阳性神经元的形态学改变,利用图像分析系统测算VTA TH免疫反应阳性神经元的数目,分析试验结果.结果痴呆模型组中脑VTA TH免疫反应阳性神经元数量明显下降(P＜0.01),部分神经元出现突起消失、胞体肿胀或碎裂等表现.结论中脑VTA DA神经元与认知功能关系密切,其病变可能同老年性痴呆有关.     

氨基胍对帕金森病小鼠黑质内多巴胺能神经元的保护作用

目的：观察诱导型一氧化氮合酶（iNOS）特异性抑制剂氨基胍（AG）对帕金森病模型小鼠黑质内多巴胺（DA）能神经元的影响。方法：采用Lau法制作PD小鼠模型,通过行为学观察和免疫印迹法,观察PD小鼠模型的行为学表现,及腹侧中脑（包括VTA和SN）iNOS、酪氨酸羟化酶（TH）表达水平的变化。并观察给予iNOS抑制剂AG后对上述变化的影响。结果：与对照小鼠相比,PD小鼠出现PD典型的行为学表现,腹侧中脑TH含量下降约77%,同时i-NOS含量大幅度升高。经iNOS抑制剂AG处理的PD小鼠行为表现明显减轻,腹侧中脑TH含量仅下降约41%,腹侧中脑iNOS含量也较模型组明显为低。结论：iNOS的表达与PD模型小鼠黑质内DA能神经元的丢失有关;AG可能对PD模型小鼠黑质内DA能神经元有保护作用。     

大鼠PD模型多巴胺能神经元损毁与纹状体相关神经元内c-fos的表达

为探讨 6 羟多巴胺 ( 6 OHDA)损毁大鼠帕金森病 (PD)模型多巴胺能神经元变性缺失与纹状体相关神经元内c fos表达的关系 ,观察PD模型的中脑腹侧酪氨酸羟化酶 (tyrosine hydroxylase,TH)阳性神经元及c fos表达阳性细胞在纹状体的分布。免疫组化染色结果表明 :6 OHDA损毁 7d ,损毁侧TH阳性神经元及强阳性神经元较正常侧数目明显减少 (P <0 .0 5 ) ,但阿朴吗啡不能诱导c fos表达。损毁 2个月后TH阳性神经元在损毁侧完全消失 ,阿朴吗啡能诱导c fos在损毁侧尾壳核表达。结果提示 :c fos的表达能反映PD的多巴胺能神经元的变性缺失 ,其表达与否与多巴胺神经元损毁程度有关。     

6-羟基多巴胺诱导帕金森病大鼠相关蛋白及mRNA的表达

目的:研究双点法注射6-羟基多巴胺(6-OHDA)制备的帕金森病(PD)大鼠相关分子的改变.方法:采用脑立体定位仪6-OHDA微量注射建立大鼠PD模型,2周后注射阿朴吗啡(APO),观察其行为学改变,并利用高效液相-电化学法测定正常大鼠(n=10)及PD大鼠(n=23)黑质组织中多巴胺(DA)及其代谢物3,4-二羟基苯...     

单点注射6-羟基多巴胺成功建立帕金森病大鼠模型的实验研究

目的 探讨成功建立帕金森病（Parkinson＇s disease,PD）大鼠模型的快速有效方法.方法 将Wistar大鼠92只,随机分为实验组（80只）及对照组（12只）,采用脑立体定向术,实验组在大鼠右侧中脑腹侧被盖区（ventral tegmental area,VTA）注入6-OHDA,经阿朴吗啡（Apomorphine,APO）诱导表现为恒定左侧旋转且旋转圈数﹥210 r/30 min的视为成功PD大鼠模型,对照组则在脑部相应位置注入生理盐水.免疫组化法观察成功模型毁损侧黑质酪氨酸羟化酶（TH）阳性神经元的形态及数量变化.结果 （1）行为学检测：模型组与对照组手术后分别死亡2只及1只,实验组78只大鼠中36只左侧恒定旋转圈数﹥210 r/30 min,造模成功率为46.2%,并且维持时间长.（2）免疫组化：成功大鼠模型毁损侧黑质区TH阳性的神经元较对侧及对照组明显减少（P＆lt;0.01）.结论 大鼠中脑VTA单点注射6-OHDA制作PD大鼠模型,易于定位,操作简单,动物死亡率低,模型成功率较高,成本较低,是较快建立稳定PD大鼠模型的可行方法.     

银杏叶提取物对部分损毁的帕金森病大鼠黑质多巴胺能神经元的作用

目的了解银杏叶提取物(EGb)对帕金森病(PD)大鼠多巴胺(DA)能神经元的作用。方法以6-OHDA部分损毁内侧前脑束的方法建立类似于人类PD早期的大鼠模型,通过电生理学及免疫组织化学方法观察PD大鼠黑质DA能神经元电活动和形态学的改变,以及EGb对其的影响。结果 PD组SNc、VTA区TH阳性细胞数明显减少,染色变浅,形状不规则,DA残存神经元百分比明显降低;给予EGb后,随剂量增加损伤侧SNc、VTA区TH阳性细胞数增加,染色变深,形状规则,DA神经元残存数量明显升高,以高剂量组升高最为明显。PD组大鼠神经元放电频率显著高于对照组,低剂量治疗组和高剂量治疗组放电频率虽低于PD组,但均无统计学差异。4组大鼠的DA神经元放电形式均表现为规则放电、爆发式放电和不规则放电3种,其中PD大鼠爆发式放电比率高于正常组,治疗组大鼠爆发式放电比率低于PD组,与正常组接近。结论 PD状态下,SNc的DA神经元电活动增强;EGb能够减少PD大鼠SNc DA神经元的丢失,部分抑制PD大鼠的电活动,对PD大鼠DA神经元具有一定保护作用。     

电针对吗啡成瘾大鼠中枢多巴胺能神经元的影响

目的:探讨吗啡对大鼠中脑腹侧被盖区(VTA)、伏隔核(NAc)、前额皮层(PFC)内酪氨酸羟化酶(TH)及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的影响及电针的调节作用。方法:大鼠随机分为正常对照组、模型组、电针治疗组,每组5只,模型组、电针治疗组采用吗啡自身给药成瘾大鼠模型。电针治疗组选取双侧L5、L2夹脊穴,20 min/d,电针连续治疗10 d;正常对照组、模型组不予电针干预。采用免疫组化法观察各组大鼠VTA、NAc、PFC内TH、GFAP含量的变化。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠脑区VTA、NAc、PFC内TH及VTA内GFAP含量明显增加,差异均有统计学意义(P0.05);与模型组比较,电针治疗组大鼠脑区VTA、NAc、PFC内TH及VTA内GFAP含量明显降低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:吗啡成瘾后大鼠相关脑区的多巴胺能神经元发生了相应改变,电针治疗可调节多巴胺能神经元的异常表达,对吗啡成瘾大鼠的多巴胺能神经元起到保护作用。     

移植诱导中脑NSCs分化的多巴胺能神经元对PD大鼠治疗作用的实验研究

目的研究移植诱导中脑神经干细胞分化出的多巴胺能神经元对PD大鼠的治疗作用.方法利用纹状体提取液诱导大鼠胚胎中脑神经干细胞,使其部分分化为酪氨酸羟化酶(TH)阳性的多巴胺能神经元,继而把分化后的细胞移植到PD大鼠的纹状体内,免疫组化法证实移植细胞的存活并以诱发旋转行为的改善来观察其治疗作用.结果纹状体提取液能够诱导中脑神经干细胞分化出多巴胺能神经元而且这种经诱导后产生的细胞能够在PD大鼠体内长期存活并改善阿卟吗啡诱导的旋转行为.结论诱导中脑神经干细胞分化出的多巴胺能神经元对PD有一定的治疗作用.     

牛磺酸对胚胎中脑细胞移植后的保护作用

①目的　观察牛磺酸对帕金森病 (PD)模型大鼠胚胎中脑细胞移植术后移植细胞的存活及生长的影响。②方法　应用 6 羟基多巴胺 (6 OHDA)制备偏侧损毁的PD模型大鼠 ,将胚胎腹侧中脑 (VM )细胞悬液或生理盐水 (NS) (对照组 )立体定位移植到模型大鼠的损毁侧纹状体中 ,VM移植大鼠于术后侧脑室分别注射NS或牛磺酸 ,5 6d后通过免疫组织化学酪氨酸羟化酶 (TH)染色观察纹状体中多巴胺 (DA)能神经元 (TH阳性细胞 )的存活及生长情况。③结果　行胚胎中脑细胞移植术后 ,在PD模型大鼠的损毁侧纹状体中可检测到移植成活的DA能神经元 ,侧脑室注射牛磺酸组比侧脑室注射NS组细胞成活数目明显增多 (F =5 0 8.5 ,q =3.9,P <0 .0 1)。而在对照组模型大鼠的损毁侧纹状体中未检测到DA能神经元。④结论　牛磺酸可有效改善移植细胞的存活条件 ,并促进移植细胞的生长。     

外源性犬尿喹啉酸对黑质多巴胺能神经元损伤保护作用的实验研究

目的：观察评价预先应用谷氨酸（Glu)受体拮抗剂犬尿喹啉酸（KYNA）对黑质多巴胺（DA）能神经元及神经传导纤维损伤的保护性作用。方法：雌性SD大鼠40只，随机分为4组，每组10只，应用江湾I型C立体定向仪，在单侧黑质致密部（SNc)及中脑被盖腹侧部（VTA），A组注射生理盐水，B组注射KYNA，C组注射KYNA和6－OHDA，KYNA先于6－OHDA 0.5h,D组注射6－OHDA。注射药物3d后，进行症状观察，2周后处死大鼠。切片HE染色观察黑质细胞的形态特点，冰冻切片免疫组化特殊染色观察TH阳性细胞及TH阳性纤维着色情况，实验数据分别采用方差分析以及秩和检验进行统计分析。结果：正常黑质细胞体形较大，富含黑色素颗粒，可见尼氏体。数据统计分析结果提示B组与A组之间无显著影响，P＞0．05。实验组C与A、B、D组比较均有显著性差异，P＜0．01。结论：外源性谷氨酸受体拮抗剂KYNA通过阻滞Glu受体能减轻6－OHDA诱导的黑质DA能神经元毒性损害。     

人参皂苷Rg1对多巴胺能神经元的保护作用及ICI182,780的阻断作用

目的研究人参皂苷Rg1对去卵巢（ovariectomized,OVX）帕金森病（Parkinson disease,PD）模型大鼠黑质（substantianigra,SN）酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH）表达的影响以及ICI182,780的阻断作用。方法雌性Wistar大鼠随机分为正常组、OVX组、6-hydroxydopamine（6-OHDA）组、Rg1＋6-OHDA组及ICI＋Rg1＋6-OHDA组。大鼠OVX后应用6-OHDA单侧损毁内侧前脑束（medial forebrain bundle,MFB）制备PD模型,腹腔注射Rg1或侧脑室同时给予雌激素受体（estro-gen receptor,ER）拮抗剂ICI182,780,免疫组织化学技术检测TH阳性神经元,RT-PCR技术检测SN内TH基因的表达。结果OVX大鼠SN内TH基因的表达较正常大鼠明显降低（P〈0.05）。6-OHDA制备的PD模型组损毁侧SN内TH阳性神经元数量及TH基因表达较健侧明显降低（P〈0.01）。与模型组相比,Rg1可显著提高损毁侧大鼠SN内TH阳性神经元数量及TH基因的表达（P〈0.01）。此效应可以被ER拮抗剂ICI182,780完全阻断（P〈0.01）。结论ER拮抗剂ICI182,780可以阻断人参皂苷Rg1对OVX PD模型大鼠黑质多巴胺能神经元的保护作用。     

胚胎中脑细胞植入帕金森病模型大鼠脑内的实验研究

目的：观察胚胎中脑细胞脑内移植治疗帕金森病(PD)模型大鼠的长期疗效。方法：将取自11．5天胚胎(E11．5)大鼠的中脑细胞植入PD模型大鼠的绞状体，观察大鼠旋转行为的改变，并于移植手术1年后用免疫组织化学的方法检测移植细胞的存活及其分化为多巴胺能神经元的状况。结果：E11．5大鼠中脑细胞在植入脑内后能够明显改善PD大鼠的旋转行为，但只有不到0．1％的移植细胞能够分化成为多巴胺能神经元，这些分化良好的多巴胺能神经元可以在脑内长期存活。结论：E11．5大鼠的中脑细胞植入PD模型大鼠的绞状体后，虽然有一定的疗效，但其最终分化成为多巴胺能神经元的比例却较低，提示E11．5大鼠胚胎中脑细胞不如E13—E15大鼠胚胎中脑细胞脑内移植治疗PD的效果好。     

白藜芦醇对帕金森病大鼠黑质多巴胺能神经元损伤的保护作用

 目的 观察白藜芦醇(Res)对脂多糖（LPS）所致大鼠黑质多巴胺能（DA）神经元损伤的保护作用。方法 黑质内注射LPS制作帕金森病（PD）大鼠模型。应用Res对实验动物进行处理。通过行为学、酪氨酸羟化酶（TH）、核因子κB（NF-κB）等免疫组化及免疫印迹技术观察Res对DA能神经元损伤的作用。结果 对照组大鼠无行为学变化,PD组大鼠平均旋转圈数为（196.90±9.52）圈,Res组为（106.57±7.89）圈,差异有统计学意义（P<0.01）。TH免疫组化结果表明,对照组大鼠黑质TH阳性神经元数量较多,胞体较大,突起明显;PD组神经元数量明显减少（P<0.01）,甚至消失,神经元胞体萎缩,突起亦不清晰。Res组TH阳性神经元数量与PD组相比明显增加（P<0.01）,神经元形态变化亦不明显。NF-κB免疫组化结果表明,对照组黑质仅见少数NF-κB阳性细胞,无明显核转位现象;PD组黑质NF-κB阳性细胞较多,胞质呈黄褐色,部分细胞核也着色,有明显核转位现象;与PD组相比,Res组NF-κB阳性细胞数明显减少（P<0.01）。小胶质细胞特异性抗体（OX-42）免疫组化结果表明,对照组大鼠黑质小胶质细胞多呈静止的“分枝样”状态,PD组多为激活状态,呈典型的“阿米巴样”;Res组激活状态的小胶质细胞与PD组相比明显减少,形态介于静止和激活状态之间。Western blot分析结果显示,与对照组相比,PD组TH蛋白表达减少,NF-κB P65蛋白表达明显增高（P<0.01）;与PD组相比,Res组TH蛋白表达增加,NF-κB P65蛋白表达显著下降（P<0.01）。结论 Res可对LPS所致黑质DA能神经元损伤起防护作用,具有抗炎及神经保护作用。     

帕金森病体外实验细胞模型的建立

目的： 探讨1-甲基-4-苯基-四氢吡啶离子（MPP⁺ ）对小鼠胚胎中脑原代培养多巴胺能神经元的毒性作用及其机制。在体外建立帕金森病（PD）实验研究的细胞模型。方法：采用小鼠胚胎（孕14 d）中脑进行原代细胞培养，实验分为对照组和不同浓度(0.1、１、10和15 μmol•L^-1)MPP⁺药物实验组，应用酪氨酸羟化酶（TH）免疫化学细胞染色方法 和Hoechst33342荧光染色对多巴胺能神经元的损伤及凋亡进行测定。结果：对照组中多巴胺能神经元的数量为(875±23)个/孔。在0.1、１、10和15 μmol•L^-1 MPP⁺实验组，多巴胺能神经元的数量分别为(612±25)、(586±32)、(459±16)和(435±19)个/孔，与对照组比较，MPP⁺实验组多巴胺能神经元数量均明显降低（P<0.05）,多巴胺能神经元突起的数目和长度明显减少。Hoechst33342 染色发现，对照组中凋亡细胞数占总细胞数的(5.45±0.29)%,10 μmol•L^-1 MPP⁺药物治疗组细胞凋亡率为(26.97±1.36)%，显著高于对照组水平（P<0.05）。结论：0.1、１、10 和15 μmol•L^-1 MPP⁺均引起多巴胺能神经元的数量显著减少，随着药物浓度的增加，多巴胺能神经元减少的程度越显著。MPP⁺引起的多巴胺能神经元的变性死亡可能通过凋亡途径所诱导。