转化生长因子β对大鼠神经干细胞增殖和分化的调控作用

目的:研究转化生长因子β对新生(P0天)大鼠脑室管膜前下区(anteriorsubventricularzone,SVZa)神经干细胞增殖、迁移和分化的调控作用。方法:应用地高辛标记的cRNA探针核酸分子原位杂交技术显示新生大鼠脑内转化生长因子β(transforminggrowthfactor-β,TGF-β)的mRNA表达。结果:新生大鼠的脑内广泛表达TGF-βmRNA,尤以SVZa区经喙侧迁移流(rostralmigratorystream,RMS)至嗅球的通路上最为明显,其强度又以SVZa区最强,阳性细胞数量最多,密度最大,RMS区域相对较弱,嗅球又见增多。细胞核和细胞质内均可见到阳性产物,但阳性产物主要沉积在胞核内。结论:SVZa区神经干细胞表达了较高含量的TGF-β,提示TGF-β参与了维持SVZa区神经干细胞的增殖状态,使SVZa区的神经干细胞处于适度稳定的增殖状态,而嗅球区表达量较高的TGF-β则可能主要参与促进细胞分化。     

维甲酸诱导MESPU35胚胎干细胞系定向分化神经细胞的最佳条件

背景:神经轴突再生是治疗中枢神经系统损伤必须克服的困难之一,包括移植神经干细胞、胚胎干细胞和许旺细胞等在内的细胞移植疗法已取得显著疗效,然而供体细胞不足的瓶颈限制了其发展。目的:观察维甲酸诱导MESPU35胚胎干细胞分化过程,找到其最佳分化为神经细胞的条件。设计:非随机对照实验。单位:解放军第三军医大学组织胚胎学教研室。材料:实验于2000-01/05在解放军第三军医大学基础部组织胚胎学教研室完成。发情期昆明种小鼠18只,雌12只,雄6只,2∶1同笼交配,阴栓检出日记为受孕1d。MESPU35胚胎干细胞株。方法:孕13～16d的小鼠胚胎,去头,胸腹腔脏器及四肢后,制备饲养层细胞。①采用饲养层贴壁培养增殖MESPU35胚胎干细胞,经典4-/4 法(即拟胚体自然生长4d,不加维甲酸,随后4d添加维甲酸诱导形成高比例神经拟胚体的方法)诱导其神经定向分化,不同浓度血清培养拟胚体,相差显微镜观察不同血清浓度下神经样拟胚体并计数。②免疫细胞化学技术观察各个分化时相点(5,9,14d)和不同维甲酸浓度下分化细胞形态学特征,流式细胞仪计数分化神经细胞比例。主要观察指标:①维甲酸诱导MESPU35胚胎干细胞分化后神经拟胚体形成中突起和细胞体长度估计测量。②免疫细胞化学染色分化细胞形态观察及流式细胞仪测量分化细胞比例。结果:①相差显微镜观察发现不同血清浓度对拟胚体形成后神经定向分化有一定影响,血清浓度过高和过低降低了拟胚体神经分化比例,5%血清浓度分化比例高。②免疫细胞化学观察维甲酸诱导MESPU35胚胎干细胞分化形成的NF200阳性细胞和胶质纤维酸性蛋白阳性细胞的比例随分化时相点和维甲酸浓度升高而升高,NF200阳性细胞形态由无突起变为多极细胞,胶质纤维酸性蛋白阳性细胞突起由短变长,最后联结成网状。③流式细胞仪检测分化产生的胶质纤维酸性蛋白、NF200阳性细胞比例变化类似免疫细胞化学。结论:维甲酸配合合适的血清浓度、分化时相点等条件能够诱导MESPU35胚胎干细胞高比例神经分化,其分化调节以浓度依赖模式和时间依赖模式进行。     

胎儿中枢神经系统Bax mRNA表达调控正常神经系统发育的研究

目的:研究胎儿中枢神经系统内BaxmRNA的表达对正常神经系统发育的调控作用。方法:用地高辛标记的BaxcRNA探针原位杂交组织化学技术,检测12～39周胎儿中枢神经系统内BaxmRNA的表达情况。结果:BaxmRNA广泛分布于发育中的胎儿大脑皮质、小脑皮质和脊髓,在人胎儿程序化细胞死亡的两次高峰期,分别为第12周(大脑皮质93.41±10.21,小脑皮质65.75±7.48,脊髓85.46±9.83)和第39周(大脑皮质57.96±6.50,小脑皮质47.39±6.96,脊髓54.55±6.47),均伴有BaxmR-NA的表达升高。结论:Bax参与了对正常神经系统发育中细胞数量的调控。     

Wnt信号分子在大鼠中枢神经系统的表达及其共存

目的:通过研究Wnt信号分子在大鼠中枢神经系统(CNS)的表达及分布,以探讨Wnt信号分子在CNS早期发育的可能调控机制,以及Wnt信号分子之间的功能联系.方法:应用免疫组织化学及双标记技术,观察了Wnt信号分子β-catenin、糖原合成酶激酶3β(Gsk-3β)、大肠腺瘤样息肉基因(APC)等关键调控分子在成年大鼠CNS的表达分布、细胞定位及共存关系.结果:免疫组织化学显色显示Gsk-3β阳性细胞多为具有突起的神经元样细胞,其主要分布区域包括新皮层、背内侧丘脑、海马、小脑浦肯野细胞及脑干多个核团.β-catenin与APC在分布模式上与Gsk-3β高度一致.双标记实验显示β-catenin与APC除神经元外,在部分星形胶质细胞也存在表达,而Gsk-3β则主要显示神经元定位.部分β-catenin阳性细胞,特别是室下层及海马区阳性细胞还呈现与神经前体细胞标记物巢蛋白的共存.结论:Wnt信号分子在CNS存在着密切相关的功能联系,同时在不同细胞及组织区域可能还具有其特有的生物效应,与神经前体细胞和神经胶质细胞增殖分化密切相关,对其相关信号机制有待深入研究.     

神经干细胞移植促进脊髓损伤大鼠脊髓功能的恢复

目的：观察神经干细胞移植对脊髓损伤大鼠功能恢复的作用。方法：30只Wistar大鼠随机分为对照组、损伤组和移植组，每组10只；损伤组和移植组制作成L4平面的脊髓全横断模型，将培养的大鼠NSCs悬液注入移植组损伤脊髓处，损伤组注射等量的生理盐水。术后2个月，采用BBB评分、皮层体感诱发电位(CSEP)和辣根过氧化物酶(HRP)逆行示踪技术观察大鼠脊髓运动和传导功能的恢复程度。结果：术后2个月BBB评分损伤组、移植组大鼠有所恢复，但都未达到正常水平，其中移植组的大鼠恢复较好，评分较高，与损伤组有显著性差异。脊髓损伤后，损伤组、移植组的CSEP波消失，术后2个月移植组的波形有所恢复，但潜伏期延长。对照组脊髓前角可见到许多HRP标记阳性神经元，损伤组未见阳性神经元，移植组可见有阳性神经元，但数目较对照组少。结论：NSCs脊髓内移植能促进损伤脊髓运动和传导功能的部分恢复。     

大胶质细胞混合培养与分离培养的方法评价

反应性胶质化是一个比较复杂的病理生理过程 ,在此过程中许多因素均可影响胶质细胞的反应 ,使得在体情况下评价和分析反应性胶质化比较困难。本实验旨在寻找一种能获得比较理想的、纯化单一的胶质细胞的方法 ,为进一步深入研究反应性胶质化机制创造条件。1　材料与方法1.1　主要仪器和试剂　 CO2 培养箱 (德国 Herunas) ;2 4孔培养板 ;螺口三角培养瓶 ;胎牛血清 (无支原体 ,中国科学院牲制品公司 ) ;Anti- GFAP、 Anti- NF;Anti- Galactocere-broside、DMEM/ F12、Poly- L- L isine( Sigma公司 ) ;Anit- CN-Pase( Prom ega公司 )…     

ER-β在小鼠基底前脑生后不同发育时期的表达

基底前脑包括斜角带垂直部与水平部、隔内侧核和嗅结节岛等部位 ,是雌激素和神经生长因子的重要靶区 ,与学习记忆和老年性痴呆 (AD)有着重要的联系 ,雌激素缺乏可能是导致 AD的重要原因。已经发现雌激素替代治疗可以减少 AD患者基底前脑胆碱能神经元的丢失、减少 β-淀粉样蛋白的沉积 ,进而改善 AD患者的痴呆症状 ,但其机理至今仍不清楚。雌激素 β受体 (ER- β)是近年来新发现的雌激素受体 ,研究表明该受体介导的雌激素信号可能与“经典”的雌激素受体即 ER- α有差异。本文应用免疫组化技术研究了生后不同发育时期大鼠基底前脑内 ER…     

芳香化酶在脑和肿瘤中的表达、调控与意义

芳香化酶催化雄激素转化为雌激素,该酶不仅见于性腺和脂肪组织,也见于脑组织。机体局部产生的雌激素不仅作用于生殖系统,也影响脑发育与肿瘤发生。1脑组织中的芳香化酶,脑芳香化酶的表达主要见于下丘脑与边缘系统。在皮质、海马等部位也发现有芳香化酶表达。核周质、轴突和轴突末梢、突触扣结大都呈阳性反应,免疫染色阳性神经元常与免疫染色阴性神经元形成突触连结。2芳香化酶与肿瘤,雌激素依赖性肿瘤大都有芳香化酶的过度表达,约96%的乳腺癌组织芳香化酶表达高于正常水平。癌细胞局部表达的芳香化酶能促进癌细胞的生长。如向能稳定表达芳香…     

芳香化酶在生后早期小鼠脑内基因表达的原位杂交研究

芳香化酶细胞色素P450能催化特定脑区雄激素转化为雌激素。在中枢神经系统发育中,局部雌激素的形成可以影响神经结构的性差异,调节神经内分泌和性生殖功能和参与学习记忆。而脑内雌激素的有效浓度依赖于芳香化酶的基因表达及其活性。芳香化酶活性仅在脑发育中特定的脑区如下丘脑和边缘系统检测到。关于其基因表达的研究结果不尽一致。本研究采用人胎盘芳香化酶cDNA为模板,体外转录地高辛标记的cRNA为探针,应用原位杂交技术研究了芳香化酶mRNA在小鼠生后早期(P2～P15)脑内的分布。结果显示,阳性信号主要分布于大脑皮质,海马、丘脑及下丘…     

NKA-I细胞在大鼠消化道的发生发育

目的：探讨ＮＫＡ－Ｉ细胞在大鼠消化道的发生，发育规律及其与的关系。方法：应用免疫细胞化学ＰＡＰ法，观察了胚胎１３ｄ至生后９０ｄ及成年大鼠消化道内ＮＫＡ－Ｉ细胞发生及发育的变化。结果；ＮＫＡ－Ｉ细胞首先见于胚胎１４ｄ的十二指肠粘膜，早于空肠和回肠，其阳性反应强度及细胞数量随发育而增加，３０ｄ时与成年鼠相似．