神经干细胞联合胶质细胞源性神经营养因子脑内移植治疗帕金森病的实验研究

目的：探讨胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF）对脑内移植神经干细胞（neural stem cells,NSCs）的存活、分化及对帕金森病（Parkinson＇s disease,PD）模型大鼠的治疗作用.方法：采用原代培养胚胎14.5天的胎鼠腹侧中脑NSCs,单独或经GDNF预处理后移植入PD模型大鼠的纹状体,观察NSCs在纹状体的分化情况,以及PD模型大鼠旋转行为的变化.结果：联合GDNF移植NSCs比单纯移植的NSCs较多的转化为多巴胺能神经元,并能够改善PD模型大鼠的旋转行为.结论：GDNF可以促进中脑来源的NSCs向多巴胺能神经元转化,并对PD模型大鼠有较好的治疗作用.     

移植诱导中脑NSCs分化的多巴胺能神经元对PD大鼠治疗作用的实验研究

目的研究移植诱导中脑神经干细胞分化出的多巴胺能神经元对PD大鼠的治疗作用.方法利用纹状体提取液诱导大鼠胚胎中脑神经干细胞,使其部分分化为酪氨酸羟化酶(TH)阳性的多巴胺能神经元,继而把分化后的细胞移植到PD大鼠的纹状体内,免疫组化法证实移植细胞的存活并以诱发旋转行为的改善来观察其治疗作用.结果纹状体提取液能够诱导中脑神经干细胞分化出多巴胺能神经元而且这种经诱导后产生的细胞能够在PD大鼠体内长期存活并改善阿卟吗啡诱导的旋转行为.结论诱导中脑神经干细胞分化出的多巴胺能神经元对PD有一定的治疗作用.     

胚胎神经上皮干细胞PD大鼠模型脑内移植的比较

目的观察胚胎神经上皮干细胞分别植入PD大鼠模型两侧纹状体内的存活、分化及对疾病的治疗情况。方法将GFP转基因鼠的胚胎神经上皮干细胞体外克隆增殖后,分别立体定向移植到PD模型鼠的毁损侧纹状体和健康侧纹状体内,术后观察动物的行为改变,分期取材后检测移植细胞的存活与分化状况,比较两种移植方式的治疗作用。结果移植后实验动物的旋转行为明显改善,移植细胞在宿主脑内存活良好,并分化出TH阳性神经元,损伤侧移植组效果更好。结论神经上皮干细胞植入损伤侧纹状体内的治疗效果更好。     

胚胎中脑神经干细胞移植治疗大鼠帕金森病模型

目的：研究胚胎中脑神经干细胞（ mNSCs）移植对帕金森病（ PD）模型大鼠的治疗作用。方法分离培养大鼠胚胎mNSCs并进行EGFP基因修饰。前脑内侧束和纹状体立体定向注射6－羟多巴胺建立PD大鼠模型。将EGFP基因修饰mNSCs定向移植到PD大鼠纹状体区。免疫荧光组织化学鉴定移植细胞的存活、迁移和分化。行为学实验观察治疗效果。结果 EGFP基因修饰胚胎mNSCs移植能分化为多巴胺神经元和小胶质细胞。移植后行为学实验发现可改善运动功能。结论移植EGFP基因修饰胚胎mNSCs可改善PD大鼠的运动障碍。     

牛磺酸对胚胎中脑细胞移植后的保护作用

①目的　观察牛磺酸对帕金森病 (PD)模型大鼠胚胎中脑细胞移植术后移植细胞的存活及生长的影响。②方法　应用 6 羟基多巴胺 (6 OHDA)制备偏侧损毁的PD模型大鼠 ,将胚胎腹侧中脑 (VM )细胞悬液或生理盐水 (NS) (对照组 )立体定位移植到模型大鼠的损毁侧纹状体中 ,VM移植大鼠于术后侧脑室分别注射NS或牛磺酸 ,5 6d后通过免疫组织化学酪氨酸羟化酶 (TH)染色观察纹状体中多巴胺 (DA)能神经元 (TH阳性细胞 )的存活及生长情况。③结果　行胚胎中脑细胞移植术后 ,在PD模型大鼠的损毁侧纹状体中可检测到移植成活的DA能神经元 ,侧脑室注射牛磺酸组比侧脑室注射NS组细胞成活数目明显增多 (F =5 0 8.5 ,q =3.9,P <0 .0 1)。而在对照组模型大鼠的损毁侧纹状体中未检测到DA能神经元。④结论　牛磺酸可有效改善移植细胞的存活条件 ,并促进移植细胞的生长。     

帕金森病大鼠模型的改进及神经前体细胞移植治疗的行为学研究

目的 探讨提高6-羟多巴胺(6-OHDA)帕金森病大鼠模型成功率的技术改进方法，并对改进模型进行行为学评价?观察神经前体细胞定点移植对改进型PD大鼠模型行为学的影响。方法 6-0HDA双点微量注射于大鼠左侧大脑制备PD大鼠模型并观察其行为学变化。小鼠胚胎干细胞的培养和无血清神经诱导，神经前体细胞恼内移植，移植后PD大鼠行为变化。结果 改进注射方法后PD大鼠模型制备成功率为73.3％，较常规制备方法明显提高；神经前体细胞脑内移植后的PD大鼠的旋转次数明显减少；结论 使用6-OHDA双点注射选择性破坏大鼠多巴胺能神经元，可建立较稳定的且成功率较高的PD模型。小鼠ES细胞诱导的神经前体细胞脑内移植后PD大鼠旋转次数明显减少。     

帕金森病大鼠模型的改进及神经前体细胞移植治疗的行为学研究

目的探讨提高6-羟多巴胺(6-OHDA)帕金森病大鼠模型成功率的技术改进方法,并对改进模型进行行为学评价.观察神经前体细胞定点移植对改进型PD大鼠模型行为学的影响.方法 6-OHDA双点微量注射于大鼠左侧大脑制备PD大鼠模型并观察其行为学变化.小鼠胚胎干细胞的培养和无血清神经诱导,神经前体细胞脑内移植,移植后PD大鼠行为变化.结果改进注射方法后PD大鼠模型制备成功率为73.3%,较常规制备方法明显提高;神经前体细胞脑内移植后的PD大鼠的旋转次数明显减少;结论使用6-OHDA双点注射选择性破坏大鼠多巴胺能神经元,可建立较稳定的且成功率较高的PD模型.小鼠ES细胞诱导的神经前体细胞脑内移植后PD大鼠旋转次数明显减少.     

神经干细胞移植治疗神经变性疾病的实验研究

目的:体外分离培养的胚胎大鼠神经干细胞(NSCs),移植入患有舞蹈症的转基因大鼠的纹状体内的存活、分化情况及对大鼠脑内多巴胺含量的影响.方法:无菌条件下剖腹取5只SD胚胎大鼠(孕15d)剥离出整个脑组织,进行体外神经干细胞的扩增培养,收集细胞悬液用自动微量注射器垂直刺入大鼠纹状体.结果:胚胎大鼠脑组织中分离的NSCs,可在体外稳定扩增,并且具有分化为神经元的能力,将标记的NSCs细胞悬液移植入大鼠纹状体,移植后5个月,免疫组化检测发现损伤的多巴胺神经元处显示酪氨酸羟化酶呈阳性的神经元.结论:在受损的纹状体移植入NSCs后,NSCs可被诱导分化为多巴胺神经元,进行功能重建.可见应用体外扩增的NSCs移植治疗神经性疾病是可行和有效的.     

神经干细胞移植治疗神经变性疾病的实验研究

目的:体外分离培养的胚胎大鼠神经干细胞(NSCs),移植入患有舞蹈症的转基因大鼠的纹状体内的存活、分化情况及对大鼠脑内多巴胺含量的影响。方法:无菌条件下剖腹取5只SD胚胎大鼠(孕15 d)剥离出整个脑组织,进行体外神经干细胞的扩增培养,收集细胞悬液用自动微量注射器垂直刺入大鼠纹状体。结果:胚胎大鼠脑组织中分离的NSCs,可在体外稳定扩增,并且具有分化为神经元的能力,将标记的NSCs细胞悬液移植入大鼠纹状体,移植后5个月,免疫组化检测发现损伤的多巴胺神经元处显示酪氨酸羟化酶呈阳性的神经元。结论:在受损的纹状体移植入NSCs后,NSCs可被诱导分化为多巴胺神经元,进行功能重建。可见应用体外扩增的NSCs移植治疗神经性疾病是可行和有效的。     

人神经干细胞临床移植治疗帕金森病

目的:探索人神经干细胞移植治疗帕金森病(Parkinson disease,PD)的有效方法.方法:5～11周人胚胎的前脑细胞在体外稳定扩增,并向多巴胺神经元转化,通过立体定向手术将其植入PD患者的纹状体;2000年11月至2002年11月,采用此方法治疗50例PD患者.结果:人胚胎前脑细胞可在体外扩增并维持不分化状态1年以上,扩增的细胞可达原始细胞数量的1×107倍,并可向多巴胺能神经元转化;PD患者临床移植手术后随访8～30个月(平均24个月),有效率为92％,未见明显的免疫排斥反应.结论:应用体外长期扩增的人类神经干细胞移植治疗PD是可行和有效的.     

稳定表达GDNF的MN9D/GDNF工程细胞可明显改善帕金森病模型大鼠的旋转行为

目的：观察稳定表达ＧＤＮＦ的ＭＮ９Ｄ／ＧＤＮＦ工程细胞对６羟基多巴胺损毁所致帕金森病（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎｄｉｓｅａｓｅ，ＰＤ）模型大鼠旋转行为有无治疗作用。方法：用６羟基多巴胺损毁大鼠单侧中脑黑质多巴胺能神经元、２周后腹腔注射阿朴吗啡诱导大鼠出现偏侧旋转行为的方法制备ＰＤ模型大鼠。通过脑立体定位技术，将稳定表达ＧＤＮＦ的ＭＮ９Ｄ／ＧＤＮＦ工程细胞注入模型鼠损毁侧纹状体，１周后观察阿朴吗啡诱导的旋转行为有无改善。结果：稳定表达ＧＤＮＦ的ＭＮ９Ｄ／ＧＤＮＦ工程细胞可明显降低ＰＤ模型大鼠的异常旋转行为，治疗作用达１０周之久。结论：运用ｅｘｖｉｖｏ方法和防治兼顾的策略对于ＰＤ基因治疗的基础研究及临床应用具有重要意义。     

神经干细胞移植对帕金森病鼠旋转行为的影响

目的 :观察神经干细胞定向移植后对帕金森病 (Parkinsondisease,PD)鼠的旋转行为的影响。方法 :建立PD模型大鼠以及体外培养神经干细胞 ,然后将神经干细胞悬液立体定向移植到PD模型鼠黑质纹状体区 ,测定PD模型鼠旋转行为的变化 ,并与对照组相比。结果 :神经干细胞移植后PD模型鼠旋转行为比对照组明显减少。结论 :神经干细胞移植能减轻 6 羟基多巴胺对黑质纹状体多巴胺能神经元的损伤。     

电针及针药结合对PD大鼠行为学及DA含量的影响

[目的]观察电针及针药结合对帕金森病大鼠的行为学指标的影响,及其对纹状体内多巴胺含量的影响。[方法]纹状体内注入6-OHDA制作PD大鼠模型。将大鼠随机分为假手术组、手术组,将造模成功的手术组大鼠随机分为电针治疗组、美多巴治疗组、针药结合组、模型对照组。检测各组实验大鼠的旋转行为,并通过高效液相电化学法测定各组实验大鼠纹状体内多巴胺含量。[结果]对各组实验大鼠行为学检测及脑纹状体内多巴胺的含量检测结果显示,与模型对照组及假手术组比较,各治疗组差异显著(P0.05);各治疗组间比较无差异。[结论]说明电针疗法、、针药结合疗法有与口服美多巴相似的疗效,可以有效提高纹状体内DA的含量,改善帕金森病大鼠的旋转行为。     

GM1对帕金森病治疗作用的实验研究

研究单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)对帕金森病(PD)的治疗作用。运用选择性偏侧(右侧)PD大鼠模型,观测正常对照组、PD组(造模后14d)、PD生理盐水(NS)治疗组和GM1治疗组(10mg／kgIPqd、连续14d),阿朴吗啡(APO)诱发的旋转行为改变和纹状体线粒体钙(MCa)、钙调素(CaM)含量改变。PD组表现明显的APO诱发的旋转行为(≥6r／min),黑质损伤侧(右侧)纹状体MCa、CaM含量与正常对照组比较显著性升高(P<0．01);GM1治疗组APO诱发的旋转行为明显好转,黑质损伤侧纹状体MCa、CaM含量与PD组比较无显著差异性(P>0．05)。GM1能改善实验性PD的部分行为、生化改变,对PD具有治疗作用。     

Intrastriatal Gene Transfer of Vascular Endothelial Growth Factor Rescues Dopaminergic Neurons in a Rat Parkinson's Disease Model

Parkinson's disease (PD) is a chronic progressivegerontic disease, which is characterized by the degeneration of dopaminergic neurons in substantia nigra. Efforhas been made to find effective treatment to arrest oslow down the degeneration of dopaminergic neuronsOnce regarded as an endothelial cell-specific factorvascular endothelial growth factor (VEGF), in recenyears, was unexpectedly found to be a critical player inneurodegeneration, and have direct neurotrophic andneuroprotective effects…     

姜黄素类似物L6H3对帕金森病大鼠脑部纹状体中单胺类神经递质代谢物的影响

目的：研究姜黄素类似物L6H3对帕金森病（PD）大鼠脑纹状体中7种单胺类神经递质及其代谢物的影响。方法：采用脑部纹状体定位注射6-羟基多巴胺（6-OHDA）建立PD大鼠模型,将大鼠随机分为假手术组、PD组和PD+L6H3组。通过微透析活体取样技术和高效液相色谱电化学检测法（HPLC-ECD）联用测定PD组大鼠脑纹状体细胞外液中单胺类神经递质及其代谢物含量。结果：造模后第6周（即给药第2周）及造模后第7周（即停药第1周）,PD+L6H3组大鼠脑纹状体的多巴胺（DA）、3,4-二羟基苯乙酸（DOPAC）、高香草酸（HVA）、去甲肾上腺素（NE）、肾上腺素（E）、5-羟色胺（5-HT）、5-羟基吲哚乙酸（5-HIAA）与PD组比较明显升高（P＜0.01）。结论：L6H3在给药后第2周及停药后1周均能明显提高PD大鼠脑中单胺类神经递质及其代谢物的含量。     

Intrastriatal Gene Transfer of Vascular Endothelial Growth Factor Rescues Dopaminergic Neurons in a Rat Parkinson＇s Disease Model

To examine the ability of intrastriatal gene transfer of vascular endothelial growth factor 165 mediated by adenoviral vector to rescue dopaminergic neurons in a rat model of Parkinson＇s disease （PD）, we constructed recombinant replication-deficent adenoviral vectors carrying the gene of VEGF165 （Ad-VEGF）, and injected Ad-VEGF （or Ad-LacZ and PBS as controls） into the striatum of rats 7 days after the lesion by 6-hydroxydopamine. The rat rotational behavior analysis and tyrosine hydroxylase （TH） immunohistochemistry were performed to assess the change of dopaminergic neurons. Our results showed that the rats receiving Ad-VEGF injection displayed a significant improvement in apomorphine-induced rotational behavior and a significant preservation of TH-positive neurons and fibers compared with control animals, It is concluded that intrastriatal gene transfer by Ad-VEGF may rescue the dopaminergic neurons from degeneration in a rat model of PD.     

Therapeutic effect of human amniotic epithelial cell transplantation into the lateral ventricle of hemiparkinsonian rats

Background Human amniotic epithelial cells （HAECs） are able to secrete biologically active neurotrophins such as brain-derived neurotrophic factor and neurotrophin-3, both of which exhibit trophic activities on dopamine neurons. Previous study showed that when human amniotic epithelial cells were transplanted into the striatum of 6-hydroxydopamine （6-OHDA）-induced Parkinson disease rats, the cells could survive and exert functional effects. The purpose of this study was to investigate the survival and the differentiation of human amniotic epithelial cells after being transplanted into the lateral ventricle of Parkinson＇s disease （PD） rats, and to investigate the effects of grafts on healing PD in models. Methods The Parkinson＇s model was made with stereotactic microinjection of 6-hydroxydopamine （6-OHDA） into the striatum of a rat. The PD models were divided into two groups： the HAECs group and the normal saline （NS） group. Some untreated rats were taken as the control. The rotational asymmetry induced by apomorphine of the HAECs group and the NS group were measured post cell transplantation. The expression of nestin and vimentin in grafts were determined by immunohistology. Ten weeks after transplantation the density of tyrosine hydroxylase positive cells in the substantia nigra of the HAECs group, NS group and the untreated group was determined. The differentiation of grafts was determined by TH immunohistology. High performance liquid chromatography （HPLC） was used to determine monoamine neurotransmitter levels in the striatum. Results The rotational asymmetry induced by apomorphine of the HAECs group was ameliorated significantly compared to the NS group two weeks after transplantation （P 〈0.01）. The grafts expressed nestin and vimentin five weeks after transplantation. TH immunohistochemistry indicated that the TH positive cells in the substantia nigra of the HAECs group increased significantly compared to the NS group （P 〈0.01）. Tyrosine hydroxylase （TH） positive cells in the substantia nigra of the HAEC group and the NS group were decreased compared to the untreated group （P 〈0.01）. Dopamine and DOPAC levels in the striatum of the HAECs group increased significantly compared to the NS group （P 〈0.05）. Homovanillic acid （HVA） levels in the striatum of the HAECs group increased significantly compared to the NS group （P 〈0.01）. In addition dopamine, DOPAC, and HVA levels in the striatum and dopamine levels in the cerebrospinal fluid of the HAECs group and the NS group were decreased compared to the untreated group （P 〈0.05）. Conclusions Human amniotic epithelial cells could be used to ameliorate the rotational asymmetry induced by apomorphine of the PD models. This could have been due to the increased content of dopamine and its metabolic products, DOPAC and HVA, in the striatum in the PD models.