PGC-1α与Nrf2协同调控γ-谷氨酰半胱氨酸合酶对大鼠COPD的作用

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α（PGC-1α）和红系衍生的核因子相关因子2（Nrf2）对γ-谷氨酰半胱氨酸合酶（γ-GCS）表达的调控及其在COPD中的作用和意义。方法24只大鼠随机分为COPD组和对照组。COPD组用每日熏香烟和两次气管内滴入脂多糖（LPS）的方法制作COPD模型。观察大鼠的肺组织病理学改变,检测肺功能指标;应用免疫组化、Westernblot、原位杂交和逆转录-聚合酶链反应检测肺组织中PGC-1α、Nrf2和γ-GCS的蛋白及mRNA表达情况。结果COPD组的肺功能指标（FEV0.3、FEV0.3／FVC、PEF）和光镜下COPD组肺组织病理变化符合COPD的特征性改变。PGC-1α、Nrf2mRNA在两组大鼠肺组织中均有表达,且与γ-GCSmRNA的表达部位基本一致;PGC-1α、γ-GCS蛋白及mRNA表达在COPD组均显著高于对照组（P均〈0．05）;Nrf2蛋白表达在COPD组较对照组显著增高（P〈0．01）,而Nrf2mRNA在两组表达无明显差异（P〈0．05）。相关性分析显示PGC-1α蛋白与Nrf2蛋白及mRNA表达均呈正相关（r值分别为0．775和0．515,P均〈0．01）,PGC-1α、Nrf2蛋白与γ-GCS蛋白（r值分别为0．531和0．575,P均〈0．01）及mRNA表达（r值分别为0．616和0．634,P〈均0．01）均呈正相关。结论PGC-1α可能作为Nrf2的辅激活因子,通过辅助激活Nrf2,上调γ-GCS的基因表达;PGC-1α和Nrf2可能通过一个共同通路协同上调γ-GCS的基因表达,从而改善COPD的氧化／抗氧化失衡。     

参芪补肺方对慢性阻塞性肺疾病稳定期大鼠Nrf2和γ-GCS表达的影响

目的探讨参芪补肺方对大鼠肺组织红系衍生核因子相关因子-2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2, Nrf2)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(gamma-glutamylcysteines-ynthetase,γ-GCS)的mRNA及蛋白表达水平的影响。方法将40只Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、中药组、富露施组,每组各10只。除空白组外,其余3组均采用香烟烟雾熏制和经鼻给予脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)制作慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)大鼠模型,且给予相应干预,连续灌胃30 d。于第38天对大鼠进行麻醉并提取肺组织,通过RT-PCR法检测Nrf2和γ-GCS的mRNA表达水平,通过免疫组化法、Western blot法检测Nrf2和γ-GCS蛋白表达水平。结果中药组、富露施组大鼠Nrf2、γ-GCS的mRNA和蛋白表达均低于模型组,差异有统计学意义(P0.05);中药组大鼠Nrf2、γ-GCS的mRNA和蛋白表达与富露施组组间比较差异无统计学意义(P0.05),疗效相当。结论参芪补肺方能够通过降低Nrf2、γ-GCS的mRNA及蛋白的表达,减轻COPD大鼠的氧化应激反应。     

苦参碱对肺纤维化大鼠核因子E2相关因子2、血红素氧合酶-1的作用研究影响

目的观察博来霉素诱导的大鼠肺纤维化中核因子E2相关因子2（Nrf2）、血红素氧合酶-1（HO-1）的表达,探讨苦参碱对肺纤维化的作用及Nrf2、HO-1表达的影响。方法 SD大鼠120只,随机分为五组：正常对照组（C）、模型组（M）、泼尼松处理组（P）、苦参碱50处理组（M50）、苦参碱100处理组（M100）。计算肺系数,病理学检查肺组织,免疫组化法（SP）分析每组肺组织中的Nrf2、HO-1蛋白水平,RT-PCR检测大鼠肺组织中Nrf2、HO-1 mRNA表达。结果造模后M、P、M50、M100组的Nrf2、HO-1表达高于C组（P〈0.05）。第7、14天时M组Nrf2、HO-1 mRNA表达比P、M50、M100组低（P〈0.05）;第28天M、P、M50、M100组Nrf2、HO-1 mRNA表达比第7、14天的表达偏低,第7天表达最高（P〈0.05）。直线相关分析显示Nrf2 mRNA表达与HO-1 mRNA呈正相关（P〈0.05）。结论苦参碱有抑制博来霉素诱导的肺纤维化的作用,其机制可能与早期上调Nrf2、HO-1表达、抑制氧化应激反应有关。     

转录因子Klf2和Nrf2/Bach1调控γ-谷氨酰半胱氨酸合酶在气道上皮细胞中的作用

目的通过研究锌指Krüppel样转录因子2（Klf2）及红系衍生核因子相关因子2（Nrf2）/BTB-CNC异体同源体1（Bach1）在经香烟烟雾提取物（CSE）刺激的大鼠气道上皮细胞中的表达,了解其感受氧化应激对靶基因γ-谷氨酰半胱氨酸合酶（γ-GCS）的调控作用。方法采用酶消化法提取大鼠原代气管-支气管上皮细胞,并用10%CSE干预细胞6 h,收集细胞,双酶法检测γ-GCS活性;通过免疫细胞化学法观察Nrf2/Bach1的核转位;采用Western blot和RT-PCR技术研究细胞中Klf2、Nrf2、Bach1、γ-GCS的蛋白及mRNA表达。结果大鼠气管-支气管上皮细胞经CSE诱导后其γ-GCS活性明显增高。免疫细胞化学结果显示Nrf2经CSE刺激后出现由核外向核内的转位,Bach1经CSE刺激后出现由核内向核外的转位。Western blot结果显示CSE处理组中Klf2、Nrf2、Bach1、γ-GCS蛋白水平较对照组显著升高（P〈0.05）;RT-PCR结果显示CSE处理组中Klf2、Nrf2、Bach1、γ-GCS mRNA水平较对照组显著升高（P〈0.05）。直线相关分析表明γ-GCS蛋白表达与Klf2、Nrf2、Bach1呈正相关（P〈0.05）。结论 CSE可能通过转录因子Klf2、Nrf2、Bach1调节γ-GCS的表达。     

芍药苷通过激活Nrf2/Keap1信号通路改善脓毒症急性肺损伤的研究

  目的  探讨芍药苷（paeoniflorin, PF）对脓毒症所致急性肺损伤的影响及其与转录因子NF-E2相关因子2（nuclear factor erythyroid 2-related factor 2, Nrf2）/Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1（Keap1）信号通路的关系。  方法  采用盲肠结扎穿孔（CLP）术诱导建立脓毒症大鼠模型。将大鼠随机分成假手术组（Sham）、模型组（Model）、低剂量PF组（L-PF,50 mg/kg）、高剂量PF组（H-PF,150 mg/kg）及高剂量PF+Nrf2抑制剂组（H-PF+ML385,150 mg/kg PF+30 mg/kg ML385）,每组10只。采用改良的脓毒症严重程度评分标准对大鼠脓毒症严重程度进行评分;HE染色观察大鼠肺组织病理变化;黄嘌呤氧化酶法测定大鼠肺组织超氧化物歧化酶（SOD）活性;硫代巴比妥酸法测定大鼠肺组织丙二醛（MDA）含量;ELISA法检测肺组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）,白介素（IL）-1β和IL-6水平;Western blot和qRT-PCR分别检测肺组织中Nrf2、Keap1、血红素氧合酶1（HO-1）蛋白和mRNA的表达水平。  结果  与Sham组比较,Model组大鼠出现严重的脓毒症;肺组织出现严重炎症浸润,出现大量巨噬细胞,肺间质肿大;肺组织中促炎因子IL-1β、TNF-α、IL-6及氧化指标MDA含量均上升（P<0.05）,而抗氧化指标SOD含量下降（P<0.05）;Nrf2及HO-1蛋白和mRNA表达均降低（P<0.05）,Keap1蛋白和mRNA表达增加（P<0.05）。与Model组比较,PF给药组大鼠脓毒症程度均降低,肺组织损伤均得到改善,肺组织中IL-1β、TNF-α、IL-6及MDA含量均下降（P<0.05）,SOD活性均增加（P<0.05）;Nrf2及HO-1蛋白和mRNA表达均增加（P<0.05）,Keap1蛋白和mRNA表达降低（P<0.05）。与H-PF组比较,Nrf2抑制剂ML385干预后可抑制PF对脓毒症大鼠上述指标的改善。  结论  PF通过激活Nrf2/Keap1信号通路,降低组织氧化应激与炎症水平,改善脓毒症所致的急性肺损伤。     

Nrf2通路活化在胆红素脑病新生大鼠海马神经元损伤中的作用

  目的   探讨核因子NF-E2相关因子（nuclear factor-erythroid 2-related factor, Nrf2）通路活化对胆红素脑病新生大鼠海马神经元损伤的影响。   方法   将新生SD大鼠随机分为对照组、模型组和Nrf2激活剂特丁基对苯二酚（tert-Butylhydroquinone, TBHQ）组,每组20只。经小脑延髓池注射胆红素溶液,建立新生大鼠胆红素脑病模型,观察大鼠神经行为变化,并测定脑组织含水量;采用尼式（Nissl）染色观察海马神经元损伤;TUNEL染色观察海马神经元凋亡情况;比色法检测海马组织Caspase-3活性;化学法检测海马组织丙二醛（MDA）、还原型谷胱甘肽（GSH）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性;qRT-PCR和Western blot检测海马组织Nrf2和血红素氧合酶1（heme oxygenase-l, HO-1）mRNA和蛋白表达水平。   结果   小脑延髓池注射胆红素后模型组和TBHQ组幼鼠出现不同程度神经异常行为表现,而对照组幼鼠无明显神经异常行为。与对照组比较,模型组幼鼠神经元损伤严重,脑组织含水量以及海马神经元凋亡水平、Caspase-3活性以及MDA含量升高（P<0.01）,而SOD活性、GSH含量以及Nrf2 和HO-1 mRNA和蛋白表达水平降低（P<0.05）;与模型组比较,TBHQ组幼鼠神经元损伤得到改善,脑组织含水量、海马神经元凋亡水平、Caspase-3活性以及MDA含量均降低（P<0.01）,而SOD活性、GSH含量以及Nrf2 和HO-1 mRNA和蛋白表达水平升高（P<0.05）。   结论   Nrf2通路活化能改善胆红素脑病新生大鼠海马神经元损伤,抑制神经元凋亡和机体氧化反应。      

人参皂苷通过Nrf2/ARE信号通路干预波动性高糖致内皮细胞损伤的作用机制研究

目的 观察人参皂苷通过调控Nrf2/ARE信号通路,对波动性高糖所致内皮细胞损伤的影响,探讨人参皂苷起保护作用的部分机制。 方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分为对照组、波动性高糖模型组及人参皂苷低中高剂量治疗组。Western blot检测NF-E2相关因子2(Nrf2)的核转位及下游抗氧化蛋白血红素加氧酶-1(HO-1)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)和醌氧化还原酶(NQO1)的表达;RT-PCR检测下游抗氧化蛋白HO-1、γ-GCS和NQO1的mRNA表达。瞬时转染Nrf2siRNA质粒, Western blot检测Nrf2总蛋白和核蛋白表达,及下游HO-1、γ-GCS和NQO1蛋白的表达。 结果 人参皂苷治疗后,HUVECs中的Nrf2核蛋白及下游抗氧化蛋白HO-1、γ-GCS和NQO1的表达均明显增强。瞬时转染Nrf2siRNA质粒后,人参皂苷的治疗作用消失。 结论 人参皂苷通过促进Nrf2核转位,调控Nrf2/ARE信号通路发挥其抗波动性高糖所致内皮细胞损伤的氧化应激损伤作用。     

蒿鳖养阴软坚方通过Nrf2/γ-GCS信号转导通路抑制酒精性肝纤维化作用及其机制

目的:研究不同提取方案的蒿鳖养阴软坚方对肝纤维化大鼠肝组织中Nrf2/γ-GCS信号转导通路的影响,探讨不同提取方案的蒿鳖养阴软坚方对大鼠肝纤维化的治疗作用。方法:健康Wistar 大鼠随机分为8组:正常组、模型对照组、先水后醇60%提取方案组(0.09 mg.kg^-1.d^-1)、先水后醇95%提取方案中、高剂量组(2.59 g.kg^-1.d^-1、8.2 g.kg^-1.d^-1)、水提醇沉中、高剂量组(2.59 g.kg^-1.d^-1、8.2 g.kg^-1.d^-1)及复方鳖甲软肝片组(0.09 mg.kg^-1.d^-1),每组10只大鼠。酒精性肝纤维化大鼠模型制备成功后,各组按相应药物剂量分别开始治疗,正常组和模型组给予同体积蒸馏水,每日1 次,造模10周后处死大鼠,留取标本。酸水解法测定肝组织中胶原蛋白含量; Western blotting 检测肝组织Nrf2蛋白与γ-GCS蛋白的表达;光镜观察肝组织免疫组化染色结果。结果:(1) 肝组织中羟脯氨酸含量:与正常组比较,模型组大鼠肝组织胶原蛋白含量增高 (P<0.01);与模型组比较,先水后醇60%提取方案组、先水后醇中、高剂量组以及复方鳖甲软肝片组大鼠肝组织胶原含量均降低 (P<0.05)。(2) 肝组织Nrf2蛋白与γ-GCS蛋白的表达:与正常组比较,模型组大鼠肝组织Nrf2蛋白与γ-GCS蛋白表达增高 (P<0.01);与模型组比较,各治疗组大鼠肝组织Nrf2蛋白与γ-GCS蛋白表达增高 (P<0.01)。(3) 肝组织免疫组化染色结果: 模型组的Nrf2和γ-GCS蛋白主要在细胞浆中表达,各用药组Nrf2和γ-GCS蛋白均多数在细胞浆和细胞核中表达,汇管区附近也有所表达,但表达量不及胞浆和胞核。结论:提取工艺优化后的蒿鳖养阴软坚方可能通过上调肝组织Nrf2/γ-GCS信号转导通路,增加Nrf2蛋白和γ-GCS蛋白的表达,降低大鼠肝组织肝纤维化程度从而发挥抗肝纤维化的作用。     

姜黄素对百草枯中毒大鼠急性肾氧化损伤的干预作用

目的：探讨姜黄素对百草枯（PQ）中毒大鼠急性肾氧化损伤的干预和可能机制。方法：将60只SD大鼠随机分为正常对照组15只、姜黄素对照组（姜黄素50 mg/kg）15只、PQ染毒组（PQ 100 mg/kg）15只、姜黄素干预组（PQ染毒后15 min、24 h、48 h,腹腔注射姜黄素50 mg/kg）15只。大鼠经处理后第1、第3、第7天取肾组织,化学比色法检测肾组织匀浆液丙二醛（MDA）和谷胱甘肽（GSH）含量,超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活力;ELISA法检测血红素氧合酶-l（HO-1)、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）活力;RT-PCR法检测核转录相关因子2（Nrf2）mRNA表达,Western Blot法检测Nrf2蛋白表达。光学显微镜下观察肾组织的病理变化。结果：与正常对照组比较,PQ染毒组和姜黄素干预组各时间点MDA含量均升高,GSH、SOD、CAT活力均降低,iNOS活力升高,Nrf2 mRNA和蛋白表达均升高,第1、第3天HO-l活力升高,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;与同时间点PQ染毒组比较,姜黄素干预组各时间点MDA含量明显降低,GSH、SOD、CAT明显升高,iNOS活力下降,Nrf2 mRNA和蛋白表达明显升高,第1、第3天HO-1活力升高（P＜0.05）;PQ染毒组肾小球球囊间隙增大,排列紊乱,随时间延长,肾小管上皮细胞出现玻璃样变性及空泡样变性,姜黄素干预组病理表现较PQ染毒组明显减轻。结论：姜黄素对PQ中毒大鼠急性肾氧化损伤有保护作用,其机制可能是通过诱导肾组织Nrf2表达,上调HO-1、SOD等抗氧化酶水平,提高肾组织抗氧化应激能力。     

Nrf2－ARE 信号通路在调节慢性阻塞性肺疾病氧化失衡过程中的作用机制

目的：研究Nrf2－ARE信号通路上关键因子的表达变化情况,探讨Nrf2－ARE信号通路在调节慢性阻塞性肺疾病氧化失衡过程中的作用机制。方法将80只小鼠随机分成4组,对照组不熏烟,在相同环境下饲养6个月,其余3组分别为熏烟2个月组、熏烟4个月组和熏烟6个月组,造模结束后取材。应用Fenton反应检测肺组织匀浆中抑制羟自由基能力,ELISA法检测血清中Nrf2和谷胱甘肽（ GSH）的表达,利用Real－Time PCR方法检测肺组织中Nrf2、半胱氨酸合成酶（γ－GCS） mRNA的表达,并对结果行相关分析。结果 Fenton反应结果显示抑制羟自由基能力在熏烟6个月组显著高于对照组（ P＜0.05）;ELISA结果显示熏烟各组血清中GSH含量均高于对照组,其中熏烟4个月组GSH含量与对照组相比差异有统计学意义（ P＜0.05）,熏烟6个月组GSH含量与对照组相比差异非常显著性意义（P＜0.01）;Real－time PCR结果显示熏烟2个月组、熏烟4个月组γ－GCS mRNA转录水平均高于对照组,但差异并无统计学意义（ P＞0.05）,熏烟6个月组γ－GCS mRNA水平显著高于对照组（P＜0.01）;而Nrf2蛋白及mRNA在各组的表达无明显差异（P＞0.05）。结论过氧化物在熏烟各组小鼠肺组织中累积,可能通过活化Nrf2、促进Nrf2核积聚上调γ－GCS的基因表达,在氧化失衡中发挥作用。     

氢溴酸加兰他敏介导AMPKα1/Nrf2/HO-1通路对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

  目的  研究氢溴酸加兰他敏（galantamine hydrobromide lycoremine,Gal）介导腺苷酸激活蛋白激酶（AMPK）α1/Nrf2/血红素加氧酶 (heme oxygenase-1, HO-1)通路对心肌缺血再灌注（I/R）大鼠内质网应激型凋亡、心肌凋亡和纤维化的影响。  方法  构建心肌I/R损伤大鼠模型,将大鼠随机分为5组:对照组、I/R 模型组、Gal 1 mg/kg组、Gal 2 mg/kg组、Gal 4 mg/kg组进行后续实验。多普勒超声检测各组大鼠左室射血分数（LVEF）、左心室舒张末期容积（LVEDV）、左心室收缩末期容积（LVESV）、左心室壁厚度（LVWT）、左室短轴缩短率（FS）;HE染色检测心肌组织病理损伤程度;免疫组化检测Caspase-3阳性表达率;RT-PCR检测心肌Caspase-3 mRNA表达;蛋白免疫印迹检测内质网应激因子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein,CHOP)、cleaved Caspase-12、生长抑制和DNA损伤诱导蛋白(growth arrest and DNA damageinducible protein 34,GADD34)、免疫球蛋白重链结合蛋白(immunoglobulin heavy-chain-binding protein, BiP)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA )、Collagen Ⅰ、AMPKα1、Nrf2、HO-1蛋白表达水平;并加入AMPK的抑制剂Compound C进行验证。  结果  与I/R 模型组比较,Gal 各组心肌组织病理损伤程度明显改善,cleaved Caspase-3阳性表达率和Caspase-3 mRNA水平表达降低（P<0.05）;Gal 2 mg/kg、Gal 4 mg/kg组LVWT、FS、LVEF升高（P<0.05）,LVEDV、LVESV降低（P<0.05）,CHOP、cleaved Caspase-12、α-SMA、Collagen Ⅰ、AMPKα1、Nrf2、HO-1蛋白表达降低（P<0.05）,GADD34、BiP蛋白表达升高（P<0.05）。加入AMPK抑制剂Compound C后,与I/R模型组相比较,CC 组AMPKα1、Nrf2、HO-1、BiP蛋白水平降低（P<0.05）,CHOP、α-SMA、Collagen Ⅰ蛋白水平升高（P<0.05）,LVESV、FS降低（P<0.05）,Caspase-3 mRNA水平升高（P<0.05）。与CC组比较,CC+Gal 4mg/kg组AMPKα1、Nrf2、HO-1、BiP蛋白水平升高（P<0.05）,CHOP、α-SMA、Collagen Ⅰ蛋白水平降低（P<0.05）,LVESV、FS升高,Caspase-3 mRNA水平降低（P<0.05）。  结论  氢溴酸加兰他敏介导AMPKα1/Nrf2/HO-1通路可调节心肌缺血再灌注大鼠内质网应激型凋亡、心肌凋亡和纤维化。     

人参皂苷对波动性高糖所致内皮细胞损伤的作用及机制研究

目的观察人参皂苷对波动性高糖所致内皮细胞损伤的保护作用并探讨其作用机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分为对照组、波动性高糖模型组及人参皂苷低中高浓度组(12.5μg/mL、25μg/mL、50μg/mL)。Western blot检测NF-E2相关因子2(Nrf2)的核转位及下游抗氧化蛋白血红素加氧酶-1(HO-1)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)和醌氧化还原酶(NQO1)的表达;RT-PCR检测下游抗氧化蛋白HO-1、γ-GCS和NQO1的m RNA表达;Western blot检测瞬时转染Nrf2 si RNA质粒后Nrf2总蛋白和核蛋白及下游HO-1、γ-GCS和NQO1蛋白的表达。结果人参皂苷治疗后,HUVECs中的Nrf2核蛋白及下游抗氧化蛋白HO-1、γ-GCS和NQO1表达均明显增强(P0.05)。瞬时转染Nrf2 siRNA质粒后,人参皂苷的治疗作用消失。结论人参皂苷通过促进Nrf2核转位,调控Nrf2/ARE信号通路发挥其抗波动性高糖所致内皮细胞损伤的氧化应激损伤作用。     

三氧化二砷诱导肝癌细胞凋亡的机制研究

目的 通过研究三氧化二砷对人肝癌细胞株HepG2活性氧（ROS）、谷胱甘肽（GSH）水平、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)和核因子E2相关因子2(Nrf2)表达的影响,探讨三氧化二砷诱导肝癌细胞凋亡的机制。方法 分别采用0、 2.5、5和10 μmol/L三氧化二砷处理HepG2达24 h后,MTT实验测定细胞存活率（另增25、50 μmol/L浓度组）,流式细胞术检测细胞凋亡水平,DCFH-DA荧光探针测定细胞内ROS水平,5,5-二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）比色法检测细胞中GSH含量,蛋白印记检测γ-GCS催化亚基GCLC和调节亚基GCLM以及核因子E2相关因子2（Nrf2）蛋白的表达水平。结果 随着三氧化二砷染毒浓度的增加,HepG2细胞凋亡率、ROS水平和Nrf2蛋白表达均增加(P<0.05),而细胞存活率、GSH含量、GCLC和GCLM蛋白表达量均降低(P<0.05)。结论 三氧化二砷通过诱导细胞产生ROS,抑制γ-GCS的表达以及减少GSH合成,从而诱导人肝癌细胞凋亡。     

荔枝核皂苷对糖调节受损大鼠胰腺组织氧化应激的改善作用及其机制

目的：研究荔枝核皂苷（SL）对糖调节受损（IGR）大鼠氧化应激及核转录因子E2相关因子2（Nrf2）/血红素加氧酶1（HO-1）信号通路的作用,阐明其相关机制。方法：采用高脂饲料喂养制备IGR大鼠模型,随机分为模型组、二甲双胍组（0.20 g·kg^-1）、低剂量SL组（0.05 g·kg^-1）、中剂量SL组（0.10 g·kg^-1）和高剂量SL组（0.20 g·kg^-1）,同时设正常对照组,每组12只,连续给药6周。观察SL对实验大鼠糖脂代谢的影响,采用实时荧光定量（Real-time PCR）法检测大鼠胰腺组织中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和HO-1 mRNA表达水平,Western blotting法检测大鼠胰腺组织胞核、胞质Nrf2和全细胞HO-1蛋白表达水平,采用SOD和MDA试剂盒检测大鼠胰腺组织中SOD活性和MDA水平。结果：与正常对照组比较,模型组大鼠空腹血糖（FBG）和血脂水平明显升高（P<0.05或P<0.01）,胰腺组织中SOD活性和mRNA表达水平降低（P<0.01）,MDA水平和mRNA表达水平升高（P<0.01）,胞核和胞质中Nrf2蛋白表达水平和核转位率升高（P<0.01）,HO-1 mRNA和蛋白表达水平升高（P<0.05或P<0.01）。与模型组比较,二甲双胍组和中、高剂量SL组大鼠FBG和血清甘油三酯（TG）水平明显降低（P<0.05或P<0.01）,胰腺组织中SOD活性和mRNA表达水平升高（P<0.05或P<0.01）,MDA水平和mRNA表达水平降低（P<0.05或P<0.01）,胞质中Nrf2表达水平降低（P<0.05或P<0.01）,胞核中Nrf2表达水平和核转位率升高（P<0.05或P<0.01）,HO-1 mRNA和蛋白表达水平升高（P<0.05或P<0.01）。结论：SL具有改善糖脂代谢和增强抗氧化应激作用,其作用机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路、促进Nrf2核转位及增强下游抗氧化基因HO-1表达有关。     

异甘草酸镁对酒精性肝病大鼠肝组织Nrf2/HO-1信号通路和肝纤维化指标的影响

目的:研究异甘草酸镁(MgIG)对酒精性肝病(ALD)大鼠肝组织核因子2相关因子/血红素氧合酶(Nrf2/HO-1)信号通路和肝纤维化指标的影响.方法:喂养酒精液体饲料构建ALD大鼠模型,另取SD大鼠以普通饲料喂养作对照组,将建模成功大鼠随机分为模型组、MgIG低、中、高剂量组,每组10只.MgIG低、中、高剂量组分别腹腔注射15 mg/kg、30 mg/kg、45 mg/kg MgIG,1次/d,连续注射8周,对照组和模型组注射等体积生理盐水.采用生化试剂盒检测大鼠肝功能、肝组织甘油三酯(TG)及氧化应激指标含量,苏木精—伊红(HE)染色和Masson染色观察肝组织病理变化,酶联免疫吸附法检测纤维化指标,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白印迹法(Western blotting)检测肝组织Nrf2、HO-1mRNA及蛋白表达.结果:模型组血清ALT、AST、TBi1、MDA、肝组织TG、LN、HA、PC-111含量、Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白表达明显高于对照组,血清SOD、GSH水平明显低于对照组(P＜0.05);与模型组比较,MgIG中、高剂量组ALT、AST、TBi1、MDA、TG、LN、HA、PC-Ⅲ水平显著降低,SOD、GSH、Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白表达显著升高(P＜0.05).结论:MgIG对ALD大鼠有保护作用,可能通过Nrf2/HO-1途径减轻氧化应激及改善肝纤维化,从而缓解酒精性肝损伤.     

人参皂苷对波动性高血糖大鼠肾脏Nrf2/ARE信号通路的影响

[目的]探讨人参皂苷对波动性高血糖大鼠肾脏氧化应激及转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)/应答元件(ARE)信号通路的影响。[方法]实验以32只雄性SD大鼠为研究对象,分为正常对照组(NC组,n=8只)和波动性高糖模型组(n=24只),高脂饲料喂养模型组2周后,链脲佐菌素(STZ)35 mg/kg腹腔注射诱导建立糖尿病大鼠模型,错时注射葡萄糖和胰岛素,建立血糖波动组模型,2周后,将波动性高糖模型组随机分为3组,分别为波动性高血糖组(FHG组,n=8),人参皂苷低剂量组(LG组,n=8),人参皂苷高剂量组(HG组,n=8)。予人参皂苷低高剂量[14、56mg/(kg·d)]干预相对应的模型组8周后,切取肾脏组织,用蛋白免疫切迹方法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测血红素加氧酶-1(HO-1)、Nrf2、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)蛋白及m RNA表达。[结果]与NC组相比,FHG组Nrf2的蛋白及m RNA的表达明显增加(P0.05),而HO-1、γ-GCS的表达明显降低(P0.05);但人参皂苷治疗后,LG组及HG组HO-1、γ-GCS、和Nrf2蛋白及m RNA表达明显增高(P0.05)。[结论]人参皂苷能够进一步促进波动性高糖状态下Nrf2下游HO-1、γ-GCS蛋白及m RNA表达,增加抗氧化蛋白的含量,提高机体的抗氧化应激能力,对波动性高糖所致的肾脏损伤有一定的保护作用。     

羧甲司坦对慢性气道炎症大鼠肺组织中PI3K/AKT和γ-GCS表达的影响

目的观察羧甲司坦对慢性气道炎症大鼠肺组织中磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)和γ-谷氨酰半胱氨酸合酶(γ-GCS)表达的影响。方法将30只健康雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和羧甲司坦治疗组。模型组及羧甲司坦治疗组大鼠用气管内注入脂多糖和熏香烟法制成慢性气道炎症大鼠模型,羧甲司坦治疗组大鼠在第17～30天吸烟前30min给予羧甲司坦(500mg/kg)灌胃。计数各组大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞,观察肺组织的病理变化;用免疫组织化学检测肺组织γ-GCS及磷酸化AKT(p-AKT)的表达水平;用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测PI3 K mRNA、γ-GCS mRNA的表达。结果与模型组比较,羧甲司坦治疗组大鼠支气管、肺组织中炎症浸润及BALF中中性粒细胞数明显降低(P<0.05),p-AKT蛋白、γ-GCS蛋白、PI3 K mRNA及γ-GCS mRNA的表达明显降低(P<0.05),谷胱甘肽(GSH)、活性氧(ROS)含量明显减少,总抗氧化能力明显上升(P<0.05)。结论羧甲司坦可能通过PI3K/AKT通路促进γ-GCS蛋白的表达,减轻被动吸烟大鼠肺部的炎症和氧化应激。     

藻蓝素对脓毒性急性肺损伤大鼠血红素氧合酶-1表达的影响及分子机制

目的观察藻蓝素（CPC）对脓毒症急性肺损伤（ALI）大鼠血红素氧合酶-1（HO-1）表达的影响及分子机制。方法 SD大鼠根据不同实验目的随机分为对照组、模型组和CPC干预组。其中模型组采用盲肠结扎穿刺建立脓毒症急性肺损伤大鼠模型。 CPC干预组在模型组基础上分别给予浓度为20、40、60 mg/kg CPC腹腔注射。术后72 h后获肺组织标本,观察CPC处理前后HO-1蛋白的表达,比色法检测HO-1酶活性改变情况。提取组织总蛋白和核蛋白,Western blot检测蛋白激酶B（Akt）磷酸化以及转录因子E2相关因子2（Nrf2）核转位情况。化学发光法检测超氧化物的含量。结果 CPC处理可明显促进ALI的肺组织中HO-1的表达,并能增强其酶活性。同时,CPC也可促进Akt磷酸化,并能诱导转录因子Nrf2核转位。同时,CPC也可显著减少大鼠肺组织中过氧化物产生,而HO-1抑制剂锡原卟啉御（ SnPP）能明显降低CPC对超氧化物的抑制作用。结论 CPC诱导HO-1表达可能与Akt磷酸化以及Nrf2的激活有关。     

苓桂术甘汤对慢性心律失常大鼠心肌损伤的保护作用及对Nrf2/HO-1通路的影响

[目的]探讨苓桂术甘汤对慢性心律失常大鼠心肌损伤的保护作用及对核因子E2相关因子2(nuclear factor E2 related factor 2,Nrf2)/血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)通路的影响。[方法]45只雄性SD大鼠中随机选择10只作为正常对照组,其余35只经尾静脉注射氯化钡溶液制备慢性心律失常模型,将30只建模成功的大鼠随机分为苓桂术甘汤组、阳性对照组、模型对照组,每组各10只。苓桂术甘汤组大鼠采用苓桂术甘汤灌胃,阳性对照组采用酒石酸美托洛尔灌胃,模型对照组和正常对照组接受等体积0.9%氯化钠注射液灌胃,2次/d,均干预4周。采用心电图检验大鼠造模成功情况,以酶联免疫吸附法检验大鼠血清谷胱甘肽(glutathione,GSH)、谷胱甘肽硫基转移酶(glutathione S-transferase,GST)含量,苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察心肌组织病理变化,DNA缺口末端标记法(TdT-mediated dUTP nick-end labeling,TUNEL)染色检测各组大鼠心肌细胞凋亡情况,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,Real-time q PCR)与Western blot检测心肌组织中Nrf2、HO-1基因及蛋白表达水平。[结果]与正常对照组比较,模型对照组、阳性对照组、苓桂术甘汤组GSH和GST含量较低,心肌细胞凋亡率较高,Nrf2、HO-1 mRNA与蛋白相对表达量较高(P0.05)。与模型对照组比较,阳性对照组、苓桂术甘汤组大鼠的GSH和GST含量较高,心肌细胞凋亡率较低(P0.05);与阳性对照组比较,苓桂术甘汤组大鼠的GSH和GST含量较低,心肌细胞凋亡率较高(P0.05)。模型对照组心肌组织水肿、充血严重,肌束紊乱,心肌细胞间隙增宽;阳性对照组、苓桂术甘汤组心肌组织水肿、肌束及心肌细胞间隙明显改善。与模型对照组比较,阳性对照组、苓桂术甘汤组大鼠Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白相对表达量均较高(P0.05);与阳性对照组比较,苓桂术甘汤组大鼠Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白相对表达量均较低(P0.05)。[结论]苓桂术甘汤可能通过激活Nrf2/HO-1通路,发挥对慢性心律失常大鼠心肌损伤的保护作用。     

活血通腑方对术后腹腔粘连大鼠Nrf2、HO-1及NQO1表达的影响

目的?探讨活血通腑方对术后腹腔粘连大鼠粘连部位Nrf2、HO-1及NQO1蛋白及mRNA的影响。方法?通过腹腔粘连评分评价腹腔粘连水平,Western blot法检测Nrf2核蛋白、HO-1和NQO1蛋白表达,qPCR检测Nrf2、HO-1和NQO1 mRNA表达。结果?活血通腑方能够显著降低肉眼腹腔粘连评分（P＜0.01）。活血通腑方组Nrf2核蛋白、HO-1和NQO1蛋白表达以及mRNA表达显著升高（P<0.01）。结论?活血通腑方对术后腹腔粘连大鼠粘连部位Nrf2、HO-1及NQO1表达有显著影响,可能通过调节Nrf2及下游因子的表达进而提升抗氧化应激能力,发挥抗腹腔粘连效应。