双歧杆菌分泌型粘附素对肠上皮细胞应激反应的影响

目的 观察双歧杆菌分泌型粘附素对肠上皮细胞应激反应后核因子(NF)-κB DNA结合活性、细胞胞质核因子抑制蛋白κB(IκB)、细胞胞核NF-κB p65的表达和肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-8等细胞因子表达的影响.方法 经培养的肠上皮Lovo细胞分为5组,分别经LPS( 100 ng/ml)、H2O2( 200 μmol/L)直接刺激3h以及经双歧杆菌分泌型粘附素(30 μg/ml)预孵30 min后再予LPS( 100 ng/ml)、H2O2刺激(200 μmol/L)刺激3h,正常对照组未作任何处理.采用凝胶电泳迁移率试验(EMSA)方法检测NF-κB DNA结合活性;Western印迹法分别检测细胞胞质IκB和细胞胞核NF-κBp65的表达;RT- PCR方法检测TNF-α、IL-1β、IL-8等细胞因子mRNA的表达情况.结果LPS和H2O2刺激后,细胞表现出较高的NF-κB DNA结合活性[分别为正常对照组的(6.20±0.35)倍和(4.16±0.52)倍]和细胞胞核NF-κB p65的表达[分别为(0.64±0.05)和(0.67±0.06)],而细胞胞质IxB的表达则较弱[分别为(0.28±0.10)和(0.39±0.12)];以双歧杆菌分泌型粘附素预孵后,前二者活性明显降低,而后者的表达明显增强;LPS和H2O2处理后,TNF-α、IL-1β、IL-8等细胞因子mRNA的表达水平均明显增高[LPS处理组分别为(0.92±0.10)、(0.38±0.03)、(1.44±0.25),H2O2处理组分别为(0.89±0.13)、(0.36±0.06)、(1.42±0.18)],而粘附素预孵后则可显著降低它们的表达水平.NF-κB DNA结合活性与TNF-α、IL-1β、IL-8三种细胞因子的mRNA表达水平均呈显著正相关.结论 双歧杆菌分泌型粘附素对LPS和H2O2诱导的肠上皮细胞NF-κB DNA结合活性有显著抑制作用,NF-κB的活化可能与TNF-α、IL-1β和IL-8等炎性细胞因子的表达调控有关.     

乙酰肝素酶在溃疡性结肠炎肠黏膜中的表达及在致病机制中的作用

目的探讨乙酰肝素酶(heparanase，HPSE)在溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)患者肠黏膜中表达的改变，及其表达是否与不同临床分期和不同炎症程度相关。同时也讨沦了HPSE表达在UC致病机制中的作用。方法正常对照组为13名健康成人，确诊的28例UC患者中25例根据病情分为活动期11例、缓解期14例，并对24例的病理组织学炎症进行分级，Ⅲ、Ⅳ级10例，Ⅰ、Ⅱ级14例。分别采用RT-PCR和Western印迹法对不同分组的HPSE表达水平进行检测。结果HPSE在正常对照组肠黏膜中无表达，在缓解期和病理分级Ⅰ、Ⅱ级的肠黏膜中均呈现低表达，而在活动期和病理分级Ⅲ、Ⅳ级的肠黏膜中表达显著升高。结论HPSE在UC肠黏膜中呈阳性表达．且其表达水平与病情轻重和炎症严重程度呈正相关，它可能在UC肠黏膜上皮重塑和疾病的发生和发展中起重要作用，而HPSE抑制剂则有可能用于UC的治疗。     

大肠癌p53、K-ras基因突变研究

目的：探讨p53,K-ras基因突变与大肠癌发生、发展的关系。方法：应用PCR－SSCP方法研究68例大肠癌和癌旁组织以及20例正常组织p53,K-ras基因突变情况。结果：大肠癌组中p53，K-ras基因突变率分别为47．1％和44．1％，明显高于癌旁组（分别为13．2％和7．4％），20例正常组织中未检出p53、K-ras基因突变，大肠癌伴有淋巴结转移及远处转移，p53、K-ras基因突变率明显高于无淋巴结及远处转移；p53、K-ras基因突变与组织学分型无关。结论：p53、K-ras基因突变与大肠癌发生、发展有密切关系，在细胞癌变中起重要作用，可作为评估大肠癌转移的分子生物学指标。     

左归丸治疗卵巢早衰小鼠处方配比研究

目的对左归丸治疗卵巢早衰作用进行拆方研究,明确该方配伍的科学性。方法以免疫性卵巢早衰小鼠为模型,采用均匀设计方法。将左归丸拆方为不同组方,观察各组方对模型小鼠卵巢细胞的凋亡率降低的效果。结果方中熟地、炒山药、川牛膝均是影响细胞凋亡的主要因素．选择左归丸治疗卵巢早衰的最优配方为熟地：炒山药：川牛膝（18：9：9）。结论优选后的配比与传统中药方解较为一致．配比可行。为本方的药理研究和临床应用提供剂量依据。     

阻抑eIF-4E对大肠腺癌LS-174T细胞乙酰肝素酶mRNA及其翻译表达水平的影响

目的:确定阻抑结肠癌LS-174T细胞中过量表达的真核细胞起始因子-4E(eukaryoticinitiationfactor-4E,eIF-4E)是否促进乙酰肝素酶(heparanase)mRNA的降解,并改变其翻译表达水平。方法:应用脂质体包裹与eIF-4EmRNA翻泽起始点互补的asODN,转染处理人大肠腺癌细胞LS-174T。使用Westernblot和RT-PCR方法分别检测eIF-4E被阻抑后其转录和翻译水平的改变。乙酰肝素酶mRNA在细胞内水平采用Northernblot定量检测,其蛋白表达水平改变采用Westernblot检测。结果:asODN经脂质体转染LS-174T细胞后,eIF-4E基因表达明显受到抑制,其蛋白表达产物也显著下降。伴随eIF-4E被阻抑表达,Northernblot结果显示乙酰肝素酶mRNA水平下降,且其蛋白翻译表达量也降低。结论:阻抑eIF-4E影响LS-174T细胞乙酰肝素酶mRNA稳定、促使其降解,并降低乙酰肝素酶表达。     

富集纯化前上样液参数影响三七皂苷类成分的研究

目的 考察富集纯化前上样液参数pH值、氯化钠浓度、时间等对三七皂苷类成分的影响.方法 用UV、TLSC分别测定3种不同上样液在不同时间段的三七总皂苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的含量.结果 3种上样液放置72 h后,人参皂苷Rg1含量均增加(P＜0.01);三七皂苷R1含量均减少(P＜0.05);人参皂苷Rb含量变化无差异;pH5.5上样液和pH 7.0上样液中的总皂苷含量均增加(P＜0.05),pH5.5且含4％氯化钠的上样液中总皂苷含量无明显变化.结论 在富集纯化过程中,上样液的pH值、无机盐浓度和时间对皂苷类成分含量变化有影响.     

电位滴定法测定肿节风注射液中总有机酸含量

目的 建立肿节风注射液中总有机酸含量的测定方法.方法 采用电位滴定法进行含量测定.结果 6个批次的肿节风注射液总有机酸含量(以反丁烯二酸计)每支在3.06～3.16 mg之间,RSD=1.20％ (n=6),反丁烯二酸加样回收率为96.28％～101.56％.结论 该方法简便快速,精密度好,准确度高,重现性好可以作为肿节风注射液中总有机酸的质量控制方法之一.     

大孔吸附树脂分离纯化枫香槲寄生总黄酮的工艺研究

目的 研究大孔吸附树脂富集纯化枫香槲寄生总黄酮的最佳工艺参数.方法以枫香槲寄生总黄酮吸附量为指标,通过正交实验考察确定了该树脂分离纯化总黄酮的工艺条件.结果 AB-8型树脂对枫香槲寄生总黄酮有良好的吸附分离性能,其吸附分离工艺条件为:上样浓度为2.55 mg·ml-1,上样液pH为3,吸附流速为3 BV·h-1,洗脱剂为60%乙醇.结论 AB-8型大孔吸附树脂在所确立的工艺条件下,纯化枫香槲寄生总黄酮效果良好,总黄酮纯度可达60%左右.     

大肠癌组织血管内皮生长因子及其受体的表达与肿瘤血管生成的关系

为探讨血管内皮生长因子（VEGF）及其受体（KDR）的表达与人大肠癌组织血管生成的关系，采用免疫组织化学SABC法观察了68例人大肠癌组织中的VEGF及KDR的定位与分布，并对血管进行染色及计数。结果显示，68例大肠癌组织中VEGF表达阳性率为55．9％（38／68），阳性物质阳性物质主要位于肿瘤细胞胞膜及胞浆；KDR表达阳性率为45．6％（31／68），既可位于癌组织及癌组织旁的血管内皮细胞，又可位于肿瘤细胞胞膜及胞浆。VEGF表达与大肠癌Dukes分期密切相关。VEGF表达阳性大肠癌组织的微血管密度（MVD）显著高于VEGF表达阴性者（P＜0．01），而且随着VEGF表达强度的增强，癌组织内微血管密度明显增加（P＜0．01）。结果提示，大肠癌细胞分泌的VEGF既可以旁分泌的形式促进肿瘤血管的生成，也可能存在着自分泌形式；VEGF与大肠癌的生长、浸润和转移密切相关，是大肠癌主要的血管新生诱导因子之一，可促进大肠癌的血管生成。     

氯沙坦长期治疗对自发性高血压大鼠血管结构的影响

目的 :评价血管紧张素Ⅱ受体 1(AT1)拮抗剂氯沙坦 (Losartan)对自发性高血压大鼠 (SHR)血管结构的影响及在减缓高血压血管损害中的潜在作用 ,并探讨在高血压血管壁增厚的过程中醛固酮所起的作用。方法 :采用 10周龄SHR 16只 ,随机分为Losartan(SHRLOS)治疗组和对照组 (SHR) ,另选 10只同龄Wistar鼠作为正常对照。腹主动脉插管测定收缩压 ,应用计算机图像分析 ,计算血管中膜 /内径比 ,用光镜观察各组主动脉的结构变化 ;行肠系膜动脉离体灌注、反向高效液相 (HPLC)纯化和放免检测氯沙坦对血管局部合成醛固酮的影响。结果 :SHRLOS组收缩压 (SBP)与SHR组相比明显下降 (P =0 .0 0 1) ;其血管中膜 /内径比较SHR组显著降低 ,但仍高于Wistar组 ,血管壁结构接近Wistar组 ;SHRLOS组血管AngⅡ与SHR组无差异 ,醛固酮水平降至Wistar组。结论 :氯沙坦抑制血管合成醛固酮 ,逆转血管重构是其治疗高血压的机理之一。