黄连素通过抑制磷酸化埃兹蛋白表达阻断鼻咽癌细胞侵袭和转移的机制研究

目的:探讨黄连素(berberine,BBR)抑制鼻咽癌细胞侵袭及移动的分子机制,明确BBR是否通过抑制Ezrin蛋白抑制鼻咽癌侵袭转移.方法:采用细胞增殖实验(MTT)测定BBR非毒性浓度(non-cytotoxic concentration,NCC),扫描电子显微镜观察BBR在NCC对鼻咽癌细胞5-8F细胞伪足形...     

三氧化二砷对人肝癌细胞生长及其侵袭转移能力的影响

目的探讨三氧化二砷(As_2O_3)对人肝癌SMMC-7721细胞生长及其侵袭转移能力的影响。方法 MTT法检测不同浓度As_2O_3对人肝癌SMMC-7721细胞生长的影响,之后检测经As_2O_3作用前后对基底膜黏附能力的影响;Transwell膜侵袭系统观察As_2O_3作用前后SMMC-7721细胞游走与穿透基底膜能力的改变。结果 As_2O_3能显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞的生长以及对Matrigel的黏附能力,相同浓度不同作用时间比较及相同作用时间不同浓度比较,差异均有统计学意义(P<0.01);As_2O_3能抑制细胞游走与穿透基底膜的作用,与对照组比较,游走穿膜细胞数及侵袭穿膜细胞数均减少(P<0.05)。结论 As_2O_3具有抑制人肝癌细胞生长增殖以及侵袭转移的能力。     

PTEN对15-deoxy-PGJ2调节肝癌细胞生长作用的影响

目的:探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)在肝癌细胞生长中的调节作用,以及PTEN和磷酸化Akt(pAkt)在该过程中的变化,旨在进一步揭示PPARγ调节肝癌细胞生长的机制。方法:培养SMMC-7721肝癌细胞,经不同浓度的PPARγ配体15-脱氧-前列腺素J2(15-deoxy-PGJ2)作用不同时间后,用MTT法测定细胞活力;用流式细胞仪进行细胞周期分析;用RT-PCR检测PPARγ配体对细胞PTENmRNA表达的影响;用Westernblot检测PPARγ配体对细胞PTEN和pAkt蛋白表达的影响。结果:15-deoxy-PGJ2对肝癌细胞的增殖具有抑制作用,且呈时间和剂量依赖性;它能增加G0/G1期细胞的比例,减少S期细胞的比例;增加SMMC-7721细胞PTENmRNA和蛋白的表达,减少pAkt蛋白的表达。结论:PPARγ的配体15-deoxy-PGJ2能够时间和剂量依赖性地抑制肝癌细胞的增殖,其机制可能是部分通过上调PTEN的表达而实现的。     

flk-1基因在胎肝造血细胞增殖中的调控作用

[目的]探讨flk-1基因在胎肝造血细胞体外扩增中的调控作用.[方法]体外培养E14胎肝造血细胞,应用Western-Blot检测flk-1配基VEGF及其抑制剂SU5416对E14胎肝造血细胞flk-1蛋白表达水平的影响,通过细胞计数、氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入实验及细胞周期分析观察flk-1配基VEGF及其抑制剂SU5416对E14胎肝造血细胞增殖的影响,造血集落CFU-GM(colony-forming unit-granulocyte/macrophage粒-巨噬细胞系集落形成单位)培养检测造血祖细胞的功能状态.[结果]VEGF或VEGF加SU5416均可促进胎肝造血细胞的增殖,细胞数目分别为对照组的108%和142%,并且集落数量也显著增加,分别为对照组的159%和151%(P<0.01);单独应用SU5416使造血细胞的数目较对照组减少了8%,但集落产率与对照组无显著性差异.Western blot结果经统计学分析,S U5416组和VEGF加SU5416组flk-1蛋白表达强度分别为对照组的165%(P<0.01)和57%(P<0.05),与对照组相比有显著性差异.[结论]VEGF受体flk-1和flt-1均参与介导VEGF对胎肝造血细胞增殖的调控作用.SU5416阻断flk-1信号转导可上调flk-1的蛋白表达,flt-1活化可下调flk-1的蛋白表达.     

选择性环氧化酶-2抑制剂尼美舒利对肝癌细胞生长的影响

目的探讨选择性环氧化酶-2（COX-2）抑制剂尼美舒利对肝癌细胞SMMC-7721生长的影响及其作用机制。方法MTT法检测对照组和实验组（尼美舒利25、50、100、200、400μmol／L）作用24、48、72h后SMMC-7721细胞增殖的抑制率，RT-PCR、ELISA及RIA检测药物作用48h后SMMC-7721细胞分泌的血管内皮生长因子（VEGF）、前列腺素E2（PGE2）的变化。结果尼美舒利对肝癌细胞SMMC-7721的增殖有抑制作用，且呈剂量和时间依赖性；能降低肝癌细胞SMMC-7721分泌的VEGF、PGE2水平。结论选择性环氧化酶-2抑制剂尼美舒利可以抑制肝癌细胞的生长和降低VEGF水平，并能降低COX-2的下游产物PGE2水平。     

肝星状细胞对肝癌SMMC-7721细胞增殖、侵袭的影响及作用机制研究

目的观察人肝星状细胞LX-2对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、侵袭能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法人肝星状细胞LX-2条件培养基（HSC-CM）与肝癌SMMC-7721细胞共培养,设为HSC-CM组;人正常肝细胞LO2条件培养基(LO2-CM)与肝癌SMMC-7721细胞共培养,设为LO2-CM组（阴性对照）;1%FBS培养基与肝癌SMMC-7721细胞共培养,设为1%FBS组（空白对照）。采用CCK-8法检测3组肝癌SMMC-7721细胞增殖能力;Transwell侵袭实验检测培养48h后细胞侵袭能力;Westernblot检测增殖细胞核抗原（PCNA）、血管内皮生长因子（VEGF）、核因子资B（NF-资B）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）蛋白表达水平。结果HSC-CM组、LO2-CM组、1%FBS组肝癌SMMC-7721细胞增殖能力、侵袭能力、PCNA、VEGF、NF-资B、基质金属蛋白酶２（MMP-2）蛋白表达水平比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）;与LO2-CM组、1%FBS组比较,HSC-CM组肝癌SMMC-7721细胞增殖能力、侵袭能力均增强（均P＜0.05）;PCNA、VEGF、NF-资B、MMP-2蛋白表达水平均上调（均P＜0.05）。结论肝星状细胞可促进肝癌SMMC-7721细胞增殖、侵袭等生物学行为,其作用机制可能与上调PCNA、VEGF、NF-资B、MMP-2表达水平有关。     

全反式维甲酸联合干扰素-γ对人肝癌细胞株SMMC-7721抗增殖作用的研究

目的探讨全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)和干扰素-γ(Interferon-gamma,IFN-γ)联合作用对于人肝癌细胞株SMMC-7721的抑制作用。方法用ATRA和IFN-γ处理SMMC-7721细胞后,应用MTT法检测SMMC-7721细胞的增殖抑制率,电镜观察细胞形态的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达变化。结果ATRA作用于SMMC-7721后,抑制细胞增殖并且诱导细胞凋亡发生,和IFN-γ联合作用后,这种作用加强;SMMC-7721细胞中PCNA的表达在ATRA作用后减少,ATRA与IFN-γ联合作用后进一步减少。结论IFN-γ可以增强ATRA对于肝癌细胞的抑制及诱导细胞凋亡的作用,并且明显下调了PCNA的表达。     

氯胍通过下调FASN/SREBP-1c通路抑制肝癌细胞增殖、集落形成及迁移

目的探讨氯胍对肝癌细胞Hep-G2及SMMC-7721增殖、集落形成和迁移的影响及可能机制。方法用不同浓度的氯胍分别处理Hep-G2及SMMC-7721细胞。采用MTT法检测细胞增殖情况,克隆形成实验检测细胞集落形成能力,Transwell检测细胞迁移能力,Western blotting检测脂肪酸合成酶(FASN)及调节元件结合蛋白(SREBP-1c)的表达情况。结果氯胍抑制Hep-G2及SMMC-7721的增殖、集落形成及迁移能力;Western blotting显示氯胍下调FASN及SREBP-1c的表达。结论氯胍能抑制肝癌细胞Hep-G2及SMMC-7721增殖、集落形成及迁移,其作用机制可能与下调FASN/SREBP-1c通路有关。     

白藜芦醇对人肝癌细胞SMMC-7721增殖影响的研究

目的已有较多研究表明白藜芦醇能抑制多种肿瘤的生长和促进肿瘤细胞的凋亡,观察白藜芦醇对原发性肝癌(简称肝癌)细胞SMMC-7721增殖的影响,探讨其可能的调控机制。方法 MTT法观察不同浓度白藜芦醇(50、100μmol/L)对肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响;应用锥虫蓝拒染法检测白藜芦醇对肝癌细胞SMMC-7721的细胞毒性作用;流式细胞术测定肝癌细胞SMMC-7721细胞周期的变化;Western blot法测定细胞周期相关蛋白(Cyclin D1、Cyclin E、P21)变化。结果白藜芦醇呈浓度和时间依赖地抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖(P<0.05)。100μmol/L白藜芦醇干预48 h后,可使G0/G1期肝癌SMMC-7721细胞比例升高,S期细胞比例下降,Cyclin D1和Cyclin E的蛋白表达水平均受到抑制,同时P21蛋白的表达水平上调(P<0.05)。结论白藜芦醇可能通过调控细胞周期来抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖。     

腺病毒介导的P120ctn基因对SMMC-7721细胞侵袭能力的影响

目的以腺病毒介导连环蛋白P120(P120ctn)基因,转染人肝癌SMMC-7721细胞,观察其对SMMC-7721细胞侵袭能力的影响。方法用腺病毒介导的P120ctn基因转染SMMC-7721细胞,用逆转录-PCR(RT-PCR)和Western Blot检测细胞中P120ctn表达水平,并测定转染后细胞侵袭能力的变化。结果腺病毒介导的P120ctn转染SMMC-7721后,P120ctn的表达水平显著上升;体外侵袭实验显示转染后SMMC-7721的侵袭能力明显下降。结论腺病毒介导的P120ctn基因能够在SMMC-7721细胞中有效表达,并显著抑制肝癌细胞的侵袭能力。     

柴胡皂甙d对肝癌细胞VEGF和Ang-2表达的影响

目的观察柴胡皂甙d(saikosaponins-d,SSd)对人肝癌SMMC-7721细胞血管内皮生成因子(vascular endo-thelial growth factor,VEGF)和血管生成素-2(angiopoietin-2,Ang-2)表达的影响,探讨其抗癌作用机制。方法肝癌SMMC-7721细胞株经LPS诱导,加入不同终浓度的SSd(2.5、5、10、20 mg/L)作用48 h,并以300μmol/L终浓度的Nimesulide(COX-2选择性抑制剂)作为阳性对照,采用MTT法检测细胞增殖,免疫细胞化学法测定肝癌细胞内VEGF和Ang-2蛋白表达,RT-PCR法检测VEGF mRNA表达,ELISA法检测培养上清中VEGF含量。结果 SSd可显著抑制肝癌SMMC-7721细胞的生长、增殖。与LPS诱导组比较,10 mg/L SSd作用组肝癌细胞VEGF蛋白表达率、mRNA表达水平和培养上清中VEGF含量均显著降低[VEGF蛋白:80.0%vs 60.0%;mRNA表达:(0.83±0.07)vs(0.09±0.03);培养上清中VEGF含量:(655.00±5.56)vs(446.15±5...     

RAD51表达与肝细胞癌增殖侵袭能力及预后的关系

目的 探讨RAD51在肝细胞癌(HCC)组织中的表达、临床意义及其对肝癌细胞增殖、侵袭能力的影响。方法 利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库比较RAD51 mRNA在组织中的表达差异,采用实时荧光定量PCR在细胞系中验证表达差异,分析RAD51表达与生存时间、预后的关系。采用siRNA沉默肝癌SMMC-7721细胞系中的RAD51表达,进行CCK-8实验、Transwell小室实验比较细胞增殖、迁移侵袭能力的变化。结果 RAD51 mRNA在肿瘤组织、细胞的表达高于正常肝组织、细胞,高表达组患者的总体生存期较差,其表达水平可作为独立预后因素。沉默RAD51后SMMC-7721细胞的增殖能力下降,迁移侵袭能力明显受到抑制。结论 RAD51高表达与HCC患者更高的病理分级、临床分期有关,是影响总体生存预后的独立危险因素,沉默其表达可显著抑制肝癌SMMC-7721细胞的增殖、迁移及侵袭能力。     

整合蛋白β1亚基过表达上调p27抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖

目的:研究整合蛋白β1亚基过表达对肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响及机制。方法:采用MTT及细胞流式测定观察整合蛋白β1亚基过表达对肝癌细胞SMMC-7721增殖及细胞周期的影响。蛋白质印迹及RT-PCR检测细胞中p27的蛋白及mRNA的表达,并构建p27的RNA干扰质粒,转染整合蛋白β1亚基过表达细胞,再观察p27的表达变化对细胞增殖的影响。结果:整合蛋白β1亚基过表达可以抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖,并将细胞阻滞在细胞周期的G1期。整合蛋白β1亚基过表达可以在蛋白水平上调p27的表达,但并不影响p27的mRNA水平。p27的RNA干扰质粒可明显抑制p27的表达,而且p27表达的下调可以阻止整合蛋白β1亚基过表达所引起的细胞增殖抑制。结论:整合蛋白β1亚基过表达通过上调p27抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖。     

毒蕈碱型胆碱能受体M3调控肝癌细胞侵袭转移的研究

目的 探讨毒蕈碱型胆碱能受体M3 (muscarinic cholinergic receptors 3,ChRM3)活化对人肝癌细胞侵袭、转移能力的影响及其分子机制.方法 Western blot检测两种人肝癌细胞株HepG2和SMMC-7721中ChRM3受体的表达;采用氯贝胆碱(Beth)及达菲那新(UK88525)处理肝癌HepG2和SMMC-7721细胞,分为空白对照组、Beth组、Beth+UK88525组、UK88525组,经处理48 h后,Transwell 实验检测两种肝癌细胞经不同分组处理后侵袭、迁移能力的变化,Western blot检测各组细胞中上皮-间质转化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)标志蛋白的表达及下游信号通路PI3K/Akt的变化;采用shRNA干扰质粒经Lipofectamine 2000TM转染肝癌细胞HepG2以沉默ChRM3,分为空白对照组、Beth组、Beth+shChRM3组、shChRM3组,分别检测细胞的侵袭、转移能力及EMT、下游PI3 K/Akt的改变.结果 HepG2和SMMC-7721两种肝癌细胞中均有ChRM3受体的表达;Transwell实验显示:Beth单独处理组对肝癌细胞的迁移和侵袭有明显的促进作用,而UK88525能够抑制Beth对肝癌细胞迁移侵袭能力的促进作用(P＜0.05);Western blot结果显示:Beth单独处理组能够上调EMT标志蛋白N-Cadherin和Vimentin,下调E-Cadherin的表达,UK88525处理后能够明显抑制Beth促进HepG2细胞EMT的过程(解除Beth对HepG2细胞EMT的促进过程),同时也能够抑制PI3K/Akt的活化(P＜0.05);干扰质粒沉默ChRM3受体同样能够抑制Beth促肝癌细胞迁移、侵袭的作用,并且抑制Beth诱导的EMT和下游PI3K/Akt的活化(P＜0.05).结论 ChRM3活化能够通过PI3K/Akt信号通路促进肝癌细胞的侵袭和转移.     

塞来昔布通过ERK1/2信号通路对肝癌细胞株SMMC-7721增殖、凋亡的影响

目的:观察COX-2抑制剂塞来昔布对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖抑制和凋亡诱导作用,并探讨该作用与ERK1/2信号通路之间的关系。方法:用不同浓度的塞来昔布溶液(0、25、50、75和100μmol/L)处理对数生长期的肝癌SMMC-7721细胞,MTT比色法检测不同时间点各药物浓度组细胞增殖情况;流式细胞术分析不同浓度的塞来昔布溶液对SMMC-7721细胞凋亡的影响;RT-PCR检测COX-2、VEGF和ERK1/2mRNA表达的变化;Western blot检测COX-2、VEGF和ERK1/2蛋白表达的变化。结果:塞来昔布对SMMC-7721细胞增殖具有抑制作用,该作用随着药物浓度的增加和作用时间的延长而增强;流式细胞术检测结果显示出明显的细胞凋亡,且凋亡率随着塞来昔布浓度的增高而升高;随着塞来昔布剂量的增加,COX-2、VEGF和ERK1/2mRNA及蛋白的表达水平逐渐降低。结论:塞来昔布可抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖、促使瘤细胞凋亡,且作用呈时间和剂量依赖性,其机制可能与下调ERK1/2信号通路及抑制新生血管生成有关。     

AEG-1对裸鼠肝癌模型中肝癌细胞生长及肺转移的影响

摘要:目的 研究过表达和沉默 AEG-1基因对肝癌细胞生长的影响,以及 AEG-1基因在调节肝癌细胞定向肺转移 中的作用。方法 分别以携带过表达 AEG-1序列及对照基因序列的慢病毒(lentivirus)转染 SMMC-7721肝癌细胞株 (SMMC-7721-AEG-1-L;SMMC-7721-control-L);以携带shRNAAEG-1及对照shRNA 质粒(plasmid)转染SMMC-7721 细胞株(SMMC-7721-shAEG-1-P;SMMC-7721-control-P);使用实时定量 PCR 和 Westenblot检测 AEG-1的表达;随后 使用荧光素酶基因慢病毒包装颗粒转染上述4种稳定转染细胞株。使用上述细胞株分别建立3种裸鼠肝癌模型:皮下 移植瘤模型,原位移植瘤模型和血行播散模型;每种细胞株每一模型5只 Balb-c裸鼠,共60只。建立皮下移植瘤模型, 观测肿瘤的生长情况并绘制肝细胞肿瘤生长曲线;建立肝癌原位移植瘤和血行播散模型,采用生物发光活体成像技术及 组织病理学方法监测造模成功率及肿瘤在肝内、肝外转移情况。结果 通过肝癌皮下移植瘤模型可观察到 AEG-1过表 达组肿瘤体积显著高于对照组,且裸鼠肝脏组织出现弥漫性侵袭转移灶;在肝癌原位移植瘤和血行播散模型中可观察到 AEG-1过表达/沉默可以导致肝癌细胞肝内转移、肺转移率和转移灶数量显著增高/降低。结论 过表达 AEG-1基因可 促进肝癌细胞生长以及定向肺转移,沉默 AEG-1基因抑制肝癌细胞生长及定向肺转移。     

miR-n282对肝癌细胞侵袭、迁移能力的影响

目的 探究miR-4282对肝癌细胞侵袭、迁移能力的影响及作用机制.方法 qRT-PCR方法检测miR-4282转染至SMMC-7721细胞后表达量的变化.Transwell实验和细胞划痕实验检测细胞的迁移、侵袭.双荧光素酶检测miR-4282的互作基因,Westernblot和qRT-PCR方法验证基因及蛋白.结果 miR-4282上调可抑制SMMC-7721细胞侵袭、迁移能力.GRB2为miR-4282的互作基因,miR-4282上调可使Ras蛋白表达量下降.结论 miR-4282可通过miR-4282-GRB2-Ras途径影响肝癌细胞的侵袭、迁移能力.     

环氧合酶-2抑制剂塞来昔布对人肝癌细胞侵袭转移能力的影响

目的 探讨环氧合酶-2抑制剂塞来昔布对人肝癌SMMC-7721细胞侵袭转移能力的影响,为塞来昔布在临床上治疗肝肿瘤提供理论依据.方法 应用体外细胞培养技术培养人肝癌细胞株SMMC-7721,并以重建基底膜的侵袭试验、趋化运动试验、对层粘连蛋白的粘附试验以及损伤刮擦实验观察不同浓度塞来昔布对人肝癌SMMC-7721细胞侵袭、转移能力的影响.结果 塞来昔布作用于人肝癌SMMC-7721细胞后,其细胞黏附率明显下降,而运动抑制率及侵袭抑制率明显上升,与对照组相比差别均有统计学意义,且塞来昔布浓度与肿瘤细胞黏附率,运动抑制率及侵袭抑制率均有相关性.结论 环氧合酶-2抑制剂塞来昔布能明显抑制人肝癌SMMC-7721细胞的黏附、运动及侵袭能力,故可阻抑肝癌细胞的转移,可能是预防肝癌复发的重要候选药物之一.     

三氧化二砷抑制人肝癌细胞侵袭性的体外研究

目的：研究三氧化二砷（As2O3）对人肝癌SMMC-7721细胞侵袭能力的影响,为As2O3用于原发性肝癌的治疗提供实验依据。方法：以0.25、0.5、1.0、2.0、4.0μg/ml的As2O3与人肝癌细胞株SMMC-7721孵育24、48和72h后,应用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）观察As2O3对细胞生长的影响;应用Transwell小室进行人工重组基底膜侵袭和运动实验,观察As2O3对肝癌细胞侵袭能力的影响。结果：应用As2O3处理后人肝癌SMMC-7721细胞生长受到抑制,且有时间-浓度依赖性;同时肝癌细胞过膜细胞数减少,侵袭能力受到抑制。结论：As2O3在体外能有效抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖和侵袭能力,且有浓度依赖性。