LY294002可抑制VEGF和PlGF调控小鼠胎肝造血干细胞髓系分化的作用

 【目的】探讨内皮生长因子（VEGF）和胎盘生长因子（PlGF）对小鼠胎肝造血干细胞髓系分化的影响及其相关机制。【方法】体外培养E13胎肝造血细胞,培养造血集落CFU-GM,观察VEGF和PlGF对胎肝造血干细胞髓系分化的作用,应用MTT法来评估不同浓度的PI3-K/Akt抑制剂LY294002对胎肝造血细胞增殖的影响及其对VEGF和PlGF调控胎肝造血作用的影响, Western-Blot检测不同处理条件对胎肝造血细胞Akt蛋白以及p-Akt蛋白表达水平的影响。【结果】VEGF和PlGF均促进胎肝造血干细胞髓系分化,集落数分别为对照组的141%（P<0.05）和123%（P<0.05）;经PlGF处理的胎肝造血细胞后,p-Akt蛋白表达水平是对照组的143%（P<0.01）;VEGF和PlGF分别处理以及联合处理后,与对照组的总Akt蛋白表达水平相比,差异没有统计学意义。不同浓度的LY294002抑制胎肝造血细胞的增殖,并具有明显的剂量依赖性（r=0.9647,P<0.01）,LY294002可抑制VEGF和PlGF调控胎肝造血干祖细胞调控髓系分化的作用,集落数为单独存在时的11.5%（P<0.001）和14.5%（P<0.001）。【结论】VEGF和PlGF均能促进胎肝造血干细胞的髓系分化;PlGF可通过上调胎肝造血细胞Akt的磷酸化水平调节胎肝造血细胞的髓系分化。     

内皮生长因子和胎盘生长因子对小鼠胎肝造血干细胞髓系分化的作用

【目的】观察VEGF(内皮生长因子)和PlGF(胎盘生长因子)对小鼠胎肝造血干细胞髓系分化的影响,并探讨其调控机制;【方法】体外培养E13胎肝造血细胞,培养造血集落CFU-GM,观察VEGF和PlGF对胎肝造血干细胞髓系分化的作用,应用Western-Blot检测不同处理条件对胎肝造血细胞Akt蛋白以及p-Akt蛋白表达水平的影响,用MTT法来评估不同浓度的LY294002(PI3K/Akt抑制剂)对胎肝造血细胞增殖的影响,通过CFU-GM观察LY294002对VEGF和PlGF调控胎肝造血作用的影响;【结果】VEGF和PlGF均可促进胎肝造血干细胞髓系分化,集落数分别为对照组的141%(P < 0.01)和123%(P < 0.05); PlGF可上调胎肝造血细胞p-Akt蛋白表达,其表达水平为对照组的143%(P < 0.05);VEGF及其与PlGF联合应用对胎肝造血细胞p-Akt蛋白表达水平无明显影响;LY294002可抑制胎肝造血细胞的增殖,并具有明显的剂量依赖关系(r = 0.9647,P < 0.01),在LY294002存在的条件下加入VEGF或PlGF,其CFU-GM产率与单独应用LY294002相比无明显差异(P > 0.05);【结论】VEGF和PlGF均能促进胎肝造血干细胞的髓系分化;PlGF可通过上调胎肝造血细胞Akt的磷酸化水平调节胎肝造血细胞的髓系分化;LY294002可通过抑制PI3K/Akt信号通路抑制VEGF和PlGF对胎肝造血干祖细胞髓系分化的调控作用;     

flk-1基因在胎肝造血细胞增殖中的调控作用

[目的]探讨flk-1基因在胎肝造血细胞体外扩增中的调控作用.[方法]体外培养E14胎肝造血细胞,应用Western-Blot检测flk-1配基VEGF及其抑制剂SU5416对E14胎肝造血细胞flk-1蛋白表达水平的影响,通过细胞计数、氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入实验及细胞周期分析观察flk-1配基VEGF及其抑制剂SU5416对E14胎肝造血细胞增殖的影响,造血集落CFU-GM(colony-forming unit-granulocyte/macrophage粒-巨噬细胞系集落形成单位)培养检测造血祖细胞的功能状态.[结果]VEGF或VEGF加SU5416均可促进胎肝造血细胞的增殖,细胞数目分别为对照组的108%和142%,并且集落数量也显著增加,分别为对照组的159%和151%(P<0.01);单独应用SU5416使造血细胞的数目较对照组减少了8%,但集落产率与对照组无显著性差异.Western blot结果经统计学分析,S U5416组和VEGF加SU5416组flk-1蛋白表达强度分别为对照组的165%(P<0.01)和57%(P<0.05),与对照组相比有显著性差异.[结论]VEGF受体flk-1和flt-1均参与介导VEGF对胎肝造血细胞增殖的调控作用.SU5416阻断flk-1信号转导可上调flk-1的蛋白表达,flt-1活化可下调flk-1的蛋白表达.