一种新的抗凝血酶基因突变导致遗传性抗凝血酶缺陷症

目的对1例遗传性抗凝血酶（AT）缺陷症患者及其家系成员AT活性（AT：A）、AT抗原含量（AT：Ag）进行检测及基因分析，探讨该遗传性AT缺陷症发病的分子机制。方法采用发色底物法和免疫比浊法分别检测先证者及其家系成员血浆AT：A和AT：Ag，提取外周血基因组DNA，PCR法扩增AT基因的全部7个外显子及侧翼序列，DNA序列分析AT的基因异常。结果先证者AT：A和AT：Ag分别为45％和97mg／L，为Ⅰ型AT缺陷症。AT基因外显子5区第9833位核苷酸发生杂合性T→A突变，引起Tyr363Stop（Y363X）无义突变。其他家系成员基因测序结果显示有4人（Ⅱ2、Ⅱ6、Ⅲ7、Ⅲ14）存在该突变。结论该家系为I型遗传性AT缺陷症。AT基因外显子5区杂合性9833T—A无义突变引起AT缺陷，导致静脉血栓是该遗传性AT缺陷症的分子致病机制。该突变在国际上尚未见报道。     

新的双重杂合性FV基因突变导致的重型遗传性FV缺陷症

目的对一个遗传性凝血因子V(FV)缺陷症家系进行FV基因突变的检测。方法用活化部分凝血活酶时间(Am)，凝血酶原时间(PT)及FV促凝活性(FV：C)和FV抗原(FV：Ag)测定进行表型诊断；用PCR法对先证者FV基因25个外显子及其侧翼序列进行扩增，PCR产物纯化后直接测序，检测其基因突变。突变位点经限制性内切酶分析证实：结果先证者APTT 249．2s．PT46．6s。TT17．9s，Fg3．42g/L，FV：C0．1％，FV：Ag 1．5％，FⅡ：C99％，FⅦ：C110％、FⅧ：C95％、FⅨ：C88％、FX：C120％、vWF121％；FV外显子区共发现4个与基因文库Z99572序列不同的位点，其中位于exon13区的杂合性2238～2239de1AG导致移码突变和终止密码子的提前m现(Asp689stop)，位于exon23区的杂合性G6410T错义突变导致Gly2079 Val.家系分析表明前者遗传于母亲，后者遗传于父亲。结论2238～2239delAG导致的移码突变和G6410T导致的错义突变．是导致先证者FV缺陷的原因。这是2个导致遗传性FV缺陷症的新的FV基冈突变位点。     

调节性T细胞亚群变化与五种自身免疫性疾病的关系

机体通过调控活化自身反应性T细胞，可保护机体免受持续有害免疫反应的损害。最近研究表明，调节性T细胞（简称Treg）可主动抑制逃逸出被动耐受机制的自身反应性T细胞。目前已发现的Treg亚群有多种，CD4^＋CD25＋T细胞是研究较为深入的一类，大量动物实验证明，其数量缺乏和功能紊乱将导致严重或致命的自身免疫性疾病。但对其在人自身免疫性疾病发生中的作用目前还不明确，故本研究分析与探讨其与5种自身免疫性疾病的发病关系。     

选择性环氧化酶-2抑制剂对肝癌细胞侵袭力的影响

目的:研究选择性环氧化酶-2抑制剂尼美舒利 (Nimesuli,Nim)对肝癌细胞SMMC-7721增殖和侵袭力的影响并探讨其作用机制．方法:应用Nim作用于SMMC-7721细胞,并设对照组和实验组(Nim 25,50,100,200, 400 μmol/L),MTT法检测Nim作用24、 48、72 h后,对SMMC-7721细胞增殖的影响;用Transwell小室检测Nim作用24 h后对 SMMC-7721细胞侵袭能力的影响,并用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、明胶酶谱法分析 Nim对SMMC-7721细胞分泌的基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)mRNA和酶活性的影响．结果:Nim对SMMC-7721细胞的增殖有抑制作用,且呈剂量和时间依赖性;Nim 25,50, 100,200,400 μmol/L作用后,与对照组比较 Nim能降低SMMC-7721细胞分泌的MMP mRNA和酶的活性(MMP-2 mRNA:0．968, 0．545,0．330,0．158,0．083 vs 1．063,P<0．05或 P<0．01;MMP-9 mRNA:1．005,0．758,0．465, 0．208,0．103 vs 1．075,除25 μmol/L作用外,其余P<0．01);Nim作用后SMMC-7721细胞穿透聚碳酸酯膜的能力显著降低(SMMC-7721 细胞穿透聚碳酸酯膜抑制率为7．8％,28．0％, 35．6％,53．6％,61．4％),与对照组比较有显著差异(P<0．05)．结论:选择性环氧化酶-2抑制剂Nim可以抑制肝癌细胞的生长和其侵袭力,Nim抑制肝癌细胞侵袭力的作用机制与通过降低MMP水平有关．     

一种新的FⅩⅢ基因突变导致的遗传性FⅩⅢ缺陷症

目的 对1例遗传性凝血因子ⅩⅢ（FⅩⅢ）缺陷症患者及其家系成员FⅩⅢ基因[F（13）A]进行分析，探讨其分子致病机制。方法 尿素溶解法定性检测FⅩⅢ活性，抽提外周血基因组DNA．PCR扩增FⅩⅢA基因的15个外显子及其侧翼序列，PCR产物纯化后直接基因测序，并对家系成员F（13）基因相应的突变序列进行检测。结果 先证者FⅩⅢ定性试验阳性。基因测序发现先证者F（13）A存在纯合缺失，外显子10自127067位起缺失33个核苷酸（127067del33，GI：AF418272），导致阅读框内缺失11个氨基酸（406Met-416Ala），产生了由720个氨基酸残基组成的截短型FⅩⅢA蛋白。其父母FⅩⅢ定性试验为阴性，均显示为该序列的杂合缺失突变。结论 先证者为遗传性FⅩⅢ缺陷症患者，由F（13）A外显子10缺失突变所致。该突变为国际首次报道。     

急性冠状动脉综合征患者血浆Fn水平的变化及其临床意义

目的:通过检测急性冠状动脉综合征(ACS)患者血浆Fn和Fg水平,探讨其与不同类型冠心病及冠状动脉狭窄程度之间的相关性及临床意义。方法:选取接受冠状动脉造影检查的患者88例。其中,ACS患者47例(ACS组),稳定型心绞痛(SAP)患者18例(SAP组)和冠状动脉造影正常对照者23例(Control组)。采用酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测患者外周血浆Fn水平,凝血酶比浊法测定血浆Fg水平。根据冠状动脉造影结果,分为单支病变组、双支病变组及3支病变组,并结合改良的Gensini冠状动脉病变积分标准分别比较血浆Fn和Fg水平变化与冠状动脉管腔病变程度的相关性。结果:ACS组血浆Fn和Fg水平显著高于SAP组(P<0.01、P<0.05)及Control组(均P<0.01),SAP组血浆Fn和Fg水平亦高于Control组(均P<0.05)。血浆Fn水平在冠状动脉单支病变组、双支病变组及3支病变组之间差异无统计学意义(均P>0.05),而血浆Fg水平在冠状动脉3支病变组明显高于单支病变组(P<0.05)和双支病变组(P<0.01)。线性相关分析表明,血浆Fn与Fg水平具有明显相关性(r=0.381,P<0.0...     

肺癌患者外周血循环内皮细胞和VEGF检测临床意义的探讨

目的:探讨肺癌患者外周血循环内皮细胞(CECs)包括活性循环内皮细胞(aCECs)与VEGF之间的关系及其在肺癌中的临床意义。方法:用流式细胞仪对70例肺癌患者(NSCLC64例)化疗前后及30例健康人外周血CECs及aCECs进行检测,同时采用ELISA方法检测肺癌患者化疗前后VEGF水平。结果:NSCLC患者外周血CECs及aCECs的数量明显高于健康人群(P=0.000)。不同病理类型肺癌之间CECs及aCECs的数量差异无统计学意义(NSCLC与SCLC,P=0.878、0.936;鳞癌与腺癌,P=0.786、0.658)。CECs及aCECs的数量与VEGF之间无明显相关性(P=0.697、0.631)。治疗后不同疗效间肺癌患者VEGF水平比较,PD均高于CR+PR及SD(P=0.009、0.031)。NSCLC及SCLC化疗后aCECs的数量高于化疗前(P=0.031、0.029);SD及PD患者CECs、aCECs的数量高于化疗前(P=0.024、0.014;P=0.036、0.028);对治疗后不同疗效肺癌患者CECs及aCECs水平比较,aCECs数量PD、SD均高于CR+PR(P=0.022、0.009)。结论:VEGF联合CECs及aCECs检测可以作为很好的预测性指标评估肺癌的血管生成状况及判断预后。     

伴有t(8;21)急性髓细胞白血病的预后多因素分析

目的了解伴有t(8;21)急性髓细胞白血病(AML)的生物学特征及多因素对其疗效及预后的影响。方法回顾分析54例伴有t(8;21)AML患者,以同期收治的83例正常染色体核型的AML患者作为对照。分析细胞形态学、染色体、免疫表型、AML1/ETO表达及临床疗效等资料。结果54例t(8;21)AML患者M2型占59.2%,初诊时骨髓中原始细胞比例(47.92±21.63)%,CD34、CD33、CD7、CD117、CD19阳性率分别为66.04%、43.40%、3.71%、67.92%、62.26%,附加染色体异常占44.4%。完全缓解(CR)率、复发率、平均CR持续时间分别为75.68%、55.56%、225 d。结论 t(8;21)AML与正常染色体核型AML比较,外周血白细胞计数及骨髓原始细胞数较低(P<0.05),高表达CD34、CD19、CD117(P<0.05),低表达CD33、CD7(P<0.05),CR率和复发率差异无统计学意义。在t(8;21)AML中,CD19表达对缓解率影响不大,CD7与CD19共表达、继发性或合并有其他基因异常等多提示预后不良,t(8;21)AML的疗效及预后受多方面因素影响,不能单纯依靠t(8;21)来评估疗效及预后。     

脐血和新生儿外周血CD4+CD25+调节性T细胞的表型特征及意义

目的 探讨脐血和新生儿外周血中CD4 CD25 调节性T细胞的表型特征及其意义.方法以18份脐血和9份新生儿外周血为标本,细胞膜表面抗原采用单抗直接标记法,检测胞内抗原(CD152、FoxP3)时先标记膜表面抗原,固定破膜后再标记胞内抗原,应用多参数流式细胞仪进行检测和结果分析.结果脐血和新生儿外周血中的CD4 CD25 T细胞显示为独立的细胞群,脐血中该群细胞占CD4 T细胞比例为(9.26±2.43)%,新生儿外周血中的比例则为(9.35±2.30)%;在表型方面,大部分是CD45RA 的细胞,同时表达CD62L、胞浆内的CD152,也表达FoxP3,CD4 CD25 FoxP3 占CD4 T细胞比例为(1.92±0.28)%.结论 脐血和新生儿外周血中存在着一群单纯且水平较高的CD4 CD25 调节性T细胞,它们可能在发挥对母体非遗传性抗原的耐受及防止母体对胎儿的排斥反应中具有独特的作用.