环氧合酶-2抑制剂联用姜黄素对肝星状细胞增殖抑制作用的观察

目的观察选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398与姜黄素联用对大鼠肝星状细胞（hepatic stellate cells，HSC）增殖的影响。方法体外培养肝星状细胞株HSC-T6，接种96孔板，分别加入终浓度为20μmol／L的NS-398和姜黄素，两药物单独或联合应用与HsC共同培养，以M＇IT法检测NS-398、姜黄素单用或联用24h（n=4）对HSC生长的抑制情况。LDH法检测NS-398、姜黄素对HSC的毒性作用。结果NS-398、姜黄素及联合应用两药对HSC的增殖的抑制率分别为6．0％，20．5％，44．0％，与细胞对照组比较差异有显著性（P〈0．01），联合用药组优于单用药组（P〈0．05）。与对照组比较，各浓度组培养上清液中LDH活力差异无显著性（P〉0．05）。结论NS-398与姜黄素均可以抑制HSC增殖，联合用药的效果明显优于任一药物单用。     

还原型谷胱甘肽对大鼠肝星状细胞增殖及活化的影响

目的探讨还原型谷胱甘肽对大鼠肝星状细胞（HSC）=T6增殖及活化的影响。方法选择脂多糖（LPS）活化HSC—T6的最适作用浓度及作用时间;分别采不同浓度的还原型谷胱甘肽（GSH）作用于经LPS活化的大鼠HSC—T6,24h后进行如下实验：噻唑兰（MTT）比色法检测HSC—T6增殖;化学发光免疫法检测细胞上清液中透明质酸（HA）、Ⅳ型胶原的含量;免疫细胞化学染色图像分析HSC—T6中a—SMA的表达。结果0．1gg／mlLPS在作用24h时HSC—T6活化明显;GSH能够抑制HSC—T6的增殖及活化（P〈O．05）,减少其细胞外基质（ECM）HA和Ⅳ型胶原的表达（P〈0．05）,作用呈剂量依赖性。结论GSH可能通过抑制HSC—T6的增殖及活化,减少其ECM的产生,进而减缓肝纤维化的进展。     

大黄蛰虫丸对大鼠肝星状细胞活化增殖的影响

【目的】观察大黄蛰虫丸对经旁分泌和自分泌途径激活大鼠肝星状细胞活化增殖情况的影响。【方法】采用Nycodenz分离液非连续密度梯度离心法同步分离急性CCl4损伤模型大鼠和正常大鼠肝的枯否细胞（KC）和星状细胞（HSC）。在制备正常鼠血清和DHZCW药物血清的基础上,将它们分别加入KC和HSC培养板内作用后制备成正常鼠KC条件培养液（NKCCM）、损伤鼠KC条件培养液（KCCM）以及正常鼠HSC条件培养液（HSCCM）。将上述条件培养液分别干预HSC24h、48h和72h,然后采用MTT法和3H—TdR掺入法分别检测比较各组HSC细胞活化增殖情况。【结果】损伤鼠不含药组和正常KC对照组比较,HSC活化增殖情况显著性增高（P〈0．01）,损伤鼠含药组HSC活化增殖则显著降低（P〈0．01,P〈0．05）,且其抑制效应随着含药血清浓度的升高逐渐增强;而正常鼠HSC不含药组和正常鼠HSC含药组各组间比较均无显著性差异（均P〉0．05）。【结论】DHZCW对经旁分泌途径激活大鼠HSC活化增殖有明显的抑制作用,且作用效应与血清药物浓度间存在剂量依赖关系,但对经自分泌途径激活大鼠HSC活化增殖未见明显抑制作用。     

4-乙酰氧基苯并恶唑-2-酮对大鼠肝星状细胞增殖抑制的影响

目的探讨4-乙酰氧基苯并恶唑-2-酮（AcO—BOA）对体外培养大鼠肝星状细胞（HSC—T6）增殖的影响。方法将HSC-T6细胞分别在实验组（AcO—BOA浓度分别为0．008、0．04、0．2、1．0、5．0mg／ml）及对照组（单纯培养液）中体外培养32h后,应用四甲基偶氮唑盐法（MTT法）检测细胞增殖情况;荧光倒置显微镜下观察两组HSC-T6细胞的形态学变化。结果实验组HSC—T6细胞的增殖率均低于对照组,浓度为0．008mg／ml的实验组与对照组相比差异无统计学意义（P〉0．05）;其他浓度的实验组分别与对照组比较差异有统计学意义（均P〈0．05）。AcO—BOA对HSC—T6细胞的增殖抑制率均随着药物作用浓度的升高而逐渐升高;经吖啶橙染色后,在荧光倒置显微镜下观察,均可见细胞数量减少、体积缩小、核破裂、核浓缩等变化,且随着作用浓度的增加变化更加明显。结论AcO-BOA对HSC—T6细胞具有抑制增殖的功效。     

乙醛对大鼠肝星状细胞株HSC—T6激活、增殖及转分化的影响

目的：观察乙醛对大鼠肝星状细胞株（HSC-T6）激活、增殖并转分化为肌成纤维细胞的影响。方法：HSC—T6细胞常规培养及乙醛处理;VG染色法形态学及MTT法检测细胞增殖;ELISA法检测I型胶原蛋白（TIMPI）、纤维粘连素（FN）的表达;Westernblottin譬检测细咆内效应蛋白0L—SMA的表达。结果：VG染色乙醛束Ij激明显促进HSC贴壁及重叠、明显促进HSC增殖和显著增加胶原纤维蛋白的表达;MTT检测结果发现乙醛刺激明显增强HSC活性（P〈0．05）;ELISA结果表明乙醛刺激组较对照组TIMPI和FN的表达明显上调（P〈0．05）;Western blotting检测结果显示,乙醛刺激明显促进仅一SMA表达（P〈0．05）。结论：乙醛刺激可明显激活HSC～T6细胞株,并促进其增殖及转分化为肌成纤维细胞。     

复方肝毒清对铁超载肝星状细胞活化和凋亡的影响

【目的】观察复方肝毒清对铁超载肝星状细胞（HSC）活化和凋亡的影响【方法】体外培养HSC—T6细胞,分为正常对照组、模型组、中药组（给药浓度为0．08g/L）。以柠檬酸铁胺（FAC）与HSC—T6细胞共同温育,建立HSC铁超载模型。采用免疫组化法检测HSC—T6细胞α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达,半定量聚合酶链反应（PCR）法检测细胞转化生长因子β1（TGF-β1）mRNA的表达,TUNEL法检测HSC—T6细胞的凋亡,电镜观察HSC—T6细胞超微结构。【结果】正常对照组和模型组HSC-T6细胞α-SMA大量表达,未见或仅见有较少细胞发生凋亡,而中药组HSC细胞α-SMA表达明显减少,TGF-β1 mRNA表达显著降低（P〈0．05）,且出现明显细胞凋亡。【结论】中药复方肝毒清可能通过调节细胞铁的代谢,抑制HSC活化并诱导其发生凋亡,从而在体外发挥抗肝纤维化作用。     

叶下珠复方Ⅱ号对HSC—T6增殖及TIMP—lmRNA表达的影响

目的观察叶下珠复方Ⅱ号对肝星状细胞（HSC～T6）增殖及基质金属蛋白酶抑制因子mRNA（TIMP—lmRNA）表达的影响，探讨叶下珠复方Ⅱ号抗肝纤维化效果和作用机理。方法体外培养HSC—T6，随机分为对照组和叶下珠复方Ⅱ号5．00、2．50和1．25mg／ml组。加药后用MTT法检测各组HSC—T6增殖变化，且采用RT—PCR方法测定各组HSC—T6的TIMP—lmRNA表达。结果叶下珠复方Ⅱ号各剂量组药物对HSC—T6的增殖有明显的抑制作用，且TIMP—lmRNA表达都低于正常对照组。结论叶下珠复方Ⅱ号能押制HSC—T6增殖和TIMP—lmRNA表达，从而减弱TIMP—l对基质金属蛋白酶的抑制作用，促进ECM的降解，这可能是叶下珠复方Ⅱ号抗肝纤维化的作用机制之一。     

叶下珠复方Ⅱ号对HSC—T6增殖及TIMP—lmRNA表达的影响

目的观察叶下珠复方Ⅱ号对肝星状细胞（HSC～T6）增殖及基质金属蛋白酶抑制因子mRNA（TIMP—lmRNA）表达的影响，探讨叶下珠复方Ⅱ号抗肝纤维化效果和作用机理。方法体外培养HSC—T6，随机分为对照组和叶下珠复方Ⅱ号5．00、2．50和1．25mg／ml组。加药后用MTT法检测各组HSC—T6增殖变化，且采用RT—PCR方法测定各组HSC—T6的TIMP—lmRNA表达。结果叶下珠复方Ⅱ号各剂量组药物对HSC—T6的增殖有明显的抑制作用，且TIMP—lmRNA表达都低于正常对照组。结论叶下珠复方Ⅱ号能押制HSC—T6增殖和TIMP—lmRNA表达，从而减弱TIMP—l对基质金属蛋白酶的抑制作用，促进ECM的降解，这可能是叶下珠复方Ⅱ号抗肝纤维化的作用机制之一。     

姜黄提取物对大鼠肝星状细胞增殖与活化的影响

目的研究姜黄提取物（姜黄素）对大鼠肝星状细胞增殖和活化的影响。方法培养大鼠T6肝星状细胞株，并使用姜黄素对细胞进行处理，采用四甲基偶氮唑蓝[3-（4，5-dimthy-2-2thiazoly）2，5-dipheny-2H-tetrazoliun bromide，MTT]比色分析法检测药物对细胞增殖的影响；收集细胞并抽提细胞总蛋白，10％聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白，采用Western blot检测药物处理对细胞表达α平滑肌肌动蛋白的影响。结果姜黄素剂量依赖性地抑制大鼠T6肝星状细胞株的增殖，并可以降低细胞表达α平滑肌肌动蛋白的水平。结论姜黄素能够抑制肝星状细胞的增殖和活化．     

慢性乙型肝炎肝纤维化患者外周血CD4＋CD25＋CD127^low/-T细胞与人肝星状细胞共培养的实验研究

目的探讨CD4＋CD25＋CD127^low/-T细胞在慢性乙型病毒性肝炎肝纤维化发病机制中的作用。方法按肝纤维化S分期将慢性乙型肝炎肝纤维化患者分为s1-s2期6例和s3-s4期7例;采用磁激活细胞分选法（MACS）提取13例患者和6例健康对照者外周血CD4＋CD25＋CD127^low/-T细胞;分别将CD4＋CD25＋CD127^low/-T细胞以不同比例与人肝星状细胞株（hepatic stellate cell,HSC）共培养5天,检测各组HSC的增殖及TGF—β1的分泌。结果CD4＋CD25＋CD127^low/-T细胞与HSC之比,当健康对照组和S1-S2期组为1．5：1,S3-S4期组为2：1时,HSC的增殖速度和TGF—β1分泌量均在同组不同比例中达最高值。各组同比例之间,当比例为1．5：1时,健康对照组HSC的增殖速度显著高于s3～s4期组（P〈0．05）;在比例为1：1—2：1范围内,s1-s2期组和s3～s4期组HSC的TGF—β1分泌量远高于同比例健康对照组（P〈0．05）。结论CD4＋CD25＋CD127^low/-T细胞可能通过自身细胞数量和功能的双重调节,影响肝星状细胞的增殖和分泌,参与了慢乙肝肝纤维化的进展。     

蕲艾提取液药物血清对大鼠肝星状细胞增殖的影响

目的研究蕲艾提取液药物血清对大鼠肝星状细胞(HSC)增殖及转化生长因子β1(TGFβ1)表达的影响。方法传代培养的HSC-T6与蕲艾提取液药物血清共同培养24h后,采用MTT法检测其对HSC增殖的影响,Elisa法检测TGFβ1蛋白表达情况。结果不同浓度蕲艾提取液药物血清(5%、10%、20%)与空白对照组及生理盐水血清组比较,能显著抑制HSC-T6增殖(P0.01)及TGFβ1蛋白的表达(P0.01)。结论蕲艾提取液药物血清可显著抑制HSC-T6增殖。     

姜黄素、阿米洛利联用对大鼠肝星状细胞增殖的影响

目的　探讨姜黄素 (curcumin)、阿米洛利 (Amiloride)联用对大鼠肝星状细胞增殖的影响。方法　HSC T6细胞与不同浓度的姜黄素、阿米洛利共同培养 2 4h。LDH法观察姜黄素、阿米洛利对HSC T6的毒性作用 ,以MTT法观察姜黄素、阿米洛利单用及联用对HSC T6增殖的效应。结果　各治疗组HSC的增殖与对照组相比明显为低 ,均有显著性差异 (P <0 0 0 1) ;联用组对HSC增殖的抑制率最高 ;联用组HSC的增殖更低于姜黄素组 (P <0 0 5 )。各治疗组培养上清液中LDH活力与对照组相比未见显著性差异 (P >0 0 5 )。结论　姜黄素、阿米洛利均可抑制HSC的增殖 ,且联用组优于姜黄素单用组 ;它们的作用不是非特异性细胞毒作用所致。     

大蒜素对大鼠肝星状细胞单胺氧化酶表达的影响

目的观察大蒜素对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)增殖及细胞外基质合成酶-单胺氧化酶(MAO)的影响,探讨大蒜素抗肝纤维化的作用及其机制。方法体外培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6。以MTT法检测大蒜素作用下对大鼠肝星状细胞增殖的影响,real time RT-PCR检测肝星状细胞的MAO m RNA的表达水平、Western blot检测肝星状细胞的MAO蛋白的表达水平。结果 HSC-T6大蒜素处理组与空白对照组比较,增殖抑制率明显提高,差异有统计学意义(P0.05);MAO的m RNA及蛋白表达水平均明显下调,并且大蒜素浓度增高时,MAO的m RNA及蛋白表达水平则逐渐下调,DATS高浓度实验组(24μg/ml)对MAO的抑制作用明显强于溶剂对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论大蒜素对HSC-T6的增殖和MAO的表达均有抑制作用,且对MAO的表达抑制作用具有剂量依赖性,可为临床开发抗肝纤维化的新药物提供理论基础。     

AngⅡ对肝星状细胞中ACE 2和Mas受体mRNA的影响

目的：体外培养肝星状细胞（HSC）,从分子生物学的角度探索其是否有ACE 2和Mas受体mRNA的表达,以及血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）贝那普利对二者的影响。方法大鼠肝星状细胞株（HSC-T 6）按实验计划分组处理（正常对照组、AngⅡ组、AngⅡ＋贝那普利组、贝那普利组）,提取总RNA,逆转录后应用RTFQ PCR的方法测量ACE 2及Mas受体 mRNA的基因水平。结果 ACE 2、Mas受体mRNA在各组中均有表达;与对照组相比,AngⅡ组中二者的表达均较高,差异有统计学意义（P〈0.05）;在AngⅡ＋贝那普利组,二者均较AngⅡ组升高,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 AngⅡ可使肝星状细胞激活,活化后的HSC的ACE 2、Mas受体mRNA的基因表达水平升高,从而发挥其抗肝纤维化的作用。     

姜黄素对食管癌EC-9706细胞增殖的影响

目的观察姜黄素对人食管癌EC-9706细胞增殖的影响并探讨其分子机制。方法应用50～200txmol／L姜黄素处理食管癌EC-9706细胞株12—48h后,应用四甲基偶氮唑蓝（MTF）法检测细胞增殖抑制率、逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测热休克蛋白70（Hsrv0）mRNA的表达。结果经姜黄素干预后,人食管癌EC一9706细胞生长减慢,MTT法检测结果显示增殖抑制率达18．3％～77．5％（P〈0．05）,呈良好的时间一剂量效应关系,HSP70mRNA的表达下调。结论姜黄素能够有效抑制人食管癌细胞EC-9706的增殖．其机制可能与抑制HSP70mRNA的表达有关。     

大蒜素对大鼠肝星状细胞基质金属蛋白酶抑制剂-1表达的影响

目的 观察大蒜素对大鼠肝星状细胞（HSC-T6）增殖及细胞外基质降解酶-金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）的影响,探讨大蒜素抗肝纤维化的作用及其机制.方法 体外培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6.MTT法检测大蒜素作用下对大鼠肝星状细胞增殖的影响、Real-time RT-PCR检测肝星状细胞的TIMP-1mRNA水平、Western blot检测肝星状细胞的TIMP-1蛋白的表达水平.结果 HSC-T6大蒜素处理组与空白对照组比较,增殖抑制率明显提高,差异有统计学意义（P ＜0.01）;TIMP-1的mRNA及蛋白表达水平均明显下降,并且大蒜素浓度增高时,TIMP-1的mRNA及蛋白表达水平则逐渐下降,大蒜素高浓度（24μg/mL）组对TIMP-1的抑制作用明显高于空白对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 大蒜素对HSC-T6增殖和TIMP-1的表达均有抑制作用,为临床开发抗肝纤维化的新药物提供了理论基础.     

姜黄素对大鼠肝星状细胞中TGF-β调节的NADPH氧化酶4的激活及Smad信号通路的影响

目的：研究姜黄素潜在的抗纤维化作用,以及转化生长因子β( TGF-β)诱导大鼠肝星状细胞( HSC-T6)激活的机制。方法不同浓度的姜黄素(0、5、10、20、40μmol/L)处理HSC-T6后,用MTT法测定其对HSC-T6增殖作用的影响;用RT-PCR法检测其mRNA水平的表达;用Westem blot法检测表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、细胞外基质主要成分α1I胶原(Col1α1)、NADPH氧化酶4(NOX 4)、 Smad 2、Smad 3及其磷酸化的水平。结果40μmol/L的姜黄素组刺激HSC-T648 h后,其抑制率达到最大,显著低于仅TGF-β1刺激组、5、10及20μmol/L姜黄素组( P<0．05)。姜黄素可显著降低激活型HSC-T6的α-SMA、α1I胶原mRNA与蛋白表达,从而可以降低细胞外基质的沉积;有效降低了NOX 4的蛋白水平,减少了活性氧的水平;还明显降低Smad 2、Smad 3的磷酸化程度,呈浓度依赖性。结论姜黄素在体外能够明显地抑制HSC-T6激活,对肝纤维化的发生发展具有一定抑制作用,其机制可能与抑制TGF-β诱导的NOX4的激活及Smad信号通路有关。     

羊蹄根对体外肝星状细胞增殖的影响

目的 探究羊蹄根对体外肝星状细胞（HSC）增殖的影响。方法 将液氮下保存的肝星状细胞株于 37 ℃、5％CO2孵育箱中复苏传代培养,加入转化生长因子（TGF-β）刺激肝星状细胞（HSC）12h后,同步分为 2 组：对照组、羊蹄根不同剂量（1：1200、1：1800、1：2400）组,2 h后采用倒置荧光显微镜观察细胞形态以及MTT比色法检测细胞增殖情况。 结果 镜下可见羊蹄根组比对照组凋亡细胞显著增多,细胞密度明显减少,细胞由典型的星形变成了椭圆形或梭形,细胞体积减小,细胞结构完整,细胞之间伪足连接少见、融合基本消失;各剂量组对细胞增殖均有显著抑制作用（P〈0.05）,抑制率分别为 69.36%、32.01%、29.14%,且高剂量组与中、低剂量组相比细胞抑制作用比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论 羊蹄根对肝星状细胞（HSC）的增殖有显著抑制作用,有效的缓解了肝星状细胞的纤维化程度。