全血基因组DNA的提取和纯化方法比较

目的探讨全血基因组DNA的快速纯化方法。方法分别采用表面活性剂裂解法、传统酚抽提法、加热法分别制备DNA，分析各种方法提取DNA的产量、纯度，以及方法本身的优缺点、费用等，同时我们进行RAPD标记实验以比较纯化的DNA在PCR上应用的效果。结果表面活性剂裂解法简单快速，其制备的DNA产率、纯度明显高于传统酚抽提法，但其完整性不如后者。加热法快速制备的全血基因组DNA作为模板虽然纯度差，但仍可用于PCR，并得到满意的检测结果。同一份标本采用不同方法提取的DNA作为模板进行的RAPD标记实验，其多重PCR产物进行分离产生的DNA图谱基本一致。结论3种全血DNA纯化方法均可满足不同的实验要求。     

改良盐析法提取全血基因组DNA的影响因素研究

目的 观察红细胞裂解时间、DNA纯化方式以及DNA干燥时间对改良盐析法提取全血基因组DNA的影响.方法 改良盐析法提取全血基因组DNA时,分别采用不同的红细胞裂解时间、DNA纯化方式以及DNA干燥时间.使用流式细胞术检测红细胞裂解后的细胞总数及死细胞比例,紫外分光光度计检测DNA的浓度和纯度,琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物.结果 红细胞裂解时间从10 min延长至120 min,死细胞比例随时间延长而增加,但细胞总数、DNA产量与纯度无明显变化;采用异丙醇沉淀法纯化DNA得到的DNA产量与纯度均显著高于使用DNA分离柱纯化的DNA; DNA干燥时间从120 min缩短至30 min,既不影响DNA的产量与纯度,也不影响后续PCR扩增实验.结论 改良盐析法提取全血基因组DNA时,红细胞裂解时间可延长至120 min,DNA干燥时间可缩短至30 min,异丙醇沉淀法优于DNA分离柱纯化的DNA.     

一种快速高效提取全血基因组DNA的实验方法

目的 建立一种快速的从少量全血中高效提取基因组DNA的实验方法 .方法 首先低渗处理红细胞,收集白细胞,然后裂解白细胞释放核蛋白,在去污剂及乙酸钾的作用下使核酸与蛋白分离,最后沉淀、纯化DNA.扩增管家基因(β-globin)观察提取效果.结果 该法收集的DNA纯度(OD360/OD280)为(1.82±0.4);每毫升外用血可得DNA19.0～37.0μg,片段大小10～13kb;β-giobin基因扩增电泳带清晰.结论 该法提取DNA简便、高效和经济,易于各级分子生物学实验室使用.     

模板DNA质量对单核苷酸多态性分析的影响

目的探索在单核苷酸多态性分析中模板DNA质量对实验的影响以及提高模板DNA质量的途径。方法用PCR—RFLP法研究SNPrs1024611（G／A）的基因分型,从样本保存方式、保存时间及DNA提取方法三方面进行对比实验,观察其对模板DNA质量及SNP分析的影响。结果从抗凝血中提取DNA模板的得率比非抗凝血高,在SNP分析中,EDTA抗凝血效果最好、肝素抗凝血效果不好;基因组DNA在全血中的有效保存时间比提纯的DNA有效时间长;试剂盒法提取DNA的得率和纯度均高于传统的酚-氯仿法。结论可通过以下途径提高SNP研究中DNA模板的质量：采集血样用EDTA抗凝、分装成小份在-20℃冻存,避免反复冻融。使用前在37℃水浴中快速解冻,用试剂盒法提取DNA更适合于SNP的研究,提取的模板DNA要及时实验或分装后冻存于-20℃,若需长期保存模板DNA,保存全血优于保存纯化的DNA。     

全血基因组DNA的快速纯化

目的探讨全血基因组DNA的快速纯化方法。方法微量全血通过红细胞裂解后，得到白细胞。再通过白细胞裂解，高盐离子去除蛋白，异丙醇沉淀即可得到高纯完整的全血基因组DNA。结果该方法简单快速，得到的产品产率高(6.94μg／300μl全血)，纯高度(A260/A280=1．82，A206/A230=2．08)，完整性好(单一条带)。结论该方法快速、高效。不仅缩短了实验时间，而且还提高了产品质量，可完全满足实验室快速分析的要求。     

混合菌基因组的合并提取及鉴定

目的为了简便、快速的提取混合病原菌的基因组DNA，进而获得不同病原菌的特异性毒力DNA片断用于进一步的基因诊断。方法改良了裂解试剂，同时提取革兰氏阳性菌(以金黄色葡萄球菌为代表)和革兰氏阴性菌(以产毒性大肠杆菌ETEC为代表)的混合基因组DNA；采用双重PCR法进行扩增鉴定。结果提取得到混合菌的混合基因组，并以此为模板通过双重PCR同时扩增得到两种菌的特异性DNA片断。结论这是一种合并提取混合菌基因组DNA，进而获得不同病原菌DNA片段的简便方法。     

适于Panhandle PCR模板的贵阳腐霉基因组DNA的提取方法

目的：探索适合作为锅柄聚合酶链反应（Panhandle PCR）模板的贵阳腐霉基因组DNA的提取方法。方法：采用氯化苄法、微波法、改良的SDS法提取贵阳腐霉基因组DNA,利用核酸蛋白检测仪及琼脂糖凝胶电泳法测定其纯度和浓度,并比较其作为Panhandle PCR模版的扩增效果。结果：氯化苄法、微波法、改良的SDS法均能提取到贵阳腐霉基因组DNA,氯化苄法提取的基因组DNA纯度及含量较高。而且氯化苄法提取的基因组DNA扩增的条带专一,特异性强。结论：氯化苄法提取的贵阳腐霉基因组DNA最适合作为Panhandle PCR的模板。     

经典酚/氯仿抽提法和纯化试剂盒法提取全血基因组DNA的比较

目的 比较经典酚/氯仿法和纯化试剂盒法抽提全血基因组DNA的差异.方法 分别对两种方法抽提的全血DNA产物进行紫外分光光度仪、琼脂糖凝胶电泳和体外聚合酶链锁反应（PCR）扩增.结果 两种方法DNA的提取效率相似,TaKaBa试剂盒法提取的纯度[光密度（OD）260nm/280nm]较常规酚/氯仿法明显提高.结论 TaKaBa试剂盒法较传统酚/氯仿提取基因组DNA法快速、简便、经济,可用于PCR模板DNA的制备.     

SNP敏感性纳米级复合分子开关在性别鉴定中的应用

目的研究SNP敏感性纳米级复合分子开关在性别鉴定中的应用。方法（1）单碱基敏感性复合分子“开／关”与普通PCR技术相结合对筛选出的特异已知样本进行检测：用常染色体基因片段作为对照，分别用同一样本的X，Y基因特异性引物延伸产物（x，Y）与常染色体引物延伸产物（A）进行比较，得出正常男性及女性的X／A，Y／A比值。建立标准化的普通PCR检验系统。（2）在同一反应体系中对两个靶基因进行检测，对双靶PCR反应条件进行优化。结果SNP敏感性分子开关准确检测了Y染色体上才有的特异序列。男性的X／A，Y／A比值分别为1：1和3：2，女性的X／A，Y／A比值均为1：1。结论SNP敏感性纳米级复合分子开关能够准确地对临床性别表型正常的人进行性别鉴定。     

一种从培养细胞中快速制备病毒PCR模板的方法

目的建立一种快速、简单的从培养细胞中制备病毒PCR模板的方法。方法分别用裂解液煮沸法、苯酚法及基因组DNA提取试剂盒提取F81细胞中的犬细小病毒的DNA,分析3种方法提取的病毒DNA纯度、浓度及操作所需时间,并作巢式PCR检测,比较其PCR检测的阳性率。结果以裂解液煮沸法提取的犬细小病毒DNA为模板进行巢式PCR检测后的阳性率与两种对照方法之间的差异无统计学意义（P〉0.05）,3种方法提取的病毒DNA纯度及浓度未见差异,但裂解液煮沸法操作所需时间最短。结论裂解液煮沸法是一种快速而简单的从培养细胞中制备病毒PCR模板的方法。     

不同检材微量血间日疟原虫PCR检测模板制备方法的研究

目的 探寻不同检材微量血间日疟原虫PRC检测模板制备的方法.方法 全血标本采用酚/氯仿抽提法、洗涤沉淀法、Chelex煮沸法和洗涤水煮法;滤纸干血滴及厚血膜标本以Chelex煮沸法和洗涤沉淀法制备模板.以间日疟原虫特异性引物作PCR扩增检测模板制备的效果.结果 采用上述4种不同的方法制备的全血间日疟原虫DNA模板与采用Chelex法和洗涤沉淀法制备的滤纸干血滴以及厚血膜疟原虫DNA模板均可被扩增出1条341bp的间日疟原虫特异性DNA条带,与预期的扩增片断大小一致;不同方法制备的10份间日疟患者血样DNA模板用于PCR扩增检测,结果无明显差异.其中,Chelex煮沸法和洗涤沉淀法对不同检材的疟原虫感染血样DNA模板均能有效制备,且可在同一离心管中进行,减少了交叉污染的机会.结论 Chelex法和洗涤沉淀法简便、实用,适用于不同检材微量血疟原虫PRC模板的制备.     

应用改良法从冷冻血凝块中提取基因组DNA

[目的]建立从冷冻血凝块中提取基因组DNA的改良方法.[方法]取冷冻血凝块在4℃条件下解冻,经高盐及高EDTA提取液处理,消化液消化,异丙醇抽提.[结果]用改良异丙醇法成功地从人血凝块中提取基因组DNA,其质量浓度为(22.5±7.2)mg/L,光吸收比值A260/A280为1.63~2.00.[结论]应用改良法提取的基因组DNA的总量较多,提取率高,PCR扩增效果较好,可用于血凝块基因组DNA的提取.     

丝状真菌高分子量DNA的提取研究

为寻求一种简便高效的提取真菌基因组ＤＮＡ的方法，采用经改良的液氮研磨饱和酚抽提法及高盐沉淀法，从液体培养的鸡土从菌菌丝体中提取了高分子量的基因组ＤＮＡ。用紫外吸收光谱、限制酶切、ＲＡＰＤ—ＰＣＲ反应及琼脂糖凝胶电泳等方法进行了鉴定。结果显示，两种方法均可以获得分子量大、样品较纯的基因组ＤＮＡ，用限制酶均能有效地消化，并可有效地用于ＰＣＲ扩增。其中高盐沉淀法提取的ＤＮＡ产量高（每克菌丝体可获ＤＮＡ０．８３ｍｇ），方法简便，对人体无毒害，是较理想的提取真菌ＤＮＡ的方法     

几种水稻田土壤微生物总DNA提取方法的比较

目的：使人们在提取土壤总DNA时,可以根据不同的要求选用不同的方法。方法：选用了5种现在较常用的土壤微生物总DNA提取方法从水稻田土壤中提取总DNA,并对5种方法提取的DNA的质量和数量进行比较评价。结果：5种方法都可以从土壤中提取到长度大于48kb的DNA片段,但不同方法提取的DNA的产量存在明显差异。土壤总DNA都不需要纯化就可以用于PCR扩增,使用细菌16SrDNA基因的引物可以扩增得到相应的片段。结论：Bourrain法和Martin-Laurent法可以较快地提取出DNA,Martin-Laurent法提取的DNA的量最多,Tiedje法和Janssen法提取的DNA片段最大,Janssen法提取的DNA纯度最高,Reddy法提取的DNA的完整性和PCR扩增效果最好。     

冻存血与新鲜血的DNA抽提效果的比较研究

目的探讨一种简单便捷、可用于PCR扩增的人体外周血标本冷冻保存的方法。方法外周血标本冷藏于普通冰箱冷冻室2-4周,采用常规方法,提取28例新鲜血标本及31例冻存血标本的DNA,经2%琼脂糖凝胶电泳,凝胶分析软件半定量分析,比较冻存血和新鲜血的DNA抽提效果。采用PCR方法扩增抽提DNA标本的ABCB4基因外显子6,研究冻存血中提取的DNA能否用于PCR实验。结果新鲜血组的光强度值为24948.98±10246.97,冻存血组DNA标本的光强度值为22917.65±11545.63,两组间无显著性差异(P>0.05)。所有冻存血中提取的DNA标本,经PCR扩增均有目标带。结论简易冷冻保存的外周血标本中提取的DNA质量与新鲜血无明显差别。冻存血的DNA标本可以用于PCR实验。     

基因DNA制备方法的探讨

目的 :探讨基因组DNA的制备方法。方法 :酚 -氯仿法、改良盐析法及口腔粘膜法。结果 :三种方法提取的DNA产量均能满足PCR及基因分型的需要。结论 :改良的盐析法相对简单、经济和快速 ,更适合临床上基因诊断的需要 ;而口腔粘膜法特别适用于儿童及家系调查。     

干血滤纸片试剂盒和水煮法提取间日疟原虫DNA用于PCR检测的比较

目的：比较水煮法和干血滤纸片基因组DNA分离试剂盒提取间日疟原虫DNA用于PCR检测及克隆研究的差异。方法：采集间日疟患者末梢血制备干血滤纸片,分别用水煮法和QIAamp DNAmini kit试剂盒提取间日疟原虫基因组DNA10份。PCR扩增LDH基因,并克隆质粒pGEM-PvLDH。分析比较2种提取方法的差异。结果：水煮法和试剂盒法提取的间日疟原虫gDNA,均扩增出LDH基因特异条带,但试剂盒提取的gDNA目的条带亮于水煮法。结论：水煮法操作简便、快速、经济,在等量血源条件下,所得DNA量较少、纯度较低;试剂盒提取可获得较高的得率,在定量检测和复合扩增时受到的影响因素较少,成功率较高。     

3种方法对临床菌血症样本细菌DNA提取的比较

目的寻找一种简单、有效的提取临床菌血症样本细菌DNA的方法．方法分别用碱液加热裂解法、溶菌酶法和商品DNA提取液法提取细菌DNA,用临床常见病原菌特异性引物,进行PCR扩增．结果（1）商品DNA提取液法提取革兰阴性菌DNA,经PCR扩增后得到特异性目的片段,但未扩增出革兰阳性菌的特异性目的片段;（2）碱液加热裂解法、溶菌酶法提取革兰阴、阳性菌DNA,经PCR扩增后均得到特异性目的片段,但碱液加热裂解法比溶菌酶法能扩增到更低浓度的细菌DNA目的片段．结论碱液加热裂解法是3种方法中最简单有效的细菌DNA提取方法,适用于临床病原菌基因组DNA提取．     

从血液中提取DNA方法探讨

目的:研究从血液中提取DNA的方法以应用。方法:静脉抽取血样,分别抗凝或不加抗凝处理后,提取DNA,通过电泳和PCR进行检测。结果:凝血和抗凝血的DNA产量和纯度分别是(40.2±8.86)mgDNA/L血液和(1.87±0.11)mgDNA/L,(39.1±10.2)mgDNA/L血液和(1.92±0.12)mgDNA/L。所有样本的DNA分子量都很高,从两者的DNA样本中能很容易地扩增出t-PA基因的第8内含子区Alu等位基因二态性,因此所提取的DNA是完整可靠的。结论:该方法能快速、简单、有效、无毒地从新鲜血液和凝血中提取DNA,适合于临床检测和分子生物学研究。     

外周血基因组DNA提取方法比较

目的建立快速经济有效提取微量外周血基因组DNA的方法。方法采用酚/氯仿提取法、NaCL沉淀法和试剂盒法,直接从人外周血中提取基因组DNA,并以此为模板,进行肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因片段的扩增及鉴定。结果酚/氯仿法和试剂盒法提取的DNA量大,需血量少,用于PCR扩增结果稳定。结论酚/氯仿提取外周血DNA稳定、高效、经济,可用于批量临床标本的制备。