基于风险识别的临床生化实验室安全管理模式初探

正过去临床实验室病原微生物因子的生物风险管理较受重视,实验室生物安全管理的投入和措施较多[1-3],但从临床实验室质量安全体系构建的完整性角度讲,实验室安全管理工作的全面性尚存不足。目前中国合格评定国家认可委员会(CNAS)发布的医学实验室质量和能力认可准则(CL02)[4]、国家卫计委发布的等级医院评审实施细则(2011)[5]等文件均对除生物风险外的其他安全风险如实验室内医疗安全风险、信息     

端粒、端粒酶基因及其突变在肝癌发生发展中的研究进展

<正>研究者凭借对端粒的功能和维持机制的阐述在2009年获得了诺贝医学奖[1],这些研究者发现了端粒是一段位于真核生物线性染色体末端的DNA-蛋白复合体,通过防止染色体的末端融合来维持染色体的稳定,端粒酶通过对端粒的损伤后修复来维持端粒的稳定。在这篇综述中,阐述的是这些发现在肿瘤中的应用。在人体细胞中,限制细胞生长的两个机制:衰老和生长停滞是防止癌症的有效机制,当平均端粒长度达到大约5     

熔解曲线分析检测临床常见5种革兰阴性菌的方法建立

目的:构建熔解曲线分析法检测5种临床常见革兰阴性病原菌.方法:选取临床最常见的大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯杆菌、鲍曼不动杆菌、嗜麦芽单胞菌作为目标检测菌种.对目标菌种设计种特异性引物.构建熔解曲线法,并进行特异性验证.检测不同拷贝浓度稀释液进行敏感性分析.检测临床分离目标菌各20株,进行稳定性评价.结果:(1)经预实验后,对Tm值差异较大的铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯杆菌、鲍曼不动杆菌三对引物同时进行熔解曲线分析,对大肠埃希菌、嗜麦芽单胞菌两对引物同时进行熔解曲线分析.(2)特异性验证显示,目标菌种均有特异性的熔解曲线,各自的Tm值依次为88.37、86.32、80.86和87.56、86.32℃.(3)可检测到的拷贝浓度稀释液约为3.0 × 103 copies/mL.(4)稳定性评价的结果显示,Tm值变化范围窄小,差异有统计学意义.结论:所构建的熔解曲线法具有较好的特异性、敏感性和稳定性.     

产ESBLs大肠埃希菌磺胺耐药基因sulⅠ的检测与分析

产超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum b-eta-lactamases,ESBLs)是由质粒介导的能赋予细菌水解青霉素类、头孢菌素类和单酰胺类抗生素的一类β-内酰胺酶,其水解活性能被β-内酰胺酶抑制剂所抑制.大肠埃希菌是医院感染常见的病原菌,而产ESBLs大肠埃希菌在临床分离率逐年升高,其对β-内酰胺酶类、氨基糖苷类和磺胺类等常用抗菌药物表现出多重耐药.在对肠杆     

熔解曲线分析检测临床常见4种革兰阳性菌的方法建立

目的 构建熔解曲线分析法同时检测4种临床常见革兰阳性病原菌,为临床感染性疾病的诊疗提供快速、敏感的分子生物学检测信息.方法 选取临床最常见的革兰阳性病原菌:金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、屎肠球菌、粪肠球菌做为本课题研究的检测菌种.根据检测菌种的不同,分别选取不同菌种的特异性靶序列,设计种特异性引物.对种特异性引物分别用标准菌株、临床分离目标菌株、临床分离非目标菌株、非细菌性病原体以及人源基因组DNA进行常规PCR扩增以及扩增产物测序,验证引物的特异性.对目标菌种引物进行荧光PCR预实验,筛选Tm值差异较大的多对引物,进行熔解曲线分析法实验,并对熔解曲线法的反应条件与反应体系进行优化.对优化后的熔解曲线法进行特异性验证.通过检测加入人血液中的不同细菌浓度对该方法进行敏感性分析.应用所构建的方法分别检测临床分离目标菌种各20株,分析每种菌种的熔解曲线图,熔点温度(Tm值)及其标准差(SD)的变化,评价所构建方法的稳定性.结果 ①对所设计的种特异性引物经常规PCR扩增产物电泳分析显示,目标菌株均有目的特异性扩增产物,非目标菌株、非细菌性病原体以及人源基因组DNA未出现特异性电泳条带.特异性扩增产物测序所得序列比对分析显示与目的菌种序列相符.②对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、屎肠球菌、粪肠球菌的4对引物同时进行熔解曲线分析和mecA基因熔解曲线分析的条件优化结果:预变性温度94℃、120s,变性温度94℃、20s:退火温度53℃、12s;延伸温度68℃、13s;扩增循环数为40个循环,熔解曲线分析温度75℃～95℃.最佳的引物浓度为300nmol/L.③所建立的方法经特异性分析显示,上述4种目标菌种均有特异性熔解曲线,Tm值依次为81.02℃;80.32℃;82.37℃:83.10℃,峰高(cm)/峰宽(cm)均大于2.6,以此为典型的熔解曲线判断标准,则非目标菌、非细菌性病原体以及人源基因组DNA分析未见典型的熔解曲线.④方法的敏感性分析显示,上述4种目标菌和mecA基因可检测到的血液细菌浓度依次为:550、520、470、500与203CFU/mL.⑤对上述4菌和MRSA的临床分离菌各20株进行检测,结果显示,其平均Tm值依次为(80.96±0.688)℃,(80.20±0.729)℃,(82.42±0.599)℃,(83.20±0.713)℃和(80.11±0.15)℃.结论 本研究所设计的针对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、屎肠球菌、粪肠球菌和mecA基因检测引物具有较好的菌种特异性,可用于相应病原菌熔解曲线分析法的建立;所构建的熔解曲线法具有较好的特异性、敏感性和稳定性;并具有快速、简便、成本低廉的特点,可用于临床样本的检测;但葡萄球菌属内和肠球菌属内的Tm值较接近,必要时,可进一步用单对引物检测分析以鉴定到种.     

对称动态动脉硬化指数对原发性高血压患者早期肾功能损害的预测

目的：探讨对称动态动脉硬化指数（S-AASI）对原发性高血压患者早期肾功能损害的预测价值。方法：选择原发性高血压患者300例,测量患者的动态血压参数并计算S-AASI,检测尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）/肌酐（NAG/Cr）,化验血清肌酐并计算Ccr。根据S-AASI的四分位数将受试者分为A、B、C、D 4组。比较4组患者各参数的差别,并行S-AASI与尿NAG/Cr等参数的多元相关回归分析。结果：①4组的年龄随S-AASI水平的增高依次增高（P〈0.05）。A、B组高血压病程差异无统计学意义（P〉0.05）,B、C、D组高血压病程依次延长,各组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）。②4组之间的血清肌酐比较差异无统计学意义（P〉0.05）,但4组尿NAG/Cr及微量蛋白尿阳性率均依次增高,而Ccr依次降低,组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）。③多元线性回归分析显示S-AASI与尿NAG/Cr（β=0.470,P〈0.001）、Ccr（β=-0.322,P〈0.05）具有相关性。尿NAG/Cr每增加1 IU/g,S-AASI相应增加0.005;Ccr每降低1 ml/（min.1.73 m2）,S-AASI相应增加0.003。结论：S-AASI可作为高血压早期肾功能损害的预测指标。     

高脂血症患者APOB／CIII／E基因多态性交互作用的研究

目的探讨原发性高脂血症载脂蛋白（Apo）B、CIII、E基因中ApoB MspI、ApoB XbaI、ApoB EcorI、ApoCIII3175、ApoCIII3206、ApoE112／158等7个位点基因多态性间的交互作用。方法采用病例一对照相关性研究策略，选择昆明地区汉族作为研究对象，用基因芯片检测技术，对91例高脂血症患者及76例健康对照者进行ApoB MspI、ApoB Xbal、ApoB EcorI、ApoCIII3175、ApoCIII3206、ApoE112／158等6个位点基因多态性进行检测。用比值比（odd ratio，OR）估计相对危险度。用MDR分析多基因相互作用。结果用MDR分析法，对昆明地区汉族高脂血症患者上述6个位点基因型多态性的基因-基因交互作用进行了分析，发现两位点MspI—E112／158、三位点MspI—CIIB206-E112／158和四位点MspI—XbaI—CIII3206-E112／158这三种模型均具有统计学意义（P〈0．001），但三位点MspI—CIII3206-E112／15模型的交叉验证一致性系数最大（10／10）为最佳模型，该模型包含了位点ApoBMspI、ApoCIII3206和ApoE112／158位点．提示这三个基因位点之间可能存在基因-基因交互作用。该模型的Odd Ratio为14．870（95％CI：1．305—169．43）。结论发现昆明地区汉族人群7个高脂血症候选基因位点中，MspI—CIII3206-E112／158三个基因多态性之间可能存在基因-基因交互作用。     

ABO-HDN“二孩”患儿多项指标的联合检测分析

目的对确诊为ABO新生儿溶血病(ABO-HDN)的"二孩"患儿,对产前与产后多项相关检测指标进行综合分析,做到早预防、早诊断、早治疗。方法选取2013-2016年在该院检查并确诊为ABO-HDN患儿92例,产前微柱凝集法检测父亲、母亲血型及母亲不规则抗体筛选,母亲血清IgG抗A(B)抗体效价,产后微柱凝集法进行新生儿溶血3项试验,根据新生儿溶血3项试验结果,分成5组。A组:直抗试验(+)、游离试验(+)、释放试验(+);B组:直抗试验(-)、游离试验(+)、释放试验(+);C组:直抗试验(+)、游离试验(-)、释放试验(+);D组:直抗试验(-)、游离试验(-)、释放试验(+);E组:直抗试验(+)、游离试验(-)、释放试验(-);全自动分析仪检测患儿总胆红素、非结合胆红素、血红蛋白、网织红细胞百分比、乳酸脱氢酶水平。结果92例ABO-HDN患儿经溶血3项试验,发现5组母亲IgG抗A(B)抗体效价越高,患儿病情越严重,差异具有统计学意义(P0.05);网织红细胞百分比与乳酸脱氢酶在5组间比较,差异具有统计学意义(P0.05)。结论产前产后多项实验室指标联合检测,对诊断"二孩"ABO-HDN更为准确,同时有助于掌握患儿病情发展状态,降低并发症和后遗症的出现。     

样本放置时间对血清二氧化碳结果的影响

目的探讨样本放置时间对血清中二氧化碳检测结果的影响。方法随机收集当天住院患者静脉血样本30例,分别于五个不同时间点(5分钟,45分钟,1小时45分钟,2小时45分钟和3小时45分钟)检测血清样本中二氧化碳含量,评估样本放置时间对二氧化碳检测结果的影响。结果 30例样本5个时间点二氧化碳检测结果有统计学意义(P=0.000);30例样本45分钟时二氧化碳检测结果全部满足质量目标,1小时45分钟时满足质量目标的例数有5例,2小时45分钟和3小时45分钟时满足质量目标的例数有0例。结论样本开盖待测时间对二氧化碳检测结果有显著影响;样本放置45分钟内二氧化碳检测结果的偏差百分率能满足基于生物学变异合适水平的总允许误差质量目标。     

一株少见耐药表型产酸克雷伯菌致感染一例

患者女，62岁，自2003年9月25日以来因尿路感染和肺部感染，曾用氨苄西林、左氧氟沙星、哌拉西林/他唑巴坦等抗菌药物治疗。患者因肺部感染于2003年10月31日～11月8日期间共送6份下呼吸道痰标本做细菌培养和药敏试验。