小鼠骨髓基质成纤维细胞与成骨关系的实验研究

目的 :研究骨髓基质成纤维细胞与成骨的关系。方法 :Luria多器官培养器体外器官培养法、肾被膜下移植技术以及石蜡切片技术。结果 :移植物在移植处形成软骨细胞团及骨基质。结论 :骨髓基质成纤维细胞集落形成细胞 ( CFU-F)为基质多能干细胞 ,能增生分化为成骨所必需的基质细胞     

骨髓CFU-F体内、体外成骨功能研究

目的：研究骨髓基质成纤维细胞与成骨的关系,为临床应用奠定基础。方法：采用Ｌｉｕｒｉａ多器官培养器体外器官培养法、肾被膜下移植技术以及石蜡切片技术、Ｇｏｍｏｒｉ染色和Ｖｏｎ Ｋｏｓｓａ染色技术。结果：移植物在肾被膜下形成软骨细胞团及骨基质;在β－ＧＰ存在下,骨髓基质ＣＦＵ－Ｆ体外培养可见形成钙化的骨板。结论：骨髓基质ＣＦＵ－Ｆ为基质多能干细胞,能增生分化为成骨以及造血诱导微环境所必需的各种基质细胞系。     

碱性成纤维细胞生长因子对骨髓基质细胞增殖与成骨活性的影响

目的：观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对骨髓基质细胞的增殖及成骨活性的影响。方法：传代骨髓基质细胞的培养中加入不同浓度的bFGF，行细胞增殖和蛋白含量测定以及碱性磷酸酶的活性检测与钙结节的形成观察。结果：bFGF浓度在0～10ng／ml，蛋白含量及细胞数量随浓度的增高而增多，10ng／ml达到最大，浓度为100ng／ml反有下降。各组ALP活性没有降低，Von Kossa染色均为阳性。结论：bFGF可促进骨髓基质细胞的增殖，并保持骨髓基质细胞成骨的特性。     

兔骨髓基质细胞在诱导条件下的成骨特性

目的 观察兔骨髓基质细胞的生长特点及诱导条件下的成骨能力。方法 使用密度梯度离心分离兔骨髓基质细胞进行培养，保留贴壁细胞传代，观察在培养液中添加地塞米松，维生素C，β－甘油磷酸钠条件下骨髓基质细胞生长及成骨分化情况。结果 骨髓基质细胞呈成纤维细胞样表现，增殖能力强。诱导条件下第2代细胞的碱性磷酸酶活性明显增高，10－12d达到最高峰，并且出现矿化结节。结论 使用本实验方法，获得的骨髓基质细胞成骨能力肯定，增殖能力强，可作为骨组织工程的种子细胞。     

袁氏生脉成骨胶囊对激素诱导骨髓基质细胞成脂分化的拮抗作用

【目的】观察中药袁氏生脉成骨胶囊(主要由丹参、川芎、鸡血藤、黄芪组成)对激素诱导骨髓基质细胞成脂分化的拮抗作用,探讨袁氏生脉成骨胶囊防治激素性股骨头坏死的病理机制。【方法】采用骨髓细胞体外培养技术和血清药理学方法,分离培养大鼠骨髓基质细胞;地塞米松诱导骨髓基质细胞的成脂分化,以含中药血清作为拮抗剂。检测培养细胞的甘油三酯含量和碱性磷酸酶活性。【结果】分离细胞培养4d后可以观察到大量成骨细胞、成纤维细胞、破骨细胞;模型组加入地塞米松造模;成骨胶囊药物组地塞米松用法同模型组,同时加入含药血清。6d后,光镜下观察成骨胶囊药物组见少量脂肪细胞,模型组脂肪细胞明显增多。成骨胶囊药物组碱性磷酸酶活性高于模型组(P<0.05);甘油三酯含量低于模型组(P<0.01)。【结论】中药袁氏生脉成骨胶囊能够有效拮抗激素诱导骨髓基质细胞成脂分化。提示活血化瘀类中药防治股骨头坏死的机理不仅是改善了股骨头的微循环,而且抑制了骨髓基质细胞成脂分化,增加了成骨细胞的表达。     

骨形态发生蛋白对人骨髓基质细胞的体外成骨分化影响

目的 提取牛骨形态发生蛋白，并观察其对人骨髓基质细胞的体外成骨分化作用，为将骨形态发生蛋白与骨髓基质细胞用于进一步的缺损修复研究提供实验依据。方法 从小牛骨中的提取骨形态发生蛋白，配制条件培养液，并作用于培养状态的人骨髓基质细胞，染色检测细胞碱性磷酸酶，I型胶原表达情况，放免法测定培养液中骨钙素含量。结果 人骨髓基质细胞经衣导培养后，碱性磷酸酶，I型胶原，骨钙素表达明显增加。结论 体外培养时，天然骨形态发生蛋白可促进人骨髓基质细胞的成骨分化。     

兔骨髓基质干细胞诱导成骨的实验研究

目的:研究兔骨髓基质干细胞(BMSCs)的生长特点和在诱导条件下的成骨特性。方法:使用密度梯度法分离骨髓基质细胞并进行培养,传2代后运用成骨诱导剂地塞米松、β-甘油磷酸钠(β-Gp)、L-坏血酸(AA)进行诱导,测试骨髓基质细胞的生长变化和成骨分化。结果:形态学表明骨髓基质细胞呈集落生长,有成纤维细胞样外观,诱导后细胞生长较前明显减慢,逐渐变为立方形、锥形或梭形。汇合时细胞呈铺石状重叠生长,进而形成“钙结节”样表现。染色及电镜观察可见细胞诱导前后有明显区别,细胞增殖吸光度(OD值)及细胞碱性磷酸酶测试表明,随着时间的延长,细胞增殖变慢,但分化能力增强(P<0.05)。结论:骨髓基质细胞作为构建组织工程骨的种子细胞在地塞米松、β-甘油磷酸、L-坏血酸诱导下成骨具有可靠的重复性。     

辛伐他汀促进骨髓基质细胞的成骨分化

目的：观察辛伐他汀对骨髓基质细胞成骨分化的影响，探讨其刺激成骨的作用机制。方法：体外培养成年小鼠骨髓基质细胞，不同浓度的辛伐他汀作用72h后，RT-PCR检测骨钙素(osteocalcin，OCN)mRNA水平的变化，Western blot检测OCN和骨桥蛋白(osteopontin，OPN)表达水平的变化，细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)细胞化学染色及酶比活性测定。结果：辛伐他汀作用72h后，OCN的mRNA表达水平增高，OCN、OPN蛋白表达水平增高，呈剂量依赖关系，细胞ALP染色增强，ALP比活性显著增高。结论：辛伐他汀促进骨髓基质细胞的成骨分化，辛伐他汀刺激成骨的作用机制可能与此有关。     

成纤维细胞胶质凝胶培养研究

建立一种成纤维细胞的三维培养方法。方法将胶原，成纤维细胞、血清和培养基在正确的比例下混合，使可形成凝胶。结果：在凝胶中成纤维细胞具有良好的活力，使之形成有一定弹性和抗拉伸能力的凝胶块。结论：真皮替代物培养是研究成纤维细胞与细胞外基质间相互作用的良好模型。     

成纤维细胞的生物学特性及其成骨作用的研究进展

成纤维细胞在骨损伤时能合成和分泌大量的胶原纤维和基质成分，和其它组织一起形成骨性骨痂，促进骨性愈合。成纤维细胞可能在上皮细胞等诱导因子作用下，分化为成骨细胞，形成骨组织，参与骨性愈合。     

骨髓基质细胞体外成骨能力的实验研究

目的 研究骨髓基质细胞(BMSc)的体外成骨能力，为骨组织工程研究提供细胞来源。方法 采用密度梯度离心法将兔BMSc自小量骨髓中分离培养，并观察第2代BMSc在地塞米松、维生素C、β-甘油磷酸钠诱导条件下的生长及成骨分化情况。结果 BMSc呈成纤维细胞样表现，增殖能力强，在诱导条件下碱性酸酶活性明显增高，并出现矿化结节。结论 BMSc体外增殖能力强，成骨能力肯定。地塞米松、维生素C、β-甘油磷酸钠可促进BMSc向成骨细胞分化。     

骨髓基质细胞的培养和保存方法

目的：建立大量生产骨髓基质细胞的培养和保存方法。为组织工程骨的培养提供种子细胞。方法：从4～5月龄新西兰大白兔胫骨上端髓腔抽吸骨髓，接种、培养及液氮冻存。通过显微镜观察其生物学表现，测定碱性磷酸酶，鉴定其生物学特征。结果：在培养过程中，未分化的骨髓基质细胞选择性粘贴于培养皿底，形态为成纤维细胞样，并呈集落生长。培养值至9-10天时，贴壁细胞单层融合。传代后的细胞形成集落的趋势明显下降，但细胞形态仍表现为成纤维细胞样，复苏细胞贴壁时间延迟，但增殖速度和形成没有改变。可测出碱性磷酸酶活性。结论：成功地建立了骨髓基质细胞的培养和冻存方法。     

大鼠骨髓基质细胞的生长特点和在诱骨条件下的成骨特性

目的 研究大鼠骨髓基质细胞(rMSCs)的生长特点和在诱导条件下的成骨特性。方法 使用密度梯度法分离成年大鼠骨髓基质细胞进行培养,保留贴壁细胞传代,观察、测试在培养液中添加成骨诱导剂地塞米松（Dex)10^-8mol/L、β-甘油磷酸钠（β-GP）10mmol/L,抗坏血酸（AA）50μg/ml条件下骨髓基质细胞的生长变化和成骨分化。结果 形态学观察表明,rMSCs贴壁细胞呈集落生长,有成纤维细胞样外观,利用MTT法和流式细胞术（FCM）测定增殖的结果表明,传代次数增加,rMSCs的增殖活性升高。成骨诱导剂促进骨髓基质细胞的增殖,而且对多次传代细胞促增殖作用明显。成骨诱导剂促进骨髓基质细胞成骨、在诱导3周时即出现明显的钙化结节。组织化学染色结果显示,非诱导条件下MSCs的碱性磷酸酶（ALP）水平会随传代而升高,传3代rMSCs的ALP的表达较弱,诱导一周后ALP的表达明显升高,超过未加诱导剂的传一代大鼠成骨细胞（OB）的ALP表达。结论 本实验表明所培养的rMSCs仍处于低分化水平,具有骨祖细胞的特性。     

全骨髓贴壁法分离培养rBMSCs及成骨诱导探讨

[摘要]　目的 通过研究在体外培养大鼠骨髓基质干细胞(rBMSCs)及其成骨生物学特性,探讨构建骨组织工程种子细胞的方法。方法 通过全骨髓贴壁培养法分离大鼠骨髓基质干细胞,应用含地塞米松、维生素C、β2甘油磷酸钠的诱导培养液定向诱导传代细胞向成骨细胞分化,并检测碱性磷酸酶活性及钙结节茜素红染色反应,进行成骨细胞鉴定。结果 全骨髓贴壁培养下,骨髓基质干细胞增殖能力强,生长迅速,呈成纤维细胞样生长。诱导条件下细胞的碱性磷酸酶活性明显增高,并且钙结节茜素红染色反应阳性。结论 采用全骨髓贴壁培养法,骨髓基质干细胞分离培养及体外扩增更为简便迅速,诱导条件下成骨能力肯定,可为骨组织工程构建提供大量种子细胞。     

兔眼角膜、结膜成纤维细胞的培养

目的 建立眼角膜、结膜细胞体外培养的方法。方法 采用组织块培养法培养兔眼角膜基质及结膜成纤维细胞。结果 结膜成纤维细胞在培养10天以后可以形成单层细胞。眼角膜成纤维细胞在培养瓶中培养2周后可形成单层；24孔板培养3d后细胞贴壁生长旺盛，10d形成单层。结论 眼角膜、结膜成纤维细胞组织块培养法是可行的，但在24孔培养板上眼角膜成纤维细胞比在培养瓶中贴壁快而且容易生长。     

大鼠骨髓基质细胞的生长特点和在诱骨条件下的成骨特性

目的　研究大鼠骨髓基质细胞 (r MSCs)的生长特点和在诱导条件下的成骨特性。方法　使用密度梯度法分离成年大鼠骨髓基质细胞进行培养 ,保留贴壁细胞传代 ,观察、测试在培养液中添加成骨诱导剂地塞米松 (Dex) 10 - 8mol/ L、β-甘油磷酸钠 (β- GP) 10 mm ol/ L,抗坏血酸 (AA) 5 0 μg/ ml条件下骨髓基质细胞的生长变化和成骨分化。结果　形态学观察表明 ,r MSCs贴壁细胞呈集落生长 ,有成纤维细胞样外观。利用 MTT法和流式细胞术 (FCM)测定增殖的结果表明 ,传代次数增加 ,r MSCs的增殖活性升高。成骨诱导剂促进骨髓基质细胞的增殖 ,而且对多次传代细胞促增殖作用明显。成骨诱导剂促进骨髓基质细胞成骨 ,在诱导 3周时即出现明显的钙化结节。组织化学染色结果显示 ,非诱导条件下 MSCs的碱性磷酸酶 (AL P)水平会随传代而升高。传 3代 r MSCs的 AL P的表达较弱 ,诱导一周后 AL P的表达明显升高 ,超过未加诱导剂的传一代大鼠成骨细胞 (OB)的 AL P表达。结论　本实验表明所培养的 r MSCs仍处于低分化水平 ,具有骨祖细胞的特性。     

骨髓基质干细胞与成骨的研究进展

实验证实骨髓基质干细胞具有间充质干细胞的特性，表现为较强的增殖能力和向多种间充质细胞分化的潜能，可向成骨系细胞方向分化。在体外培养时具成骨细胞样细胞表型，植人体内可产生矿化骨组织。本文对其体内外成骨实验进展作一综述。     

骨髓基质细胞体外成骨的实验研究

目的 研究骨髓基质细胞体外培养的成骨能力,为细胞移植修复骨缺损提供一条新途径。方法 取新西兰大白兔股骨大转子处骨髓,进行体外培养,纯化,10－14天后进行转代。培养后的细胞经倒置显微镜,透射地镜,钙染色,碱性磷酸酶染色等方法进行观察。结果 培养纯化后的细胞呈梭形,多角形,电镜显示具有分泌功能旺盛的结构,碱性磷酸酶染色强阳性,培养3－4周后,能形成钙结节。细胞在体外能多次传代,维持成骨表型。结论 骨髓基质细胞在体外培养纯化后,骨与成骨细胞相似的形态结构和生物学特性,能形成钙化的骨样组织。     

兔MSCs-PGA复合物在RCCS中的成骨潜能

目的：探讨联合应用兔骨髓基质干细胞（MSCs）、聚乙醇酸（PGA）支架材料和成骨诱导因子在旋转式细胞培养系统（RCCS）中构建组织工程化骨的可行性。方法：利用密度梯度离心法分离培养兔骨髓基质干细胞，采用动力接种方法形成骨髓基质干细胞-PGA支架复合物，以成骨条件培养液为生长介质，在RCCS中进行培养。用趋骨性荧光素四环素标记、茜素红染色以及扫描电镜、透射电镜观察，研究细胞-PGA支架在RCCS中的成骨潜能。结果：组织化学研究显示，兔骨髓基质干细胞-PGA支架结构中RCCS中培养第7d时，茜素红钙质染色呈弱阳性反应，至第21d及28d时，茜素红钙质染色呈强阳性反应。荧光显微锏上，培养组织趋骨性荧光素四环素标记呈现金黄色荧光，荧光亮度与分泌物堆积程度成正相关，与钙质染色阳性反应结果一致。超微结构观察，见骨髓基质干细胞合成分泌胶原纤维，释放基质小泡，并出现钙盐沉积，形成丛毛球状钙球，最终形成骨组织。结论：在旋转式细胞培养系统中，骨髓基质干细胞-PGA支架结构具有形成类似活体骨组织特征的组织工程化骨的潜能。     

骨髓基质细胞培养和体外成骨研究（摘要）

骨髓基质细胞培养和体外成骨研究（摘要）研究生刘劲松导师曾才铭，王宏邦，李世和（昆明医学院第一附属医院骨科，昆明６５００３１）关键词骨髓，基质细胞，细胞培养，成骨作用中图分类号Ｒ６０５将家兔和人的骨髓细胞进行体外培养。接种后的最初７２ｈ，培养物中以造血...