全蝎抗凝活性成分的研究

目的研究全蝎提取液抗凝活性成分。方法以紫外分光光度法测其抗凝蛋白含量,以凝血酶时间(TT)为指标,以提取次数、提取工艺、加热时间、反复冻融及酸碱度考察全蝎提取液抗凝活性成分的稳定性。结果其凝血酶时间与蛋白质含量呈正比关系(γ=0.9988),全蝎以提取2次为宜,对热的稳定性较差,与冻融的次数无关(P>0.05),易受pH的影响,经酸碱处理后的TT有所降低P(<0.05),在3种提取工艺中,冷浸液的活性最强(P<0.01)。结论全蝎提取液的抗凝活性成分易受提取次数、提取工艺、受热时间及pH的影响。     

僵蚕提取物中氨基酸种类与含量测定

目的:研究僵蚕提取物中组成蛋白质的氨基酸残基种类与含量,为其质量控制和抗凝活性作用物质基础研究提供依据.方法:将样品用盐酸水解后采用RP-HPLC法测定15种氨基酸残基的种类与含量.结果:僵蚕提取物含有15种氨基酸残基,其总量为48.7%,其中谷氨酸、丙氨酸和缬氨酸残基较多,蛋氨酸和辅氨酸残基在水解过程中被破坏而未测出.结论:僵蚕提取物中的主要成分为蛋白质、多肽类成分,它们含有所测的15种氨基酸残基.该定量方法准确、可控,可用于僵蚕样品中氨基酸残基的分析.     

动物药中蛋白和多肽的研究与开发

动物药是中药的重要组成部分，近十年来，动物药的临床和药理研究日益受重视，而且在活性成分的研究方面也获得迅速发展。氨基酸、多肽、蛋白质广泛存在于动物类中药，是动物药中普遍存在的化合物，这些成分以往常被认为无药理作用，属于无效成分或有毒成分。近年来的研究得知，许多蛋白质和多肽是动物药中的有效成分，动物药中的蛋白质和多肽成分研究也渐被人们重视。现对常用动物药中蛋白和多肽的研究和开发作简单综述。     

全蝎不同部位抗凝活性的比较研究

目的 采用不同提取方法比较全蝎不同部位的抗凝活性.方法 用凝血酶时间(TT)为指标,测定全蝎不同部位水提醇沉和冻融法提取液的抗凝血活性.结果 水提醇沉法全蝎凝血酶时间长于冻融法,两种提取方法中,各部位的凝血时间比较是蝎尾>蝎全体>蝎身.结论 全蝎抗凝活性成分提取方法中水提醇沉优于冻融法,抗凝活性成分主要集中于蝎尾.     

薄层色谱法分离僵蚕中蛋白质和氨基酸类成分的研究

目的建立僵蚕蛋白质和氨基酸类成分的薄层色谱分离鉴别方法，为僵蚕的质量控制提供依据。方法用不同的展开剂、硅胶薄层板的干燥温度等对僵蚕化学成分进行分离。结果以羧甲基纤维素钠(CMC-Na)为粘合荆制备的硅胶G薄层板，20℃以下自然干燥，用含0．1％的茚三酮的正丁醇-冰醋酸-水(4：1：1)作展开剂，展开90min，60℃左右烘烤2min，分离得到10个不同组分的斑点，与氨基酸对照品在相同位置上有相同颜色的斑点。结论薄层色谱法稳定、重现性好、操作方便、快速，适于僵蚕中蛋白质和氨基酸类成分的初步分离鉴别。     

几种无机阳离子对全蝎抗凝活性的影响

目的研究全蝎中无机阳离子对全蝎抗凝活性的影响。方法以凝血酶时间为指标,分别在全蝎提取液中加入相应不同浓度的无机阳离子,考察其对全蝎抗凝活性的影响。结果加入无机阳离子后,明显缩短了全蝎的凝血酶时间(P<0.01)。结论铵离子等无机阳离子对全蝎提取液抗凝活性有明显的影响。     

鹿花盘营养成分及蛋白多肽提取工艺的研究进展

鹿花盘是一种成分丰富的具有较高药用价值的动物性中药材,其中含有蛋白质多肽、氨基酸、胆固醇、多糖、脂类和无机物与矿物质等,其中丰富的蛋白质和多肽是鹿花盘主要的药效成分.本文对其营养成分和近年来鹿花盘蛋白质多肽的提取工艺进行了综述.     

海洋天然产物中活性肽类成分研究进展

生物体内的活性肽是介于氨基酸与蛋白质之间的分子聚合物，它小至由2个氨基酸组成，大至有数百个氨基酸通过肽键连接组成，具有十分重要的研究价值和生理学意义。从1977年以来，各国已从海藻、海绵、腔肠动物、软体动物和微生物体内，分离得到了数千种的新型化合物，包括肽类、生物碱类、萜类、多糖类、大环类酯类、聚醚类等化合物。其中，许多具有抗癌、抗病毒、抗菌和抗真菌、治疗心血管疾病、神经系统活性、提高免疫力等生理活性，这方面的相关报道也已很多，对海洋生物的活性物质的研究起到了十分重要的指导作用。其中，对海洋天然产物中活性多肽成分的研究，现在已经进入了一个快速发展的阶段，并取得了一些显著的成果。现就海洋生物中活性肽类成分的种类、结构、生理活性等方面的研究与开发及其应用前景进行介绍。     

中药全蝎活性成分、药理作用及临床应用研究进展

全蝎为钳蝎科(Scorpion)动物东亚钳蝎Buthus martensii Karsch的干燥体。全蝎中含有蝎毒、三甲胺、甜菜碱、核苷类等活性成分,具有抗哮喘、抗凝、抗血栓、促纤溶、镇痛、抗肿瘤、抗癫痫等药理作用,临床用于治疗支气管哮喘、白血病、扁桃体炎、乳腺炎、慢性肾炎等疾病。该文通过查阅近年来相关文献,对全蝎化学成分、药理作用和临床应用进行整理和归纳,为全蝎的进一步研究提供新的思路。     

重组多功能抗凝多肽的表达及活性测定

目的 探讨多功能抗凝多肽基因的克隆、表达的可行性及其活性的测定。方法 设计一个具有双重抗凝功能的重组多肽分子结构,它由谷胱甘肽-S-转移酶(GST)作为载体蛋白与重组抗凝多肽融合而成。编码重组抗凝多肽的DNA序列是根据氨基酸序列逆向翻译后经人工合成,并插入表达质粒pGEX-5X-3中,与其中的编码GST序列的3‘端融合。采用大肠杆菌DH5α进行原核表达。应用亲和层析的方法得到纯化的融合蛋白。重组抗凝多肽含有31个氨基酸,由3个功能部分组成：(1)Lys-Gly-Asp(KGD)氨基酸序列,可抑制血小板GpⅡb／Ⅲα受体与纤维蛋白原的结合;(2)纤维蛋白单肽A的7-16残基(FBA^7-16),是凝血酶的抑制剂。(3)水蛭素C末端的12肽,可直接抑制凝血酶。结果 纯化的融合蛋白能抑制二磷酸腺苷诱导的血小板聚集(100μmol／L时其活性为对照组的20．7％);随浓度增加而显著延长部分凝血活酶时间(80μmol／L时凝血活酶时间为74．7s)和凝血酶时间(80μmol／L时为102．3s)并抑制凝血酶的蛋白酶分解活性(100μmol／L时活性为对照的11％)。同时,也发现GST也有抗血小板作用,但其作用要明显弱于融合蛋白。结论 通过基因重组的方法设计一具复合抗凝功能的多肽是可行的。     

不同提取方法对水蛭、土鳖虫、蜈蚣抗凝活性的影响

目的观察不同提取方法以及酸、碱、反复冻融对水蛭等3种中药抗凝活性的影响。方法以TT为指标,考察不同提取方法,以及酸、碱和反复冻融法对水蛭、土鳖虫、蜈蚣提取液中抗凝物质的影响。结果冷浸法抗凝活性明显优于煎煮法和冻融法,其抗凝活性不受pH影响,经酸碱处理后TT无明显变化（P〉0．05）,土鳖虫、蜈蚣提取液的凝血酶时间与冻融次数无关（P〉0.05）,水蛭凝血酶时间易受冻融次数影响（P〈0．05）。结论3种提取方法以冷浸法提取最优,酸碱和反复冻融影响其药抗凝活性。     

板蓝根乙酸乙酯部位抗病毒活性组分及相关化学成分研究

目的?研究板蓝根乙酸乙酯部位的抗病毒活性组分及相关成分。方法?利用溶剂法及色谱法提取分离板蓝根乙酸乙酯部位各化学组分,MTT法体外筛选各组分抗单纯疱疹病毒1（HSV-1）活性,利用UPLC-Q-TOF-MS检测乙酸乙酯部位及各组分的化学成分,运用Markview软件及Excel软件进行各组分差异性成分分析,根据统计结果得到抗病毒相关的化学成分。结果?按照化学成分的相似性,利用色谱法将板蓝根乙酸乙酯部位分为16个组分,其中8个组分具有明显抗病毒活性。UPLC-Q-TOF-MS检测到乙酸乙酯部位中的49个化学成分,并明确了它们的化学结构,在各化学组分的分析检测及差异性分析中,发现了生物碱类、有机酸和氨基酸衍生物共12个化学成分与抗病毒活性相关。结论?板蓝根乙酸乙酯部位以生物碱、有机酸、核苷、黄酮、蒽醌及氨基酸类成分为主,其中生物碱、有机酸和氨基酸衍生物与抗病毒活性密切相关。      

蝎毒对家兔凝血功能影响的研究

目的:研究蝎毒对家兔凝血功能的影响,以探讨蝎毒抑制凝血功能的机制。方法:10只家兔分别于给药前1h、给药后1h、给药后2h抽血1.8m l,检测凝血酶原时间、部分凝血酶原时间、纤维蛋白原含量。将给药后1h、给药后2h凝血酶原时间、部分凝血酶原时间、纤维蛋白原含量分别与给药前1h比较。结果:本实验中测定的凝血酶原时间、部分凝血酶原时间,在给药1h明显延长,与给药前相比具有差异显著性。在给药2h凝血酶原时间、部分凝血酶原时间比1h缩短,与给药前相比无差异显著性。结论:蝎毒对家兔凝血功能的影响除通过降低血液粘度外,还可能是蝎毒影响了凝血因子的功能所致。     

肝病时血浆氨基酸谱的改变及其临床意义

应用高效液相色谱法，测定６０例不同肝病患者与１２例正常对照者血浆氨基酸水平。探讨氨基酸谱型对肝病诊治的临床意义。结果发现，急性病毒性肝炎、慢迁肝、慢活肝、失代偿期肝硬化及原发性肝癌时的氨基酸谱不尽相同。分析氨基酸谱型对肝病的鉴别诊断有一定价值。血浆氨基酸与多数常规肝功能试验结果无相关性，仅ＢＣＡＡ／ＡＡＡ比值与血清白蛋白浓度呈正相关，提示氨基酸谱型的异常主要反映了肝细胞代谢状态的改变。血浆氨基酸分析对肝病治疗中正确使用氨基酸溶液有指导意义。     

在线、离线结合快速筛选杨梅叶中黄酮类抗氧化活性成分

目的: 建立一种2,2-联苯基-1-苦基肼基高效液相色谱(2, 2-diphenyl-1-picrylhydrazyl-high performance liquid chromatography, DPPH HPLC)法在线筛选杨梅叶中黄酮类抗氧化活性成分,并对抗氧化活性进行检测和评价。方法: 采用Shimadzu C18柱(150 mm × 4.6 mm, 5 μm)反相HPLC梯度洗脱法分离杨梅叶中黄酮类成分,通过DPPH-HPLC法快速筛选出具有抗氧化活性的化合物,并以2,2-联苯基-1-苦基肼基(DPPH)自由基清除实验、ABTS自由基清除实验及铁离子还原(FRAP)实验,抗氧化能力检测方法评价其抗氧化活性。结果： 在HPLC条件下可以检测出杨梅叶中所含的杨梅苷、杨梅素、槲皮素和山柰酚四种黄酮类化合物并达到完全分离。四种化合物都具有抗氧化活性,其中槲皮素抗氧化能力最强,其次为杨梅素,且两者抗氧化能力都强于L 抗坏血酸,而杨梅苷和山柰酚抗氧化能力较弱。结论： 所建立的DPPH-HPLC法可筛选复杂体系中的抗氧化活性成分。     

促成核泡相糖蛋白的分离、纯化及理化性质研究

目的提纯胆汁泡相糖蛋白并研究其理化性质。方法应用超速离心法结合高效液相层析(HPLC)分离纯化胆汁泡相糖蛋白，体外观察成核活性，并检测泡相糖蛋白的相对分子质量和化学组成。结果胆汁泡相糖蛋白Mr约为33500，具有较强的促成核功能，成核活性达0．31。泡相糖蛋白由多肽和寡糖组成，糖-肽键为N-连接方式，其中多肽Mr约为21000，含153个氨基酸，包括97个极性氨基酸和56个非极性氨基酸。糖链约占总蛋白含量的37．3％，为核心岩藻糖丰富的多天线复杂型聚糖。肽链N-末端氨基酸序列为H2N-天冬-天冬酰胺-丝-谷氨酰胺-组-精-酪-缬-苯丙-异亮氨酸。结论胆汁泡相糖蛋白是一种新的促成核活性因子，在胆固醇性结石的早期发生阶段可能起重要作用。     

Changes in amino acid contents in hepatocellular carcinoma tissues

Contents of 22 amino acids in hepatoma with surrounding and distant liver parenchyma resected from 10 pathologically proven patients were determined using high performance liquid chromatography. Analysis of the results showed that the contents of total amino acids and essential amino acids in hepatoma tissues were much higher than those in the surrounding and distant liver parenchyma. The contents of 11 amino acids, including glutamic acid, asparagine, glutamine, serine, histidine, arginine, tryptophan, methionine, leucine, isoleucine and lysine were higher than those in the surrounding and/or distant liver parenchyma. There was no statistically significant difference of amino acid contents between the surrounding and distant liver parenchyma. Most amino acid contents which increased in hepatoma tissues were positively correlated with tumor volume and/or serum gamma-glutamyl transpeptidase activity. These results suggested that hepatoma tissues can selectively take up the necessary amino acids which fail to be produced by the cancer tissues as raw material for synthesis of protein. The faster the hepatoma grows, the greater the need for amino acidosis. This study may be helpful to the application of imbalanced amino acid for correction of metabolic disturbances in hepatoma patients.     

不同炮制方法对水蛭中氨基酸及抗凝血酶活性的影响

目的 考察不同炮制方法对水蛭的氨基酸含量和抗凝血酶活性的影响.方法 采用柱前衍生化高效液相色谱法测定水蛭不同炮制品的游离氨基酸及水解氨基酸的含量;采用凝血酶滴定法测定其抗凝血酶活性.结果 蚂蟥的游离氨基酸含量为0.64%, 水解氨基酸含量为24.7%, 抗凝血酶活性为14.4 U;柳叶蚂蟥1 批的游离氨基酸含量为0.51%, 水解氨基酸含量为35.7%, 抗凝血酶活性为14.9 U;柳叶蚂蟥2 批及其炮制品的游离氨基酸含量为0.68%～0.78%,水解氨基酸含量为33.6%～39.9%,抗凝血酶活性为9.6～15 U.结论 柳叶蚂蟥的游离氨基酸含量及抗凝血酶活性与蚂蟥差别不大,但水解氨基酸含量高于蚂蟥;柳叶蚂蟥经过炮制后,游离氨基酸及水解氨基酸含量变化不大,而高温炮制（砂炒、蜜炙麦麸炒、滑石粉炒）降低了其抗凝血酶活性.