乙型肝炎病毒X基因在HepG2肝癌细胞的转染及对Fas/FasL表达的影响

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)X基因在HepG2肝癌细胞中的转染及对Fas/FasL表达的影响.方法用分子克隆方法构建HBV X真核表达载体pcDNA3-X,用脂质体转染方法瞬时转染HepG2细胞,以转染空载体pcDNA3的HepG2细胞及未转染质粒的HepG2为对照,抽提RNA,进行RT-PCR,检测HBV X基因的表达.以β-actin为内参,用半定量RT-PCR法检测三组细胞凋亡相关基因Fas/FasL mRNA相对表达量的变化.结果重组真核表达载体经RT-PCR及DNA测序均检测出HBV X特异性片段,pcDNA3-X转染HepG2细胞后,RT-PCR扩增出HBV X片段,空质粒组及正常对照组均未扩增出相应片段.转染HBx的细胞Fas与FasL mRNA相对表达量较转染空质粒组和未转染质粒组明显增高,差别有统计学意义(P＜0.05).结论成功构建HBV X真核表达载体pcDNA3-X,转染入HepG2肝癌细胞,并在该细胞中表达.HBx在肝癌细胞中的表达能上调Fas和FasL基因的表达.     

HBX在肝癌细胞中通过下调miR-199a增强AKT的表达

目的 探讨乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBX)调节miR-199a的表达在HBV相关性肝癌发生中的分子机制.方法 重组HBX腺病毒(Ad-HBX)感染人肝癌HepG2细胞,HBX的siRNA转染稳定表达HBV基因的人肝癌HepG2.2.15细胞,荧光定量PCR方法检测HBV相关性肝癌组织标本和肝癌细胞中HBX、miR-199a、AKT的mRNA表达水平及运用Western blot检测肝癌组织标本和肝癌细胞中HBX、AKT的蛋白表达水平;分别用miR-199a mimics和miR-199a inhibitor的转染肝癌细胞后,荧光定量PCR方法检测肝癌细胞中AKT的mRNA表达水平及运用Westem blot检测肝癌细胞中AKT的蛋白表达水平.结果 miR-199a在HepG2.2.15细胞中表达水平显著低于HepG2细胞,并且证实其表达下调受到了HBX的调控(P＜0.05),HepG2.2.15细胞中AKT表达水平显著高于HepG2细胞(P＜0.05),在HepG2.2.15细胞中过表达miR-199a能明显下调AKT表达水平以及在HepG2细胞中抑制miR-199a能明显上调的AKT表达水平(P＜0.05),此外,miR-199a的表达量在HBV相关性肝癌组织比相应的癌旁组织表达降低.结论 HBX可以通过miR-199a调节AKT导致HBV相关性肝癌发生.     

乙肝病毒X蛋白通过Wnt/β-catenin信号通路调控Gankyrin表达

目的：研究乙肝病毒X蛋白（hepatitis B virus X protein,HBX）对Gankyrin表达水平的影响以及Wnt/β-catenin信号通路在HBX基因调控Gankyrin表达中的作用。方法：HBX腺病毒表达载体（Ad-HBX-GFP）感染转染2种人肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721细胞,Si-HBX分子（Si-HBX oligo）用 LipofectamineTM 2000转染入HepG2.2.15细胞,用RT-PCR和Western blot法检测HBX与Gankyrin的表达情况;β-catenin腺病毒载体转染HepG2、SMMC-7721细胞,用Western blot法检测β-catenin与Gankyrin的表达情况;在沉默β-catenin表达的HepG2、SMMC-7721细胞中过表达HBX基因,Western blot法检测β-catenin与Gankyrin的表达情况。结果：①HepG2.2.15细胞中Gankyrin mRNA与蛋白表达水平均高于HepG2细胞（P＜0.05）。②HepG2与SMMC-7721细胞系中Ad-HBX-GFP组Gankyrin mRNA与蛋白表达水平均高于绿色荧光蛋白腺病毒表达载体（Ad-GFP）组（P＜0.01）。③HepG2.2.15细胞中Si-HBX组Gankyrin mRNA与蛋白表达水平均低于Si-阴性对照（Si-NC）组（P＜0.01）。④在HepG2与SMMC-7721细胞系中过表达HBX后,Ad-HBX-GFP组β-catenin的蛋白表达水平均高于Ad-GFP组（P＜0.01）。⑤在HepG2与SMMC-7721细胞系中过表达β-catenin后,β-catenin腺病毒表达载体（Ad-β-catenin-GFP）组Gankyrin的蛋白表达水平均高于Ad-GFP组（P＜0.01）。⑥在HepG2与SMMC-7721细胞系中沉默β-catenin后,过表达HBX基因,Si-β-catenin腺病毒表达载体（Ad-si-β-catenin-RFP）组与红色荧光蛋白腺病毒表达载体（Ad-RFP）组相比,Gankyrin的蛋白表达水平未见升高（P＜0.01）。结论：HBX-Wnt/β-catenin-Gankyrin信号转导通路存在与肝癌细胞中,抑制β-catenin的功能可阻遏HBX对Gankyrin的上调作用,本结果将可能为肝癌的治疗提供新的思路。     

莱菔硫烷诱导人肝癌HepG2细胞凋亡与Fas/FasL途径的相关性研究

目的 研究莱菔硫烷对人肝癌HepG2细胞Fas、FasL、Bid蛋白表达的影响,探讨其诱导HepG2细胞凋亡过程中Fas/FasL途径的作用。方法 Caspase-8试剂盒检测莱菔硫烷对HepG2细胞Caspase-8活性的影响;流式细胞仪检测莱菔硫烷对HepG2细胞中Fas、FasL、Bid蛋白表达的影响。结果 莱菔硫烷10、20、40 μmol/L作用于HepG2细胞48 h,可显著升高HepG2细胞Caspase-8活性（P＜0.01）;可使HepG2细胞 Fas、FasL蛋白的表达显著升高（P＜0.01）;莱菔硫烷20、40 μmol/L时,可显著提高Bid蛋白的表达（P＜0.01）,上述作用均呈剂量相关性。结论 激活Fas/FasL途径可能是莱菔硫烷诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的重要机制之一。     

凋亡信号调节激酶1通过c-Jun氨基末端激酶通路调控高糖诱导的视网膜神经节细胞损伤

目的 研究细胞凋亡信号调节激酶1(apoptosis signal-regulating kinase1,ASK1)对高糖诱导的视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)损伤的保护作用及其可能的机制.方法 建立大鼠RGC细胞的分离培养和体外高糖(50 mmol/L葡萄糖)损伤模型.转染ASK1 siRNA沉默ASK1的表达.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ASK1 mRNA表达水平;Western blot检测ASK1、JNK蛋白表达量和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)磷酸化水平;MTT和CCK-8方法、Ki67染色分别检测RGC生长活力和增殖情况;Annexin-V FITC/PI方法和TUNEL检测RGC凋亡情况;试剂盒方法检测Caspase-3活性.结果 RGC高糖环境下培养4d,细胞生长活力降低明显(P＜0.05);ASK1表达水平在高糖损伤的RGC中明显上升(P＜0.05);ASK1 siRNA的转染实验结果显示:ASK1的表达水平明显下降(P＜0.05),说明沉默表达实验成功;ASK1表达被抑制后RGC的生长活力(P＜0.05)和增殖能力(P＜0.05)明显上升,RGC的凋亡(P＜O.01)和Caspase-3的活力(P＜0.01)明显降低.沉默ASK1的表达有效地降低JNK蛋白的磷酸化水平.结论 抑制ASK1的表达对RGC的高糖损伤有保护作用,其机制可能与抑制JNK通路有关.     

乙型肝炎病毒X基因对正常肝细胞HL7702凋亡影响的初步探讨

目的 研究乙型肝炎病毒X基因(HBX基因)对HL7702肝细胞凋亡及凋亡相关因子表达的影响.方法 用脂质体转染法将HBx真核表达载体pcDNA3.1( )-X瞬时转入HL7702细胞,以转染空质粒pcDNA3.1( )的细胞及未转染的HL7702细胞为对照.转染后72 h收集细胞标本,作以下处理:RT-PCR法检测HBX mRNA的表达,免疫荧光鉴定HBx蛋白的表达;流式细胞术检测细胞凋亡率;以β-actin为内参,半定量RT-PCR法检测凋亡相关基因Bax、Bcl-2 mRNA的表达量变化.结果 转染72h后,转染pcDNA3.1( )-X真核表达载体的HL7702细胞经RT-PCR扩增出HBX片段,免疫荧光结果 显示细胞内出现HBx蛋白的较强荧光;而转染空质粒组及未转染对照组经RT-PCR法及免疫荧光检测均显示无HBx表达.通过流式细胞术和半定量RT-PCR法检测细胞凋亡情况,结果 显示:转染HBX的细胞凋亡率(3.38%±0.67%)相对于转染空质粒组(1.25%±0.30%)及未转染质粒组(1.40%±0.37%)凋亡率增高, 差异均有显著性意义(P<0.05);转染HBx的细胞Bax mRNA相对表达量较转染空质粒组和未转染质粒组明显增高,差异均有显著性意义(P<0.05),Bcl-2 mRNA相对表达量较转染空质粒组和未转染质粒组明显降低,差异均有显著性意义(P<0.05).转染空质粒组和未转染质粒组之间,对细胞凋亡率、Bax mRNA、Bcl-2 mRNA进行比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论成功将HBX转染入HL7702细胞,并在细胞中表达;转染后72 h HBx可上调Bax表达,而下调Bcl-2表达,表明HBx能促进HL7702细胞凋亡.     

JNK／c-Jun 信号通路参与介导 EB 病毒编码的BARF1基因上调胃癌细胞 Bcl-2的表达

目的:探讨EB病毒编码的BARF1基因对胃癌细胞JNK-MAPK信号通路活性及Bcl-2基因表达的影响。方法:以p SG5空载体转染的胃癌细胞系BGC823(BGC-SG)为对照,采用蛋白质印迹分析稳定表达BARF1的BGC823细胞(BGC-BARF1)中,以及采用JNK-MAPK的特异性抑制剂SP600125处理后JNK和c-Jun蛋白的磷酸化水平以及cJun和Bcl-2蛋白的表达。结果:与BGC-SG相比,BGC-BARF1细胞中JNK和c-Jun蛋白的磷酸化水平,以及c-Jun和Bcl-2蛋白的表达均显著提高(P<0.05)。SP600125处理后,c-Jun蛋白的磷酸化水平以及c-Jun和Bcl-2蛋白的表达均显著下降。结论:JNK/c-Jun信号通路参与介导BARF1上调胃癌细胞中Bcl-2的表达。     

肝癌细胞系Fas/FasL功能与免疫逃逸机制探讨

目的:探讨肝癌细胞通过Fas/FasL途径的免疫逃逸机制。方法:用流式细胞术检测肝癌细胞系HepG2.2.15细胞表面Fas及FasL的表达;用激活性Fas单克隆抗体CH11诱导细胞凋亡法检测肝癌细胞对Fas介导凋亡的抵抗;用HepG2.2.15与Jurkat细胞共培养法检测细胞表面FasL诱导T细胞凋亡的功能。结果:①HepG2.2.15细胞Fas表达低下,CH11不能诱导其凋亡;②FasL的表达率为18.03%,与Jurkat细胞共培养可诱导Jurkat细胞凋亡;③用中和抗体NOK-2封闭HepG2.2.15细胞表面FasL后,Jurkat细胞的凋亡率由21.41%降为8.91%。结论:肝癌细胞能抵抗Fas介导的凋亡,其表面的FasL可抑制T细胞的免疫功能,Fas/FasL途径是肝癌细胞免疫逃逸的重要机制之一,可成为免疫治疗的新靶点。     

乙型肝炎病毒x蛋白与肝癌多药耐药性的初步探讨

目的 :研究乙型肝炎病毒x蛋白 (HBX)对肝癌耐药相关基因MDR1、MRP1的作用及其影响。方法 :利用瞬时转染HBX基因的方法建立细胞模型 ,然后用逆转录一聚合酶链反应 (RT PCR)和蛋白质免疫印迹检测 (Westernblot)技术 ,分别检测转染前后人癌肝细胞株HepG2多药耐药相关基因和蛋白水平的表达情况。再使用流式检测阿毒素诱导后两种细胞的凋亡率。结果 :转染前后相比 ,转染HBX基因的HepG2细胞多药耐药相关基因和蛋白表达水平比转染前均明显上调 (P <0 0 5 ) ;转染后MPR1基因表达量与转染前比为 3 11,MDR1为 4 99。Westernblot显示转染后p 170蛋白水平上升 1 10倍 ,MRP蛋白上升 5 0 8倍。AnnexinV FITC/PI检测提示 ,阿霉素诱导后转染组调亡率明显低于对照组。结论 :乙型肝炎病毒x蛋白可能是造成肝癌多药耐药的原因之一。     

肝癌细胞通过Fas/FasL途径触发T淋巴细胞的凋亡

目的：研究肝癌细胞表面Fas/FasL系统的变化及对其逃避机体免疫监控的影响。方法：采用流式细胞术和RT-PCR检测肝癌细胞株HepG2、Hep3B和PLC/PRF/5Fas和FasL的表达;观察化疗药物争光霉素诱导肝癌细胞FasL表达及FasL表达上调后的肝癌细胞触发淋巴细胞株Jurkat细胞凋亡的作用。结果：HepG2、Hep3B和PLC/PRF/5肝癌细胞株Fas表达均阴性;HepG2 FasL mRNA的表达为阴性,而Hep3B 和PLC/PRF/5FasL mRNA的表达均阳性。经争光霉素（0.6mg/ml）诱导后,上述肝癌细胞Fas的表达无明显变化,而其FasL的表达却增加,与Jurkat细胞混合孵育则触发后发生显性调亡。结论：肝癌细胞可能一方面降低或不表达Fas而对Fas介导的凋亡耐受,另一方面又增强自身FasL的表达以诱发与之接触的T淋巴细胞凋亡,在完成免疫逃避的同时,可对周围的T细胞实施反攻击。     

下调FoxM1通过激活JNK/线粒体通路增加人鼻咽癌细胞对紫杉醇的敏感性

目的 探讨特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA) 沉默转录因子叉头框M1(FoxM1) 对人鼻咽癌HONE-1细胞增殖、凋亡、紫杉醇敏感性的影响及可能的分子机制.方法 采用siRNA靶向沉默鼻咽癌HONE-1细胞FoxM1表达并通过RT-PCR、实时定量PCR、Western blot检测转染后FoxM1的表达水平.siRNA转染后细胞的增殖和对紫杉醇的敏感性采用MTT法检测,流式细胞仪检测细胞周期分布,Annexin V-FITC /PI双染法检测细胞凋亡率.Western blot检测Ki67、CyclinE1、多药耐药基因1(multidrug resistance 1,MDR1) 及c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK) 、p-JNK、 c-Jun、p-c-Jun、凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达水平.结果 转染后FoxM1 mRNA及蛋白的表达均被下调(P＜0. 01) .siRNA转染组细胞增殖速率减缓(P＜0. 05),Ki67表达降低(P＜0. 05) .siRNA转染组G1期细胞比例增加(P＜0. 01),S期比例减低(P＜0. 05),Cyclin E1低表达(P＜0. 01) .同时, siRNA +紫杉醇组凋亡率明显高于阴性及空白对照+ 紫杉醇组(P＜0. 01) .siRNA转染组细胞MDR1水平下降(P＜0. 05),对紫杉醇的敏感性较两对照组明显增强(P＜0. 01) .siRNA + 紫杉醇组与阴性对照+ 紫杉醇组相比p-JNK1、p-c-Jun、Bax表达上调(P＜0. 01),Bcl-2表达下调(P＜0. 01) .结论 特异性siRNA沉默FoxM1表达可以影响JNK/线粒体通路活性,抑制鼻咽癌HONE-1细胞增殖,促进其凋亡,提高其对紫杉醇的敏感性.     

凋亡相关基因Bcl-2/Bax和Fas/Fas L在应激性溃疡发生发展过程中的表达及作用

目的　探讨应激性溃疡发生发展过程中 ,凋亡相关基因Bcl 2 /Bax、Fas/FasL表达的变化及其与细胞凋亡发生的关系。方法　SD大鼠按水浸 束缚应激 (WRS)实验 2h、3.5h及WRS结束后2、5、8、12、2 4h分 7组 ,每组 8只鼠 ,对照组 8只鼠。原位末端标记 (TUNEL)法检测WRS结束前后不同时间点细胞凋亡的发生情况 ;用原位杂交方法检测WRS结束前后大鼠胃粘膜组织Fas、FasL、Bcl 2mRNA的表达 ,免疫组化法检测Bcl 2 /Bax蛋白质的表达。结果　 ( 1)正常大鼠胃粘膜上皮散在TUNEL细胞 ,WRS 2h～WRS后 5hTUNEL细胞较对照组明显增多 (P <0 0 1)并逐渐达高峰 ;WRS后 8～ 12hTUNEL 细胞逐渐减少 ,至WRS后 2 4h仍高于正常水平 (P <0 0 5 )。 ( 2 )正常对照组Fas、FasLmRNA无明显表达 ,FasLmRNA在WRS 3 5h至WRS后 8h在粘膜层基底部出现弱阳性～中等阳性表达。FasmRNA在WRS后 5～ 8h在粘膜层基底部出现弱阳性表达 ,WRS后 8h后表达基本消失。 ( 3)正常胃粘膜组织Bcl 2mRNA及蛋白质在胃腺部呈中等阳性表达 ,Bax蛋白质在上皮细胞层呈弱阳性表达 ;WRS 2h～WRS后 5hBcl 2表达明显减弱 (P <0 0 1) ,Bax表达增加并达高峰 (P <0 0 1) ;WRS后8～ 12hBcl 2表达增加 (P <0 0 1) ,Bax表达逐渐减弱 ,WRS后 2 4hBcl 2表达基本恢复至正常水     

血管内皮生长因子165b对人肝癌HepG2细胞生物学特性的影响

目的：探讨血管内皮生长因子165b（VEGF165b）对人肝癌HepG₂细胞生物学特性的影响,并初步研究其作用机制。方法：HepG₂细胞分为空白组（仅加转染试剂）、对照组（转染阴性对照PcDNA3.0表达载体）和PcDNA-VEGF165b组（转染VEGF165b表达载体PcDNA-VEGF165b）。MTT法检测各组HepG₂细胞生存率,RT-PCR法和Western blotting法检测HepG₂细胞中VEGF165b和VEGF165 mRNA和蛋白表达水平,Transwell小室法检测HepG₂细胞迁移能力。结果：与空白组比较,对照组HepG₂细胞中VEGF165b和VEGF165 mRNA和蛋白表达水平无明显变化（P>0.05）。与空白组比较,PcDNA-VEGF165b组细胞中VEGF165b mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,VEGF165 mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。空白组和对照组细胞生存率比较差异无统计学意义（P>0.05）;与空白组和对照组比较,PcDNA-VEGF165b组细胞生存率有所降低,但差异无统计学意义（P>0.05）。细胞迁移实验,空白组和对照组细胞迁移率比较差异无统计学意义（P<0.05）;与空白组和对照组比较,PcDNA-VEGF165b组HepG₂细胞迁移率明显降低（P<0.05）。结论：VEGF 165b能抑制VEGF165基因和蛋白的表达,VEGF165b对肝癌细胞增殖无明显影响,但可降低肝癌细胞的迁移能力。     

乙肝病毒X蛋白对油酸钠诱导HepG2细胞脂质沉积的影响

目的探讨乙肝病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)是否增加油酸钠诱导HepG2细胞的脂质沉积。方法将质粒pIRES2-eGFP-HBx瞬时转染入HepG2细胞中,建立表达HBx的细胞模型(HepG2-HBx);以转染空载体pIRES2-eGFP(HepG2-pIRES2)和HepG2细胞(HepG2)作对照。观察转染后绿色荧光蛋白(GFP)的表达;转染后16 h开始用油酸钠处理各组细胞24、48 h(分别命名为HBx/OA组、空/OA组、G2/OA组),细胞内甘油三酯(TG)含量测定及油红O染色了解细胞内脂质沉积情况;在油酸钠处理细胞24 h,RT-PCR法检测SREBP-1和LXRα的mRNA表达水平,Westernblot检测HBx、LXRα及FAS蛋白表达水平。结果转染后16 h HepG2-HBx细胞和HepG2-pIRES2细胞中开始有GFP的表达,提示转染成功;仅在HepG2-HBx细胞内有HBx表达,表明HepG2-HBx细胞模型构建成功。在相同油酸钠处理的条件下,HBx/OA组细胞内脂质含量和TG含量与对照组相比均明显增加(P<0.01)。在油酸钠处理细胞24 h,HBx/OA组细胞内LXRα、SREBP-1的mRNA表达量和LXRα、FAS蛋白表达量较对照组均明显增加(P<0.01/0.05)。结论 HBx通过上调HBx-LXRα-SREBP1/FAS通路脂质合成相关基因表达,可能增加HepG2-HBx细胞对外界脂代谢紊乱因素的易感性,从而增加油酸钠诱导HepG2细胞脂质沉积。     

乙肝病毒X基因阻断降低肝癌细胞HepG2.215与纤维连接蛋白的黏附

目的探讨乙肝病毒X基因（HBX）在肝细胞癌（HCC）侵袭转移中的作用。方法利用psiRNA-hH1neo质粒,构建针对HBX的shRNA表达载体psiRNA1、psiRNA2、psiRNA3,转染肝癌细胞株HepG2.215,用荧光定量PCR仪检测siRNA对HBX mRNA表达的抑制作用,用Western blot法检测siRNA对HBX蛋白表达的抑制作用。以Transwell小室测定HepG2.215细胞与纤维连接蛋白（Fn）的体外黏附能力。结果成功构建shRNA表达载体,shRNA表达载体均可不同程度地抑制HBX的表达,其中psiRNA1对HBX的抑制作用最强,对HBX mRNA抑制率达80.27%,对HBX蛋白的抑制率为65.59%;细胞体外黏附能力受到明显抑制,在培养至48、72h后,对照组和转染组跨膜细胞数分别为442.6±57.1vs376.4±55.2和588.2±70.1vs513.6±68.5,两时相点均有明显差异（P〈0.05）。结论阻断HBX的表达可明显抑制肝癌细胞HepG2.215的体外侵袭性生长。     

As2O3联合γ分泌酶抑制剂MW167对人肝癌HepG2/ADM细胞耐药性的影响

目的：探讨三氧化二砷（As₂O₃）和γ分泌酶抑制剂MW167单独及联合作用对HepG₂/ADM细胞耐药性的影响,并阐明其作用机制。方法：MTT法检测不同浓度As₂O₃（0.25、0.50、1.00、2.00、4.00和8.00 mg·L^-1）和MW167（10、20和40 μmol·L^-1）处理HepG₂/ADM细胞24、48和72 h后细胞的吸光度（A）值,计算细胞增殖抑制率,确定药物作用浓度和时间;将HepG₂/ADM细胞分为空白组、As₂O₃组、MW167组、As₂O₃和MW167联合组;根据MTT结果选取无细胞毒剂量的As₂O₃、MW167干预各组细胞48 h后,FCM法检测细胞凋亡率;RT-PCR和Western blotting法分别检测各组细胞中Notch-1、Hes-1、MDR-1（P-gp）、Bcl-2和Bax mRNA及蛋白表达水平。结果：在同一浓度时,As₂O₃和MW167对HepG₂/ADM细胞的增殖抑制率随着作用时间的延长而升高（P<0.05或P<0.01）;在同一时间点,As₂O₃和MW167对HepG₂/ADM细胞的增殖抑制率随药物浓度的增加而升高（P<0.05）;确定As₂O₃和MW167的无毒剂量分别为0.25 mg·L^-1和10 μmol·L^-1,干预时间为48 h。药物干预48 h后,与空白组比较,各干预组细胞凋亡率均升高（P<0.05）,其中以联合组升高最为明显（P<0.01）。与空白组比较,各干预组细胞中Notch-1、Hes-1、MDR-1（P-gp）和Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,其中以联合组降低最为明显（P<0.01）;与空白组比较,各干预组Bax mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,其中以联合组升高最为明显（P<0.01）。结论：As₂O₃可逆转HepG₂/ADM细胞的耐药性,其作用机制可能与抑制细胞增殖、促进细胞凋亡、下调细胞中Notch-1、Hes-1、MDR-1（P-gp）和Bcl-2基因及蛋白表达水平及上调Bax基因和蛋白表达水平有关。     

缺氧预处理对 L02肝细胞Bcl-2、Bax、Fas及FasL表达的影响

目的:研究缺氧预处理对正常肝细胞株L02缺血再灌注损伤的抗凋亡机制.方法:将体外培养的L02细胞分为3组:正常对照组(A组)、缺氧复氧损伤组(B组)、缺氧预处理组(C组).各组细胞缺氧复氧处理1、6、1 2、18、24 h后,使用流式细胞术检测细胞凋亡率,各组细胞分别缺氧复氧、缺氧预处理后12 h检测细胞Bcl 2、Bax、Fas及FasL蛋白表达,同时对细胞结构进行电镜观察.结果:C组和B组比较,细胞凋亡率明显降低(P＜0.05),细胞Bcl-2蛋白表达明显升高(P＜0.05),Bax、Fas及FasL蛋白表达量显著降低(P＜0.05),透射电镜观察到缺氧预处理组细胞结构基本正常.结论:缺氧预处理明显减轻了缺氧复氧所导致的L02肝细胞损伤,降低了细胞凋亡率,缺氧预处理保护机制和Bcl-2、Bax、Fas及FasL蛋白表达有关.     

奥曲肽诱导肝癌细胞凋亡和Fas/FasL的表达

目的 探讨奥曲肽对人肝癌细胞抑制作用的机制,为奥曲肽临床应用提供实验依据.方法 用奥曲肽4、7、10 μ g/ml作用人肝癌细胞株(SMMC-7721)24、48、72 h,以空白作为对照组;采用原位末端标记(TUNEL)法流式细胞仪检测SMMC-7721凋亡;直接标记单克隆(CD95/CDl78)抗体法流式细胞仪检测SMMC-7721 Fas/FasL表达的变化.结果 奥曲肽在4、7、10 μg/ml d作用 SMMC-7721 24 h后,SMMC-7721凋亡率从8%升高为40%(P＜0.05),Fas表达率从57%升高为76%(P＜0.05),FasL表达率从54%升高为63%(P＜0.05).结论 奥曲肽能诱导肝癌细胞(Hep SMMC-7721)凋亡的发生,而且能促进肝癌细胞Fas/Fasl基因的表达.     

脑缺血再灌注损伤中FKBP51对JNK通路的影响

目的 探讨脑缺血再灌注损伤中FK506结合蛋白51（FKBP51）对c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路的影响.方法 采用四血管阻塞制作大鼠全脑缺血模型.将体质量220 ～ 250 g健康雄性清洁级SD大鼠按随机数字表法进行分组：假手术组、缺血再灌注组、FKBP51反义寡核苷酸组、FKBP51错义寡核苷酸组、溶剂对照组.假手术组仅电凝双侧椎动脉,不夹闭双侧颈总动脉;缺血再灌注组电凝双侧椎动脉,夹闭双侧颈总动脉;FKBP51反义寡核苷酸组在电凝双侧椎动脉时侧脑室注射反义寡核苷酸进行干预,连续注射3d,第4天夹闭双侧颈总动脉;FKBP51错义寡核苷酸组和溶剂对照组侧脑室分别注射等体积错义寡核苷酸和TE buffer.除假手术组外,其余各组均缺血15 min后复灌不同时间点,然后分别断头取海马用于免疫印迹和免疫沉淀,检测各组中FKBP51蛋白表达;检测FKBP51反义寡核苷酸对FKBP51蛋白表达和JNK、c-Jun磷酸化的影响.结果 （1）FKBP51反义寡核苷酸组的FKBP51蛋白表达量明显减少,与假手术组差异有统计学意义（P＜0.05）.（2）各组之间JNK总蛋白的表达差异均无统计学意义（P＞0.05）.假手术组p-JNK的表达量明显少于其他组,差异有统计学意义（P＜0.05）;缺血再灌注3h组、溶剂对照组、FKBP51错义寡核苷酸组p-JNK的表达较高,三组之间的差异无统计学意义（P＞0.05）;与FKBP51错义寡核苷酸组比较,FKBP51反义寡核苷酸组p-JNK的表达量较少,差异具有统计学意义（P＜0.05）.（3）各组之间c-Jun总蛋白的表达差异均无统计学意义（P＞0.05）.假手术组p-c-Jun的表达量明显少于其他各组,差异有统计学意义（P＜0.05）;缺血再灌注6h组、溶剂对照组、FKBP51错义寡核苷酸组p-c-Jun的表达量较高,三组之间的差异无统计学意义（P＞0.05）;与FKBP51错义寡核苷酸组比较,FKBP51反义寡核苷酸组p-c-Jun的表达量较少,差异具有统计学意义（P?     

The expression of Fas, FasL and their biological behavior in human cervical carcinoma

Objective： To investigate the relationship between the expression of Fas and Fas ligand （FasL） and its biological behavior in human cervix carcinoma. Methods： Immunohistochemisty technique was used to detect the expression of Fas and FasL in 47 cases of cervical carcinoma, 16 cases of cervical interaepithelial neoplasia, 10 cases of chronic cervicitis and 10 cases of normal cervix. TUNEL technique was used to observe the apoptic cells in 47 cases of cervical carcinoma. Retrospective study was carried out to find the relationship between the expression of Fas and FasL and cell apoptosis, clinical stage, pathological classification, lymph node metastasis, prognosis and age. Results： The expression of Fas and FasL was significantly different in different cervix （P 〈 0.01）, and also related to the degree of differentiation, lymph node metastasis and prognosis （P 〈 0.05）. But had no relation with clinical stage or age （P 〉 0.05） ; Cervix carcinoma cells apoptosis in different pathological classification appeared negative relation （Rs=-0.35, P 〈 0.05 ）. Cervix carcinoma cell apoptosis was significantly higher in Fas-positive and FasL- positive than that in Fas-negative and FasL-negative （P 〈 0.05）. By retrospective investigation, Fas-negative and FasL-positive were related to poor prognoses of the patients with cervical carcinoma （P 〈 0.05 ）. Conclusion： The development of apoptosis in cervix carcinoma has a promoting regulation function in Fas and FasL expression. Gene treatment can alter apoptosis abnormality, thus induce apoptosis in cancerous cell expressing Fas and FasL. Fas or FasL may be taken as a marker in the prognostic character- ization.