原发性肝细胞癌中p33ING1b与p53基因间协同功能的研究

目的　探讨 p33ING1b与 p5 3基因间的协同功能对肝癌细胞生长、阻滞细胞周期、诱导肿瘤细胞凋亡及对 p5 3下游基因p2 1WAF1/CIP1表达的影响。方法　采用脂质体方法将 p33ING1b与wtp5 3基因分别转染入HepG2、PLC/PRF/ 5和Hep3B 3株内源性p5 3基因表达状态各不相同的肝癌细胞株 ,同时设转染反义 p33ING1b及反义wtp5 3质粒实验组和转染空载体对照组 ,转染 4 8h后检测各实验组细胞凋亡率及分析细胞周期变化 ,用Western印迹杂交分析各实验组肝癌细胞中 p33ING1b与 p5 3蛋白表达的变化 ,通过分析受 p2 1WAF1/CIP1启动子调控的荧光素酶报道基因表达的强弱 ,观察各实验组中p5 3下游基因 p2 1WAF1/CIP1的活性情况。采用 6 %乙醇为诱导剂作用于各实验组后 ,再次观察上述各指标的变化。结果　在表达内源性wtp5 3基因的HepG2细胞中 ,转染入 p33ING1b基因后 ,与对照组相比 ,细胞凋亡率增强 (2 2 5 3% ) ,细胞周期中停滞于G0 /G1期细胞的比例增多 (6 7 4 5 % ) ,下游基因p2 1WAF1/CIP1启动子的活性 (13 0 8)增强 (P <0 0 1)。对于表达突变型p5 3蛋白的PLC/PRF/ 5细胞 ,联合共转染 p33ING1b与wtp5 3实验组的G0 /G1期细胞比例 (78 16 % )及 p2 1WAF1/CIP1启动子活性(12 99)比单转染 p33ING1b或wtp5 3基因实验组高 (P     

重组腺病毒突变型人低氧诱导因子1α对细胞凋亡调节机制的研究

目的 研究重组腺病毒突变型人低氧诱导因子1α(Ad-HIF-1α-Ala564-Ala803)对细胞凋亡的调节机制.方法 将重组腺病毒Ad-HIF-1α-Ala564-Ala803和对照病毒Ad-lacZ感染常氧下LoVo细胞.荧光定量PCR检测不同时间点HIF-1α,p21WAF1/CIP1的mRNA表达水平,Westernblot检测HIF-1α,p21WAF1/CIP1的蛋白表达水平,及Hoechst染色检测loVo细胞的凋亡率.结果 Ad-HIF-1α-Ala564-Ala803感染LoVo细胞后随着HIF-1αmRNA和蛋白表达水平的增高.p21WAF1/CIP1的mRNA和蛋白表达水平也相应增高,Hoechst染色示Ad-HIF-1α-Ala564-Ala803组细胞的凋亡率(16.2%)gq显高于对照组(5.5%)(P=0.00).结论 HIF-1α可通过上调p21WAF1/CIP1的表达,诱导细胞周期停滞,促进细胞凋亡.     

X-rays induce dose-dependent and cell cycle-independent accumulation of p21(sdi1/WAF1)

Cell cycle arrest at the G1 checkpoint is governed by a function of wild-type p53. We assessed the behavior of the sdi1 gene, which codes for a 21kDa potent inhibitor of cdk/cyclins, after X-irradiation. X-irradiation induced sdi1 mRNA accumulation and G1 arrest only in cells possessing wild-type p53. Elevation of p21(sdi1/WAF1) was preceded by p53 accumulation, which occurred despite p53 mRNA constancy in normal cells growing in the log phase. The quantity of accumulated p53 and p21(sdi1/WAF1) was radiation dose dependent. A decrease in the S phase cell population in normal cells observed after irradiation reached a minimum at less-than-maximum levels of p53 and p21(sdi1/WAF1). Furthermore, an accumulation of p53 and p21(sdi1/WAF1) was also observed when cells were synchronized in the G0, G1 and S phase and X-irradiated. These results indicated that an X-ray induced p53 and p21(sdi1/WAF1) accumulation mechanism exists throughout the cell cycle, and that the signal strength induced by X-irradiation is dose-dependent.     

Growth inhibition of gastric cancer cells by all-trans retinoic acid through arresting cell cycle progression

目的　探讨ATRA调节胃癌细胞生长的作用机理。方法　Westernblot测定蛋白表达水平 ,免疫沉淀测定蛋白激酶活性 ,MTT方法检测细胞生长和流式细胞术分析细胞周期。结果　ATRA有效地诱导细胞滞留G0 /G1期并抑制胃癌细胞生长。ATRA通过依赖P5 3和非依赖P5 3途径诱导ATRA敏感细胞的P2 1WAF1/CIP1表达 ,由此导致CDK4 和CDK2 活性下降 ,但对CDK4 和CDK2 蛋白表达没有影响。另外 ,由于ATRA抑制CDK4 和CDK2 活性 ,导致Rb蛋白去磷酸化水平上升。结论　ATRA通过调节细胞周期进程的相关蛋白而抑制胃癌细胞生长。     

转染p21^WAF1／CIP1对肾癌细胞系GRC—1促凋亡作用

研究转染ｐｗｑ＾２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１对肾癌失足 凋亡作用。方法：采用脂质体介导的逆录病毒载体将ｐ２１＾ＷＡＦ１／ＣＩＰ１转入无Ｐ２１蛋白表达的肾癌细胞ＧＲＣ－１中,通过是,流式细胞仪,ＤＮＡ梯电泳检测细胞凋亡。结果：电镜检测到凋亡细胞,ＤＮＡ电泳呈梯状。所检测细胞中１５．３％出现凋亡。结论：ｐ２１＾ＷＡＦ１／ＣＩＰ１过表达有促进ＧＲＣ－１细胞凋亡作用。     

外源性p21WAF1/CIP1基因转染对人胶质瘤细胞生长和细胞周期的影响

目的：探讨外源性p21^WAF1／CIP1基因对胶质瘤细胞生长和细胞周期的影响．方法：采用脂质体介导法将p21^WAF1／CIP1基因质粒转导人人胶质瘤细胞系SHG44细胞，然后用电镜、流式细胞仪等技术对细胞形态、生长及细胞周期进行观察。结果：酶切电泳和斑点杂交显示p21^WAF1／CIP1基因成功的转染至SHG44细胞。转染p21^WAF1／CIP1基因的细胞光镜及电镜下可见凋亡产生；生长速度明显慢于亲代细胞，其倍增时间约是对照细胞的二倍；细胞周期发生明显改变，G1期明显增多，S期明显减少．结论：外源性p21^WAF1／CIP1基因对SHG44细胞的生长和细胞周期有明显的抑制作用，并可诱导细胞凋亡产生。     

MDM2、p53和p21WAF1/CIP1蛋白在胃癌中的表达及意义

目的：探讨MDM2在胃癌中的表达情况以及MDM2、p53和p21^WAF1/CIP1在胃癌发生发展中的作用。方法：应用免疫组化SABC法检测94例胃癌MDM2、p53和p21^WAF1/CIP1蛋白的表达情况，并对三者之间的关系及其与胃癌临床病理特征的关系进行统计分析。结果：94例胃癌中未发现有MDM2的表达。p53及p21^WAF1/CIP1的阳性表达率分别为56.38%（53／94）和41.49%（39／94），阳性表达位于癌细胞核。在癌旁不典型增生灶中，p53有3例，p21^WAF1/CIP1有5例阳生，癌旁正常黏膜均为阴性。p53和p21^WAF1/CIP1两者的阳性表达率之间无显著相关性。在性别、年龄、部位、浸润深度、局产淋巴结转移及组织学类型等临床病理指标中，p53或p21^WAF1/CIP1的阳性表达率的差异均无统计学意义。结论：MDM2在胃癌的发展中不起重要作用，而在胃癌发展中起主要作用的是抑癌基因p53的突变。p21^WAF1/CIP、在胃癌中可能是以不依赖p53的途径增高，说明癌细胞增生已不受G1期检查点的控制。     

p21WAF1/CIP1、细胞周期素D1、p53在结肠癌的表达

目的探讨p21WAF1/CIP1、细胞周期素D1(cyclin D1)及p53在结肠癌的表达及三个基因产物间的相关性.方法应用原位杂交技术及免疫组织化学技术检测p21WAF1/CIP1、cyclin D1的mRNA及p53蛋白在结肠癌中的表达.结果 p21WAF1/CIP1 mRNA在癌组织的表达率为84.13%,明显高于癌旁组织61.90%(P<0.05).cyclin D1 mRNA在癌组织表达率为63.49%,明显高于癌旁组织44.44%(P<0.05).p53蛋白在结肠癌的阳性表达率为38.09%,p53过表达组p21WAF1/CIP1 mRNA表达较p53阴性组为低,二者存在显著差异(P<0.05),p53过表达组cyclin D1 mRNA表达较p53阴性组为高,差异具有显著性(P<0.05).p21WAF1/CIP1 mRNA与cyclin D1 mRNA表达存在相关性(P<0.05).结论 p21WAF1/CIP1、cyclin D1、p53的异常表达及它们之间可能存在的相互作用,可能在结肠癌的癌变过程中发挥重要作用.     

尼美舒利与阿霉素联合应用对骨肉瘤MG-63细胞增殖、凋亡及衰老的影响

目的:研究尼美舒利与阿霉素联合应用对骨肉瘤MG-63细胞的作用及机理。方法:MTT法检测细胞的增殖,衰老相关性β-半乳糖苷酶(SAβ-Gal)染色检测细胞衰老,流式细胞仪测定细胞周期和凋亡,透射电镜显示MG-63细胞的形态变化。结果:当阿霉素浓度固定在0.75 mg/L时,与低浓度尼美舒利(25-200 μmol/L)...     

反义p21WAF1/CIP1基因转染对肾癌细胞凋亡抑制作用的影响

目的 探讨p21^WAF1/CIP1基因在顺铂诱导的GRC-1肾癌细胞凋亡过程中的作用。方法 使用脂质体转染方法将正义p21^WAF1/CIP1基因及反义p21^WAF1/CIP1基因基因分别导入GRC-1肾癌细胞系中，对所获转染细胞进行形态学观察和流式细胞仪检测。结果 在正义p21^WAF1/CIP1基因基因转染后GRC-1肾癌细胞中，顺铂诱导细胞凋亡的作用增强；在反义p21^WAF1/CIP1基因基因转染后GRC-1肾癌细胞中，顺铂诱导细胞凋亡的作用受到抑制。结论 在GRC-1肾癌细胞中，顺铂诱导的细胞凋亡至少部分是通过p21^WAF1/CIP1基因基因发挥作用。p21^WAF1/CIP1基因基因作为一个与细胞凋亡的相关基因可能参与肾癌细胞凋亡的调控。     

藤龙补中汤促结肠癌LS-174-T细胞衰老及其机制

目的：细胞衰老是重要的细胞内在抗癌机制,与肿瘤治疗效应机制密切相关。本研究观察中药复方藤龙补中汤对人结肠癌LS-174-T细胞衰老及相关信号转导的影响。方法：藤龙补中汤处理结肠癌细胞LS-174-T,显微镜观察细胞形态,衰老相关β-半乳糖苷酶（senescence-associatedβ-galactosidase,SA-β-gal）染色检测SA-β-gal活性,流式细胞术检测细胞周期,Western blot法检测p21WAF1/CIP1、p53、p16基因的表达以及RB磷酸化水平。结果：藤龙补中汤作用后,LS-174-T细胞呈现典型大而扁平的衰老形态,SA-β-Gal染色阳性,细胞周期阻滞于G0/G1期。Western blot显示藤龙补中汤可促进LS-174-T细胞p21WAF1/CIP1、p16等基因的表达,对p53、RB等基因的表达无明显影响,可抑制RB磷酸化。结论：藤龙补中汤可促进LS-174-T细胞衰老,并可能与促进p21WAF1/CIP1、p16等基因的表达,以及抑制RB磷酸化相关。     

重组核心蛋白聚糖转染对HepG2细胞p21WAF1/CIP1表达的影响

目的：将已构建完成的分泌型核心蛋白聚糖真核表达载体转染到HepG2细胞中并检测核心蛋白聚糖及p21^WAF1/CIP1的表达,探讨核心蛋白聚糖抗肿瘤作用的机制。方法：HepG2细胞分为转染pcDNA3.1-DCN载体的转染组和转染pcDNA3.1空载体的对照组,脂质体介导核心蛋白聚糖真核表达载体及质粒pcDNA3.1载体分别转染到HepG2细胞中,经G418筛选建立稳定转染的细胞株,采用RT-PCR法检测核心蛋白聚糖和p21^WAF1/CIP1 mRNA表达;Western blotting法检测核心蛋白聚糖和p21^WAF1/CIP1蛋白质的表达;免疫组化法检测核心蛋白聚糖蛋白质的表达。结果：RT-PCR检测转染组细胞核心蛋白聚糖及p21^WAF1/CIP1 mRNA表达的灰度比值均高于对照组 (P<0.05),Western blotting检测核心蛋白聚糖及p21^WAF1/CIP1 蛋白质表达的灰度比值也高于对照组 (P<0.05),免疫组化检测转染组细胞核心蛋白聚糖蛋白质表达的阳性细胞计数高于对照组 (P<0.05)。结论：成功建立了稳定转染核心蛋白聚糖的HepG2细胞株,并证实核心蛋白聚糖能够提高p21^WAF1/CIP1mRNA和蛋白质的表达。     

重组腺病毒介导P21WAF1/CIP1诱导人脑胶质瘤细胞凋亡的体外实验研究

目的：研究基因转移P21^WAF1/CIP1过量表达对人脑胶质瘤细胞凋亡的影响。方法：构建缺陷型重组腺病毒载体：在CMV启动子控制下的p21 cDNA(Ad-P21)，其编码人P21蛋白。通过流式细胞仪，RT－PCR进行P21表达检测；应用TUNEL法，荧光显微镜和流式细胞仪进行相关凋亡检测，分析。结果：RT－PCR检测5株亲本胶质瘤细胞表达p21 cDNA，而流式细胞仪未检测到P21表达；Ad-P21转染的胶质瘤细胞株均过量表达P21；在体外通过细胞形态学，分子生物学检测均证实Ad-P21能诱导胶质瘤2细胞向终末分化并诱导细胞凋亡。结论：基因转移P21^WAF1/CIP1为研究基因治疗恶性脑胶质瘤提供了有效的手段。     

金樱子对阿霉素诱导心肌细胞凋亡的保护作用

目的探讨金樱子对大鼠阿霉素诱导心肌细胞凋亡的保护作用。方法SD大鼠随机分为空白对照组、阿霉素组模型组和金樱子干预组。模型组采用阿霉素（15mg／kg）分6次隔日腹腔注射,金樱子组按1～5g／kg体重给予金樱子灌胃,空白对照组仅给予等体积生理盐水。采用缺口末端标记法检N,b肌凋亡细胞,比色法检测Caspase-3的活性改变,荧光探针法检测活性氧（Reactiveoxygenspecies,ROS）的产生。Westernblot检测bcl-2和bax蛋白的表达。结果与模型组相比,金樱子能有效降低心肌细胞凋亡和Caspase-3的活性,并能降低细胞内ROS的产生。bcl-2和bax在正常心肌细胞中均有表达,阿霉素模型组bcl-2表达显著降低,bax表达上调,bcl-2／bax比率下降;金樱子可明显增加bcl-2／bax比率。结论金樱子能在一定程度上抑制阿霉素诱导的心肌细胞凋亡,其机制可能与抑制ROS产生,降低Caspase-3活性,上调bcl-2／bax比率有关。     

宫颈癌中p53、p21WAF1/CIP1、MDM2的表达及其与HPV16感染的关系

目的：探讨子宫颈鳞状细胞癌中p53、p21^WAF1／CIP1、MDM2的表达及其与HPV16感染的关系。方法：采用免疫组化Envision二步法检测p53、p21^WAF1／CIP1及MDM2在43例子宫颈鳞状细胞癌、20例子宫颈上皮内瘤变（CIN）和15例正常对照组中的表达，高危HPV16DNA的检测应用原位杂交法。结果：HPV16、p53、p21^WAF1／CIP1和MDM2在子宫颈癌中的阳性表达率分别为46．51％、34．88％、30．23％、25．58％；在CIN中的阳性表达率分别为45％、5％、60％、15％；HPV16在对照组中的阳性表达率为6．67％，p53、p21^WAF1／CIP1和MDM2未见阳性表达。HPV16、p53、p21^WAF1／CIP1在3种不同组织中表达差异有统计学意义（P〈0．05），MDM2在3种不同组织中表达差异无统计学意义（P〉0．05）。p53、p21^WAF1／CIP1和MDM2在子宫颈癌HPV阳性组和阴性组间表达差异无统计学意义（P〉0．05），p21^WAF1／CIP1蛋白表达与p53有关（P〈0．05），MDM2蛋白表达与p53无关（P〉0．05）。结论：在HPV16感染的子宫颈癌中，p53的转录功能仍然存在。     

没药倍半萜抑制前列腺癌细胞的增殖活性初探

目的初步探讨没药两个倍半萜单体化合物抑制前列腺癌细胞增殖的作用。方法应用倍半萜单体化合物处理人前列腺癌细胞株LNCaP后,MTT检测化合物对细胞增殖的影响;流式细胞术进一步分析细胞周期时相的变化;反转录PCR（RT-PCR）检测细胞周期相关蛋白p21^WAF/CIP1(p21)和cyclinD的表达水平。结果两个没药倍半萜单体化合物对前列腺癌细胞均有显著的抑制活性（P＜0.001）,使细胞停滞于G₀/G₁期;并且能在mRNA水平诱导p21的表达,同时降低cyclinD的表达。结论没药倍半萜化合物抑制前列腺癌细胞增殖,可能是通过上调p21的表达、下调cyclinD蛋白的表达来实现的。     

曲古菌素A调节NB4细胞组蛋白乙酰化和p21WAF1/CIP1表达

目的研究去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(trichostatinA，TSA)对人急性早幼粒细胞白血病细胞NB4组蛋白H3乙酰化水平的调节作用及对细胞周期素依赖性激酶抑制剂p21^WAF1/CIP1。表达的影响。方法应用300、150、75、37．5、18．75nmol／L浓度的TSA分别作用NB4细胞4、8、12、24、48h，提取细胞的总mRNA和总蛋白，采用RT-PCR技术检测p21^WAF1/CIP1表达情况，并用免疫印迹技术(Western blot)观察组蛋白H3的乙酰化水平变化及p21^WAF1/CIP1蛋白的表达水平。结果TSA对组蛋白H3乙酰化作用随时间改变而变化；在低浓度时就可引起组蛋白H3的乙酰化。TSA对p21^WAF1/CIP1 p21^WAF1/CIP1蛋白表达的影响呈时间和剂量依赖性。结论TSA能够明显上调NB4细胞组蛋白H3的乙酰化水平，促进细胞周期依赖性激酶抑制剂p21^WAF1/CIP1的表达。     

网脊衣酸上调p21CIP1蛋白诱导前列腺癌细胞周期阻滞的作用分析

目的 探讨天然化合物网脊衣酸(RB)对前列腺癌LNCaP细胞的周期阻滞作用及分子机制。方法 细胞经RB处理后,流式细胞术检测细胞周期的变化;溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记法检测细胞增殖情况;Western blotting检测p53、p21 CIP1(p21)及细胞周期相关蛋白的表达;实时定量PCR检测p21的 mRNA水平的变化;荧光素酶报告基因检测RB对p21启动子活性的影响;转染p53突变体质粒检测p53对p21表达的影响;基因敲除p21检测其对细胞周期的作用。结果 RB可使LNCaP细胞阻滞于G0/G1期,抑制周期相关的Cyclin D、Cyclin E、Cdk 4和p-Rb表达。同时,RB可时间依赖性地诱导LNCaP细胞中野生型p53表达、促进其入核,同时上调p21的mRNA和蛋白水平。阻断p53的活性后,可抑制RB介导的p21表达及其启动子活性。而敲除p21基因,可降低RB所介导的G0/G1期阻滞,同时G2/M期细胞数量增加。结论 RB通过激活p53,在转录水平上调靶基因p21的表达,导致前列腺癌LNCaP细胞阻滞于G0/G1期,从而抑制细胞的增殖。     

p21WAF1/CIP1 gene DNA sequencing and its expression in human osteosarcoma

Background Mutation and expression change of p21^WAF1/CIP1 may play a role in the growth of osteosarcoma. This study was to investigate the expression of the p21^WAF1/CIP1 gene in human osteosarcoma, p21^WAF1/CIP1 gene DNA sequence change and their relationships with the phenotype and clinical prognosis.Methods p21^WAF1/CIP1 gene in 10 normal people and the tumours of 45 osteosarcoma patients were examined using polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism (PCR-SSCP) with silver staining. The PCR product with an abnormal strand was sequenced directly. The p21^WAF1/CIP1 gene mRNA and P21 protein of 45 cases of osteosarcoma were investigated by using in situ hybridization and immunohistochemistrv, respectively.Results The occurrence of P21 protein in osteosarcoma was 17. 78% (8/45), and p21^WAF1/CIP1 mRNA expression in osteosarcoma was 42.22% (19/45). The p21^WAF1/CIP1 gene DNA sequencing of amplified production showed that in p21^WAF1/CIP1 gene exon 3 of 36 cases of human osteosarcoma,there were 17 cases (47.22%) with C→T at position 609; 10 normal blood samples‘ DNA sequence analysis yielded 8 cases (80.00%) with C→T at the same position.Conclusions Along with the increase of malignancy, the expression of p21^WAF1/CIP1 mRNA and P21 protein in osteosarcoma tends to decrease. It is uncommon for the p21^WAF1/CIP1 gene mutation to occur in human osteosarcoma. As a result, the possible existence of tumour subtypes of p21^WAF1/CIP1 gnemutation should be investigated. Our research leads to the location of p21^WAF1/CIP1 gene polymorphism of Chinese osteosarcoma patients, which can provide a basis for further research.     

P21WAF1／CIP1在大肠癌中的表达

目的探讨Ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰＩ与ｐ５３基因大肠癌中的表达意义及其关系，方法应用原位杂交及免疫组化技术检测大肠癌中的抑癌基因Ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１ｍＲＮＡ及ｐ５３蛋白的表达，统计学采用卡方检验，结果发现大肠癌组织及癌旁组织中Ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰＩ表达阳性率分别为８４．１３％（５３／６３）及６１．９０％（３９／６３）两者是差别显著（Ｐ〈０．０５），Ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１表达程度与癌组织的分化程