SOCS3经JAK/STAT信号通路调控气道黏蛋白高分泌

目的 研究细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)在炎症情况下经JAK/STAT通路调控气道黏液高分泌.方法 培养人气道16HBE上皮细胞,设置空白对照组、白介素(IL)-6处理组、IL-6和microRNA (miR)-203处理组,Westernblot法分析细胞中磷酸化JAK激酶(p-JAK1/2)、SOCS3、黏蛋白(MUC) 5AC蛋白水平;Real-time法检测各组细胞中SOCS3、STAT3、MUC5AC mRNA表达量;ELISA法检测各组培养上清液中p-JAK1/2、SOCS3、MUC5AC蛋白含量.结果 在IL-6刺激下,IL-6处理组的p-JAK1/2、SOCS3、MUC5AC蛋白量及SOCS3、STAT3 mRNA含量较空白对照组显著升高(P＜0.05),IL-6和miR-203处理组的p-JAK1/2、MUC5AC蛋白量及STAT3 mRNA含量较IL-6处理组显著升高(P＜0.05),但SOCS3 mRNA与IL-6处理组比较差异无统计学意义,SOCS3蛋白含量较IL-6处理组显著降低(P＜0.05).结论 细胞在IL-6刺激后SOCS3呈现高表达,同时经JAK/STAT信号通路负反馈调控MUC5AC.     

淫羊藿女贞子合布地奈德对哮喘大鼠肺组织JAKs/STAT4-5的影响

目的 研究中药淫羊藿女贞子煎剂及提取物配伍对布地奈德气道雾化的哮喘大鼠肺组织JAKs/STAT4-5蛋白磷酸化表达的影响。方法 SPF级雄性SD大鼠,采用数字表法随机分为7组,分别是正常组、模型组、布地奈德组、煎剂组、布地奈德合煎剂组、提取物组、布地奈德合提取物组。卵蛋白致敏、激发建立大鼠哮喘模型,雾化吸入布地奈德和（或）灌胃淫羊藿女贞子煎剂或提取物,免疫荧光法检测肺组织JAKs （包括JAK1、JAK2、JAK3、TYK2）及STAT4、STAT5蛋白的磷酸化表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠肺组织pJAK1、pJAK3、pTYK2和pSTAT5蛋白表达均显著上调（P均<0.01）,pJAK2和pSTAT4显著下调（P均<0.01）。与模型组比较,5个给药组均能显著影响pJAKs各蛋白的表达（P<0.01或P<0.05）,上调pSTAT4蛋白表达的阳性面积,下调pSTAT5蛋白的阳性面积及积分光密度（IOD）（P<0.01或P<0.05）。与单用布地奈德比较,布地奈德合煎剂组或合提取物组对pJAKs蛋白表达和pSTAT4、pSTAT5蛋白表达的Area作用更优（P均<0.01）。结论 在布地奈德治疗哮喘的同时合用中药淫羊藿女贞子,可通过调节JAK/STAT4-5蛋白的磷酸化表达产生协同增效作用。     

miR-19a对慢性压迫性损伤大鼠神经病理性疼痛的影响及其机制

目的 观察miR-19a对慢性压迫性损伤(chronic constriction injury,CCI)大鼠神经病理性疼痛的作用,并探讨其潜在机制.方法 75只雄性SD大鼠按随机数字表法分为3组:假手术组,行假手术;CCI组,坐骨神经结扎法构建CCI大鼠模型;CCI+inhibitor组,CCI大鼠鞘内注射miR-19a inhibitor.于术前当天(0 d)和术后3、7、14、21 d观察机械缩足反射阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)和热刺激反射潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL)的变化.采用RT-qPCR检测腰椎脊髓中促炎因子IL-6、TNF-α、IL-1β mRNA及JAK2和STAT3表达的变化,Western blot检测SOCS3蛋白水平的表达,荧光素酶报告基因技术验证miR-19a的靶基因.结果 与假手术组比较,CCI组大鼠脊髓的miR-19a表达显著上升(P＜0.05),MWT显著降低,TWL显著缩短(P＜0.05).与CCI组比较,CCI+ inhibitor组MWT显著升高,TWL显著延长(P＜0.05).RT-qPCR检测结果表明,CCI可显著促进促炎因子IL-6、TNF-α、IL-1β mRNA的表达;而与CCI组比较,CCI+inhibitor组IL-6、TNF-α、IL-1βmRNA表达水平均显著降低(P＜0.05).另一方面,与假手术组比较,CCI组大鼠术后脊髓中JAK2和STAT3 mRNA水平明显增加;与CCI组比较,CCI+ inhibitor组术后脊髓中JAK2和STAT3的表达显著降低(P＜0.01).荧光素酶报告基因检测结果表明JAK2/STAT3上游的负调控因子SOCS3是miR-19a的靶基因.Western blot检测结果表明CCI组大鼠脊髓中SOCS3水平较假手术组升高,且SOCS3水平在CCI术后第7天达到最高,而后呈下降趋势;与CCI组比较,CCI+inhibitor组SOCS3表达明显上升(P＜0.05).结论 miR-19a inhibitor能缓解CCI大鼠机械性触诱发痛和热痛觉过敏,该作用与SOCS3介导的JAK2/STAT3通路有关.     

芍甘附子汤加味对CIA大鼠关节滑膜组织JAK/STAT通路相关基因表达的影响

目的:观察芍甘附子汤加味对胶原性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠关节滑膜组织JAK/STAT通路相关基因SOCS1 mRNA、SOCS3 mRNA以及STAT1 mRNA表达的影响。方法:建立CIA大鼠模型,采用real-time PCR法检测大鼠膝关节滑膜组织SOCS1 mRNA、SOCS3 mRNA以及STAT1 mRNA的表达含量。结果:两组比较Ct值的相对含量,结果显示大鼠滑膜组织正常组,模型组,芍苷附子汤小剂量组、中剂量组、大剂量组,对照组STAT1 mRNA表达相对值分别是1、38.32、12.04、6.15、8.94、8.06;STAT1 mRNA表达相对值分别是1、17.03、5.98、2.50、3.36、4.66;SOCS3 mRNA表达相对值分别是1、15.89、3.58、1.75、2.22、3.12。说明模型组SOCS1 mRNA、SOCS3 mRNA以及STAT1 mRNA表达水平与正常组相比较,均有明显增高(P0.05),以STAT1 mRNA增高最显著。治疗组和对照组SOCS1 mRNA、SOCS3 mRNA以及STAT1 mRNA表达水平与模型组相比较,均有明显下降(P0.05)。结论:芍甘附子汤加味能有效调控JAK/STAT信号转导通路STAT1 mRNA、SOCS1 mRNA、SOCS3 mRNA的表达,可能是其实现抗炎效应及CIA大鼠好转的重要分子机制之一。     

JAK2/STAT3信号通路对胃癌血管生成的影响

目的探讨酪氨酸激酶2/信号转导和转录激活因子3（JAK2/STAT3）信号通路对胃癌血管生成的影响。方法选择胃癌根治术病人30例,收集胃癌组织、癌旁组织以及正常组织,体外检测JAK2/STAT3信号通路对细胞自噬以及细胞活力的影响,以及自噬蛋白对胃癌细胞分泌血管生成因子的影响。结果胃癌组织中pJAK2、pSTAT3表达水平高于癌旁组织及正常组织;加入JAK2/STAT3信号通路阻滞剂后,胃癌细胞自噬能力、细胞活力明显减弱（P < 0.01）;过表达自噬蛋白Beclin-1后胃癌细胞分泌血管内皮生长因子（VEGF）和血小板衍化生长因子（PDGF）水平明显高于抑制组（P < 0.01）;而过表达自噬蛋白LC3后,VEGF、PDGF水平与抑制组差异无统计学意义（P>0.05）。结论JAK2/STAT3信号通路通过调控细胞自噬影响胃癌微血管生成能力,可能是通过激活Beclin-1提高VEGF、PDGF的表达水平。     

溃疡性结肠炎组织中SOCS2、SOCS3表达量与炎症反应、免疫应答的相关性

目的:研究溃疡性结肠炎组织中SOCS2、SOCS3表达量与炎症反应、免疫应答的相关性。方法:选择2014年5月~2016年7月期间在淄矿集团中心医院结肠镜活检的溃疡性结肠炎病灶组织和正常肠黏膜组织,分别作为UC组和对照组。抽提RNA并测定SOCS2、SOCS3以及炎症反应JAKs/STATs通路分子的mRNA表达量,抽提蛋白并测定免疫应答细胞因子的含量。结果:UC组肠黏膜组织中SOCS2的mRNA表达量与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),SOCS3的mRNA表达量显著低于对照组;UC组肠黏膜组织中JAK1、JAK2、JAK3、STAT1、STAT3、STAT5的mRNA表达量以及γ干扰素(IFN-γ)、白介素(IL)-17的蛋白含量显著高于对照组,IL-4、IL-10的蛋白含量显著低于对照组;UC组中SOCS3低表达肠黏膜组织中JAK1、JAK2、JAK3、STAT1、STAT3、STAT5的mRNA表达量以及IFN-γ、IL-17的蛋白含量显著高于SOCS3高表达肠黏膜组织,IL-4、IL-10的蛋白含量显著低于SOCS3高表达肠黏膜组织。结论:溃疡性结肠炎组织中低表达的SOCS3能够加重炎症反应、造成Th1/Th2以及Th17/Treg免疫应答失衡。     

祛风活血丸对实验性自身免疫性葡萄膜炎大鼠JAK2 mRNA和STAT3 mRNA表达的影响

目的观察祛风活血丸对实验性自身免疫性葡萄膜炎大鼠视网膜JAK2及STAT3 mRNA表达的影响。方法将80只(160眼)雄性Lewis大鼠根据随机数字表法随机抽取16只作为空白组(A),对其余64只大鼠进行实验性自身免疫性葡萄膜炎模型制作。造模成功后,根据随机数字表法将其随机分为模型组(B)、祛风活血丸常规剂量组(C)、祛风活血丸两倍剂量组(D)、熊胆开明片组(E)。干预14 d后用q PCR法检测大鼠视网膜组织中JAK2 mRNA和STAT3 mRNA的相对表达量。结果JAK2 mRNA:与B组比较,C组、E组表达降低,差异具有统计学意义(P0.05),D组表达显著降低,差异具有统计学意义(P0.01);STAT3 mRNA:与B组比较,C、D、E组表达均降低,差异具有统计学意义(P0.05)。结论祛风活血丸能降低实验性自身免疫性葡萄膜炎大鼠JAK2、STAT3 mRNA的表达,抑制JAK2/STAT3信号通路,达到抗炎作用。     

基于JAK2/STAT3/SOCS3信号通路探讨复方甘草酸苷对实验性自身免疫性脑脊髓炎的防治作用

目的探讨复方甘草酸苷(CG)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠的防治作用及其对JAK2/STAT3/SOCS3信号通路的影响。方法将50只雌性C57BL/6小鼠随机分为5组:空白组、模型组和CG低、中、高剂量干预组,每组10只。模型组和CG各干预组建立EAE模型,干预组分别予以CG低、中、高剂量(15、30、60 mg/(kg·d))腹腔注射,空白组及模型组腹腔注射等体积生理盐水,连续14 d。观察小鼠神经功能缺损评分、病理学改变及程度。采用Western blot法检测脑组织蛋白的表达、实时荧光定量RT-PCR法检测脑组织mRNA的含量。结果与模型组比较,CG各干预组最高神经功能缺损评分(P0. 05)及累计神经功能缺损评分(P0. 05)降低,脊髓组织炎性细胞浸润及脱髓鞘程度减轻,JAK2、STAT3蛋白及其mRNA表达下降(P0. 05),SOCS3蛋白及其mRNA表达升高(P0. 05),RORγt mRNA表达下降(P0. 05),Foxp3 mRNA升高(P0. 05)。结论 CG对EAE小鼠发挥防治作用,其机制可能与负性调控因子SOCS3的表达上调,JAK/STAT信号通路的抑制以及影响Th17/Treg细胞平衡有关。     

急性白血病患者STAT5、SOCS1和PTPRO基因的表达及临床意义

目的 探讨STAT5、SOCS1和PTPRO基因在急性白血病(AL)中的表达情况及临床意义.方法 将入选患者分为AL初治组、完全缓解组(CR组)和正常对照组(NC组),Syber Green 荧光定量PCR方法检测各组骨髓单个核细胞(MNC)中STAT5、SOCS1及PTPRO mRNA的表达.结果 (1)AL初治组STAT5 mRNA表达水平明显高于缓解组(P＜0.05),缓解组STAT5表达水平高于正常对照组(P＜0.05);(2)AL初治组SOCS1、PTPRO的表达水平低于缓解组(P＜0.05),缓解组SOCS1、PTPRO的表达水平低于正常对照组(P＜0.05);(3)STAT5、SOCS1、PTPRO基因表达水平中位值分别为0.980、0.838和0.771,根据中位值分为高表达组和低表达组,两组缓解率间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 STAT5的高表达及SOCS1和PTPRO的低表达可能在白血病的发生、发展中起重要作用.     

AG490及5-Aza对大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响及分子机制

【摘要】 目的 探讨JAK2/STAT3通路抑制剂AG490及DNA甲基化抑制剂5-Aza对血小板源性生长因子-BB（PDGF-BB）诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）增殖的影响及意义。方法 采用CCK8检测不同浓度AG490及5-Aza对PDGF-BB诱导PASMCs增殖的影响;将细胞分为对照组（正常的PASMCs）、0μM 组（予30 μg/L PDGF-BB 孵育48h)和25μM/1μM组、50μM/3μM组、100μM/5μM组（25μM/1μM组、50μM/3μM组、100μM/5μM组分别给予25/1、50/3、100/5μmol/L AG490/5-Aza共同孵育细胞）。采用RT-qPCR检测IL-6、GATA6、JAK2及STAT3 mRNA表达水平;Western blot检测GATA6、p-JAK2及p-STAT3蛋白的表达。结果 与对照组比较,0 μM AG490组IL-6、JAK2、STAT3mRNA表达均增加,GATA6mRNA及蛋白水平降低,p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3表达升高（P＜0.05）。与0μM AG490组比较,25、50、100μM AG490组细胞增殖减少,IL-6、JAK2和STAT3mRNA的表达均降低,GATA6mRNA及蛋白表达升高,p-JAK2/JAK2水平降低（均P＜0.05）,50和100μM组中p-STAT3/STAT3水平降低（均P＜0.05）;与0μM 5-Aza组相比,1μM、3μM、5μM 5-Aza组细胞增殖减少,IL-6mRNA表达降低,GATA6蛋白、p STAT3/STAT3表达增高,p-JAK2/JAK2水平降低（均P＜0.05）,JAK2、STAT3mRNA水平无显著差异（P＞0.05）;3μM和5μM 5-Aza组中GATA6mRNA表达增高(P＜0.05)。结论 AG490及5-Aza对 PDGF-BB诱导的PASMCs增殖具有抑制作用,该作用可能与阻断JAK2/STAT3信号通路,抑制IL-6调节GATA6启动子甲基化有关。     

细胞因子信号转导抑制因子3与早产关系的研究

目的 探讨细胞因子信号转导抑制因子3（SOCS3）与早产的关系.方法 选取2013年2月至2013年10月本院收治自发性早产患者及足月妊娠妇女各30例为研究对象,自发性早产患者为实验组,足月妊娠妇女设为对照组,收集两组胎盘组织,应用RT-PCR及Western-blot检测两组孕妇胎盘组织中的SOCS3蛋白及mRNA的表达情况,比较不同组间SOCS3表达强度;采用RT-PCR检测胎盘组织中IFN-α、IL-10基因表达情况,分析Th1/Th2平衡情况.结果 PCR检测结果显示,SOCS3-mRNA在对照组和实验组胎盘组织中均有表达,对照组SOCS3-mRNA表达强度值明显低于实验组（P ＜0.01）;West-ern-blot结果显示,实验组胎盘组织中SOCS3的蛋白表达明显强于对照组（P＜0.01）,SOCS3基因及蛋白表现一致;实验组患者Th1分泌的细胞因子IFN-α表达显著高于对照组（P＜0.01）,Th2分泌的细胞因子IL-10介导的体液免疫功能减弱（P＜0.05）,Th1/Th2平衡向Th1偏离.结论 早产发生与SOCS3高表达有一定的关系,其作用机制可能是其通过的信号传导及转录活因子（JAK/STAT）信号途径调节体内免疫平衡.为早产研究奠定了基础.     

消银解毒方颗粒对Jurkat T细胞内JAK1/STAT3信号通路作用机制的研究

目的探讨消银解毒方颗粒对人急性T淋巴细胞白血病细胞株(Jurkat T)细胞内酪氨酸激酶1(JAK1)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路的调控作用。方法以植物血凝素(PHA)和白细胞介素-6(IL-6)共同诱导Jurkat T淋巴细胞建立血热证银屑病T细胞异常活化病理细胞模型,将模型细胞接种于24孔板,制备消银解毒方颗粒、凉血方颗粒(消银解毒方颗粒拆方)、解毒方颗粒(消银解毒方颗粒拆方)、阿维A(阳性对照)、蒸馏水(阴性对照)的药理血清,择取最佳浓度药理血清及JAK/STAT信号通路阻断剂Filgotinb(GLPG0634)作用于模型细胞48 h,同时设空白细胞组。收集各组细胞,采用蛋白质印迹(Western blot)、实时定量聚合酶链式反应(real-time PCR)法检测JAK1、STAT3、糖蛋白(GP)130的蛋白表达与基因转录水平。结果模型组的JAK1、STAT3、GP130的蛋白和mRNA表达较空白组明显增高(P0.01)。与模型组相比,各实验组磷酸化酪氨酸溶酶(p JAK)1/JAK1、磷酸化信号转号和转录激活因子(p STAT)3/STAT3、GP130蛋白表达量均明显降低(P0.01);与模型组相比,各实验组JAK1、STAT3、GP130的mRNA表达量均降低(P0.05或P0.01)。结论消银解毒方颗粒能够通过抑制JAK1/STAT3信号通路的开放进而抑制T细胞异常活化,以发挥其治疗银屑病的作用。     

FGF21通过SOCS3/JAK/STAT通路调控肝细胞脂质代谢研究

目的 通过敲减细胞内成纤维细胞生长因子21(fibroblast growth factors 21,FGF21)的表达,观察其对肝细胞脂质代谢的影响,并探讨FGF21调控肝细胞脂质代谢的分子机制。方法 通过FGF21干扰慢病毒转染HepG2细胞,降低FGF21的表达,以空载体转染HepG2细胞作为对照,分为干扰组和对照组。两组均以棕榈酸油酸刺激构建非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)细胞模型。采用油红O染色法观察肝细胞内脂质沉积情况,测定分光光度值,计算脂质含量;利用蛋白质印迹(Western blot)法检测肝细胞中SOCS3、JAK2、STAT3蛋白的变化。结果 油红O染色及吸光度值显示,与对照组相比,干扰组肝细胞内脂滴含量显著减少;Western blot结果表明,干扰组肝细胞内细胞因子信号转导抑制因子3(suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3)、Janus激酶2(Janus kinase 2,JAK2)、信号转导和转录活化因子3(signal transducer and...     

厄贝沙坦抑制肾皮质JAKs-STATs信号通路的实验研究

目的 探讨肾脏Janus激酶/信号转导子/转录激活子(JAKs-STATs)基因表达在高血压肾损害中的作用和血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB)的肾脏保护作用.方法 应用病理检查、放射免疫、逆转录-聚合酶链式反应和蛋白印迹杂交等方法,检测自发性高血压大鼠(SHR)应用厄贝沙坦(SHR-Ⅰ组)对肾脏局部血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)水平、肾皮质组织JAK1,2及STAT1,3 mRNA和蛋白表达.同时设SHR组及对照Wistar-Kyoto(WKY)组.结果 SHR-Ⅰ组肾皮质组织匀浆液Ang Ⅱ水平为(79.4±14.8)pg/mg,SHR组为(83.4±8.2)PS/mg,WKY组为(43.2±13.6)pg/mg(P＞0.05).SHR-Ⅰ组和SHR组肾皮质组织匀浆液Ang Ⅱ水平均比WKY组显著增加(均P＜0.01).SHR-Ⅰ组肾皮质JAK1,2及STAT1,3 mRNA和蛋白表达含量明显比SHR组下降(均P＜0.01),与WKY组相比,差异无统计学意义(均P＞0.05).结论 JAKs-STATs信号通路可能参与了高血压肾脏损害过程,厄贝沙坦肾脏保护作用部分是通过减少肾脏内的JAKs-STATs表达,使JAKs-STATs信号通路受到抑制有关.     

大鼠急性肺损伤过程中STAT-3的活化对caspase-3表达的影响

目的 探讨大鼠急性肺损伤（ALI）过程中信号转导和转录活化因子-3（STAT-3）的活化对caspase-3表达的影响.方法 60只成年雄性SD大鼠随机分为4组：对照组（n=6）,脂多糖组（LPS组,n=24）,酪氨酸蛋白激酶（JAK）抑制剂 AG490组（n=6,AG490用0.4%二甲亚砜溶解）,AG490＋LPS组（n=24）;LPS、AG490＋LPS组在注射LPS后1、2、4、6 h又被分为4个亚组（每组n=6）.分别采用Western blotting检测各组大鼠肺组织中磷酸化STAT-3（pSTAT-3）的表达并采用免疫组织化学法测定caspase-3的表达情况.结果 注射LPS1、2、4、6 h后STAT-3被明显活化（P〈0.05）,而相对应的AG490＋LPS组中STAT-3活性较LPS组减弱（P〈0.05）.同时LPS组中caspase-3表达较相应的AG490＋LPS组明显减少（P〈0.01）.结论 大鼠ALI过程中STAT-3通路的激活可减低caspase-3的表达.     

清热化湿祛瘀法对慢性肾衰竭湿热证患者瘦素介导的JAK/STAT信号通路的影响

目的观察清热化湿祛瘀中药清肾颗粒对慢性肾衰竭(CRF)湿热证患者血清瘦素(Leptin)、Janus激酶/信号转导与转录活化因子(JAK/STAT)信号通路中Janus激酶2(JAK2)蛋白及信号转导和转录激活因子3(STAT3)蛋白表达的影响,探讨清肾颗粒治疗CRF患者的作用机制。方法68例CRF湿热证患者,随机数字表法分为治疗组和对照组,每组34例,实际完成60例,治疗组29例,对照组31例。治疗组及对照组给予西医基础治疗,治疗组加用清肾颗粒,每日3次,每次1袋,疗程均为12周。观察2组患者临床疗效、治疗前后血肌酐(Scr)、肾小球滤过率估算值(e GFR)以及血清Leptin、JAK2蛋白、STAT3蛋白变化情况。结果治疗组临床疗效和中医证候疗效总有效率为86.21%(25/29)和82.76%(24/29),优于对照组的58.06%(18/31)和54.84%(17/31),差异有统计学意义(P0.05)。与本组治疗前比较,治疗后治疗组Scr水平明显下降(P0.01),e GFR水平明显升高(P0.01),且优于对照组同期(P0.05)。与本组治疗前比较,治疗后治疗组Leptin、JAK2、STAT3水平均明显降低(P0.01),且均优于对照组同期(P0.05或P0.01)。结论清肾颗粒可降低CRF湿热证患者血清Leptin、JAK2蛋白及STAT3蛋白水平,抑制瘦素介导的JAK/STAT信号通路的活化,进而改善CRF湿热证患者临床症状和肾功能。