利用血红素制备原卟啉钠的工艺优化研究

目的:建立并优化利用血红素制备原卟啉钠的工艺.方法:采用单因素试验方法,从甲醇用量、1mol/L氢氧化钠甲醇溶液用量、加热回流温度和加热回流时间4个主要因素对NAPP的制备工艺进行优化.结果:原卟啉钠的平均产量为3.46 g/5 g血红素,纯度为88.8%;确定的最佳提取工艺参数是:甲醇用量70 ml,1 mol/L氢...     

PPN抑制HBV-DNA表达及复制的体外实验

目的：体外观察PPN对HBV－DNA表达、复制的抑制效果及其细胞毒性作用。方法：取10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml PPN水溶液分别加入2.2.15细胞株培养悬液中，8天后用放射免疫法检测上清液中HBeAg的含量，并计算HBeAg抑制率、细胞存活率、HBeAg抑制率为50％时的药物浓度（ID50）、实验组存活细胞为对照组的50％时的药物浓度（CD50）和治疗指数（TI）。PCR技术检测HBV－DNA阳性血清中加入160μg/ml PPN水溶液后对HBV－DNA复制的抑制作用。结果：当加入的PPN浓度为160μg/ml和80μg/ml时，HBeAg抑制率分别为89．8％和82．4％，细胞存活率分别为98．7％和99．2％；HBV－DNA阳性血清中加入PPN后可有效抑制其复制。结论：PPN可有效抑制HBV－DNA的表达和复制，且对靶细胞（肝细胞）无细胞毒作用，有进一步研究和推广应用的价值。     

藤梨根正丁醇提取物对人食管癌细胞生长作用的实验研究

目的:探讨藤梨根正丁醇提取物对培养的人食管癌Eca-109细胞的生长抑制作用。方法:MTT比色法检测藤梨根正丁醇提取物在不同浓度(1μg/m l、10μg/m l、100μg/m l)及不同时间(24 h、48 h、72 h)对Eca-109细胞生长抑制作用,TUNEL法检测其对癌细胞生长的诱导凋亡效应。结果:①藤梨根正丁醇提取物对人食管癌Eca-109细胞的生长抑制作用随着药物浓度的升高和作用时间的延长而增强。②提取物对瘤细胞有明显的凋亡效应。结论:藤梨根正丁醇提取物能有效抑制人食管癌Eca-109细胞生长。     

山奈酚和槲皮素对大鼠细胞色素P450酶活性的影响

目的:观察山奈酚和槲皮素两种银杏黄酮对细胞色素P450的影响。方法:原代培养大鼠肝细胞,接触0.1~10.0μm o l/L的山奈酚或槲皮素,作用12 h、24 h和48 h,用N ash法检测细胞色素P450同工酶-红霉素N-脱甲基酶(ENRD)和氨基比林N-脱甲基酶(ADM)的活性。分别以红霉素(10.0μm o l/L)和二甲基亚砜(DM SO)作为阳性对照和溶剂对照。结果:0.1、1.0和10.0μm o l/L山奈酚作用24 h,ENRD酶活性分别为(0.088±0.008)、(0.074±0.006)和(0.041±0.003)μm o l/(m g.m in-1);槲皮素相同浓度和作用时间处理的ENRD酶活性分别为(0.082±0.007)、(0.063±0.007)和(0.034±0.005)μm o l/(m g.m i-n 1)。其中1.0和10.0μm o l/L山奈酚和槲皮素处理的肝细胞ENRD酶活性都显著低于溶剂对照组(0.085±0.011)μm o l/(m g.m in-1),且呈剂量-效应关系(P<0.01)。10μm o l/L山奈酚处理细胞12 h和48 h后,ENRD酶活性为(0.053±0.006)和(0.037±0.007)μm o l/(m g.m i-n 1);10μm o l/L槲皮素处理细胞12 h和48 h后,ENRD酶活性为(0.067±0.005)和(0.032±0.004)μm o l/(m g.m i-n 1),都具有明显的时间-效应关系(P<0.01)。山奈酚只有在10μm o l/L浓度下作用24 h对ADM活性出现抑制,槲皮素对ADM活性没有明显影响。结论:在本实验条件下,山奈酚和槲皮素能明显抑制大鼠肝细胞ENRD活性;山奈酚在10μm o l/L浓度下能轻度抑制ADM,而槲皮素对ADM活性没有明显的抑制作用。     

融合蛋白XE-TNFαm2对SIV的抑制作用

目的检测XE-TNFαm2靶向融合蛋白作为新型生物性药物抑制SIV病毒感染CEMx-174细胞的作用。方法 XE-TNFαm2、SIV和CEMx-174细胞共同培养,在培养的第5天,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养上清中P27抗原水平,间接免疫荧光法(IFA)和流式细胞仪测试SIV阳性细胞,应用PE-annexin V凋亡检测试剂盒测试细胞存活率和凋亡率。结果 XE-TNFαm2在细胞安全最大药物浓度50μg/mL时,对SIV病毒抑制率为40%。细胞早期凋亡率在XE-TNFαm2浓度6.25μg/mL时为37.1%。结论融合蛋白XE-TNFαm2对SIV病毒有一定的抑制作用,其中部分作用推测是因通过诱导感染细胞产生凋亡导致病毒死亡。     

仙草提取物对小鼠脾淋巴细胞DNA氧化损伤保护作用的研究

目的:观察仙草提取物对原代培养脾淋巴细胞H2O2所致DNA氧化损伤的保护作用。方法:原代培养24 h的脾淋巴细胞悬液,随机分为6组,其中4组细胞用不同浓度的仙草提取物溶液预先处理60 m in,再加入50μm o l/L的H2O2,H2O2染毒组直接加入相同浓度的H2O2,空白对照组加入等量的PBS溶液,6组细胞共同在4℃下染毒20 m in,收获细胞同时进行单细胞凝胶电泳,最后用激光共聚焦显微镜拍摄图像,计算DNA迁移的细胞率和总彗星长度。结果:H2O2可致原代培养脾淋巴细胞DNA的严重损伤,而仙草提取物能不同程度地降低H2O2诱导产生的DNA损伤,在10、50、100μg/m l的浓度下,彗星细胞出现率从阳性对照组的100%分别降低为88%、60%和36%(P分别<0.05、0.01、0.01),总彗星长度也从对照组的(49.56±6.94)μm,逐渐降低为(41.14±5.64)μm、(38.89±9.81)μm、(28.62±4.66)μm(P分别<0.05、0.01、0.01)。结论:仙草提取物具有显著的抗氧化功能,能在一定浓度范围内保护细胞免受氧自由基对DNA的氧化损伤。     

黄连素联合胞嘧碇脱氨酶自杀基因对直肠癌细胞的抑制作用

目的 探讨黄连素联合胞嘧碇脱氨酶自杀基因(Ad-CD)对直肠腺癌细胞的体外杀伤作用.方法 培养人直肠腺癌细胞株HR-8348细胞,将重组腺病毒自杀基因转染人直肠癌细胞株HR-8348后,用四甲基偶氮唑盐(MTT法)检测黄连素联合Ad-CD基因对HR-8348细胞存活率的影响.结果 构建pcDNA3.1( )-CD真核表达载体成功,CD基因序列分析表明:重组子pcDNA3.1( )-CD含有完整的CD基因.RT-PCR表明CD基因在HR-8348细胞中表达,成功筛选出稳定表达CD基因的HR-8348细胞.HR-8348-CD细胞对浓度为100μg/ml以上的5-FC敏感,随着药物浓度升高和作用时间的延长,杀伤作用增强,但在250μg/ml以上浓度变化时,细胞杀伤率变化不大.分别以0.1、0.3、3.0、30.0μm浓度的黄连素联合5-FC对直肠癌细胞作用,细胞抑制作用随黄连素浓度升高而上升,但3.0、30μm浓度作用变化不大.在250μg/ml 5-FC浓度下,0.1、0.3、3.0、30.0μm浓度的黄连素联合5-FC对直肠癌细胞生长抑制率分别为:27.7%、42.4%、52.3%、56.3%.结论 黄连素联合5-Fc作用HR-8348-CD细胞能够增强对直肠癌细胞的抑制作用.     

大肠杆菌脂多糖对皮肤成纤维细胞数量及增殖周期的影响

目的:观察大肠杆菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激后,皮肤成纤维细胞数量和增殖周期的变化规律。方法:体外培养正常人皮肤成纤维细胞,加入不同浓度(0.005~1.0μg/m l)的大肠杆菌LPS(E.coli055:B5),通过细胞计数法连续观察1~9 d细胞数量的变化;于LPS加入后第6天细胞处于对数生长期时,采用流式细胞术观察细胞增殖周期。结果:LPS刺激浓度在0.005~0.1μg/m l时,细胞数量和S期细胞比例随着刺激浓度增加而增高,且呈浓度依赖性;当LPS浓度为0.5μg/m l时,上述作用开始降低,但仍高于对照组;当浓度达到1.0μg/m l时,细胞数量和S期细胞比例均低于对照组。结论:在一定浓度范围内LPS促进皮肤成纤维细胞增殖,而过高浓度LPS则呈现抑制效应。     

大黄蒽醌类化合物体外抗流感病毒作用的研究

目的:探讨大黄蒽醌类化合物(RAA)在细胞培养中抗流感病毒的作用。方法:采用细胞培养技术,以病毒唑为阳性对照药,比较观察大黄蒽醌类化合物对流感病毒引起的细胞病变(CPE)的抑制作用。结果:大黄蒽醌类化合物半数中毒浓度(TC50)为226.1μg/m l,其抗流感病毒的半数有效浓度(IC50)为122.4μg/m l,治疗指数(T I)为1.9,且对流感病毒抑制作用存在明显的量效反应关系。结论:大黄蒽醌类化合物在M DCK细胞中对流感病毒有抑制作用。     

氧化低密度脂蛋白对体外血管内皮细胞损伤的剂量反应关系

目的:研究氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对体外培养的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)造成的损伤效应。方法:分别用不同浓度的ox-LDL作用于对数生长期的HUVEC细胞24 h,进行细胞形态学观察比较,采用四唑盐(MTT)比色法测定细胞活力,计算细胞生长抑制率,并测定细胞中丙二醛(MDA)含量。结果:随着ox-LDL浓度的增加,细胞形态发生明显变化,变得结构松散,ox-LDL高浓度时甚至出现细胞破碎、死亡。MTT实验的吸光度值(OD)在ox-LDL浓度为50、100、200μg/m L时,与对照组相比差异均具有统计学意义(P<0.05)。不同浓度干预24 h后细胞中MDA含量与MTT实验结果一致。当ox-LDL浓度为50、100、200μg/m L时,细胞抑制率分别达到23.2%、45.2%、62.0%。结论:当HUVEC细胞暴露于ox-LDL 24 h后,干预浓度越大细胞活力越低,细胞生长抑制率越大,细胞中MDA含量增加。ox-LDL浓度为200μg/m L以内时,ox-LDL对HUVEC细胞可造成较明显的氧化损伤且呈现剂量效应关系。     

徐长卿水提物抗乙型肝炎病毒的体外实验研究

目的初步探讨徐长卿水提物的抗乙型肝炎病毒(HBV)作用.方法通过徐长卿水提物作用于体外培养的2.2.15细胞株,观察其对2.2.15细胞株分泌HBsAg和HBeAg的影响,以初步评价其抗HBV作用. 结果徐长卿水提物作用于2.2.15细胞株12d后,对2.2.15细胞株的半数毒性浓度为62.65g/L,对HBsAg的半数抑制浓度小于0.78 g/L、对HBeAg的半数抑制浓度为10.13 g/L;对HBsAg治疗指数大于80.32,对HBeAg治疗指数为6.18.结论徐长卿水提物在体外细胞培养中对两抗原的分泌有较好的抑制作用.     

补肾健脾方体外抗乙型肝炎病毒作用的初步研究

目的：初步探讨补肾健脾方的抗乙型肝炎病毒（HBV）作用。方法：通过补肾健脾方作用于体外培养的2．2．15细胞，观察其对2．2．15细胞两抗原分泌的影响，初步评价其抗HBV作用。结果：补肾健脾方作用于2．2．15细胞10d后，药物对2．2．15细胞的半数毒性浓度为37．80g/L，对HBsAg、HBeAg的半数抑制浓度分别为19．05g/L和9．55g/L，治疗指数分别为1．98和3．96。结论：补肾健脾方在体外细胞培养中对HBeAg的分泌有较好的抑制作用。     

黄芪提取物对乙型肝炎病毒抗原表达的抑制作用

目的探讨黄芪提取物对乙型肝炎病毒（HBV）病毒抗原表达的抑制作用。方法用MTT法测定黄芪提取液在不同浓度下对HepG2．2．15细胞的细胞毒性,ELISA法检测黄芪提取物对HepG2．2．15细胞分泌HBsAg、HBeAg颗粒的影响。结果黄芪提取物对HepG2．2．15细胞4d和8d的半数毒性浓度（TC50）分别为88．914μg／ml和85．209μg／ml（P〉0．05）,对HBeAg4d和8d的治疗指数（TI）分别为1．018和1．342（P〉0．05）,对HBsAg4d和8d的治疗指数分别为0．065和0．089（P〉0．05）。结论黄芪提取物抑制HepG2．2．15细胞分泌HBeAg的作用为低效有毒,黄芪提取物对HBsAg抗原分泌无明显抑制作用。     

新型稀土杂多化合物对乙型肝炎病毒复制的抑制作用

目的：研究稀土杂多化合物(PTW-6)体外抗乙型肝炎病毒（HBV）的活性。方法：MTT法检测PTW-6对Hep G2 2.2.15细胞的毒性,乙型肝炎病毒e（s）抗原诊断试剂盒检测上清液中HBeAg、HBsAg的含量,Southern blotting 法检测PTW-6对细胞内HBV DNA复制的抑制作用。荧光定量PCR分析PTW-6对细胞内HBV mRNA和上清液中HBV DNA含量的影响。结果：PTW-6对2.2.15细胞的半数中毒浓度为1590.46 mg•L^-1, PTW-6各浓度实验组对HBeAg和HBsAg的抑制率均高于对照组（P<0.05）;随着PTW-6浓度的增高,PTW-6对2.2.15细胞内外HBV DNA的抑制率增加,PTW-6对2.2.15细胞外HBV DNA和细胞内HBV mRNA半数抑制浓度分别为51.1和63.6 mg•L^-1。结论：PTW-6体外毒性较低, 且对HBV复制有较好的抑制作用。     

自制枝莲清肝胶囊抑制乙型肝炎病毒活性的体外实验

目的观察枝莲清肝胶囊抑制乙型肝炎病毒（HBV）的活性。方法以HepG2.117细胞为模型,分为3组：空白对照组、枝莲清肝组（1000μg/ml）、拉米夫定组（5μg/ml）,用酶联免疫试验法（ELISA）检测细胞培养上清液中HBsAg、HBeAg的变化,用荧光定量PCR法检测细胞培养上清液中HBV DNA的变化,以MTT比色法观察药物对细胞的毒性作用。结果细胞毒性实验显示,2个药物组与空白对照组比较,OD值差异无统计学意义（P〉0.05）,表明2种药物对HepG2.117细胞的生长无毒性作用。枝莲清肝组24h和72 h对HBsAg的抑制率分别达30.1%和36.3%,对HBeAg的抑制率分别达6.4%和26.7%;PCR检测显示枝莲清肝胶囊能降低HBV DNA水平。除72 h时对HBsAg的抑制率低于拉米夫定组外（P〈0.05）,2组其余指标比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论枝莲清肝胶囊在1mg/ml浓度下有抑制HBV DNA和HBsAg、HBeAg的作用。     

脱氧核酶抑制乙型肝炎病毒基因表达的实验研究

目的：探讨乙型肝炎病毒(HBV)s基因和c基因特异性的脱氧核酶(DNAzyme)对HBV表面抗原(HB—sAg)和e抗原(HBeAg)表达的抑制效应。方法：设计合成针对HBVs基因ORF A^157UG、e基因ORF A^1816UG的DNAzyme DrzBS、DrzBC，在2.2．15细胞上观察其对HBVs基因、c基因的表达抑制效应。结果：DrzBS、DrzBC作用于2．2．15细胞后，可显著抑制HBVs基因、c基因的表达，有效浓度为0．1—2．5μmol／L并呈剂量依赖性，最高抑制率分别为94．2％和91．8％；有效抑制持续时间可达72h，DrzBS、DrzBC在细胞内对HbeAg、HbeAg表达的抑制效率，明显高于作为对照的反义寡核苷酸AsBS、AsBC，有效浓度较后者低至少l0倍。其对2．2．15细胞的HBVDNA复制无明显影响，亦未见明显的细胞毒性作用。结论：在2．2．15HBV细胞模型系统，DrzBS、DrzBC能高效阻断HBVs基因、e基因的表达，是一种特异性的、高效的抗HBV基因治疗剂。     

苦参碱脂质体抗乙型肝炎病毒的体外实验研究

目的评价苦参碱脂质体的体外抗乙型肝炎病毒(HBV)作用。方法通过苦参碱脂质体、苦参碱作用于体外培养的2.2.15细胞,观察和比较二者对2.2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg的影响及药物的细胞毒性,初步评价苦参碱脂质体的抗HBV作用。结果苦参碱脂质体、苦参碱作用于2.2.15细胞11 d后,对细胞的半数毒性浓度(TC50)分别为7.29mg/ml和1.33rage/ml,对HBsAg和HBeAg抑制的半数有效浓度(IC50)分别为0.078 mg/ml、3.35mg/ml、<0.078mg/ml和>10mg/ml,苦参碱脂质体对HBsAg和HBeAg的治疗指数(TI)分别为93.46和2.17,高于苦参碱的治疗指数。结论苦参碱脂质体在体外细胞培养中对HBsAg和HBeAg的分泌有较好的抑制作用,可以提高苦参碱的抗HBV作用。     

Adefovir抗乙型肝炎病毒的体外实验研究

目的在体外细胞培养研究中,观察Adefovir抗HBV的作用.方法以乙型肝炎病毒(HBV)DNA转染的细胞株2.2.15细胞为靶细胞,给药后通过检测细胞培养液中HBsAg、HBeAg和HBV DNA,对Adefovir抗HBV效果进行评价.在2.2.15细胞培养基中分别加入不同浓度的药物,培养数天后检测上清液中HBsAg和HBeAg滴度,细胞DNA抽提液检测HBV DNA;用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色分析法检测药物对细胞的毒性.结果 Adefovir加入细胞培养12d,最大无毒浓度为20μg/ml,对HBsAg抑制率为52.44%,对HBeAg抑制率为54.87%,对HBV DNA抑制率为45.68%,并有剂量依赖效应.结论 Adefovir在体外细胞培养的实验中有抗HBV病毒作用.     

The inhibitory effect of oxymatrine of hepatitis B virus in vitro

Objective To study the inhibitory effect of oxymatrine on hepatitis B virus (HBV) in vitro.Methods Microparticle enzyme immunoassay, bDNA signal amplification assay was used for determining secreted HBsAg/HBeAg in the culture medium, HBV DNA from core particles in the cytoplasm and MTT colorimetric assay was used to assay the oxymatrine cytotoxity.Results The inhibitory rates of HBsAg and HBeAg were 40.57% and 48.27% by oxymatrine at the concentration of 2000*!μg/ml. At 100-2000*!μg/ml, it can remarkably decrease the level of viral core associated-HBV DNA in the cytoplasm. No significant toxicity was shown in such concentrations.Conclusion Oxymatrine has a potential anti-HBV activity in vitro.