山稔子提取物对体外DNA氧化性损伤的保护作用

目的 观察山稔子提取物对原代体外培养淋巴细胞DNA氧化损伤的保护作用.方法 原代培养24 h的脾淋巴细胞悬液,随机分为7组,其中5组细胞用不同浓度的山稔子提取物溶液预先处理60 min,再加入50 μmol/L的H2O2,H2O2染毒组直接加入相同浓度的H2O2,空白对照组加入等量的PBS溶液,7组细胞共同在4℃下染毒20 min,收获细胞同时进行单细胞凝胶电泳,计算DNA迁移的细胞率和总彗星长度.结果 H2O2可致原代培养脾淋巴细胞的DNA严重损伤,而山稔子提取物能不同程度地降低H2O2诱导产生的DNA损伤,在10、50、100 μg/mL的浓度下.彗星细胞出现率从阳性对照组的100%分别降低为85%、65%和30%(P分别<0.05、0.01、0.01),总彗星长度也从对照组的(52.82±6.42)μm,逐渐降低为(43.68±5.59)μm、(35.80±8.75)μm、(25.35±4.32)μm(P分别<0.05、0.01、0.01).结论 山稔子提取物具有抗氧化作用,能在一定浓度范围内保护细胞显著降低氧自由基对DNA的氧化损伤.     

CBIQ对肺泡上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的:研究CBIQ对肺泡上皮细胞株A549氧化损伤的保护作用.方法:应用MTT法检测不同浓度CBIQ对正常及过氧化氢(H2O2)损伤的肺泡上皮细胞株A549的保护作用;DNA Ladder检测细胞凋亡;相差显微镜观察Hoechst染色后细胞凋亡形态的变化.结果:H2O2损伤后的A549细胞经不同浓度CBIQ处理后,细胞死亡数明显减少.浓度为1×10-2,1×10-3mmol/L的CBIQ组平均细胞存活率分别为(76.1±0.8)%,(71.3±1.0)%,较损伤组(46.3±0.9)%明显增高(P<0.01);终浓度为100μmol/L H2O2及10μmol/LCBIQ共同干预A549细胞4 h后,可检测到凋亡标志性的DNA梯形带;实验组细胞凋亡率较对照组明显下降(P<0.05).结论:在一定浓度范围内,CBIQ对氧化损伤的A549细胞生长有浓度依赖性的保护作用,并可抑制氧化损伤的A549细胞发生凋亡.     

锌、黄芪甲苷对镉致16HBE细胞DNA损伤的拮抗作用

目的探讨锌或黄芪甲苷单独或联合对镉致人支气管上皮细胞(Human bronchial epithelial cells.16HBE)DNA损伤的拮抗效果,为预防镉暴露对机体造成的遗传损伤提供理论依据。方法采用单细胞凝胶电泳(single-cellgel electrophoresis,SCGE;又称彗星试验,comet assay)技术和CASP软件分析方法,检测不同剂量的锌或黄芪甲苷单独或联合对镉致16HBE细胞DNA损伤的拮抗效果。结果染毒及药物处理8周后,低、中剂量锌组或低剂量黄芪甲苷组的细胞损伤程度指数、拖尾率、彗星尾长、尾部DNA百分含量、尾矩和Oliver尾矩均数分别为1 574、1 417、1 447;87.8%、74.6%、81.4%;(12.74±7.33)μm、(12.26±7.04)μm、(17.98±14.16)μm;(23.40±15.71)%、(23.85±17.35)%、(23.28±21.46)%;(3.81±3.84)μm、(3.78±3.78)μm、(6.09±8.15)μm;(2.81±2.23)μm、(2.74±2.26)μm、(4.18±5.00)μm,而镉染毒16HBE细胞组(阳性组)分别为2 204、96.9%、(22.43±13.32)μm、(38.56±20.40)%、(12.62±11.63)μm、(7.27±6.26)μm,均明显高于上述各组(P0.05)。中、高剂量黄芪甲苷组和低、中、高剂量联合组的细胞损伤强度指数分别为1 678、1 685、1 758、1 686、2 084,与阳性组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论锌或黄芪甲苷对镉致正常16HBE细胞的DNA损伤均具有明显的拮抗作用,而两者的联合则使这种拮抗作用减弱。     

bcr/abl融合蛋白对细胞DNA损伤修复功能的影响

目的:建立稳定表达bcr/ablP210融合蛋白的小鼠转化细胞株BaF3-P210的DNA损伤模型,探讨bcr/abl融合蛋白对细胞DNA损伤修复功能的影响.方法:彗星实验检测不同浓度H2O2诱导的BaF3-P210细胞的DNA损伤建立DNA损伤模型,以空载体转染BaF3-MIGR1细胞为对照;用彗星实验对两组细胞在DNA损伤后的修复进行不同时间段的动态观测.结果:彗星实验确定了细胞DNA损伤模型的建立条件是:采用50 μmol/L终浓度的H2O2对BaF3-MIGR1细胞和BaF3-P210细胞进行染毒,H2O2作用温度和时间均为4℃,10 min.BaF3-P210细胞与BaF3-MIGR1细胞相比DNA损伤后修复时间缩短,在损伤后60 min即可达到完全修复,而后者在损伤后120 min才能完全修复(P＜0.05).结论:建立了表达bcr/ablP210融合蛋白的小鼠转化细胞株BaF3-P210细胞的DNA损伤模型,并发现bcr/abl融合蛋白可增强BaF3-P210细胞的DNA损伤后修复能力.     

苯引起鼠胸腺细胞DNA的损伤及其机制的研究

目的研究苯对小鼠胸腺细胞DNA的损伤及其机制. 方法运用单细胞凝胶电泳技术,将苯分为3个浓度组染毒胸腺细胞,测定胸腺细胞DNA的彗星尾长.结果在有代谢活化系统存在下,苯对小鼠胸腺细胞DNA产生损伤,且呈浓度依赖.但加入抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸后,可抑制苯对胸腺细胞DNA的损伤.结论苯能引起胸腺细胞DNA损伤,可能与其代谢物有关.     

甜杏仁对H_2O_2诱导大鼠外周淋巴细胞DNA损伤的影响

目的观察甜杏仁对过氧化氢(H2O2)诱导淋巴细胞DNA损伤的影响。方法提取大鼠淋巴细胞并进行分组。除空白、阳性对照组外,实验组分别加入不同浓度的甜杏仁匀浆液(终浓度分别为50、100、150mg/L);在CO2孵育箱继续温孵24h,当细胞在培养瓶中生长近饱和时,除空白对照组外,其余各组均加入H2O2(终浓度为50μmol/L)作用5min。用单细胞凝胶电泳(SCGE)技术观察各组淋巴细胞DNA损伤情况。结果与空白对照组比较,阳性对照组,加入高、中、低剂量甜杏仁组细胞DNA损伤的程度明显增强(P<0.05);与阳性对照组比较,加入高、中、低不同剂量甜杏仁匀浆液后,细胞DNA的损伤程度明显降低(P<0.05);与低剂量甜杏仁匀浆液组比较,中、高剂量甜杏仁匀浆液组细胞DNA的损伤程度明显减轻,差异均有统计学意义(P<0.05),其中高剂量甜杏仁匀浆液对细胞DNA损伤的保护作用优于中剂量组,但2组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论甜杏仁具有一定的抗氧化作用。     

彗星电泳法检测阿魏酸 咖啡酸对脱氧核糖核酸氧化损伤的影响

目的研究在细胞水平阿魏酸、咖啡酸对脱氧核糖核酸（DNA）氧化损伤的影响。方法分别用不同浓度（50、100、500μmol/L）阿魏酸、咖啡酸对人外周血淋巴细胞预处理后,过氧化氢（H2O2）于4℃下作用10 min,并用500μmol/L咖啡酸对细胞进行处理（未经H2O2作用）,采用单细胞凝胶电泳法,以彗星尾距为指标进行测量、分析。结果阿魏酸各浓度组彗星尾距较阳性对照组都有显著减小,并随剂量的增加,尾距呈减小趋势;咖啡酸在100μmol/L时尾距较阳性对照组显著减小,而在500μmol/L时尾距较低浓度组有所增加,并与100μmol/L浓度之间差异有统计学意义;用500μmol/L咖啡酸对细胞进行处理（未经H2O2作用）,尾距较对照组显著增加。结论阿魏酸在细胞水平显示出较强的抗氧化保护DNA的作用,而且保护作用有随作用浓度增加而增强的趋势;咖啡酸保护DNA的作用较弱,高浓度组咖啡酸（500μmol/L）表现出明显的DNA损伤作用,证明咖啡酸具有抗氧化和氧化增强的双重作用。     

单细胞凝胶电泳检测烹调油烟对淋巴细胞DNA的损伤作用

目的　研究烹调油烟对体外和体内小鼠淋巴细胞DNA损伤作用。方法　采用单细胞凝胶电泳 ,检测细胞DNA单链断裂 ,观察在不同剂量及浓度下的DNA损伤情况。结果　以 10、50、10 0及 2 0 0 μg/L的油烟颗粒有机提取物染毒小鼠淋巴细胞 ,各剂量组均可引起小鼠淋巴细胞DNA损伤。以 10、2 0、4 0mg/m3的烹调油烟染毒小鼠 ,也可引起小鼠体内淋巴细胞DNA损伤。烹调油烟引起的小鼠体外和体内淋巴细胞DNA损伤均存在剂量 -效应关系 ,且整体染毒显示存在时间 -效应关系。结论　一定剂量的烹调油烟能引起小鼠淋巴细胞DNA损伤     

外源性BDE-209对小鼠精子DNA的损伤

目的采用碱性单细胞凝胶电泳技术检测BDE-209染毒小鼠精子DNA的损伤,探讨BDE-209影响受精卵发育的可能机制。方法附睾尾取精法体外获得昆明小鼠精子,分别置于HTF培养基中。按照培养基中BDE-209终浓度的不同将实验分为5组:A组:0μg/ml;B组:2.5μg/ml;C组:5μg/ml;D组:10μg/ml;E组:20μg/ml。精子培养后,做单细胞凝胶电泳,再用彗星分析软件对细胞进行分析(SCGE),比较各组精子损伤的差异。结果在SCGE试验图片中,A组平均尾长为(1.15±1.27)μm。随着BDE-209浓度的增加,D组和E组,可见到部分细胞拖尾,平均尾长分别为(2.13±1.29)μm和(2.83.±2.46)μm,明显长于A组(P<0.01)。细胞尾部DNA的含量比也明显增加(P<0.01)。D组及E组的Olive尾矩、尾长/头长比A组长(P<0.01),C组的尾长/头长比A组大(P<0.05)。小鼠精子DNA损伤中各指标变化与BDE-209浓度的相关系数均大于0.9。结论外源性的BDE-209可造成小鼠精子DNA的损伤,导致小鼠精子DNA链的断裂。外源性BDE-209对小鼠精子DNA的损伤作用呈明显的剂量-效应关系。     

动物原代细胞彗星试验敏感性筛选

目的：筛选一种动物原代敏感细胞用于彗星试验，使该试验能更广泛地对环境样品的遗传毒性进行监测。方法：用重铬酸钾(K2CrO7)和过氧化氢(H2O2)作为受试物对小鼠的肝、脾、肾细胞进行彗星试验，观察K2CrO7和H2O2对这3种细胞造成的DNA损伤来判断细胞的敏感性。结果：以K2CrO7染毒的彗星试验中肝细胞的检测阈值(10nmol／L)低于为脾和肾(100nmol／L)，以H2O2染毒的彗星试验中，在相同浓度下肝细胞迁移长度最长。结论：肝细胞具有敏感性高、自身活化能力强、取材方便、耗时短等优点，可以作为一种检测细胞应用于彗星试验对环境样品进行遗传毒性监测。     

Association between polymorphisms of DNA repair gene XRCC1 and DNA damage in asbestos-exposed workers

INTRODUCTION Asbestos is an important environmental carcinogen and remains the primary occupational concern in many countries. The most important pulmonary disease associated with asbestos fiber exposure is asbestosis (diffuse interstitial pulmonary fibro…     

微胶囊化儿茶素拮抗H2O2诱导的大鼠GMCs DNA损伤

目的:研究微胶囊化儿茶素对过氧化氢(H2O2)诱导的肾小球系膜细胞(glumreular mesangial cells,GMCs)DNA损伤修复作用及可能机制.方法:按H2O2终浓度分为0(对照组)、50 μmol/L组、100 μmol/L组、150 μmol/L组、200 μmol/L组、250 μmol/L组,每个处理组又分6,12,24 h 3个小组,筛选过氧化氢对GMCs DNA损伤研究的最适剂量与最佳时点.然后将培养细胞分生理盐水对照组、H2O2组、不同浓度儿茶素组(按终浓度又分为10.0,15.0,20.0 mg/L 3个组)与不同浓度微胶囊化儿茶素组(按胶囊中儿茶素含量终浓度又分为10.0,15.0,20.0 mg/L 3个组),共8组进行培养.利用生物化学法检测各组大鼠GMCs培养上清中羟自由基(hydroxy radical,·OH-)、丙二醛(malonydialdehyde,MDA)与总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,tSOD)含量,利用单细胞凝胶电泳技术检测大鼠GMCs DNA损伤修复.结果:(1)6 h时,100 μmoL/L过氧化氢剂量组即可引起GMCs DNA损伤,150μmoL/L组则可检测到DNA出现明显损伤;(2)微胶囊化儿茶素组GMCs慧星全长在不同剂量时与儿茶素组差异无统计学意义,微胶囊化儿茶素组GMCs慧星尾长与尾部荧光强度在不同剂量时均低于儿茶素组,差异有统计学意义(均P＜0.05,0.01);(3)10.0 mg/L时,儿茶素组与微胶囊化儿茶素两组之间相比,两组·OH-,MDA与tSOD含量差异无统计学意义;15.0 mg/L与20.0 mg/L剂量时,微胶囊化儿茶素组·OH-和MDA含量较儿茶素组降低,tSOD含量较儿茶素组增高,差异有统计学意义(均P＜0.05).结论:微胶囊化儿茶素可能是通过提高其抗氧化能力而提高其对DNA损伤保护及损伤修复能力.     

工频磁场对人晶状体上皮细胞DNA双链断裂的影响

目的:采用γH2AX免疫荧光法观察工频磁场对人晶状体上皮细胞DNA双链断裂的影响.方法:将人晶状体上皮细胞暴露于0.4 mT、50 Hz工频磁场2 h、6 h、12 h、24 h、48 h,以0.1 μmol/L的DNA损伤剂4-硝基喹啉-1-氧化物作用1 h作为阳性对照,结束处理后进行γH2AX免疫荧光检测.计算细胞平均焦点数.将细胞平均焦点数及焦点阳性细胞率作为评价细胞DNA双链断裂程度的指标.结果:工频磁场暴露24 h的平均焦点数、γH2AX焦点阳性细胞率分别为(2.93±0.43)、(27.88±2.59)%,与假辐照组(1.77±0.37)、(19.38±2.70)%相比,差异具有显著性(P<0.05);工频磁场暴露48 h的平均焦点数、γH2AX焦点阳性细胞率分别为(3.14±0.35)、(31.00±3.44)%,与假辐照组相比,差异具有显著性(P<0.01);而工频磁场暴露2 h分别为(2.11±0.61)、(22.44±5.09)%,6 h分别为(2.18±0.47)、(22.59±3.08)%和12 h分别为(2.35±0.43)、(23.35±2.93)%,与假辐照组比较,差异没有显著性(P>0.05).结论:体外实验表明,0.4 mT工频磁场长时间辐照可以使人晶状体上皮细胞DNA双链断裂增加.     

牛磺酸对乙醇醛细胞毒性的抑制作用

目的：研究牛磺酸对乙醇醛所致细胞毒性的抑制作用。 方法：采用单细胞凝胶电泳技术（彗星实验）检测牛磺酸（50 mmol•L^-1）对乙醇醛（GA, 0.1 mmol•L^-1）所致小鼠脾淋巴细胞DNA损伤的抑制作用,并用2,4-二硝基苯肼法定量检测牛磺酸对反应体系中乙醇醛含量的影响,同时设乙醇醛阳性对照组和PBS阴性对照组。 结果：在0.1 mmol•L^-1乙醇醛溶液中加入50 mmol•L^-1牛磺酸后,小鼠脾淋巴细胞DNA的损伤率较阳性对照组明显降低（P<0.01）,彗星实验的迁移距离（尾长）也显著缩短（P<0.01）,牛磺酸呈剂量依赖性明显降低反应体系中乙醇醛的含量。 结论：牛磺酸对乙醇醛的细胞毒性有明显抑制作用。     

中国仓鼠肺成纤维细胞和HeLa细胞DNA氧化损伤的自身修复能力与比较

目的:研究不同氧化相关因素对中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)和HeLa细胞DNA损伤的自身修复情况.方法:将CHL细胞和HeLa细胞用不同氧化相关因素处理一定时间[CHL细胞:过氧化氢(H2O2)25 min,重铬酸钾(K2Cr2O7)105 min,阿霉素(Dox)75 min;HeLa细胞:H2O2 25 min,K2Cr2O7 105 min],随后立即去毒培养0、0.5、1、2、3 h,以碱性单细胞凝胶电泳技术检测DNA链断裂情况.结果:①CHL细胞经H2O2、K2Cr2O7、Dox作用后引起DNA链断裂,去毒培养1 h链断裂修复明显(P<0.01);去毒培养2～3 h,前两毒剂的损伤组完全修复,而Dox组链断裂仍高于未损伤组;②HeLa细胞经H2O2、K2Cr2O7作用后引起DNA链断裂,去毒培养0.5 h链断裂明显修复(P<0.01),去毒培养1 h则完全修复;③CHL细胞和HeLa细胞损伤后修复的拖尾率与修复时间的回归系数显著不同(P<0.05).结论:两种细胞在氧化性DNA损伤后均迅速启动自身修复,但HeLa细胞比CHL细胞有更快的修复能力;同时这两种细胞由Dox所致损伤修复能力均较H2O2、K2Cr2O7所致的差.     

Effects of cadmium on hepatocellular DNA damage, proto-oncogene expression and apoptosis in rats

Objective To study the effects of cadmium on hepatocellular DNA damage,expression of proto-oncogenes c-myc,c-fos,and c-jun as well as apoptosis in rats. Methods Cadmium chloride at the doses of 5,10,and 20 μmol/kg was given to rats by i.p. and there were 5 male SD rats in each group. Hepatocellular DNA damage was measured by single cell gel electrophoresis(or comet assay),while expression of proto-oncogenes c-myc,c-fos,and c-jun in rat hepatocytes were measured by Northern dot hybridization. C-Myc,c-Fos,and c-Jun were detected with immuno-histochemical method. Hepatocellular apoptosis was determined by TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick End Labelling) and flow cytometry. Results At the doses of 5,10,and 20 μmol/kg,cadmium chloride induced DNA damage in rat hepatocytes and the rates of comet cells were 50.20%,88.40%,and 93.80%,respectively. Results also showed an obvious dose-response relationship between the rates of comet cells and the dose of cadmium chloride(r =0.9172,P<0.01). Cadmium chloride at the doses of 5,10,and 20 μmol/kg induced expression of proto-oncogenes c-myc,c-fos,and c-jun. The positive brown-yellow signal for c-myc,c-fos,and c-jun was mainly located in the cytoplasm of hepatocytes with immunohistochemical method. TUNEL-positive cells were detected in cadmium-treated rat livers. Apoptotic rates(%) of cadmium-treated liver cells at the doses of 5,10,and 20 μmol/kg were(17.24 ±2.98),(20.58±1.35),and(24.06±1.77) respectively,being significantly higher than those in the control. The results also displayed an obvious dose-response relationship between apoptotic rates and the dose of cadmium chloride(r=0.8619,P<0.05). Conclusion Cadmium at 5-20 μmol/kg can induce hepatocellular DNA damage,expression of proto-oncogenes c-myc,c-fos,and c-jun as well as apoptosis in rats.     

DNA Damage, Apoptosis and C-myc, C-fos, and C-jun Overexpression Induced by Selenium in Rat Hepatocytes

INTRODUCTION Selenium, an important nutritional trace element, is an essential component of glutathione peroxidases and thioredoxin reductases. Selenium-dependent glutathione peroxidases and thioredoxin reductases protect the body from cellular metabolism…     

H2O2对正常人淋巴细胞DNA的损伤

目的 :观察过氧化氢诱导正常人淋巴细胞DNA的损伤情况。方法 :不同浓度的过氧化氢处理正常人淋巴细胞后 ,用MTT法和彗星实验检测了淋巴细胞的损伤情况。结果 :过氧化氢对正常人淋巴细胞的损伤呈剂量依赖效应。结论 :彗星实验是一种非常灵敏的检测DNA损伤的方法 ,可将该方法用于一些天然药物的抗氧化作用的研究 ,尤其是对氧化所致DNA损伤保护性作用的研究     

Comet assay and cytokinesis-blocked micronucleus test for monitoring the genotoxic effects of X-ray radiation in humans

Objective To assess the genotoxic effects of X-ray radiation on human populations.Methods The single cell gel electrophoresis (SCGE) and cytokinesis-blocked micronucleus (CBMN) test were applied as biological dosimeters to detect DNA damage and abnormalities in human peripheral lymphocytes of subpopulation exposed to X-ray radiation. The subjects were divided into four groups: 12 radiation-patients; 13 intervention-radiation-therapy doctors; 32 radiation-diagnostians; 28 controls. Results The average comet lengths of the four groups were 128.17±4.49 μm, 88.09±5.39 μm, 72.68±2.57 μm and 32.87±0.57 μm, respectively. The difference in average comet length between any two groups was highly significant (P&lt;0.01). The average micronucleated cell (MNC) rates (‰) of the four groups were 12.33±0.85, 9.75±1.02, 8.48±0.66 and 3.18±0.36, respectively. The difference of MNC rates of Group 1 vs 3, 1 vs 4, 2 vs 4 and 3 vs 4 was highly significant (P&lt;0.01), and the difference of Group 1 vs 2 was significant (P&lt;0.05), but there was no difference of MNC rate in Group 2 vs 3 (P&gt;0.05). Conclusions This study showed that both the comet assay and the CBMN test could be used to monitor populations exposed to X-ray radiation, but the comet assay seems to be more sensitive than the CBMN test.