艾烟冷凝物对肺泡Ⅱ型上皮细胞A549形态及活性的影响

目的观察艾烟冷凝物对肺泡Ⅱ型上皮细胞A549形态及活性的影响。方法体外培养A549细胞,加入不同浓度的艾烟冷凝物,刺激24h后,应用荧光显微镜、四甲基偶氮唑蓝(MTT)法来观察其对A549的细胞形态以及细胞活性的影响。结果显微镜下观察发现艾烟冷凝物在0.05g/L时细胞形态基本无变化,在高于0.05g/L时细胞形态逐渐改变、细胞数量逐渐下降,具有明显的浓度依赖性。MTT法结果显示与对照组相比,A549的细胞活性在0.09g/L浓度时P=0.985,无统计学差异;在0.06,0.12g/L浓度时统计结果分别为P=0.036和0.013,有明显差异,但差异不大;在高于0.12g/L时,P值均小于0.01,具有极显著性差异,细胞活性呈逐渐下降趋势,具有浓度依赖性。结论在24h刺激时间内,低浓度的艾烟冷凝物有可能对A549细胞无影响,高浓度的艾烟冷凝物对细胞有一定毒性作用,这种毒性作用具有明显的浓度依赖性。     

昆明山海棠总生物碱对肺腺癌A549细胞株增殖抑制作用的实验研究

目的观察昆明山海棠总生物碱(alkaloids from tripterygium hypoglaucum hutch,THHa)对人肺腺癌细胞系A549体外生长的影响.方法采用MTT比色法检测THHa对A549细胞生长的抑制作用,测定其吸光度D(490)值;用倒置和荧光显微镜观察药物作用后A549细胞形态的变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果随着THHa浓度的增加和作用时间的延长,A549细胞增殖受到抑制,抑制率逐渐升高,具有浓度和时间依赖性.流式细胞仪结果显示,随着处理浓度和作用时间的增加,细胞的凋亡率逐渐升高.结论THHa能明显抑制A549细胞增殖,并可诱导A549细胞凋亡.     

新藤黄酸体外抑制肺腺癌A549细胞增殖的作用

目的研究新藤黄酸（Gambogenic acid,GNA）抑制肺腺癌细胞株A549增殖的作用及其相关机制。方法不同浓度GNA分别作用A549细胞24、48和72 h,甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）比色法检测药物对A549细胞增殖的抑制率,吖啶橙/溴化乙啶（acridine orange/ethidium bromide,AO/EB）染色荧光显微镜检测细胞的凋亡;乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）法检测GNA对A549细胞损伤作用。结果 MTT法检测结果显示,GNA在0-8μmol/L浓度范围内、24-72 h时间范围内对A549的生长有明显抑制作用,且呈浓度和时间依赖关系;相差显微镜观察表明GNA作用A549细胞48 h后,细胞变圆,呈半贴壁状态;AO/EB染色荧光显微镜观察显示GNA作用48 h后,细胞出现典型的凋亡特征;LDH实验进一步证实GNA在0-4μmol/L浓度范围内对正常细胞未见明显毒性作用。与空白对照组比较,8μmol/L GNA显著降低LDH释放。结论 GNA具有体外抑制肺腺癌细胞株A549增殖的作用,在0-4μmol/L浓度范围内GNA可能是通过诱导细胞凋亡而发挥抑制A549细胞增殖的作用。     

尼美舒利对人肺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响

目的 体外研究选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂尼美舒利对人肺癌细胞株A549增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 采用噻唑蓝(MTT)比色法、流式细胞仪(FCM)、吖啶橙染色结合荧光显微镜观察细胞形态等技术,研究尼美舒利对人肺癌细胞株A549细胞增殖的抑制和促进凋亡的影响.结果 MTT比色法显示塞来昔布对A549细胞有较强的抑制作用,呈时间和浓度依赖性;FCM显示有凋亡峰出现,凋亡率在(12.69±0.87)%～(43.87±1.53)%;尼美舒利使G0/G1期细胞比例升高,S期和G2/M期比例下降,呈一定效应关系;荧光显微镜下可见典型的细胞凋亡形态学特征:细胞体积缩小、细胞核固缩,凋亡小体形成等.凋亡比例呈剂量和时间依赖.结论 尼美舒利体外能够显著抑制A549细胞增殖,诱导凋亡,可能与诱导凋亡和阻止细胞周期进展有关.     

尼美舒利对人肺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响

目的体外研究选择性环氧化酶-2（COX-2）抑制剂尼美舒利对人肺癌细胞株A549增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法采用噻唑蓝（MTT）比色法、流式细胞仪（FCM）、吖啶橙染色结合荧光显微镜观察细胞形态等技术,研究尼美舒利对人肺癌细胞株A549细胞增殖的抑制和促进凋亡的影响。结果MTT比色法显示塞来昔布对A549细胞有较强的抑制作用,呈时间和浓度依赖性;FCM显示有凋亡峰出现,凋亡率在（12.69±0.87）%～（43.87±1.53）%;尼美舒利使G0/G1期细胞比例升高,S期和G2/M期比例下降,呈一定效应关系;荧光显微镜下可见典型的细胞凋亡形态学特征：细胞体积缩小、细胞核固缩,凋亡小体形成等。凋亡比例呈剂量和时间依赖。结论尼美舒利体外能够显著抑制A549细胞增殖,诱导凋亡,可能与诱导凋亡和阻止细胞周期进展有关。     

氨甲喋呤对映体药物对A549人肺腺癌细胞株增殖抑制作用及诱导凋亡作用

目的 探讨氨甲喋呤对映体[(+)MTX,(-)MTX]对A549细胞的增殖抑制作用及诱导凋亡作用。方法 采用培养的A549细胞,应用MTT比色法分析其活性;用光学显微镜和荧光显微镜观察细胞的形态学变化;碘化丙啶(PI)单染流式细胞术检测细胞周期;DNA梯度电泳检测凋亡。结果 在0.1~150 μmol·L^-1范围内,(+)MTX和(-)MTX作用于A549细胞24,48,72 h,均抑制细胞A549增值,但抑制强度为(+)MTX>(-)MTX,倒置显微镜和荧光显微镜观察不同浓度(+)MTX和(-)MTX作用A549细胞不同时间后,出现细胞不同程度的形态学改变;用10 μmol·L^-1的(+)MTX和(-)MTX作用A549细胞48 h后,PI单染流式细胞术检测A549细胞周期的影响,表明氨甲喋呤对映体干扰A549细胞DNA合成;DNA梯度电泳检测结果发现MTX作用组有凋亡条带出现,其中(+)MTX最为明显。结论 (+)MTX和(-)MTX对A549细胞的抗增殖作用具有化学结构的立体选择性,(+)MTX的抗A549细胞增殖作用明显强于(-)MTX。     

姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖活性的影响

目的探讨姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖活性的影响.方法采用细胞计数法绘制亲代A549和A549/DDP细胞生长曲线,MTY法测定A549/DDP对顺铂的耐药指数以及姜黄素对A549/DDP细胞抑制率.将不同浓度姜黄素作用于A549/DDP细胞24h 后,Hoechst33258染色荧光显微镜下观察细胞核形态,流式细胞仪检测细胞凋亡率.以20μmol/L的姜黄素作用细胞24h 后,流式细胞仪分析细胞周期.结果亲代A549细胞和A549/DDP细胞的生长曲线相似,倍增时间分别为(33.24±0.24)h和(32.88±0.11)h(P＞0.05);顺铂处理A549和A549/DDP细胞72h 后,半数抑制浓度(IC50)分别为13.57 μmol/L 和146.79 μmol/L,A549/DDP细胞对顺铂的耐药指数为10.82.姜黄素对A549/DDP细胞增殖有抑制作用,并且呈时间浓度依赖性(P＜0.05).姜黄素作用后,Hoechst染色显示A549/DDP细胞核缩小变形,致密浓染荧光成团块分布.流式细胞仪分析结果示细胞凋亡率呈明显剂量依赖关系(P＜0.05).20 μmol/L的姜黄素作用细胞24h,引发G2期阻滞.结论姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖具有抑制作用,并呈时间、浓度依赖.其作用可能是通过阻滞细胞周期进程和诱导细胞凋亡来实现的.     

周氏克金岩方提取部位抗A549细胞增殖的研究

目的 观察周氏克金岩方提取部位对肺癌A549细胞生长和凋亡的影响.方法 MTT法观察不同浓度的克金岩方提取部位对肺癌A549细胞和正常人胚肺成纤维细胞HFL-I生长增殖的影响.Hoechst33258染色后在荧光显微镜下观察A549细胞凋亡的形态变化,同时用流式细胞仪进行细胞周期检测分析.结果 不同浓度提取部位E对A549细胞有不同程度的生长抑制作用;作用48 h后,荧光显微镜下可见A549细胞核固缩,染色质凝聚等凋亡形态学特征;流式检测显示Go/G1期细胞增多,并有凋亡细胞出现.结论 周氏克金岩方提取部位E能够显著抑制肺癌细胞的生长,并对人体正常细胞(胚肺成纤维细胞)无显著影响.     

洛铂诱导人肺腺癌A549细胞凋亡机制的实验研究

目的探讨洛铂(LBP)诱导人肺腺癌A549细胞凋亡作用机制。方法取对数生长期的A549细胞分为阴性对照组和实验组(分别加入2.5、5和10μmol/L LBP)。采用倒置相差显微镜观察各组A549细胞形态学改变,利用流式细胞仪检测各组A549细胞凋亡率,RT-PCR检测凋亡A549细胞中Bax、Bcl-2的表达。结果显微镜下观察到LBP抑制A549细胞的增殖;流式细胞仪结果显示LBP诱导A549细胞凋亡,并呈浓度和时间依赖性;RT-PCR结果显示LBP可使A549细胞Bax基因表达上调,Bcl-2基因表达下调,二者呈负相关。结论 LBP明显诱导人肺腺癌A549细胞凋亡,通过线粒体途径参与其凋亡过程。     

重组TRAIL诱导肺腺癌细胞系细胞凋亡的实验研究

目的 研究重组可溶性TRAIL作用于人肺癌系A549细胞培养物后,细胞凋亡的形态变化和凋亡率测定.方法 MTT比色法测定重组TRAIL对肺腺癌A549细胞的生长抑制率.TRAIL处理前后细胞核、质的形态学变化.经不同浓度重组TRAIL处理后A549细胞的双色荧光变化.定量重组TRAIL与亚毒性浓度的CDDP联合使用,对肺腺癌A549细胞生长抑制率和凋亡率的影响.结果 重组TRAIL对A549细胞生长有明显的抑制作用,TRAIL 100 μg·L-1作用24 h后,抑制率达到41.6%.细胞形态学观察显示,A549肺腺癌细胞经50 μg·L-1TRAIL处理24 h后,可观察到典型的细胞凋亡特点.3.3 mg·L-1的CDDP与50 μg·L-1重组TRAIL合用,A549细胞凋亡率高达75.2%.结论 重组TRAIL具有明显的诱导多种恶性肿瘤细胞凋亡的作用;化疗药物CDDP能加强重组TRAIL的抗肿瘤活性.     

紫杉醇对人肺腺癌细胞系A549生长抑制作用的研究

目的:评价紫杉醇对肺腺癌细胞A549的生长抑制作用,以及诱导凋亡与G2-M期阻滞的关系。方法:紫杉醇不同浓度、不同时间分别处理A549细胞,采用MTT试验和流式细胞术进行检测及分析。结果:紫杉醇对A549的细胞毒性呈时间依赖性(P<0.05),10~1 000 nmol/L的浓度对A549生长的影响差异不显著(P>0.05)。紫杉醇浓度≤100 nmol/L时,G2-M期细胞的比率随浓度增加而增高(P<0.05);凋亡的比例在低浓度范围内(0.1~10 nmol/L)呈浓度依赖性,浓度进一步增加,反而降低。10 nmol/L作用时,凋亡的发生呈时间效应;1 000 nmol/L作用时,G2-M期阻滞表现出时间效应,但不如低浓度诱导凋亡出现的早。紫杉醇诱导的凋亡和G2-M期阻滞无相关性(P>0.05)。结论:紫杉醇对A549的生长抑制作用呈时间依赖性,但在一定浓度范围内剂量效应不明显;低浓度紫杉醇虽然对G2-M期阻滞的影响较小,但却能比高浓度更早诱发凋亡,延长作用时间亦可达到有效抑制肿瘤细胞增殖的目的。     

黄芪总苷对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究黄芪总苷(TA)对人肺腺癌A549细胞增值及凋亡的影响.方法:采用不同药物浓度作用于人肺腺癌A549细胞,应用MTT、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术分析药物对细胞的影响.结果:TA对A549细胞有明显的生长抑制及凋亡作用,并呈剂量、时间依赖性.DNA凝胶电泳显示出特征性凋亡梯状带.结论:在一定条件下,TA可抑制人肺腺癌细胞增殖,抑制作用具有明显的浓度和时间依赖性,同时可诱导其凋亡,凋亡可能与细胞周期阻滞有关.     

得力生诱导肺癌细胞株A549细胞凋亡及其对survivin基因表达的影响

目的探讨中成药得力生诱导肺癌细胞株A549细胞凋亡及其对survivin基因表达的影响。方法采用MTT法测定细胞增殖抑制率,在显微镜下观察细胞凋亡的形态特点,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用逆转录聚合酶连反应（RT—PCR）法测定survivin mRNA的表达。结果（1）得力生在4mL／L-100mL／L浓度范围内可抑制A549细胞增殖,此作用与药物体积浓度无明显相关关系,但该作用具有时间依赖性（r=0．991,P=0．001）。（2）20mL／L浓度的得力生在体外可诱导A549细胞凋亡,且其作用具有时间依赖性（r=0．997,P=0．049）。（3）RT—PCR结果显示,得力生可明显抑制A549细胞中表达survivin,与对照组相比,差异具有统计学意义（r=4．333,P〈0．05）。结论得力生可抑制A549细胞增殖,诱导A549细胞凋亡,其作用机制可能与抑制survivin基因表达有关。     

CBIQ对肺泡上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的:研究CBIQ对肺泡上皮细胞株A549氧化损伤的保护作用.方法:应用MTT法检测不同浓度CBIQ对正常及过氧化氢(H2O2)损伤的肺泡上皮细胞株A549的保护作用;DNA Ladder检测细胞凋亡;相差显微镜观察Hoechst染色后细胞凋亡形态的变化.结果:H2O2损伤后的A549细胞经不同浓度CBIQ处理后,细胞死亡数明显减少.浓度为1×10-2,1×10-3mmol/L的CBIQ组平均细胞存活率分别为(76.1±0.8)%,(71.3±1.0)%,较损伤组(46.3±0.9)%明显增高(P<0.01);终浓度为100μmol/L H2O2及10μmol/LCBIQ共同干预A549细胞4 h后,可检测到凋亡标志性的DNA梯形带;实验组细胞凋亡率较对照组明显下降(P<0.05).结论:在一定浓度范围内,CBIQ对氧化损伤的A549细胞生长有浓度依赖性的保护作用,并可抑制氧化损伤的A549细胞发生凋亡.     

吉西他滨对人非小细胞肺癌A549、H1299细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究吉西他滨对人非小细胞肺癌A549及H1299细胞增殖及凋亡的影响。方法:应用MTT法及流式细胞技术测定不同浓度的吉西他滨对A549及H1299细胞体外增殖的抑制作用。结果:(1)MTT法检测不同浓度(1.25、2.5、5、10、20、40、60μg/ml)吉西他滨分别作用于A549及H1299细胞24、48、72h后,其对A549和H1299细胞的抑制作用逐渐增强,且具有一定的剂量和时间依赖性,但是随着时间的延长,吉西他滨对A549具有药物耐受性,而对H1299具有药物敏感性;(2)A549及H1299细胞随着培养时间的延长,细胞生长逐渐进入对数期,后进入平台期;(3)倒置显微镜下观察发现,A549及H1299对照组细胞贴壁生长,生长状态良好,形态大多数为多角形、或梭形,贴壁牢固,细胞间连接紧密。随着药物作用时间的增加,细胞逐渐皱缩、坏死、碎裂;(4)流式细胞仪检测不同浓度的吉西他滨(0、2.5、5、10、20、40μg/ml)对A549及H1299细胞凋亡具有明显的剂量依赖关系。结论:吉西他滨对A549及H1299细胞增殖有较强的抑制作用;呈现一定的浓度抑制作用和时间抑制作用。随着时间的延长,吉西他滨对A549细胞耐药,而对H1299细胞敏感。     

二甲双胍丁酸盐对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡与迁移能力的影响

目的 研究不同浓度的二甲双胍丁酸盐(MFB)作用不同时间后对人肺腺癌细胞A549增殖、凋亡与迁移能力的影响.方法 用梯度浓度(0、0.5、1、2,、4、8 mmol/L)的MFB对离体培养的A549细胞进行处理,在作用24、48 h后,用 MTT法检测MFB对A549细胞增殖的抑制率;干预24、48 h后用流式细胞术分析A549细胞的凋亡率.用划痕实验分析 MFB对A549细胞株迁移能力的影响.结果 MTT实验表明,MFB对A549细胞的增殖具有抑制作用,并且在一定浓度范围内呈现出浓度和时间依赖性(P<0. 05).流式细胞术检测结果显示:实验组细胞凋亡率大于对照组(P< 0.05),具有一定的时间和浓度依赖性(P<0. 05).划痕实验结果显示实验组细胞迁移率小于对照组,高浓度用药组细胞迁移率小于低浓度用药组(P<0. 05),且药物作用48 h后细胞迁移率<24 h(P<0.05).结论 MFB在体外能够抑制人肺腺癌A549细胞的增殖和迁移,促进其凋亡,其强度可能与其浓度和作用时间有关.     

神经生长因子对β-淀粉样蛋白诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的:研究神经生长因子(NGF)对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导鼠肾上腺嗜咯瘤细胞(PC12)凋亡的作用,从而探讨NGF对阿尔茨海默病的治疗作用。方法:以PC12细胞为神经元的细胞模型,将Aβ和NGF+Aβ分别加入培养的PC12细胞中,采用MTT法观察细胞存活率,相差显微镜观察细胞形态改变,hochest33258观察细胞核变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,比较两组间差异。结果:Aβ组细胞存活率随作用时间延长而下降(P<0.01),胞体变小,轴突退化变形,可见特征性的凋亡细胞核,并检测到典型的凋亡峰;而NGF+Aβ组细胞存活率明显增高,凋亡率明显减少(P<0.01)。结论:一定浓度的Aβ2535能诱导PC12细胞凋亡,NGF对Aβ诱导的PC12细胞凋亡具有保护作用。     

水飞蓟素可通过MAPK信号转导通路促进肺腺癌A549细胞凋亡

目的:探讨水飞蓟素(SM)对人肺腺癌细胞(A549)的抗癌作用及其分子机制. 方法:采用倒置显微镜和电子显微镜等形态学检测、四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、流式细胞仪(FCM)技术结合PI及Annexin V双标记染色以及MAPK的磷酸化活性检测方法. 结果:SM对人肺腺癌A549细胞的增殖有抑制作用;SM作用A549细胞48 h后,随着浓度的增加,倒置显微镜下可见细胞数目减少,有些细胞变小、变圆;透射电镜观察发现,随着SM作用浓度的增加,A549细胞中逐步出现增多的凋亡细胞,凋亡细胞表现出典型的超微结构特征;流式细胞仪检测的结果发现,随着药物作用时间的延长,A549细胞的G1期细胞比例增多,S期细胞明显减少,G2期细胞略有减少,并出现一明显的凋亡峰. SM可以抑制A549细胞中ERK的活性,并在一定程度上提高p38和JNK的活性. 结论:SM可以在体外抑制人肺腺癌细胞A549的增殖作用,并诱导其凋亡. SM可能通过抑制A549细胞中ERK的活性,并提高p38和JNK的活性发挥其诱导作用.     

重楼醇提物对非小细胞肺癌细胞活性影响的实验研究

目的:观察中药重楼醇提物对非小细胞肺癌细胞活性的影响。方法:将人大细胞肺癌NCIH460细胞株、人肺腺癌A549细胞株悬液分别接种于96孔细胞培养板中,24 h细胞贴壁后依次加入不同浓度的含重楼醇提物培养液进行干预,并设RPMI-1640培养液为空白对照组。药物干预48 h后,采用MTT法测定不同浓度药物对NCI-H460、A549细胞增殖的影响,使用Hoechst荧光染色法检测对细胞凋亡的影响。结果:与空白对照组比较,重楼醇提物在不同浓度下对NCI-H460和A549两株肺癌细胞的生长均有抑制作用(P0.05~0.001),且呈浓度依赖性;对两种细胞的半数抑制浓度(IC_(50))分别为30μg/ml和15μg/ml。不同浓度的重楼醇提物作用于NCI-H460、A549细胞后,随着药物浓度的增加,凋亡细胞数亦明显增加,并伴随出现细胞的坏死、轮廓不清,甚至细胞解体等。结论:重楼醇提物可明显降低NCI-H460和A549细胞的活性并促进其凋亡,且呈剂量依赖性。     

槲皮素对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的研究槲皮素对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响.方法采用MTT试验、流式细胞仪检测槲皮素对体外培养的人肺腺癌A549细胞的抑制作用和细胞周期的变化,电镜观察超微结构变化,免疫组化技术检测槲皮素对凋亡相关蛋白Bcl-2、p53表达的影响.结果MTT结果显示槲皮素对体外培养的A549具有明显的增殖抑制作用,且具有一定的浓度和时间依赖性;流式细胞仪检测发现,30μg/ml槲皮素作用A549细胞48h后能将细胞阻滞于G0/G1期,且在细胞周期G1峰的左侧出现了凋亡峰;电镜观察发现有凋亡的特征性改变;免疫组化结果显示,槲皮素使Bcl-2表达下调,而上调p53蛋白的表达.结论槲皮素能抑制肺腺癌A549细胞的生长,阻止细胞由G0/G1期向S期和G2/M期移行并诱发细胞凋亡,其诱发A549细胞凋亡的机制可能与上调促凋亡蛋白p53表达和下调凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达有关.