全人源化PD-L1单抗功能活性及其对人肺腺癌HCC827细胞毒性作用的研究

目的 初步探索自行研制的全人源化PD-L1单抗的功能活性及其对人肺腺癌HCC827细胞毒性作用的影响.方法 利用十二烷基硫酸钠聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定阿特朱单抗及自研PD-L1单抗的纯度;以阿特朱单抗为阳性对照,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测该自研PD-L1单抗的结合活性和竞争性阻断活性;细胞阻断试验分别测定两抗体的细胞阻断活性;流式细胞术(FACS)测定人肺腺癌 HCC827细胞表面PD-L1的表达;检测两抗体的抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(ADCC)效应.结果 SDS-PAGE鉴定出高纯度阿特朱单抗及自研PD-L1单抗;ELISA法检测结果显示自研PD-L1单抗、阿特朱单抗均可与人PD-L1结合并且阻断PD-L1与PD-1结合;自研PD-L1单抗及阿特朱单抗均可以阻断两细胞表面分子PD-L1与PD-1的结合,其EC50分别为0. 208 5,0. 154 8 μg/ml,在一定浓度上两者差异无统计学意义;FACS结果显示人肺腺癌HCC827细胞高表达PD-L1分子;细胞毒性实验结果表明当效应细胞与靶细胞比值一定时,自研PD-L1单抗与阿特朱单抗对人肺腺癌HCC827细胞都有强的毒性作用.结论 该自研全人源化PD-L1单抗有一定的功能活性,可通过阻断细胞表面的PD-L1与PD-1的结合而减弱T细胞受体信号,并可通过ADCC效应发挥一定的抗肿瘤作用.     

二甲双胍丁酸盐对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡与迁移能力的影响

目的 研究不同浓度的二甲双胍丁酸盐(MFB)作用不同时间后对人肺腺癌细胞A549增殖、凋亡与迁移能力的影响.方法 用梯度浓度(0、0.5、1、2,、4、8 mmol/L)的MFB对离体培养的A549细胞进行处理,在作用24、48 h后,用 MTT法检测MFB对A549细胞增殖的抑制率;干预24、48 h后用流式细胞术分析A549细胞的凋亡率.用划痕实验分析 MFB对A549细胞株迁移能力的影响.结果 MTT实验表明,MFB对A549细胞的增殖具有抑制作用,并且在一定浓度范围内呈现出浓度和时间依赖性(P<0. 05).流式细胞术检测结果显示:实验组细胞凋亡率大于对照组(P< 0.05),具有一定的时间和浓度依赖性(P<0. 05).划痕实验结果显示实验组细胞迁移率小于对照组,高浓度用药组细胞迁移率小于低浓度用药组(P<0. 05),且药物作用48 h后细胞迁移率<24 h(P<0.05).结论 MFB在体外能够抑制人肺腺癌A549细胞的增殖和迁移,促进其凋亡,其强度可能与其浓度和作用时间有关.