围绝经期非器质性失眠妇女肝郁与PI3K/Akt信号通路的相关性研究

[目的]探讨肝郁影响围绝经期非器质性失眠的可能免疫学机制。[方法]收集围绝经期非器质性失眠妇女150例,通过四诊信息的采集获得患者的肝郁证素积分、肝郁分级及匹兹堡睡眠质量指数(PSQI),运用蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测外周血单个核细胞(PBMC)中磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)和磷酸化蛋白激酶B(pAkt)的蛋白表达量,实时荧光定量PCR法(RT-QPCR)检测PBMC中PI3K、Akt的mRNA含量,酶联免疫吸附法(ELISA)检测白介素1-β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。观察围绝经期非器质性失眠妇女的肝郁分级、PI3K/Akt信号通路各指标(PI3K、Akt、pAkt的蛋白表达量,PI3K mRNA、Akt mRNA含量;IL-1β、TNF-α水平)和PSQI之间的相互关系。[结果] 1)围绝经期非器质性失眠妇女中,肝郁分级与PSQI、PI3K/Akt信号通路各指标均呈正相关(P0.01);IL-1β、TNF-α均与PSQI呈正相关(P0.01);PI3K、Akt与其相应的基因水平分别呈正相关(P0.01)。2)PSQI、PI3K/Akt信号通路各指标在不同肝郁分级间的差异均具有统计学意义(P0.01),且肝郁分级越高,PSQI和PI3K/Akt信号通路各指标含量越高。[结论]肝郁是诱发或加重围绝经期非器质性失眠的病因之一。是通过影响PI3K/Akt信号通路,促使PBMC中PI3K mRNA和Akt mRNA含量增加,经基因表达后使PI3K、Akt和pAkt蛋白含量上升,经一系列级联反应后,进一步提高血清中IL-1β与TNF-α的含量,最终影响围绝经期妇女非器质性失眠。故今后研究可考虑通过阻断PI3K/Akt信号通路以改善围绝经期妇女非器质性失眠。     

基于PI3K/Akt通路豨莶草抗脑缺血再灌注损伤作用机制研究

目的:基于PI3K/Akt通路研究豨莶草抗脑缺血再灌注(IR)损伤的作用机制。方法:将40只SD大鼠随机分成假手术组、模型组和豨莶草不同剂量(0.45、0.90、1.35 g/kg)组,每组8只,各组给予相应的药物,连续灌胃给药14d。IR 24h后,对各组大鼠进行神经功能缺损评分和病理学检查,ELISA法检测缺血脑组织中IL-1β、IL-6、TNF-α和NF-κB含量,RT-PCR和Western-blot技术检测缺血脑组织中PI3K、Akt mRNA和蛋白的表达。结果:与假手术组相比,模型组大鼠神经功能缺损评分明显降低(P<0.01),梗死灶周围炎性细胞浸润程度和范围显著增加,缺血脑组织中PI3K、Akt的mRNA和蛋白表达明显升高(均P<0.01),IL-1β、IL-6、TNF-α和NF-κB含量显著升高(均P<0.01);0.90 g/kg和1.35 g/kg豨莶草能显著降低IR模型大鼠神经功能缺损评分(均P<0.01),梗死灶周围炎性细胞浸润程度和范围显著减少,PI3K、Akt的mRNA和蛋白表达明显减少(均P<0.01),IL-1β、IL-6、TNF-α和NF-κB含量明显降低(均P<0.01)。结论:豨莶草抗IR损伤可能是通过调节PI3K/Akt信号通路抑制NF-κB、TNF-α、IL-1β和IL-6含量实现的。     

瑞芬太尼通过激活PI3K/Akt/eNOS通路减轻肾缺血/再灌注损伤

目的 探讨术中应用瑞芬太尼对肾缺血/再灌注损伤的作用及机制。方法 取雄性C57/BL小鼠50只,随机分为5组：假手术组、缺血/再灌注损伤组（I/R组）、缺血/再灌注损伤+磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）抑制剂LY294002处理组（I/R+LY294002组）、缺血/再灌注损伤+瑞芬太尼处理组（I/R+RF组）、缺血/再灌注损伤+LY294002处理+瑞芬太尼处理组（I/R+RF+LY294002组）,每组10只。各组大鼠分别于手术结束6 h后取静脉血或肾脏组织,采用全自动生化分析仪测定静脉血尿素氮（BUN）、血肌酐（SCr）水平,采用蛋白质印迹法检测肾脏组织PI3K/蛋白激酶B（Akt）/内皮型一氧化氮合酶（eNOS）通路相关蛋白的表达,H-E染色观察肾脏组织炎症细胞聚集情况,酶联免疫吸附试验测定肾脏组织中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1β、IL-6、IL-10等炎性因子的表达,实时定量PCR测定肾脏组织中抗凋亡因子Bcl2和凋亡因子半胱氨酸蛋白酶3（Caspase-3）的mRNA表达。结果 与假手术组相比,I/R组小鼠静脉血BUN、SCr水平均升高,肾脏组织中PI3K表达及磷酸化Akt（p-Akt）/Akt、磷酸化eNOS（p-eNOS）/eNOS均降低,炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10释放均增加,Bcl2 mRNA表达下降而Caspase-3 mRNA表达增高,差异均有统计学意义（P均<0.05）,并且肾脏组织中炎症细胞聚集增多。给予瑞芬太尼处理后,I/R+RF组BUN、SCr水平较I/R组降低,肾脏组织中PI3K表达及p-Akt/Akt、p-eNOS/eNOS均增高,TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10释放均减少,Bcl2 mRNA表达上调、Caspase-3 mRNA表达下调,与I/R组相比差异均有统计学意义（P均<0.05）,炎症细胞募集也减轻。而使用PI3K抑制剂LY294002处理后,I/R+RF+LY294002组BUN、SCr水平升高,肾脏组织中p-eNOS/eNOS降低,IL-1β、L-6释放增加,Caspase-3 mRNA表达上调,与I/R+RF组相比差异均有统计学意义（P均<0.05）,炎症细胞募集也增加。结论 肾缺血/再灌注损伤时,瑞芬太尼通过激活PI3K/Akt/eNOS通路减轻肾脏组织炎症反应和细胞凋亡发挥肾脏保护作用。     

病理性瘢痕组织中黏着斑激酶、蛋白激酶B和核因子кB的表达

目的探讨病理性瘢痕组织中整合素介导的磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)信号转导途径中的关键酶黏着斑激酶(FAK)、蛋白激酶B(PKB)和核因子кB(NFкB)的表达。方法采用免疫组织化学方法检测40例病理性瘢痕、20例非病理性瘢痕和20例正常皮肤组织中FAK、磷酸化PKB(p-PKB)和NFкB的表达。结果病理性瘢痕组织中FAK、p-PKB、NFкB的阳性表达率较非病理性瘢痕和正常皮肤组织均升高(P<0.05)。病理性瘢痕组织中NFкB与p-PKB、FAK以及p-PKB与FAK表达均呈正相关(P均<0.05)。结论病理性瘢痕的形成可能与激活整合素介导的PI3K信号转导通路、促进成纤维细胞增殖有关。     

低氧刺激THP-1细胞炎症因子的表达及其相关通路的研究

目的观察低氧是否促进人单核细胞炎症因子的分泌,以及探讨其是否通过PI3K/Akt和低氧诱导因子(HIF-1α)信号通路而发挥作用。方法 1体外低氧(1%O2)培养人源单核细胞系THP-1,24 h;2分别加入PI3K抑制剂(LY294002)和HIF-1α抑制剂(KC7F2)预处理THP-1细胞后再进行低氧干预;3在常氧下,分别加入Akt激动剂(胰岛素)和HIF-1α激动剂(二甲氧乙二酰甘氨酸,DMOG)对THP-1细胞进行干预。Western blot检测p-Akt和HIF-1α蛋白表达的水平,ELISA法检测IL-1β和TNF-α分泌的变化。结果与对照组(常氧培养)比较,低氧干预后THP-1细胞p-Akt、HIF-1α的蛋白表达增加,IL-1β、TNF-α分泌增加,差异有统计学意义(P0.05);与低氧组(低氧培养)比较,PI3K抑制剂预处理能显著降低p-Akt、HIF-1α的蛋白表达,HIF-1α抑制剂预处理能降低HIF-1α的蛋白表达,但不影响p-Akt表达水平,两种药物预处理都能减少IL-1β和TNF-α分泌,差异有统计学意义(P0.05);与对照组比较,Akt激动剂能增加p-Akt、HIF-1α的蛋白表达,HIF-1α激动剂能增加HIF-1α的蛋白表达,但不影响p-Akt表达水平,两种药物预处理都能增加IL-1β和TNF-α分泌,差异有统计学意义(P0.05)。结论低氧可能是通过激活PI3K/Akt/HIF-1α信号通路,促进THP-1细胞炎症因子IL-1β和TNF-α的分泌,从而促进慢性炎症的发展。     

牛蒡甙元对老年大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探究牛蒡甙元对老年大鼠肾缺血再灌注损伤模型的影响.方法 建立老年大鼠肾缺血再灌注损伤模型,采用随机数字表法将大鼠随机分为6组:假手术组(Sham组)、牛蒡甙元组(ACR组)、肾缺血再灌注模型组(RIRI组)、RIRI+ACR(10 mg/kg)组、RIRI+ACR(20 mg/kg)组和RIRI+ACR(50 mg/kg)组进行后续实验.试剂盒检测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平;苏木精-伊红(HE)染色检测肾组织病理损伤;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)染色检测细胞凋亡;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)水平;蛋白免疫印迹检测肾损伤分子-1(KIM-1)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、胞内磷脂酰肌醇激酶(PI3K)、p-PI3K、蛋白激酶B(Akt)、p-Akt蛋白表达水平.加入PI3K/Akt通路抑制剂LY294002后,将大鼠随机分为5组:Sham组、RIRI组、RIRI+ACR(50 mg/kg)组、RIRI+LY294002组和RIRI+ACR+LY294002组.West-ern blot检测各组大鼠PI3 K、p-PI3 K、Akt、p-Akt蛋白表达水平;试剂盒检测Scr、BUN水平;ELISA检测TNF-α、IL-6、IL-8水平.结果 与RIRI组相比较,RIRI+ACR(20、50 mg/kg)组大鼠Scr、BUN水平降低,病理损伤程度改善,KIM-1、NGAL蛋白水平降低,凋亡细胞数减少,cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白水平降低,TNF-α、IL-6、IL-8水平降低,p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt比值升高.结论 牛蒡甙元对老年大鼠肾缺血再灌注损伤具有保护作用.     

新风胶囊通过miR-23a-3p/PTEN/PI3K/AKT/mTOR抑制骨关节炎CD4+T与软骨细胞共培养的免疫炎症

目的 观察新风胶囊（XFC）含药血清通过调控miR-23a-3p /PTEN/PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制骨关节炎（OA）CD4+T与软骨细胞共培养中免疫炎症反应的作用机制。方法 选取30例OA患者（OA组）及30例正常人（NC组）检测miR-23a-3p、10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因（PTEN）、磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（AKT）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的表达,观察临床指标：红细胞沉降率（ESR）、超敏C反应蛋白（hs-CRP）、IgA、IgG、IgM、补体 C3、补体C4的表达,并观察通路与临床指标的相关性。观察 30 例 OA 患者经 XFC 治疗后通路及临床指标的变化。分离及提取 OA-CD4 +T 细胞,transwell小室培养OA-CD4+T细胞与OA-CH,SD大鼠给药灌胃制备XFC含药血清;采用CCK8法检测OA-软骨细胞的细胞增殖;双荧光素酶报告实验分析miR-23a-3p和PTEN的靶向关系;RT-PCR技术检测共培养细胞中miR-23a-3p、PTENmRNA、PI3KmRNA、AKTmRNA、mTORmRNA 的表达;采用 ELISA 法检测 IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α的水平;Western blotting 检测PTEN、PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR蛋白表达。结果 与NC组相比,OA组miR-23a-3p、PTEN、PI3K、AKT、IL-1β、IL-6、TNF-α表达显著上调,而PTEN、IL-10表达显著下调（P<0.01）;相关性分析表明：miR-23a-3p与IL-6呈正相关（P<0.01）,PI3K与IL-10呈正相关,mTOR与IL-6、IL-10、补体C3、补体C4呈正相关（P<0.01或P<0.05）;加入XFC含药血清,miR-23a-3p及PI3K/AKT/mTOR通路被抑制,L-1β、IL-6、TNF-α表达水平下降、IL-10表达水平升高（P<0.01）;Model组miR-23a-3p、PI3K、AKT、mTOR、IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平升高,PTEN、IL-10表达水平降低（P<0.01）;miR-23a-3p经过表达后,miR-23a-3p、PI3K、AKT、mTOR、IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平显著升高,PTEN、IL-10表达水平显著降低（P<0.01或P<0.05）;XFC组IL-1β、IL-6、TNF-α表达降低,IL-10表达升高,miR-23a-3p、PI3K、AKT、mTOR表达下调,PTEN表达上调（P<0.01或P<0.05）。结论 XFC可通过下调miR-23a-3p的表达,抑制PTEN/PI3K/AKT/mTOR通路的活化,改善IL-1β、IL-6,IL-10和TNF-α的表达,降低OA患者炎症反应。     

甲状腺功能亢进症模型大鼠心肌细胞PI3K/Akt通路与胰岛素抵抗的关系

目的探讨甲状腺功能亢进症模型大鼠心肌细胞PI3K/Akt通路与胰岛素抵抗的关系。方法建立甲状腺功能亢进症模型大鼠,随机分为模型组、LY294002组（PI3K抑制剂）、740Y-P组（PI3K激动剂）,每组12只;另取12只SD大鼠设为对照组。分组处理后,酶联免疫吸附法（ELISA）检测甲状腺功能指标血清游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）、游离甲状腺素（FT4）、促甲状腺素（TSH）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）水平;测定空腹血糖水平（FBG）、胰岛素抵抗指数（IRI）;TUNEL染色检测心肌细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法检测大鼠心肌组织PI3K/Akt通路蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠血清FT3、FT4、TNF-α及IL-6水平、心肌细胞凋亡比例、FBG、IRI显著升高（P<0.05）,TSH、心肌组织p-PI3K/PI3K及p-Akt/Akt显著降低（P<0.05）;与模型组比较,LY294002组大鼠血清FT3、FT4、TNF-α及IL-6水平、心肌细胞凋亡比例、FBG、IRI升高（P<0.05）,TSH、心肌组织p-PI3K/PI3K及p-Akt/Akt降低（P<0.05）;740Y-P组大鼠血清FT3、FT4、TNF-α及IL-6水平、心肌细胞凋亡比例、FBG、IRI降低（P<0.05）,TSH、心肌组织p-PI3K/PI3K及p-Akt/Akt升高（P<0.05）。结论PI3K/Akt通路可调控甲状腺功能亢进症模型大鼠胰岛素抵抗,激活该通路,可使甲状腺功能恢复正常,减轻炎症反应,抑制心肌细胞凋亡,改善胰岛素抵抗。     

PI3K/Akt/mTOR信号通路在大肠腺瘤恶性转化中的表达及意义

目的探讨大肠腺瘤恶性转化中PI3K/Akt/mTOR信号通路分子的表达及意义。方法采用免疫组织化学技术检测PI3K/Akt/mTOR信号通路的主要分子在46例大肠低级别、高级别腺瘤及腺癌中的表达。结果PI3K表达强度在各组织间差异有统计学意义(P<0.01),其在腺癌中表达最强;磷酸化的(p-)Akt、mTOR表达强度在各组织间差异也有统计学意义(P<0.01);PI3K/Akt/mTOR信号通路负性调控蛋白PTEN表达率各组织间差异有统计学意义(P<0.05),随大肠腺瘤的恶性转化其表达降低,并与p-mTOR表达呈负相关(P<0.05)。结论 PI3K/Akt/mTOR信号通路分子在大肠腺瘤恶性转化中表达异常,与腺瘤癌变进展相关,可望成为临床干预的分子靶点。     

富氢液通过PI3K通路减轻大鼠脑缺血再灌注损伤

目的探讨富氢液对大鼠脑缺血再灌注致海马神经元凋亡及PI3K/Akt/FoxO1信号通路表达的影响。方法采用线栓法阻塞大鼠大脑中动脉,建立大鼠局灶性脑缺血/再灌注(I/R)模型,SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血/再灌注组(I/R组)和富氢液处理组(HRS组),每组10只;各组于再灌注后24 h,ELISA检测血清中炎症因子IL-6、TNF-α及IL-1β的变化;HE染色观察海马变化,TUNEL法观察脑组织细胞凋亡情况;Western blot法检测海马p-PI3K、Akt、caspase-3和FoxO1蛋白表达变化。结果与Sham组相比,I/R组锥体细胞排列疏松,大量锥体细胞死亡,海马凋亡细胞增多,血清炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α、表达显著增加(P0.05),脑组织中pPI3K、Akt、caspase-3表达显著升高,FoxO1蛋白降低,两组间比较均具有统计学差异(P0.05);与I/R组相比,HRS组炎症因子显著降低;p-PI3K、Akt、caspase-3表达水平均显著降低,,FoxO1蛋白升高(P0.05)。结论富氢液可以减轻缺血再灌注导致的脑损伤,其机制可能与PI3K/Akt/FoxO1信号通路相关。     

膀胱癌PI3K/Akt/mTOR信号通路与免疫抑制性细胞的相关分子机制研究

目的探讨膀胱癌磷脂肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路与CD4~+CD25~+Treg细胞及其免疫功能的相关分子机制。方法通过N-甲基亚硝基脲(MNU)经尿道膀胱灌注法建立SD大鼠膀胱癌模型。PI3K抑制剂Wortmannin处理膀胱癌大鼠。Western-blot检测PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白表达;流式细胞仪检测大鼠组胸腺、脾脏CD4~+CD25~+Treg细胞占CD4~+T细胞百分比分;Real time-PCR检测大鼠血浆中白细胞介素-2(IL-2)和IL-10 mRNA表达。结果相对于生理盐水对照组,Wortmannin组中雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和转化生长因子-β(TGF-β)的表达明显降低(P均0.05),而且CD4~+CD25~+Treg细胞数量显著降低(P0.05),同时IL-10 mRNA表达水平明显下降(P0.05),而IL-2表达水平明显上升(P0.05)。结论膀胱癌中PI3K/Akt/mTOR信号通路调控CD4~+CD25~+Treg细胞的增殖和分泌功能。     

微囊藻毒素-LR长期低剂量暴露诱导小鼠肾脏结构和功能损伤：基于激活PI3K/AKT信号通路

目的 探讨微囊藻毒素-LR（MC-LR）长期低剂量暴露对肾脏的毒性作用及其潜在的分子机制。方法 构建MC-LR慢性染毒体内模型,将20只C57BL/6小鼠随机分成4组,分别给予含0、1、60、120 μg/L MC-LR的饮用水染毒12月。构建MC-LR染毒体外模型,将HEK293细胞分为对照组,MC-LR染毒组,PI3K抑制剂LY294002组,LY294002+MC-LR组。在体内模型中监测小鼠体质量和肾脏质量,观察小鼠肾脏组织损伤。在体内外模型中检测小鼠肾脏和HEK293细胞的肾功能指标,炎症因子IL-6、TNF-α和IL-10的mRNA表达水平以及PI3K/AKT通路蛋白的相对表达水平。结果 体内模型中：各组小鼠体质量变化的总体趋势一致,肾脏绝对质量和肾脏指数也无明显改变。与对照组相比,60和120 μg/L染毒组小鼠出现肾结构损伤,BUN和SCr水平显著上升,且差异有统计学意义（P<0.05）。促炎因子IL-6和TNF-α水平在60和120 μg/L染毒组中上调,抗炎因子IL-10在所有染毒组中下降,且差异有统计学意义（P<0.05）。p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT的蛋白相对表达量均在60和120 μg/L染毒组上升,且差异有统计学意义（P<0.05）。体外模型中：在HEK293细胞中,BUN和Cr水平在MC-LR组呈升高趋势而在MC-LR+LY294002组中显著下降,且差异有统计学意义（P<0.05）。促炎因子IL-6和TNF-α 的mRNA表达水平在MC-LR组呈升高趋势而在MC-LR+LY294002组中显著下降,抗炎因子IL-10的mRNA表达水平在MC-LR组呈下降趋势而在MC-LR+LY294002组中显著升高,且差异均具有统计学意义（P<0.05）。p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT的表达水平也同样在MC-LR组上调而在MC-LR+LY294002组中显著下调,且差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 MC-LR可通过调控PI3K/AKT信号通路,激活炎症反应,诱导小鼠肾脏结构和功能损伤。     

槲皮素对人前列腺癌PC-3细胞自噬及磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路的影响

目的 观察槲皮素对人前列腺癌PC-3细胞活力、凋亡、自噬及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的影响。方法 体外培养PC-3细胞,采用CCK-8法检测PC-3细胞活力,TUNEL染色检测PC-3细胞凋亡,吖啶橙染色观察PC-3细胞自噬小泡,GFP-LC3质粒转染分析观察PC-3细胞自噬小体,Western blot分析检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3融合蛋白(LC3)、Beclin-1和PI3K/Akt/mTOR 信号通路蛋白的表达。结果 槲皮素以浓度-时间依赖性的方式抑制PC-3细胞活力,并诱导细胞凋亡;能够增加PC-3细胞自噬小泡和自噬小体的数量;能够升高PC-3细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ及Beclin-1表达,同时降低磷酸化-PI3K、磷酸化-Akt和磷酸化-mTOR的表达。结论 槲皮素可能是通过抑制PI3K/Akt/mTOR 信号通路诱导PC-3细胞发生自噬。     

PI3K/Akt/mTOR信号转导通路在鼻息肉中的表达

目的:研究磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)与哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在鼻息肉中的表达及相关性,探讨PI3K/Akt/mTOR信号转导通路在鼻息肉发病过程中的作用.方法:鼻息肉组织28例和正常下鼻甲组织12例,用免疫组化Elivison二步法及Western blot检测鼻息肉组与对照组组织中PI3K、Akt与mTOR的表达,比较两组之间的表达差异.结果:鼻息肉组PI3K、Akt与mTOR免疫阳性细胞数及着色强度均明显高于对照组,图像分析显示鼻息肉组PI3K、Akt、mTOR的积分光密度(IOD,103/HP)分别为30.36±3.78、32.70±2.30、35.67±1.26,与对照组3.63 ±1.55、2.38±1.36、2.79±0.78相比有显著性差异(P值均＜0.01);Spearman等级相关分析显示,鼻息肉组PI3K、Akt、mTOR表达密切相关(P＜0.01);Western blot检测发现PI3K、Akt与mTOR在鼻息肉组织中特异性表达强度高于对照组(P＜0.01).结论:鼻息肉组织中PI3K、Akt和mTOR表达均上调,三者有协同表达关系,提示可能是通过PI3K/Akt/mTOR信号转导通路使炎性细胞凋亡受到抑制,导致慢性炎症反应,最终形成鼻息肉.     

PI3K/AKT信号通路在促进口腔鳞癌侵袭转移中的作用

目的:研究PI3K/AKT信号通路在TNF-α诱导上皮间质转化(EMT)发生时促口腔鳞癌侵袭转移中的作用。方法:采用免疫蛋白印迹实验(western blot)方法、实时荧光定量RT-PCR,分别从蛋白质、mRNA水平检测炎症微环境中PI3K/AKT信号通路抑制剂作用前后关键因子表达变化。结果:TNF-α作用后,PI3K/AKT信号通路中关键因子AKT蛋白表达升高,E-钙黏蛋白mRNA表达降低,而加入相应抑制剂LY294002后,AKT的蛋白表达被抑制,E-钙黏蛋白较前者表达升高。结论:抑制PI3K/AKT信号通路可降低TNF-α诱导EMT发生促口腔鳞癌细胞侵袭转移的作用。     

黄芩苷对脂多糖诱导人牙龈成纤维细胞表达炎症因子的影响

  目的  从PI3K/Akt/NF-κB信号通路探讨黄芩苷对脂多糖(LPS)诱导的人牙龈成纤维细胞(HGFs)损伤的影响及机制。  方法  运用LPS诱导建立人牙龈成纤维细胞损伤模型,设置正常对照组、模型组和模型+黄芩苷(1、10和20μg/mL)组,每组设3个复孔,经不同浓度的黄芩苷干预后,Western blotting检测p-Akt、Akt、NF-κB p65等蛋白的表达,采用qPCR法检测炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6等基因的表达。用PI3K抑制剂LY294002作用半小时后,再用黄芩苷干预,qPCR和Western blotting法检测Akt、p-Akt、NF-κB p65、TNF-α、IL-1β、IL-6等基因和蛋白的表达。  结果  与模型组比较,黄芩苷低、中、高剂量能有效降低TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA的表达水平,促进p-Akt蛋白表达,抑制NF-κB p65核蛋白表达,并呈剂量依赖性(均P < 0.05)。与模型组比较,模型+黄芩苷组p-Akt表达升高(P＜0.05),NF-κB p65表达降低(P＜0.01)。PI3K抑制剂LY294002作用后,模型+黄芩苷组p-Akt/Akt表达量(0.63±0.18)较模型组(0.56±0.14)升高(P＜0.05),模型+黄芩苷组NF-κB p65、IL-6、IL-1β、TNF-α表达量较模型组降低(均P＜0.01)。黄芩苷对LY294002作用后,p-Akt/Akt、NF-κB p65、IL-6、IL-1β、TNF-α表达量与模型组比较,差异无统计学意义。  结论  黄芩苷可抑制LPS诱导的人牙龈成纤维细胞损伤引起的炎症反应,其作用机制可能与促进Akt的磷酸化,抑制NF-κB p65核转录和炎性因子的释放有关。      

Nintedanib对Ang Ⅱ诱导肾脏成纤维细胞产生细胞外基质的拮抗作用

目的探讨尼达尼布(Nintedanib)对抗血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ, Ang Ⅱ)诱导的肾脏成纤维细胞产生细胞外基质的作用及其机制。方法 Ang Ⅱ处理大鼠肾脏成纤维细胞(NRK-49F),Western 印迹法检测相关分子的蛋白表达量,DHE荧光探针法检测活性氧簇(ROS)的水平。结果 肾脏成纤维细胞中Ang Ⅱ通过诱导PI3K/Akt 信号通路的激活,引起纤维连接蛋白和胶原蛋白Ⅰ的积聚。Nintedanib能抑制Ang Ⅱ诱导的PI3K/Akt信号通路的激活。Nintedanib还可以抑制Ang Ⅱ引起的ROS水平升高。结论 Nintedanib可以抑制Ang Ⅱ诱导的ECM成分升高,其作用机制与其抑制PI3K/Akt激活并抑制ROS产生有关。     

磷脂酰肌醇3激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶/核转录因子κB信号通路对细胞凋亡影响的研究进展

磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(Akt)/核转录因子κB(NF-κB)信号通路是有核细胞内重要的传导通路之一,在调节细胞增殖、凋亡中起着重要作用。大量研究证明PI3K/Akt/NF-κB信号通路的激活可以影响细胞凋亡。本文就PI3K/Akt/NF-κB信号通路对细胞凋亡影响作用进行综述。     

EGCG对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及作用机制探讨

目的 观察没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对大鼠心肌缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury, IRI)的保护作用,并探讨其作用机制。方法 建立大鼠急性心肌缺血再灌注（I/R）模型,将大鼠分为假手术组(SO组)、I/R组和EGCG组。EGCG 组（10 mg/kg）在再灌注开始前5 min予以静脉滴注。采用心电图记录仪观察I/R过程中室性心律失常发生频次并评分,检测大鼠血清中心肌酶学〔乳酸脱氢酶（LDH）和肌酸激酶（CK）〕水平,心肌组织中炎症因子〔肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6和白介素-8（IL-6和IL-8）〕的表达,心肌组织HE染色进行病理学观察,Western blot检测磷脂酰肌醇3-激酶 (phosphatidyl inositol 3-kinase, PI3K ) / 蛋白激酶B (Akt)通路蛋白中磷酸化的PI3K调节亚基(p-p85)和Akt蛋白（p-Akt)表达水平。结果 I/R组大鼠各类室性心律失常的频次增加明显,其心律失常严重程度评分(P<0.01)、血清中LDH与CK表达水平、心肌组织中TNF-α、IL-6和IL-8的表达水平均高于SO组 (P<0.05);EGCG组心律失常严重程度评分、LDH与CK的表达水平、心肌组织中TNF-α、IL-6和IL-8的表达水平均低于I/R组(P<0.05),并且EGCG组大鼠心肌病理学损伤程度轻于I/R组,EGCG组大鼠心肌中p-p85与p-Akt表达水平高于I/R组(P<0.05)。结论 EGCG能通过激活PI3K/Akt信号通路抑制炎症反应水平,有效减轻IRI。     

抑制剂PI-103对786-O细胞株PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的:探讨抑制剂PI-103对786-O细胞株PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响。方法:本文建立PI3K抑制剂作用786-O细胞模型,CCK-8法检测PI-103的IC50值,Western blot法检测PI-103作用后细胞内pAkt蛋白表达水平。结果:786-O细胞72 h的IC50为(9.06±0.06)μmol/L,在此浓度下,细胞内p-Akt蛋白的表达水平显著降低(P<0.01)。结论:PI-103通过抑制PI3K来调控PI3K/Akt/mTOR信号通路下游分子,此信号通路在肾细胞癌发生发展中起着重要作用,为肾细胞癌的分子靶向治疗提供理论依据。