启动子CMV和EF1α对人胰岛素基因在BHK细胞中表达的影响

为了建立近似于临床PTCA及支架术后再狭窄的动物模型。经颈动脉入路将镍钛记忆合金自展支架植入犬股动脉，12周后进行病理学观察。支架植入段血管平滑肌细胞大量增殖。胶原合成增加，新生内膜形成，造成管腔明显狭窄。经颈动脉将记忆合金支架植入犬股动脉方法操作简单，内膜增生可靠，病理过程近似临床再狭窄。是研究支架术后再狭窄，尤其是平滑肌细胞迁移。增殖的可靠动物模型。     

激肽释放酶转基因大鼠模型的建立

目的建立KLK1转基因大鼠模型。方法腹腔注射PMSG-HCG（150-150IU/kg）超排不同周龄（4-8周）SD大鼠比较超排效果的差异，以可用于注射胚胎数作为评判标准确定最佳超排周龄。构建pBC-klk1转基因构件，经酶切、纯化后通过显微注射方法导入SD大鼠受精卵原核并移植到同期受孕的SD受体母鼠输卵管内。出生后仔鼠用PCR和Southern方法检测鼠尾DNA鉴定基因型，通过RT-PCR和免疫组化方法检测klk1基因表达。结果4-8周SD大鼠超排后分别获得受精卵14±14.8、30±15.2、13.3±13.7、13±14.7、8±5.7，5周龄大鼠超排效果最好，与其他周龄大鼠相比有显差异，P〈0.05；显微注射1538枚卵，移植685（44.53%）枚卵于31只受体输卵管中，12（12/31，38.7%）只怀孕，共产仔62只，经PCR检测获得6只阳性鼠，Southern检测3只阳性。对Southern检测阳性转基因大鼠子代进行RT-PCR检测和免疫组化分析证明klk1基因在肾脏、胰腺和乳腺内表达。结论成功建立klk1基因表达的转基因大鼠模型，该模型是高血压病研究的理想动物模型。     

用于胚胎干细胞分离培养的饲养层的制作

饲养层对胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ES cell)的培养与建系十分重要。实验选择小鼠原代成纤维细胞(Priimary mouse embmy fibroblasts,PMEF)作为饲养层,这种饲养层能够较好地维持ES细胞未分化状态和二倍体核型。除选用经典的14．5d的孕鼠制做原代成纤维细胞外,我们还选了10d、18d、的孕鼠制成饲养层,通过ES-D3的传代培养结果表明：10-18d的PMEE均可作为饲养层用,10代内的饲养层培养细胞均适宜。     

富氢液对脓毒血症大鼠肠黏膜屏障保护作用及机制研究

目的探讨富氢液对脓毒血症大鼠肠黏膜屏障的影响及其可能机制。方法清洁级SD大鼠30只,随机分为假手术组(sham组)、脓毒血症组(SEP组)及富氢液处理组(C组),每组10只。sham组仅开腹,显露盲肠;C组和SEP组行盲肠结扎穿孔术,再分别静脉给予富氢液和等量生理盐水。3组大鼠均于模型建立4 h后处死,观察小肠组织病理学结果;酶联免疫吸附法(ELISA)检测肠脂肪酸结合蛋白(I-FABP)、D-乳酸、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)浓度;蛋白质印迹(Western-blot)法检测B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bax、Caspase-3蛋白表达水平。结果光镜下sham组未出现病理损伤,SEP组损伤较重,C组损伤较轻。与sham组比较,SEP组I-FABP、D-乳酸升高[(817.12±50.39)ng/ml比(378.54±40.50)ng/ml;(513.84±42.91)ng/ml比(329.98±38.11)ng/ml,P<0.05]。与SEP组比较,C组I-FABP、D-乳酸降低[(548.92±42.19)ng/ml比(817.12±50.39)ng/ml;(437.89±36.12)ng/ml比(513.84±42.91)ng/ml,P<0.05]。与sham组比较,SEP组TNF-α、IL-6、IL-10升高[(196.51±30.31)ng/ml比(75.54±10.21)ng/ml;(68.69±3.39)ng/ml比(20.97±2.38)ng/ml;(149.61±20.21)ng/ml比(80.69±13.51)ng/ml,P<0.05];与SEP组比较,C组TNF-α、IL-6降低,IL-10升高[(118.47±10.14)ng/ml比(196.51±30.31)ng/ml;(45.36±5.14)ng/ml比(68.69±3.39)ng/ml;(178.52±26.31)ng/ml比(149.61±20.21)ng/ml,P<0.05]。与sham组比较,SEP组Bcl-2蛋白表达升高,Bax与Caspase-3降低(P<0.05);与SEP组比较,C组Bcl-2蛋白表达降低,Bax与Caspase-3升高(P<0.05)。结论富氢液对脓毒血症大鼠肠黏膜屏障有保护作用,其机制与抑制凋亡相关因子有关。     

STK15的表达对NIH3T3细胞的影响

目的构建pcDNA3.1-STK15表达质粒,探讨STK15基因对小鼠成纤维细胞(NIH3T3)的影响。方法构建pcDNA3.1-STK15质粒,将其转染NIH3T3,应用RT-PCR、免疫细胞化学和Western印迹方法检测STK15的表达;MTT法检测细胞增殖能力;Transwell检测细胞侵袭能力。结果转染pcDNA3.1-STK15质粒的NIH3T3细胞在48 h有STK15的表达,而且该细胞的增殖速度和穿透Matrigel胶的细胞数均明显高于对照组(P0.05)。结论STK15基因具有增加细胞增殖和细胞侵袭力的功能,进而形成肿瘤。     

具G418抗性NIH3T3细胞饲养层的制备

背景：建立具有抗药（新霉素或潮霉素）性的饲养层细胞是转染外源目的基因胚胎干细胞阳性克隆的筛选必备条件。建成的具有抗药性的NIH3T3细胞系可用于胚胎干细胞其他目的基因的筛选。 目的：建立具有G418抗性的NIH3T3细胞系，用于转染pTet—on基因的胚胎干细胞阳性细胞克隆筛选的饲养层。 设计：细胞培养观察及DNA检测。 单位：中国医科大学实验动物部。 材料：NIH3T3细胞由中国医科大学细胞生物教研室惠赠，pWL／neo质粒为美国哈佛大学医学院金壮教授惠赠。G418、白血病抑制因子（胚胎干细胞GRO 106U／mL）、DMEM为GIBCOBRL产品，丝裂霉素-C、DIG标记及检测试剂盒为Roche产品，脂质体为Invitrogen产品，均购自沈阳联星生物技术有限公司。 方法：①通过脂质体转染的方法，将含有neo基因的质粒pWL／neo导入NIH3T3细胞中。②将细胞传至25mL培养瓶中，加入梯度浓度的G418继续培养，通过观察细胞生长及死亡情况测定G418对NIH3T3细胞最小致死量。③将转染的细胞进行传代，挑取单个细胞的克隆至24孔培养板继续进行筛选扩增，选用正常的NIH3T3细胞加入相同剂量的G418的选择性培养基作为筛选的阴性对照。④采用较低的细胞密度铺板，加入含最小致死量G418的DMEM培养基进行再次筛选；同时选用正常的NIH3T3细胞为对照，使用含有最小致死量G418及未加G418的DMEM培养基进行培养，采用光学显微镜对G418抗性NIH3T3细胞进行观察。⑤选用具有G418抗性的NIH3T3细胞和小鼠胚胎成纤维细胞分别作为饲养层细胞进行传代，采用光学显微镜对培养后胚胎干细胞-D3细胞进行观察，并制备细胞DNA，对其进行PCR和southern blot鉴定。 主要观察指标：①G418对NIH3T3细胞最小致死量的测定结果。②G418抗性NIH3T3细胞的筛选结果。③G418抗性NIH3T3细胞的生长观察结果。④胚胎干细胞-D3细胞生长观察结果及G418抗性NIH3T3细胞的鉴定。 结果：①G418对NIH3T3细胞最小致死量为500mg／L。②经过500mg/L G418压力筛选后，获得了抗G418细胞克隆。③抗性NIH3T3细胞的形态和生长速度与正常NIH3T3细胞没有差异。④饲养层培养的胚胎干细胞呈集落形状生长，边缘光滑，保持未分化的状态。用特异性核苷酸引物检测抗性细胞基因组DNA，可以扩增出对应的核苷酸片段，Southern blot鉴定结果表明neo基因片段已整合入G418抗性NIH3T3细胞中。 结论：成功地培育了G418抗性NIH3T3细胞，生长在G418抗性NIH3T3细胞饲养层上胚胎干细胞细胞基本保持正常胚胎干细胞细胞特征：     

实验动物福利立法的必要性和可行性

1　实验动物福利立法的社会背景目前 ,世界上已有 10 0多个国家和国际组织设立了动物福利法 ,其中 ,有的已经有近 2 0 0年的历史。而在中国 ,为实验动物福利立法 ,还是一件新事物。用于科学研究的实验动物理应得到尊重和爱护 ,但仍存在不人道地对待实验动物的种种行为。这为我国在与国际间进行科技交流设置了无形障碍 ,引起实验动物科学界有识之士的共鸣和评议。他们提出 ,动物福利立法应先从实验动物福利立法开始。自 2 0 0 2年以来 ,在中国先后召开了 4次以动物福利及其立法为主题的国际会议。目前 ,已有越来越多的各界人士呼吁在我国应该…     

动物实验室房间消毒方法的研究

目的 探求动物实验室行之有效的消毒灭菌方法。方法 用甲醛，过氧乙酸，新洁尔灭溶液对动物实验室进行空气消毒，用血琼脂培养基进行落下菌培养。结果 各消毒剂均可清除或杀灭环境中的有害微生物，但使用不当会使灭菌效果降低或给实验动物造成伤害。结论 日常工作中先采用物理消毒，再采用化学药物消毒可取得良好的消毒效果。     

WNK4转基因小鼠的建立

目的制备WNK4转基因小鼠模型。方法通过显微注射法把线状WNK4基因注射入FVB小鼠受精卵雄原核中，然后将受精卵细胞移植于受体假孕母鼠输卵管内，发育产生子代小鼠。结果产生出112只F0代小鼠。鼠尾基因组DNA经PCR法检测1只阳性，并进行测序。结论通过显微注射法，外源基因WNK4在FVB小鼠基因组中得到整合，将对研究WNK4基因功能和与高血压疾病发病机制的作用和关系提供了有效的动物模型。     

电针对阿尔茨海默病小鼠海马神经元突触损伤及对CREB/BDNF信号通路的影响

目的探讨电针对APP/PS-1转基因小鼠海马神经元突触损伤及对CREB/BDNF信号通路的影响。方法将7月龄APP/PS-1转基因小鼠随机分为模型组、电针组及药物组,每组10只;另取10只同龄C57BL/6小鼠作为对照组。电针组针刺百合、印堂穴,并接入电针仪,20 min/次/天,共治疗15天;药物组给予盐酸多奈哌齐灌胃治疗;对照组及模型组不予以治疗。Morris水迷宫检测各组小鼠学习记忆能力;筑巢实验检测小鼠智力改变;尼式染色检测各组小鼠海马尼氏体变化;Western blot检测小鼠海马区SYN、PSD95、GAP43、CREB、pCREB及BDNF蛋白表达。结果 Morris水迷宫结果显示,与对照组相比,模型组小鼠逃避潜伏期增加,穿越平台次数减少,在目标象限停留时间减少;电针及药物组小鼠逃避潜伏期减少,穿越平台次数增加,在目标象限停留时间延长。模型组筑巢分数较对照组明显降低,电针及药物组小鼠筑巢分数明显增加。电针及药物组小鼠海马区神经元排列整齐且尼氏体数量增加,SYN、PSD95及GAP43蛋白表达增加。电针及药物组小鼠海马区pCREB及BDNF蛋白表达较模型组增加。结论电针减轻小鼠海马神经元突触损伤,改善APP/PS-1转基因小鼠的学习记忆能力,可能与调控CREB/BDNF信号通路相关蛋白表达有关。