Caspase-3，Bcl-2在骨关节炎软骨中的表达

目的检测和分析Caspase-3和Bcl-2在大鼠实验性骨关节炎软骨中的表达。方法采用Hulth法制作大鼠膝关节OA动物模型，于术后8周取标本并观察关节软骨形态，HE染色，免疫组化检测蛋白表达，RT—PCR技术检测mRNA表达。结果OA模型侧关节软骨的Caspase-3蛋白和mRNA表达均高于对照侧，而Bcl-2蛋白和mRNA表达则低于对照侧。结论OA软骨中的caspase-3的表达上调以及Bcl-2的表达下调，可能是OA的发病机制之一。     

细胞因子IL-1β和TNF-α在骨关节炎软骨中mRNA表达的变化及意义

目的探讨IL-1β和TNF-α mRNA在大鼠实验性骨关节炎软骨表达的变化和意义。方法采用Hulth法制作大鼠膝关节0A动物模型，于术后8周取标本并观察关节软骨形态，RT—PCR技术检测mRNA表达。结果0A模型侧关节软骨的IL-1β和TNF-α mRNA表达均高于对照侧。结论OA软骨中存在IL-1β和TNF-α mRNA表达的上调，可能是OA的发病机制之一。     

p53在骨关节炎软骨组织中的表达及与关节软骨细胞自噬的关系研究

目的:研究p53在骨关节炎软骨组织中的表达及与关节软骨细胞自噬的关系。方法:对20例骨关节炎患者(OA组)及10例正常膝关节软骨组织(对照组),用实时定量PCR(real-time PCR)、免疫组化等方法检测p53及Beclin1在膝关节软骨中的表达与分布,并对两者进行相关性分析。结果:p53在OA组的表达明显高于正常对照组(P0.05),OA组关节软骨组织中Beclin1的表达量明显低于正常对照组(P0.01),p53与Beclin1在软骨组织中表达呈负性相关(r=-0.629,P0.05)。结论:骨关节炎中p53的高表达能够抑制软骨细胞自噬,从而减弱软骨细胞对凋亡抵抗能力,促进软骨细胞凋亡。     

吲哚美辛对大鼠骨关节炎模型关节软骨中IL-6表达的影响

目的研究环氧合酶-2(COX-2)抑制剂对大鼠骨关节炎模型关节软骨中白介素-6(IL-6)表达的影响。方法健康雄性Wistar大鼠30只,随机分为对照组、骨性关节炎组(OA组)和COX-2抑制剂(吲哚美辛)处理组,每组10只。利用膝关节注射4%的木瓜蛋白酶溶液的方法制作骨关节炎模型。采用关节炎评分法评定各组大鼠平均关节炎指数,Western blot方法检测关节软骨中IL-6蛋白的表达变化,RT-PCR方法检测关节软骨中IL-6 mRNA的表达变化。结果 OA模型组随着造模时间的延长,关节出现了重度红肿现象,对照组关节无任何异常变化;与OA模型组比较,吲哚美辛组的关节炎症反应呈现消退现象。术后8周检测关节软骨中IL-6蛋白及mRNA表达的变化,结果发现IL-6蛋白及mRNA在对照组大鼠关节软骨中仅有微量表达,而在OA组大鼠关节软骨表达则显著升高(P0.01);与OA组相比,吲哚美辛组大鼠关节软骨中IL-6蛋白表达显著降低(P0.01)。结论吲哚美辛可通过下调IL-6蛋白的表达参与骨关节炎的发病机制。     

大鼠关节软骨酸敏感离子通道的表达

目的探讨大鼠关节软骨酸敏感离子通道(ASICs)的表达及其意义。方法利用RT-PCR和Western blot检测ASICs在大鼠关节软骨的表达。结果大鼠关节软骨存在ASIC1a、ASIC2a和ASIC3 mRNA及其蛋白的表达。结论ASICs在大鼠关节软骨组织的表达,其有望成为关节炎治疗的新靶点。     

TWEAK及其受体Fn14在大鼠骨关节炎(OA)关节软骨和滑膜中的表达

目的 检测肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子(tumor necrosis factor-like weak inducer of apoptosis,TWEAK)及其受体成纤维细胞生长因子诱导因子14 (fibroblast growth factor inducible 14,Fn14) mRNA及蛋白在大鼠骨关节炎(osteoarthritis,OA)关节软骨和滑膜中的表达情况,初步了解TWEAK及其受体Fn14在OA发病中的作用.方法 42只大鼠中随机选取18只行膝关节前交叉韧带切断(anterior cruciate ligament transection,ACLT)制作OA模型作为实验组,另外18只接受手术但不切断前交叉韧带作为假手术组,剩余6只作为正常对照组.饲养至1、2、4周时,实验组及假手术组随机各取6只处死,6只正常对照组在第4周处死,采集所有动物关节软骨及滑膜组织,用实时定量PCR及Western blot分别检测TWEAK和Fn14在mRNA及蛋白水平的表达情况.结果 术后第2和第4周实验组动物关节滑膜中TWEAK及Fn14的mRNA及蛋白表达水平显著上调,与假手术组及正常对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);术后第2周实验组动物关节软骨中TWEAK及Fn14的mRNA及蛋白表水平与假手术组及正常对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 TWEAK及其受体Fn14的mRNA及蛋白表达水平在大鼠OA关节软骨及滑膜组织中的表达显著增高,它们可能是参与OA的重要细胞诱导因子.     

苗药皮部熏洗对骨关节炎大鼠软骨中p53、bcl-2表达的影响

目的:探讨苗药皮部熏洗法治疗骨关节炎的部分机理。方法:取42只健康清洁级大鼠,随机选取8只不造模作为正常对照组,其余34只采用4%木瓜蛋白酶关节腔注射建立大鼠OA模型,1周后随机选取2只检测模型成功与否,将造模成功的32只大鼠随机分为模型组、熏组、洗组和熏洗组,治疗4周后处死动物,切取关节,免疫组化染色法测定p53、bcl-2的表达。结果:正常组大多数标本未见p53与bcl-2表达,造模后见到散在的p53与bcl-2表达,熏洗后bcl-2的表达有逐渐增强、p53的表达有逐渐减弱的趋势。结论 (:1)通过苗药皮部熏洗防治的干预,对OA模型大鼠的痛行为及膝关节活动有明显的改善作用。(2)苗药皮部熏洗通过上调软骨bcl-2的表达和下调p53的表达,来延缓软骨细胞的凋亡。(3)熏洗法治疗大鼠OA比单独运用熏法、洗法效果更明显。     

通痹灵对CIA大鼠软骨细胞凋亡及其调控基因p53、Bcl-2表达作用的比较研究

目的探讨中药通痹灵在类风湿关节炎(RA)发病中对软骨细胞凋亡及其基因p53、Bcl-2调控的作用机制.方法采用大鼠CIA模型,分别予通痹灵、甲氨蝶呤片(MTX)、雷公藤治疗36 d,关节软骨免疫组化染色,计算机图像分析系统对软骨p53、Bcl-2基因蛋白及细胞凋亡的表达进行分析,比较各组差异.结果 CIA大鼠软骨细胞中存在高度活跃的p53蛋白表达,通痹灵可以下调细胞中过度活跃的p53蛋白表达,MTX高剂量及雷公藤高剂量的作用不显著;大鼠软骨细胞Bcl-2蛋白表达呈抑制状态,通痹灵低剂量组明显上调Bcl-2蛋白的低表达水平,其次为雷公藤高剂量组;大鼠软骨细胞存在明显的凋亡亢进,通痹灵明显下调细胞凋亡水平.结论通痹灵能通过调整过度表达的p53蛋白与低表达的Bcl-2蛋白,抑制软骨细胞的过度凋亡;MTX与雷公藤对凋亡的作用与Bcl-2基因家族的调控密切相关,与p53相关基因的相关性不显著.     

白血病抑制因子在骨性关节炎组织的表达及临床研究

[目的]探讨白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)在骨性关节炎(OA)关节组织中的表达规律及临床相关性。[方法]切取(32人)73例骨性关节炎滑膜、软骨和软骨下骨组织,含10人正常关节组织标本,应用RT-PCR检测LIF mRNA在OA不同病变阶段中的表达,酶联免疫吸附反应(ELISA)检测LIF在组织中的含量。[结果]中度OA病变软骨下骨LIF mRNA表达量最高。重度OA软骨中LIF mRNA的表达量最高,软骨下骨的表达量最低。ELISA检测LIF在各组织的含量情况与上述结果一致。[结论]LIF在OA组织中表达呈现出一定的时间及空间分布的规律,提示LIF作为一种分解代谢因子可能参与了OA发病过程。     

骨关节炎患者关节软骨及滑膜中MMP-9、IL-6的表达

目的探讨骨关节炎中基质金属蛋白酶9(MMP-9)、白介素6(IL-6)mRNA和蛋白的表达。方法采用免疫组织化学技术检测60例骨关节炎病例(OA组)及20例正常对照关节软骨及滑膜MMP-9、IL-6蛋白的表达水平;采用原位分子杂交技术检测30例OA及10例正常对照关节软骨及滑膜MMP-9、IL-6 mRNA的表达水平。结果 MMP-9 mRNA和蛋白在OA组阳性表达的积分光密度(IOD)值均高于正常对照组[(8.38±2.29)vs(3.52±1.36),P<0.01;(9.18±3.58)vs(3.83±1.48),P<0.01],OA中二者的表达正相关性(r=0.924,P<0.01);IL-6 mRNA和蛋白在OA组阳性表达的IOD值均高于正常对照组[(8.74±3.62)vs(5.91±1.53),P<0.01;(8.96±3.57)vs(6.87±1.43),P<0.01],OA中二者的表达亦正相关(r=0.917,P<0.01);MMP-9 mRNA、IL-6 mRNA及相应蛋白在OA中的表达均正相关(原位杂交r=0.426,P<0.05;免疫组化r=0.444,P<0.01)。结论 MMP-9、IL-6在OA关节软骨与滑膜中呈高表达,二者对OA的发生发展可能起促进作用。     

超微肿痛贴对兔膝骨关节炎模型的软骨中JNK/p38 MAPK信号通路的影响

目的 观察超微肿痛贴对兔膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)模型的JNK/p38 MAPK信号通路的mRNA及蛋白表达的影响.方法 将50只3月龄新西兰兔随机分为空白组、模型组、氟比洛芬凝胶贴膏组、超微肿痛贴组,每组各12只,除空白组外,其他3组均采用木瓜蛋白酶膝关节腔注射方式造模.造模成功后,...     

少阳主骨方介导p19Arf-p53-p21Cip1信号通路调控食蟹猴关节软骨退变的机制

目的根据“少阳主骨”理论,研究少阳主骨方介导p19Arf-p53-p21Cip1信号通路调控关节软骨退变的机制。方法通过X线 选取13只膝关节退变的老年食蟹猴,随机选取1只进行病理学观察,其余食蟹猴随机分为少阳主骨方组、氨糖美辛组、生理盐水 组,每组4只,连续灌胃8周后处死所有食蟹猴,取关节软骨进行病理学观察,RT-qPCR、Western blot检测关节软骨中p19Arf、p53、 p21Cip1基因与蛋白的表达。结果老年食蟹猴KOA模型关节软骨符合KOA病理变化,3 组食蟹猴Mankin 评分少阳主骨方组 7.38±0.52 分、氨糖美辛组7.88±0.83 分、生理盐水组8.38±0.74 分,少阳主骨方组与生理盐水组间具有统计学差异（P<0.05）; p19Arf、p53、p21Cip1基因与蛋白的表达少阳主骨方组<氨糖美辛组><生理盐水组,具有统计学差异（p><0.05）。结论少阳主骨方可 以延缓关节软骨退变,调控p19arf-p53-p21cip1表达。="">     

p53在异丙肾上腺素所致心肌纤维化大鼠心肌组织中的表达及意义

目的：探讨p53在异丙肾上腺素（Iso）所致心肌纤维化大鼠心肌组织中的表达及意义,阐明其在心肌纤维化中的作用。方法：25只大鼠随机分为5组,正常对照组及注射Iso后12 h、24 h、1周和3周组。除正常对照组外,其他各组皮下多点注射Iso（15 mg·kg^-1）复制大鼠心肌损伤模型。采用免疫组织化学染色及RT-PCR分别检测心肌p53蛋白及基因表达。结果：免疫组织化学染色显示,注射Iso后12和24 h心肌P53蛋白表达水平明显高于正常对照组（P<0.05）,注射1和3周后p53蛋白表达增加更明显（P<0.01）。RT-PCR结果显示,与正常对照组比较,注射Iso后12 h心肌组织中p53 mRNA表达明显增高（P<0.05）,注射Iso后24 h p53 mRNA表达水平达到最高（P<0.01）,而注射Iso后1周心肌p53 mRNA表达较注射后24 h有所下降,但仍高于正常对照组(P<0.05)。结论：P53蛋白在大鼠损伤心肌中呈持续高表达,p53基因表达上调,提示p53在心肌纤维化形成过程中起一定作用。     

骨关节炎软骨细胞caveolin-1表达增高机制的探讨

目的 了解骨关节炎患者关节软骨内caveolin-1的表达情况,以及软骨降解因子自细胞介素(IL)-1β是否促进软骨细胞表达caveolin-1.方法 对8例骨关节炎患者膝关节软骨内caveolin-1基因表达的定量分析采用实时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),caveolin-1蛋白的表达采用免疫组化分析.选用12周龄的雄性SD大鼠20只,通过切断膝前交叉韧带和内侧副韧带制备骨关节炎模型,术后动态观察关节软骨的病理学变化和caveolin-1的表达情况.离体培养的骨关节炎软骨细胞内caveolin-1基因表达量分别采用RT-PCR和实时RT-PCR分析,caveolin-1蛋白表达量采用Western印迹分析.结果 与关节软骨轻微损害部位相比,8例骨关节炎患者中有6例患者的关节软骨严重损害部位内caveolin-1 mRNA表达增高约2倍,另外2例无明显差异.免疫组化分析显示,上述6例患者关节软骨严重损害部位内caveolin-1蛋白的表达也增高.随着术后时间延长,大鼠骨关节炎关节的软骨逐渐出现损害,且caveolin-1的表达也持续增高.IL-1β(10 ng/ml)可以上调培养的骨关节炎软骨细胞内caveolin-1基因和蛋白表达,并可持续至少48 h.结论 骨关节炎软骨损害程度与caveolin-1的表达水平具有相关性,IL-1β可以刺激软骨细胞表达caveolin-1.提示IL-1β可能通过诱导caveolin-1表达而促进骨关节炎进展.     

关节内注射透明质酸钠对兔膝关节退变软骨的影响

目的：观察关节内注射透明质酸钠对兔膝关节炎模型中退变软骨的影响。方法：以２４只成年新西兰兔为实验对象,建立Ｈｕｌｔｈ膝关节骨关节炎模型。实验组（１２只）于术后第８周开始,每周关节内注射１％透明质酸钠１ｍｌ,连续注射５次,对照组（１２只）不作任何治疗。注射后６周处死动物,在手术显微镜下观察膝关节表面,取股骨内髁软骨标本进行透射电镜观察;取内侧胫骨髁软骨作氨基己糖测定。结果：实验组动物软骨细胞退变程度     

转染野生型p53对宫颈癌HeLa细胞COX-2表达及生长影响的研究

目的 研究外源性野生型p53（wt p53）基因对宫颈癌HeLa细胞中环氧合酶-2（COX-2）的影响和对HeLa细胞的生长抑制作用.方法 将p53的HeLa细胞按是否转染p53分为实验组和对照组.实验组利用脂质体介导的转染技术将野生型p53基因转染到HeLa细胞中,wt p53的表达使用逆转录-多聚酶链反应（RT-PCR）鉴定,用蛋白质印迹法（Western blot）与RT-PCR检测转染前后COX-2蛋白和COX-2 mRNA表达的变化.CCK-8染色法绘制细胞生长曲线.结果 野生型p53基因转染后HeLa细胞中的COX-2蛋白和COX-2 mRNA表达减少.通过对细胞生长曲线的分析,转染后较转染前生长明显减慢（P〈0.01）.结论 外源性wt p53基因表达可抑制宫颈癌HeLa细胞中COX-2蛋白和COX-2 mRNA的表达;wt p53可能通过抑制COX-2对宫颈癌HeLa细胞产生抑制作用.     

跌打通痹膏对兔膝骨关节炎关节软骨MMP-13、Ⅱ型胶原mRNA表达的影响

目的：观察跌打通痹膏对兔膝骨性关节炎关节软骨基质金属蛋白酶-13（MMP-13）、Ⅱ型胶原mRNA （COL-Ⅱ mRNA）表达的影响。方法选用65只新西兰兔随机分成正常对照组、假手术组、模型组、跌打通痹膏组、骨通贴组,每组13只。模型组、跌打通痹膏组、骨通贴组采用改良Hulth造模法,正常组、假手术组不予处理,模型组、跌打通痹膏组、骨痛贴组分别用胶带、跌打通痹膏、骨痛贴膏贴敷4周,观察治疗后各组实验兔关节软骨改变情况,并检测关节软骨中 MMP-13、COL-Ⅱ mRNA的表达。结果（1）组织学关节软骨评分：跌打通痹膏组评分较模型组低（P<0.05）。（2）MMP-13mRNA检测：模型组MMP-13表达较正常对照组显著提高（P<0.01),跌打通痹膏组MMP-13 mRNA表达较模型组降低（P<0.01)。（3）COL-ⅡmRNA检测：跌打通痹膏组COL-Ⅱ表达较模型组升高（P<0.01）。结论跌打通痹膏能通过降低Ⅱ型胶原降解,抑制MMP-13 mRNA表达,从而有效保护膝骨关节炎模型兔关节软骨,延缓关节软骨退变。