骨髓间充质干细胞移植对老年性痴呆大鼠学习和记忆能力的影响

【目的】本研究旨在探索骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)移植对老年性痴呆大鼠学习和记忆的影响。【方法】选用24月龄健康雄性Wistar大鼠制备自然衰老痴呆模型,将模型大鼠随机分为3组,每组10只。对照组大鼠双侧海马注射生理盐水;干细胞组大鼠注射BMSCs;分化组大鼠注射定向神经诱导的BMSCs。大鼠的学习能力在术前1 d及术后6周通过Y迷宫试验测定,记忆能力测定在学习能力测定48 h后进行;同时采用Morris水迷宫观察大鼠空间学习和记忆能力;采用免疫荧光组织化学染色法观察大鼠海马区胆碱乙酰化酶(choline acetyltransferase,ChAT)阳性细胞。【结果】对照组大鼠学习和记忆成绩均下降,与术前相比,差异无显著性意义(P>0.05);干细胞组大鼠学习和记忆成绩均提高,与移植前相比差异无显著性意义(P>0.05);分化组大鼠学习和记忆成绩均较移植前明显提高(P<0.01);与对照组相比,其他两组大鼠学习和记忆成绩均提高(P<0.05)。分化组大鼠逃避潜伏期较对照组明显缩短(P<0.01)。分化组大鼠海马区可观察到ChAT阳性细胞。【结论】BMSCs移植可改善老年性痴呆大鼠的学习和记忆能力,且定向神经诱导分化的BMSCs移植治疗效果优于未分化的BMSCs,提示BMSCs移植可能成为治疗痴呆大鼠认知功能障碍的一种方法。     

甘露醇对骨髓间充质干细胞治疗血管性痴呆大鼠行为学的影响

目的：观察甘露醇预处理对骨髓间充质干细胞（BMSCs）静脉移植治疗血管性痴呆模型大鼠行为学的影响。方法：以双侧颈总动脉永久性结扎法（2-VO）制作大鼠血管性痴呆模型。造模成功后,随机分成培养基组8只（注射1 mL无血清培养基）、BMSCs移植治疗组11只（注射1×10^6个BMSCs 1 mL）及甘露醇预处理BMSCs移植治疗组9只（注射1.5 g/kg甘露醇后,在10-30 min之内注射1×10^6个BMSCs 1 mL）。通过Morris水迷宫实验检测血管性痴呆大鼠模型移植治疗前与移植4周后空间学习记忆能力,比较各组之间差异。结果：与培养基组比较,BMSCs移植治疗组和甘露醇预处理BMSCs移植治疗组大鼠空间学习记忆能力都有改善,模型大鼠逃避潜伏期缩短（P〈0.05）,平台象限区滞留时间延长（P〈0.05）;与BMSCs移植治疗组比较,甘露醇预处理BMSCs移植治疗组大鼠空间学习记忆能力改善更加明显,逃避潜伏期缩短（P〈0.05）,平台象限区滞留时间延长（P〈0.05）。结论：甘露醇预处理后BMSCs静脉移植组治疗血管性痴呆与单独BMSCs静脉移植组大鼠比较,学习记忆能力显著改善。其机制可能与甘露醇能开放血脑屏障（BBB）,增加进入脑内的BMSCs数量相关。     

骨髓间充质干细胞定向分化移植对阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力的影响

目的通过β淀粉样蛋白1-40诱导建立阿尔茨海默病(AD)大鼠模型,探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)定向分化移植对AD大鼠行为学的影响。方法将45只健康Wistar大鼠随机分为对照组、模型组及移植组,每组15只。首先利用β淀粉样蛋白1-40通过立体定向注射技术建立AD动物模型,造模3周后采用立体定向注射技术移植诱导分化的BMSCs,并采用Morris水迷宫实验观察大鼠模型行为学的变化;采用免疫荧光组织化学染色法观察各组大鼠海马区胆碱乙酰化酶(ChAT)阳性细胞。结果移植组大鼠学习记忆成绩较移植前明显提高(P<0.05),与模型组大鼠学习记忆成绩比较有明显提高(P<0.05);同时通过免疫荧光组织化学染色可在移植组大鼠海马区发现ChAT阳性细胞。结论 BMSCs移植能够改善AD大鼠空间行为学能力,为利用BMSCs移植治疗AS提供实践依据。     

骨髓间充质干细胞对VaD大鼠突触素表达的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)对血管性痴呆(VaD)大鼠的作用。方法以两血管法制备VaD模型。将大鼠随机分为假手术组、磷酸盐缓冲液组、BMSCs组。造模1周后,尾静脉注射BMSCs;4周后行Morris水迷宫检测,观察其行为学改变;免疫组化法检测大鼠海马区神经细胞NGF、SYN表达。结果与PBS组比较,BMSCs组逃避潜伏期明显缩短,SYN与NGF表达明显升高(P0.05或P0.01)。结论 BMSCs对VaD大鼠的学习记忆能力有一定改善作用,可提高NGF及SYN表达。     

NGF基因修饰的BMSCs对VaD大鼠突触素表达的影响

目的研究经神经生长因子(NGF)基因修饰的骨髓间充质干细胞(BMSCs)对血管性痴呆(VaD)大鼠的作用。方法以NGF和绿色荧光蛋白(GFP)基因转染BMSCs;制备VaD模型;将大鼠随机分为假手术组、磷酸盐缓冲液(PBS)组及NGF修饰组。造模1周后,通过尾静脉注射将NGF基因修饰的BMSCs移植到大鼠体内;4周之后进行Morris水迷宫检测;以免疫组织化学法检测大鼠海马区NGF和SYN表达。结果与PBS组比较,NGF修饰组逃避潜伏期缩短显著,而SYN表达明显升高(P0.05)。结论经NGF基因修饰的BMSCs对VaD大鼠的学习和记忆能力有改善作用;并可以提高NGF及SYN的表达。     

静脉内移植骨髓间充质干细胞在脑缺血大鼠脑内的分布及其对学习和记忆的影响

目的 观察骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)经静脉注射移植后在脑缺血大鼠脑内的存活和分布情况,以及对学习记忆的影响.方法 体外培养和扩增成年雄性SD大鼠BMSC,以"四管阻断法"制作大鼠前脑缺血再灌注模型,造模后3 d通过尾静脉注射Hoechst 33342标记的BMSC(2×106/ml),另设对照组通过尾静脉注射载体溶液,于注射后3周采用Morris水迷宫观察大鼠学习记忆功能,于注射后4周处死大鼠,取脑组织切片,于荧光显微镜下观察BMSC在脑内存活及分布情况.结果 BMSC移植大鼠逃避潜伏期、穿环次数和原象限时间与对照组相比有显著性差异(P＜0.05),其中,逃避潜伏期显著短于对照组,穿环次数和原象限时间显著高于对照组.结论 静脉注射移植BMSC能够进入大鼠脑内存活,主要分布在缺血性损伤部位,可改善脑缺血大鼠学习记忆能力.     

血管内皮生长因子基因转染骨髓间充质干细胞移植治疗放射性脑损伤认知功能损害

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)基因转染同种异体骨髓间充质干细胞(MSCs)移植治疗对SD大鼠放射性脑损伤认知功能损害的影响.方法 体外分离、纯化、培养大鼠MSCs.构建VEGF腺病毒载体.单次40Gy全脑照射成年SD大鼠,制备脑损伤模型.大鼠随机分为未照射组、单纯照射组和细胞移植3组.细胞移植组采用经尾静脉注射转染后的MSCs.各组大鼠在照射后1个月、2个月、3个月、4个月和6个月分别进行Morris水迷宫试验,采用平均逃避潜伏期和搜索策略两个指标评价大鼠学习认知能力.血管内皮细胞标志物VIII因子免疫组化染色,评价脑微血管密度改变.结果 照射组在3个月时血管密度与未照射组相比明显下降(P<0.05),4个月时开始出现明显的认知功能下降,平均潜伏期[(96.14±8.09)s]和搜索策略[(15.03±1.76)%]差异有显著性(P<0.05).细胞移植组大鼠的学习认知能力显著增加,平均潜伏期[(69.74±7.13)s]和搜索策略(23.74±1.51)%,与单纯照射组相比差异有显著性(P<0.05),在3个月和6个月时,脑微血管密度较单纯照射组显著增加(P<0.05).结论 VEGF基因转染骨髓间充质干细胞移植治疗能够促进放射后大鼠脑微血管的再生和改善其认知功能.     

不同途径羊膜间充质干细胞移植治疗大鼠脑外伤

目的:通过不同途径移植羊膜间充质干细胞治疗脑损伤大鼠,比较脑损伤大鼠行为学的改善,为脑损伤治疗选择有效的移植途径.方法:制作80只Wistar大鼠脑损伤模型,分为对照组与治疗组.对照组为单纯脑损伤大鼠,共20只;治疗组分为尾静脉移植组(A组)、侧脑室移植组(B组)、脑损伤区移植组(C组),每组20只,均给与植入人羊膜间充质干细胞,采用NSS评分法评定治疗效果.结果:脑损伤区移植组大鼠行为学改善与其他各组相比,差异有统计学意义(P<0.05);侧脑室移植组分别与尾静脉移植组及对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);而尾静脉移植组与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05).结论:脑损伤区移植羊膜间充质干细胞是治疗脑损伤大鼠的有效途径.     

灵芝多糖对阿尔茨海默病大鼠学习记忆和氧化应激的影响

目的:探讨灵芝多糖对阿尔茨海默病(AD)大鼠的学习记忆能力和氧化应激的影响。方法:将40只大鼠随即分为正常组、假手术组、模型组和灵芝多糖(GLP)治疗组。采用双侧海马注射Aβ1~40的方法建立大鼠AD动物模型,灵芝多糖灌胃治疗21d,M orris水迷宫测试各组大鼠学习记忆能力,分光光度法测定大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果:与对照组相比,模型组大鼠的逃避潜伏期延长(P<0.01),血清MDA含量明显增高,SOD活性明显降低。与模型组相比,GLP治疗组大鼠的逃避潜伏期明显缩短(P<0.01),血清MDA含量明显降低,SOD活性明显升高。结论:灵芝多糖能增强Aβ诱导的AD模型大鼠的学习记忆能力和抗氧化能力。     

胎鼠海马神经干细胞移植对阿尔茨海默病大鼠行为学及海马凋亡的影响

目的:观察胎鼠海马神经干细胞移植对阿尔茨海默病(AD)大鼠行为学及海马凋亡的影响.方法:建立AD模型后,将大鼠分为移植组、对照组、正常组.将原代培养的神经干细胞移植入AD大鼠脑内,4周后通过水迷宫和跳台实验观察AD大鼠的学习记忆能力;用病理学观察移植后AD大鼠海马的凋亡的变化.结果:神经干细胞移植后的AD大鼠学习记忆能力明显增强;AD大鼠海马凋亡明显减轻,与正常组比较无明显差异(P＞0.05),与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论:胎鼠神经干细胞移植可以明显改善AD大鼠的痴呆症状,具有一定的疗效.     

川芎嗪对慢性低O2高CO2大鼠空间学习记忆的影响

目的:探讨川芎嗪对低O2高CO2大鼠空间学习记忆能力的影响.方法:雄性SD大鼠30只,随机分为正常对照组、慢性低O2高CO24 w组(模型组)、慢性低O2高CO24 w 川芎嗪组(川芎嗪组).用Morris水迷宫检测各组动物逃避潜伏期、游泳总距离和游泳平均速度.结果:与对照组相比,模型组大鼠逃避潜伏期明显延长(P＜0.01),游泳总距离明显延长(P＜0.01),与模型组相比,川芎嗪组大鼠逃避潜伏期和游泳总距离缩短(P＜0.01).结论:川芎嗪对慢性低O2高CO2大鼠空间学习记忆障碍有一定的防治作用.     

红景天苷与骨髓间充质干细胞联合应用对帕金森病大鼠的治疗作用

目的：研究红景天苷与骨髓间充质干细胞（BMSCs）联合应用对帕金森病（PD）大鼠的治疗作用,为PD治疗提供实验基础。方法：采用贴壁法培养BMSCs,免疫荧光法检测细胞表面分子。利用MTT法分析10 mg·L^-1红景天苷对BMSCs增殖分化的影响。将60只大鼠随机分为假手术组、模型组、红景天苷治疗组、BMSCs治疗组、红景天苷和BMSCs联合治疗组,每组12只。在相对应的时间点检测各组大鼠行为学变化,取各组大鼠脑组织测定酪氨酸羟化酶（TH） mRNA表达水平。结果：成功分离提取表达干细胞标志物CD29和CD44细胞。 红景天苷作用BMSCs后,BMSCs增殖较对照组更为旺盛且平台期较对照组延长。PD模型组大鼠旋转次数减少,与其他组比较差异有统计学意义(P<0.05);模型组大鼠行为改变明显,脑组织内TH mRNA表达水平降低。红景天苷和BMSCs联合治疗组大鼠行为学异常程度较轻,脑组织内TH mRNA表达水平高于其他组(P<0.05)。结论：红景天苷与BMSCs联合应用对PD大鼠的治疗作用优于单独应用红景天苷或BMSCs。     

Effects of different doses of BMSCs transplantation on silicosis fibrosis in rats

Objective:To study effects of the exogenous bone mesenchymalstem cells(BMSCs)transplantation on silicosis fibrosisin rats,and to explore dose-effect relationship.Methods:BMSCs were isolated and cultured from male 5-week-old SD rats in vitro.Fifty healthy female SD rats were randomly divided into five groups:model control group,silicosis model group,BMSCs treatment A group(1×106/ml),BMSCs treatment B group(3×106/ml),BMSCs treatment C group(5×106/ml)(n=10).The silicosis model were made by One-time infusion of silica dust suspension,using the non-exposed tracheal intubation,and given different doses of BMSCs as intervention therapy.All the rats were sacrificed on the 21st day after model estalishment.The morphological changes of lung tissue were observed by HE staining and Masson staining;the localization and distribution of TNF-αand TGF-βwere detected by immunohistochemistry;the expression quantity of TNF-α,TGF-β,collagen I and collagen III protein were detected by Western blotting;the sex-determining gene SRY was searched by immunofluorescence to confirme BMSCs home to damage lung tissue.Results:Compared with the model control group,the silicosis model group had significantly alveolitis changes,silicon nodule formation,collagen deposition and other pathological changes.Compared with silicosis model group,the pathological changes above in BMSCs treatment A group were improved;the condition of BMSCs treatment B group was improved significantly;the pathological changes of BMSCs treatment C group were increased obviously.the expression of TNF-α,TGF-β,collagen I and collagen III protein in lung tissue:BMSCs treatment C group>silicosis model group>BMSCs treatment A group>BMSCs treatment B group>model control group.The difference of BMSCs treatment C group and silicosis model group had no statistically significant(P>0.05),and the difference between the other groups had sta-tistically significant(P<0.05).The SRY-positive cells were observed in BMSCs treatment B group by laser scanning confocal microscope,but no significant expression in the heart,liver,spleen and kidney tissues.Conclusions:The Exogenous BMSCs transplantation antagonize rat silicosis fibrosis,which has dose-effect relationship.Our data suggested that the best transplantation dose for silicosis fibrosis is 3×106/ml.     

阿尔茨海默病模型大鼠血清beta-淀粉样蛋白的变化与补肾填精方的预防效应

目的 :研究血清 beta-淀粉样蛋白 ( beta- amyloid protein,Abeta)在阿尔茨海默病( Alzheimer’s disease,AD)模型大鼠中的变化及补肾填精方防治 AD大鼠的效应和机制。方法 :用腹腔注射 Al Cl3 ,复制大鼠 AD模型。用 Y电迷宫仪测定正常组、模型组和中药防治组大鼠的逃避正确率、逃避潜伏期和逃避行为方式。用放免法测定血清 Abeta含量。结果 :AD模型大鼠的血清Abeta水平显著升高 ,逃避行为方式异常 ,逃避潜伏期延长 ,逃避正确率降低 ,学习记忆能力明显损害。补肾填精方明显抑制 Al Cl3 引起的血清 Abeta的升高 ,纠正逃避行为方式异常 ,提高大鼠的逃避正确率 ,缩短逃避潜伏期 ,改善学习记忆能力。结论 :血清 Abeta水平变化主要由血小板功能的变化引起 ,血清 Abeta水平和脑损伤明显正相关 ,和学习记忆能力明显负相关。血清 Abeta水平升高可作为 AD诊断的血液指标。通过抑制免疫系统和血小板的过度激活 ,降低血清 Abeta含量 ,降低中枢神经系统的兴奋性 ,是补肾填精中药方防治铝致 AD大鼠学习记忆功能障碍的作用机制。     

骨髓间充质干细胞移植对严重烧伤大鼠肝损伤的修复作用及其机制

目的：探讨骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植对严重烧伤大鼠肝损伤的修复作用，初步阐明其作用机制。方法：体外分离、培养、扩增、鉴定并标记大鼠BMSCs。将30只Wistar大鼠随机分成正常对照组、模型组和细胞治疗组,每组10只。制备大鼠烧伤模型，将氯甲基苯甲酰胺（CM-Dil）标记的BMSCs经球后静脉移植到细胞治疗组大鼠体内，模型组大鼠注射生理盐水。观察各组大鼠的一般状况。细胞移植后2周取大鼠肝组织，进行病理组织学观察和评分；TUNEL法检测肝细胞凋亡率；激光共聚焦显微镜观察BMSCs在大鼠肝组织中的定植情况。结果：细胞移植后2周，模型组大鼠精神明显萎靡、少动；细胞治疗组大鼠精神状态较好，大鼠体质量显著高于模型组（P<0.05）。病理组织学观察，模型组大鼠肝小叶结构消失，肝索排列紊乱，部分肝窦扩张充血，散在淋巴细胞浸润，偶见小灶性聚集，肝细胞浊肿，有些细胞胞浆疏松，脂肪变性；细胞治疗组大鼠肝组织的病理学改变较轻，明显好于模型组；细胞治疗组大鼠病理组织学评分明显低于模型组(P<0.05)。TUNEL法检测，模型组大鼠肝组织出现较多凋亡肝细胞，细胞治疗组大鼠肝细胞凋亡率明显低于模型组（P<0.05）。激光共聚焦显微镜观察，细胞治疗组大鼠肝组织中有CM-Dil标记的BMSCs。结论：BMSCs移植后能够向受损肝组织定植，对烧伤引起的肝损伤有明显的修复作用，其机制可能与抑制细胞凋亡有关。     

携分泌型白细胞蛋白酶抑制因子的间充质干细胞对慢性阻塞性肺疾病大鼠的治疗作用

目的 研究携分泌型白细胞蛋白酶抑制因子( SLPI)骨髓间充质干细胞(BMSCs)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气道炎症和黏液分泌的影响.方法 SD大鼠60只按随机数字表法随机分为阴性对照组、COPD模型组、BMSCs组和携SLPI质粒BMSCs组各15只,采用熏香烟加气管内注入内毒素法制备COPD模型,通过尾静脉注入BMSCs或携SLPI质粒BMSCs细胞.Western印迹检测SLPI表达,酶联免疫吸附法检测白细胞介素8(IL-8)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达,通过病理切片观察杯状细胞增生情况.结果 携SLPI质粒BMSCs组支气管/肺组织中SLPI表达为(0.79±0.06),显著高于阴性对照组的(0.24±0.02),(P＜0.05).BMSCs组和携SLPI质粒BMSCs组支气管肺泡灌洗液中炎性因子IL-.8、TNF-α浓度均低于COPD模型组(均P＜0.05);携SLPI质粒BMSCs组更低,分别为(17.6±1.7)和(36.6±4.0)ng/L,显著低于BMSCs组(均P＜0.05).携SLPI质粒BMSCs组支气管杯状细胞数较COPD模型组和BMSCs组明显减少(均P＜0.05).结论 携SLPI质粒BMSCs移植能够减轻COPD大鼠气道炎症和黏液分泌,有望用于对COPD患者的治疗.     

骨髓间充质干细胞治疗大鼠白毒伞中毒致急性肝衰竭的效果

目的：探讨骨髓间充质干细胞（BMSCs）治疗大鼠白毒伞中毒致急性肝衰竭的疗效及机制。方法选取10只体重约80 g的雄性清洁级SD大鼠用于BMSCs的培养。另选取体重在220～250 g的成年大鼠45只作为研究对象,用于肝衰竭模型制备以及BMSCs输注治疗。在45只大鼠中随机抽取15只作为空白对照组,剩下的30只均给予白毒伞粗毒素灌胃制备肝衰竭模型,将造模成功的大鼠随机均分为两组,肝衰竭模型组和治疗组（实验BMSCs输注治疗）。对比各组大鼠7 d生存率及肝功能、凝血功能、炎症因子、肝脏病理等指标情况。结果与肝衰竭模型组相比,治疗组SD大鼠体重减轻明显更少,7 d生存率明显更高。移植结束后治疗组大鼠肝功能、凝血功能、炎症因子等指标及肝脏病理均较肝衰竭模型组显著改善（ P＜0.05）。结论 BMSCs输注对白毒伞中毒致急性肝衰竭大鼠具有十分明显的治疗作用,能显著改善大鼠肝功能衰竭。     

骨髓间充质干细胞移植对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用

目的研究骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植对新生SD大鼠缺血缺氧性脑损伤（HIBD）的治疗作用。方法新生SD大鼠随机分为假手术组、模型组、BMSCs移植组;结扎左侧颈总动脉制备大鼠缺氧缺血性脑损伤模型,3 d后BMSCs组左侧脑室接种1×105个BMSCs;分别于移植后第2周和第4周处死各组大鼠,取脑组织行HE染色及免疫荧光染色观察病理变化。结果 HE染色假手术组脑组织结构正常核仁大而圆,胞质丰富;模型组大鼠脑神经元大量坏死,出现空洞;BMSCs移植组与模型组相比较,损伤细胞较少,但是多于假手术组,无空泡,可见新生毛细血管生成。移植4周后BMSCs移植组神经元凋亡指数（0.170±0.0002）与假手术组（0.094±0.0003）相比,无统计学意义（P〉0.05）,但明显小于模型组（0.342±0.0002）,有统计学意义（P〈0.05）。结论 BMSCs移植可降低缺氧缺血性脑损伤新生大鼠神经元凋亡指数,能够促进神经功能恢复,对新生SD大鼠缺血缺氧性脑损伤有治疗作用。     

间充质干细胞对血管性痴呆大鼠学习记忆能力及海马CA1区突触素表达的影响

目的 观察同种异体骨髓间充质干细胞(MSCs)对血管性痴呆(VaD)模型大鼠空间学习记忆功能及海马CA1区突触素(SYN)表达的影响.方法 体外分离、扩增大鼠骨髓MSCs,并用BrdU标记.双侧颈总动脉结扎法(2-VO)制备VaD模型.将经过Y-迷宫筛选的大鼠随机分为A、B、C 3组.MSCs移植组(A组)于2-VO后4周尾静脉注射MSCs;对照组(B组)注射同等剂量的PBS;假手术组(C组)暴露双侧颈总动脉但不结扎,不进行尾静脉注射.Y-迷宫实验检测大鼠的空间学习记忆功能;免疫荧光染色观察MSCs注射后4周大鼠海马区BrdU标记细胞;免疫组化染色观察海马CA1区SYN表达的变化.结果 MSCs移植后4周A组大鼠海马区可见荧光标记的MSCs;A组大鼠Y-迷宫作业成绩错误次数(EN)为(7.39±0.68)次,较B组[(12.25±0.77)次]明显减少,差异有显著性(t=4.86,P＜0.05),全天总反应时间(TRT)为(348.94±27.92)s,较B组[(542.22±30.27)s]明显缩短,差异有显著性(t=193.28,P＜0.05);A组大鼠SYN光密度值(OD)为(0.284±0.041),较B组(0.093±0.036)显著增加(t=0.191,P＜0.05).结论 静脉移植MSCs使VaD大鼠空间学习记忆能力改善并使海马CA1区SYN表达增加.