汉防己甲素对白血病耐药细胞株K562／A02核因子kB表达的影响

目的：通过研究汉防己甲素（tetrandrine，Tet）对白血病细胞株K562及其耐药细胞株K562／A02核因子kB（nuclear factor-kaPPaB，NF-kB）表达的影响，探讨Tet逆转多药耐药的作用机制。方法：采用免疫细胞化学及蛋白印迹法分别检测1umol／L Tet作用K562和K562／A02细胞6h和12h舌，细胞NF-kB核转位水平和胞核NF—kB蛋白表达的变化。结果：Tet作用6h和12h后，对K562细胞的NF-kB核转位水平及胞核NF—kB蛋白表达均无明显影响（P〉0．05）；K562／A02细胞NF—kB核转位水平及胞核NF—kB蛋白表达明显高于K562细胞对照组（P〈0．01）；Tet作用6h和12h后，可明显降低K562／A02细胞NF-kB蛋白核转位（P〈0．05）和胞核NF—kB蛋白表达水平（P〈0．01）。作用12h较作用6h效果更显著（P〈0．05）。结论：1umol／L Tet可能通过抑制NF—kB活化逆转K562／A02细胞多药耐药性。     

核糖体蛋白L6在K562/A02和K562细胞株中的表达差异

目的探讨核糖体蛋白L6（ribosomal proteinL6，RPL6）在急性髓细胞性白血病耐药细胞系K562／A02和敏感细胞系K562中的差异表达。方法分别从K562／A02和K562细胞中提取总RNA，以内参对照RT—PCR检测fuPL6基因表达。结果RPL6在飚62／A02细胞中的表达较K562高（P〈0．001）。结论在耐药细胞系K562／A02高表达RPL6可能与白血病耐药有关。     

环孢菌素A、汉防己甲素及两者联合逆转K562／A02细胞的多药耐药

目的：探讨环孢菌素A（CsA）、汉防己甲素（Tet）及两者联合应用对人白血病耐药细胞系K562／A02多药耐药的逆转作用。方法：采用M1Tr法测定柔红霉素（DNR）对细胞的半数抑制量（IC50），流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞内DNR浓度。结果：DNR对K562细胞和K562／A02细胞IC50分别为0．27和21．22mg·L^-1；CsA（1mg·L^-1）及Tet（0．1mg·L^-1）单独和联合处理K562／A02后，DNR的IC50分别为7．83、5．32和2．32mg·L^-1；CsA和Tet对DNR作用K562的IC50无明显影响；K562／A02细胞48h凋亡率为2．19％，DNR（1mg·L^-1）作用K562／A02细胞凋亡率为2．70％，CsA和Tet单独及联合处理后凋亡率分别为10．27％、17．64％和52．79％；两药处理后细胞内化疗药物DNR浓度亦明显增加。结论：CsA及Tet均可逆转耐药，且联合作用逆转效果更强。     

致密斑细胞COX-2的表达及AP-1、NFKB信号通路

目的评估低盐（LS）培养对小鼠致密斑（MMDD1）细胞环氧化酶-2（COX-2）表达及核因子-kB（NF-kB）和活化蛋白-1（AP-1）活性的影响。方法经脂质体转染含NF-kB或AP-1的报告质粒,采用瞬时表达方法检测正常盐（NS）与LS培养对NF-kB和AP-1转录活性的影响。采用RT-PCR检测MMDD1细胞COX-2表达的变化,Western blot方法检测细胞内P-p38MAPK、p-p44／42、c-Jun、c-Fos和COX-2蛋白的表达。结果LS培养促进了MMDD1细胞COX-2mRNA和蛋白表达（P〈0．01）。LS培养后,p38和p44／42的磷酸化程度显著上调（P〈0．01）,180min后达到高峰。p38抑制剂SB-203580、p44／42抑制剂PD-98059可降低LS诱导的COX-2表达（P〈0．01）。LS培养促进了c-Jun、c-Fos蛋白表达（P〈0．01）,激活了AP-1和NF-kB的转录活性（P〈0．01）。25umol／L NF-kB抑制剂PDTC和20umol／L AP-1抑制剂curcumin下调了LS诱导的NF-kB、AP-1活性（P〈0．01）。25umol／L PDTC、20umol／L curcumin降低了LS诱导的COX-2mRNA和蛋白表达（P〈0．01）。结论LS培养可促进MMDD1细胞COX-2的表达,其作用可能与促进p38MAPK、p44／42激酶的磷酸化,增加NF-kB和AP-1的活性有关。     

小檗胺对慢性粒细胞白血病细胞抑制作用的机制研究

目的：探讨小檗胺诱导慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞凋亡的机制。方法：体外培养K562细胞株细胞,经8μg／ml小檗胺处理不同时间后用Westernblot检测细胞内总NF—KB、核内NF—xB和IxBa、plxBa、IKKa、A20蛋白表达。结果：随着小檗胺处理时间的延长,细胞内总NF—xB无变化,但核内的NF—KB表达下降,半定量比值从处理前的59．2％,随着作用时间的延长,逐步下降为31．4％,19．7％,4．1％,0％。同时出现pIkBa、IKKa表达下调,A20表达增高。结论：小檗胺通过NF—KB途径诱导慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞凋亡的机制,可能涉及抑制NF—KB的核转位和转激活,推测其作用与小檗胺降低K562细胞bcr—abl基因的表达有关。     

核因子кB介导病毒基因反式激活途径在激素敏感型单纯性肾病发病中的作用

目的研究核因子kB（NF-kB）介导的病毒基因反式激活途径在激素敏感型单纯性肾病（SRSNS）发病中的作用，探讨呼吸道病毒触发该病的机制。方法采用电泳迁移率改变分析、RT-PCR和ELISA法分别对SRSNS、肾炎性肾病、继发性肾小球疾病、毛细支气管炎和正常儿童外周血单个核细胞（PBMC）NF—kB转录活性、呼吸道病毒基因和抗体表达、血清IL-8水平进行检测。结果①SRSNS活动期NF—kB转录活性增高．与SRSNS恢复期、缓解期和其它组比较差异有统计学意义（P〈0．05）；②SRSNS活动期血清IL-8水平增高，与NF-kB转录活性呈直线正相关关系（r=0．88，P〈0．001），NF-kB活性与呼吸道病毒检出阳性率亦呈正相关趋势。结论NF—kB介导的病毒基因反式激活途径能使IL-8等基因表达增高而致病．这可能是呼吸道病毒触发SRSNS的主要机制之一。     

小剂量茶碱对大鼠气道平滑肌细胞表达NF-κB与ICAM-1的影响

目的：观察小剂量茶碱对培养的大鼠气道平滑肌细胞表达核因子kB（NF-kB）与细胞间黏附分子1（ICAM-1）的影响，探讨小剂量茶碱在气道发挥抗炎作用的可能机制。方法：体外培养正常大鼠鼠婴的气道平滑肌细胞，将培养出的细胞随机分为3组：空白对照组、肿瘤坏死因子α（TNF-α）刺激组、茶碱干预组。采用免疫组织化学SP法检测经TNF—α刺激的大鼠的气道平滑肌细胞中加入不同浓度的茶碱共同培养4h，以及加入同一浓度茶碱共同培养不同时间，NF-kB活性和ICAM-1表达的变化。结果：TNF-α刺激组与空白对照组的NF—kB活性和ICAM-1表达相比较，差异均有显著性（P〈0．05）。经TNF-α刺激的大鼠的气道平滑肌细胞中加入5，10，15mg／L的茶碱共同培养4h，NF-kB活性和ICAM-1表达均有所下降。与TNF-α刺激组相比，5mg／L组无统计学差异（P〉0．05），余两组差异均有显著性（P〈0．05）。且茶碱干预组内两两比较，差异均有显著性（P〈0．05）。经TNF-α刺激的大鼠的气道平滑肌细胞中加入10mg／L茶碱共同培养2，4，24h。与TNF—α刺激组相比，茶碱处理组的差异均有显著性（P〈0．05）。但茶碱处理组内不同处理时间两两比较，差异无显著性（P〉0．05）。结论：茶碱可能通过抑制气道平滑肌细胞NF—kB活性和ICAM-1的表达，进而减少炎症细胞在气道的浸润。     

地塞米松对柔红霉素诱导K562细胞核因子kappa B活化及凋亡的影响

目的探讨地塞米松（DXM）对柔红霉素（DNR）诱导K562细胞核因子kappaB（NF—κB）活化及凋亡的影响。方法采用免疫组化二步法检测K562细胞的NF—κB活化,用流式细胞检测术检测K562细胞的凋亡率。结果DNR同时具有诱导K562细胞凋亡和NF—κB活化的作用;DXM50μg／L能显著抑制DNR诱导的K562细胞的NF—κB活化和增强DNR诱导的K562细胞凋亡,NF—κB活化抑制率为20．17％（P〈0．01）,细胞凋亡增强率为25．44％（P〈0．01）。结论DNR诱导K562细胞凋亡的同时激活NF—κB p65活化;DXM通过抑制NF—κB活化,增强其诱导K562细胞凋亡的作用。     

四嗪二甲酰胺对K562和K562／Adr的作用及其与NF—κB信号分子的关系

目的探讨四嗪二甲酰胺（ZGDHu-1）对慢性粒细胞白血病细胞株K562（K562-S）和耐药细胞株K562／Adr（K562-R）的抑制作用及其对p210BCR／Abl融合蛋白和转录核因子KB（NF—κB）表达的影响。方法MTT比色法观察其对K562-S细胞增殖的抑制作用,采用Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡,流式细胞仪及细胞克隆形成初步分析其对白血病干细胞的影响,通过Western印迹分析PARP-1、p210BCR／Abl、e—Abl、NF—KB的表达。结果不同浓度的ZGDHu-1对K562-s细胞均有增殖抑制作用,呈现剂量一时间依赖关系,ZGDHu-1作用48h时的IC50值为0．25μg／ml。在ZGDHu-1作用7天后,K562-S及K562-R细胞克隆形成被完全抑制。ZGDHu-1作用48h后,出现PARP-1裂解,诱发细胞凋亡,下调K562-R细胞p210BCR／Abl及C—Abl的表达,抑制K562-S及K562-R细胞质内NF—κB／p65的表达。结论ZGDHu-1能够抑制K562-s及耐药细胞株K562／Adr（K562-R）细胞的增殖,促进细胞凋亡。通过抑制p210BCR／Abl的表达,降低NF—κB的活性,阻断NF—κB信号传导通路,尤其对于耐药型白血病细胞具有广泛的应用价值。     

蛋白酶体抑制剂MG-132诱导K562细胞株凋亡的时程效应

目的研究不同时间蛋白酶体抑制剂MG-132对人慢性粒细胞白血病急性红白血病变细胞株K562的干预作用。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测16μmol／LMG-132作用不同时间（0、24、48、72、96h5个时间点）对K562细胞株增殖的影响,免疫细胞组织化学法检测MG-132作用不同时间后核因子-κB（NF—κB）及糖皮质激素受体（GR）的表达,采用流式细胞术检测MG-132不同作用时间对凋亡的影响。结果MTT：MG-132干预K562细胞株不同时间后K562细胞株的抑制率表现为对时间的依赖性,实验组明显高于对照组（P均〈0．05）,以干预72h时抑制率最高,为（63．33±1．52）％。免疫细胞组织化学法：MG-132干预K562细胞不同时间后,K562细胞株中的NF—κB、GR的表达水平均表现为对时间的依赖性;对于NF—κB,实验组明显低于对照组（均P〈0．05）,以干预96h时表达最低,为51．15±1．64;对于GR,以干预72h时表达最高,为89．21±3．49。流式细胞术：MG-132干预K562细胞株不同时间后K562细胞株的凋亡率表现为对时间的依赖性,实验组明显高于对照组（P均〈0．05）,以干预72h时,凋亡率最高,为（17．57±1．45）％。结论MG-132可能是通过下调NF—κB、上凋GR的表达诱导了K562细胞的凋亡和抑制,并表现出对时间的依赖性。     

三氧化二砷对耐药白血病细胞血管内皮生长因子和P-糖蛋白表达的影响

目的:研究三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)对K562/A02细胞表达血管内皮生长因子(vascular endo- thelial growth factor,VEGF)和P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gP)的影响,并对VEGF和P-gp的相关性进行探讨。方法:用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测ATO对K562/A02细胞的增殖抑制率,酶联免疫吸附双抗体夹心法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定上清VEGF含量,流式细胞术测定P-gP表达率。结果:0.05μmol/L ATO对K562/A02细胞的增殖和VEGF的表达无明显影响;0.4、3.2μmol/L ATO则对K562/A02细胞有明显的增殖抑制作用和下调VEGF的作用(P<0.05)。P-gP经0.05、0.4μmol/L ATO处理24、48、72h后无明显变化(P>0.05),3.2μmol/L ATO处理48、72 h后可显著下调P-gP表达(P<0.05)。结论:ATO逆转K562/A02细胞多药耐药(multidrug resistance,MDR)的作用可能与其调控P-gP和VEGF的水平有关;K562/A02细胞VEGF水平与P-gP的表达率可能有一定的相关性。     

汉防己碱对白血病K562细胞生长的促进耐药作用

目的考察汉防己碱(Tet)对白血病K562细胞生长的影响。方法采用体外细胞培养,即在37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养,培养液为含10%热灭活NBS的完全RPMI1640细胞培养基。待K562细胞与药物作用48 h后,收集并处理细胞,结合MTT和Western blot法研究Tet对K562细胞生长的作用特点。结果 Tet在0.33～1.00μg/ml仅使K562及K562/ADM细胞的存活率降低至75%～80%,低浓度Tet(0.33μg/ml)使阿霉素(ADM)和顺铂(cDDP)对K562细胞生长的IC50增加(P<0.01),1.0μg/ml Tet则降低IC50,使ADM对K562/ADM细胞的IC50增加,cDDP的IC50无明显变化。0.33μg/ml Tet有提升2种细胞的P-gp和MRP1表达的作用(P<0.05)。Tet各浓度对LRP表达无明显影响。结论 Tet对K562及K562/ADM细胞生长抑制作用具浓度依耐性,低浓度具加速耐药的作用,其促进耐药细胞发展的机制至少与提升P-gp和MRP1表达有关。     

甲基莲心碱在K562/A02细胞对STI 571敏感性中的作用

目的:研究甲基莲心碱(Nef)在多药耐药白血病细胞K562/A02对STI 571敏感性中的作用，并探讨其逆转耐药的机制。方法:MTT法比较STI 571单独或与Nef联合应用对K562/A02细胞的抑制作用；RT-PCR法检测mdr1 mRNA转录水平及Western Blot法检测P-gp表达水平。结果:Nef与STI 571联合应用对K562/A02细胞增殖的抑制作用明显增强。单独应用STI 571对K562/A02细胞的IC50为3.02μmol/L，加Nef后,IC50为0.689μmol/L，逆转倍数为4.38倍(P＜0.05）。STI 571与Nef联合应用使mdr1 mRNA转录水平下调(45.4±2.5)%(P＜0.01)，使P-gp的表达下调40.58%(P＜0.05)。结论:甲基莲心碱能增强K562/A02细胞对STI 571的敏感性，下调其mdr1 mRNA的转录和阻断P-gp的表达，从而逆转白血病的多药耐药性。     

甲基莲心碱联合mdr 1shRNA对K562/A02 细胞mdr 1/P gp表达的影响

目的：探讨甲基莲心碱(Nef)联合mdr 1shRNA表达的载体对K562/A02细胞mdr 1/ P gp表达的影响。 方法：采用MTT方法比较Nef,mdr 1shRNA单独或二者联合对K562/A02细胞增殖的抑制作用;采用RT PCR和Western印迹法检测mdr 1/P gp的表达。 结果：Nef与mdr 1shRNA联合组对K562/A02细胞的抑制率显著高于mdr 1shRNA,Nef单独处理组(P＜0.01);联合组对K562/A02细胞mdr 1/P gp表达的抑制作用强于单独处理组（P＜0.01）。 结论：甲基莲心碱能增强mdr 1shRNA表达载体对K562/A02细胞的增殖抑制作用及mdr 1/P gp表达的抑制作用,逆转mdr 1基因编码蛋白P gp介导的多药耐药。     

汉防己甲素逆转白血病细胞株K562/A02耐药的机制

目的:研究汉防己甲素（TTD）对白血病细胞株K562/A02多药耐药(MDR)逆转的机理。方法：以白血病细胞系K562及其耐药细胞系K562/A02为TTD作用的靶细胞。细胞水平检测实验分5组（K562组、K562/A02组、K562+ADM组、K562/A02+ADM组和K562/A02+TTD+ADM组）,采用MTT法检测TTD对K562和K562/A02细胞的非细胞毒性剂量,流式细胞术检测细胞内阿霉素(ADM)的浓度,基因、酶学、蛋白水平检测实验分3组（K562组、K562/A02组和K562/A02+TTD组）,采用RT-PCR法检测mdr1 mRNA的表达,免疫细胞化学方法检测谷胱甘肽S转移酶π（GST-π）和拓扑异构酶Ⅱ（Topo Ⅱ）的表达水平,Western-blotting法检测P-糖蛋白（P-gp）和bcl-2表达。结果：1.562 5 mg•L^-1的TTD处理K562/A02细胞后,细胞内ADM的浓度较单用ADM组明显提高（P<0.01）;与空白对照组比较,K562/A02细胞内mdr1 mRNA/P-gp的表达量减少（P<0.01）;GST-π和TopoⅡ表达无明显变化;凋亡抑制基因bcl-2的表达量减少（P<0.01）。结论:TTD主要通过增加细胞内ADM浓度,下调mdr1/P-gp和bcl-2表达逆转耐药。     

选择性抑制转录核因子κB活性对白血病K562细胞生存素表达的影响

目的探讨高选择性的蛋白酶抑制药MG132诱导的K562细胞凋亡及其对转录核因子KB（NF-κB）活性和抗凋亡蛋白生存素（Survivin）表达的影响。方法采用细胞形态学观察和流式细胞术检测细胞凋亡,免疫细胞化学和Western印迹分析NF-KB的活性和Survifin的表达。结果不同浓度的MG132作用24h后可诱导K562细胞凋亡,呈剂量依赖效应。NF-κB和Survivin在K562细胞中异常高表达,MG132作用后均明显下调。2、4、6、8μmol／LMG132作用于K562细胞24h后,NF-κB活性分别下调至作用前的75．0％±3．7％、59．9％±5．3％、45．4％±5．7％和25．0％±4．2％,而Survivin蛋白表达分别下调至作用前的90．9％±10．1％、66．7％±5．2％、45．4％±5．7％和30．3％±6．6％,NF-κB活性降低的同时Survivin蛋白的表达也下调,两者密切相关（Pearson相关系数0．989,P〈O．01）。结论MG132可有效地抑制NF-κB的活性,诱导K562细胞发生凋亡,同时抗凋亡蛋白Survifin的表达也随之下调。     

冬凌草甲素逆转多药耐药细胞系K562/A02耐药性的研究

目的：探讨冬凌草甲素对多药耐药细胞系K562／A02耐药性的逆转作用。方法：以柔红霉素（DNR）和高三尖杉酯碱（HHT）联合不同浓度的冬凌草甲素处理K562／A02及敏感细胞系K562／S，以四唑盐比色法（MTT）检测两种化疗药物的半数抑制浓度（IC50），以流式细胞仪检测P170蛋白的表达与细胞内DNR的浓度。结果：冬凌草甲素可明显减小K562／A02细胞对DNR，HHT的IC50，降低耐药倍数，下调P170蛋白的表达，增高细胞内DNR的浓度，而对K562／S细胞无显著影响。结论：冬凌草甲素可逆转药细胞系K562／A02的耐药性，是一种很有希望的抗白血病中药。     

Comparative proteomic analysis of differentially expressed proteins between K562 and K562/ADM cells

Background Multidrug resistance to chemotherapeutic agents is an important clinical problem during the treatment of leukemia. The resistance process is multifactorial. To realize the total factors involved in multidrug resistance, we analyzed the differentially expressed proteins of K562 and K562/ADM cells and we investigated one of the up-regulated proteins （CRKL） using siRNA to determine its role in K562/ADM cells. Methods Altered protein expressions between K562/S （K562 ADM-sensitive cell line） and K562/ADM （K562 multidrug resistant cell line induced by adriamycin） were identified by 2D-DIGE coupled with mass spectrometry. Meanwhile, we confirmed the differential expression of CRKL and Stathmin in both K562 and K562/ADM cells by Western blot analysis. Furthermore, we used RNA interference to silence the CRKL gene expression. Results Among the 9 differentially expressed proteins, 3 were up-regulated in K562/ADM cells, while 6 were down-regulated in the K562/ADM cells compared with its parent cell line. The expression of CRKL was up-regulated significantly in K562/ADM cells, and it can be decreased by recombinant lentivirus. Moreover, the multidrug resistance of K562/ADM cells was efficiently reversed by silence of CRKL gene expression. Conclusions The data provided the differentially expressed proteins in K562 and its resistant cell line and highlights the power of 2D-DIGE for the discovery of resistance markers in cancer. We found CRKL may be a new protein involved in the multidrug resistanse of leukaemia cells.     

白血病细胞株耐药与核因子κB蛋白质诱导表达的关系

目的:探讨慢性粒细胞性白血病细胞K562与其耐药株K562/ADR细胞中IκB-α和NF-κB的表达,以及三氧化二砷(As2O3)诱导白血病细胞凋亡的关系.方法:应用不同浓度的As2O3诱导K562和K562/ADR细胞凋亡,以Western-blot免疫印迹电泳检测NF-κB、IκB-α的表达,流式细胞术检测细胞凋亡及分析IκB-α的阳性表达率变化.结果:As2O3诱导K562/ADR细胞凋亡率明显低于K562细胞,当As2O3浓度为1 μmol/L时,两种细胞凋亡率分别是(6.33±1.51)%、(13.25±1.83)%,当As2O3浓度增高到4 μmol/L时,细胞凋亡率则分别为(8.00±1.47)%、(50.56±8.62)%(P＜0.05).在K562细胞胞浆中,IκB-α阳性表达率则由(88.07±0.99)%减少到(49.21±0.95)%(P＜0.01),胞核中P65量逐渐增加;而K562/ADR细胞中无明显变化.结论:As2O3可诱导K562细胞凋亡,伴有IκB-α的降解及NF-κB的激活;K562/ADR细胞NF-κB表达增加,对As2O3诱导的反应无明显改变.