细胞外基质金属蛋白酶诱导因子在巨噬和泡沫细胞中的表达

目的观察细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)在单核向巨噬和泡沫细胞分化过程中的表达变化。方法体外诱导THP-1单核细胞分化为巨噬和泡沫细胞,应用Real-time RT-PCR和Western blot测定EMMPRIN基因和蛋白表达。结果单核细胞分化为巨噬细胞后EMMPRIN mRNA和蛋白表达均显著增加,当进一步分化为泡沫细胞时,EMMPRIN的表达与巨噬细胞比较无显著性差异。结论单核细胞向巨噬细胞的分化诱导EMMPRIN表达,而进一步向泡沫细胞分化对其表达无影响。     

THP1单核细胞分化过程中MMP9表达量的变化

目的 研究单核细胞在向巨噬细胞、泡沫细胞分化过程中基质金属蛋白酶-9(MMP 9)基因和蛋白表达的变化.方法 体外诱导人单核细胞系(THP 1)细胞株分化为巨噬细胞和泡沫细胞,采用荧光定量聚合酶链式反应和Western blotting分别检测单核细胞向巨噬细胞、泡沫细胞分化过程中MMP 9基因和蛋白表达的变化.结果 THP 1单核细胞向巨噬细胞、泡沫细胞分化过程中MMP 9 mRNA表达量分别增加了2.03倍和3.36倍(P<0.05,P<0.01);蛋白表达分别增加了5.86倍和3.68倍(P<0.01,P<0.05).巨噬细胞和泡沫细胞中的MMP 9 mRNA水平无明显差异(P>0.05),但泡沫细胞中蛋白表达量较巨噬细胞有显著减少(P<0.05).结论 经体外诱导分化成的巨噬细胞和泡沫细胞中MMP 9 mRNA、蛋白水平与单核细胞比较呈显著增加,但单核细胞分化为泡沫细胞后其蛋白表达量呈显著下降.     

THP1单核细胞分化过程中MMP9表达量的变化

目的研究单核细胞在向巨噬细胞、泡沫细胞分化过程中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)基因和蛋白表达的变化。方法体外诱导人单核细胞系(THP-1)细胞株分化为巨噬细胞和泡沫细胞,采用荧光定量聚合酶链式反应和Western blotting分别检测单核细胞向巨噬细胞、泡沫细胞分化过程中MMP-9基因和蛋白表达的变化。结果THP-1单核细胞向巨噬细胞、泡沫细胞分化过程中MMP-9 mRNA表达量分别增加了2.03倍和3.36倍(P<0.05,P<0.01);蛋白表达分别增加了5.86倍和3.68倍(P<0.01,P<0.05)。巨噬细胞和泡沫细胞中的MMP-9 mRNA水平无明显差异(P>0.05),但泡沫细胞中蛋白表达量较巨噬细胞有显著减少(P<0.05)。结论经体外诱导分化成的巨噬细胞和泡沫细胞中MMP-9 mRNA、蛋白水平与单核细胞比较呈显著增加,但单核细胞分化为泡沫细胞后其蛋白表达量呈显著下降。     

特异性抑制单核细胞中EMMPRIN基因表达的siRNA筛选和鉴定

目的 设计合成干扰细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)基因表达的不同小型干扰RNA(siRNA),筛选出能高效抑制单核/巨噬细胞中EMMPRIN表达的siRNA.方法 根据人源EMMPRIN mRNA的序列,设计合成3对不同的且能干扰EMMPRIN基因表达的siRNA,将其转染THP-1单核细胞株,采用荧光定量PCR和蛋白印迹法评价基因表达情况.结果 设计合成的3对siRNA中的2对siRNA可以特异性抑制单核细胞中EMMPRIN mRNA和蛋白表达(分别减少70%和50%,P＜0.05).结论 成功设计合成了针对EMMPRIN基因的siRNA,并从中筛选出能特异且高效阻断EMMPRIN表达的siRNA,为进一步研究EMMPRIN基因对动脉粥样硬化形成的影响及其临床应用奠定了基础.     

ACAT-1在单核细胞向泡沫细胞分化过程中的表达变化

目的研究单核细胞向泡沫细胞诱导分化过程中脂酰CoA胆固醇酯酰转移酶-1(ACAT-1)表达及活性的变化。方法复苏、培养人单核细胞株THP-1细胞,与乙酸肉豆蔻佛波酯(PMA)、PMA+氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)共孵育1～4 d,RT-PCR方法检测单核细胞分化过程中ACAT-1 mRNA表达,Westernblotting检测ACAT-1蛋白表达的变化。结果(1)单核细胞复苏后加入PMA诱导48 h后,分化为巨噬细胞。经PMA+ox-LDL诱导24 h后分化为泡沫细胞。(2)与无血清培养单核细胞对照组比较,在PMA诱导单核细胞株THP-1向巨噬细胞分化过程中,ACAT-1 mRNA、蛋白表达及酶活性水平明显增高(P<0.05),呈时间依赖效应。(3)巨噬细胞向泡沫细胞分化过程中,ACAT-1 mRNA、蛋白表达及酶活性水平增高,呈时间依赖效应。但和无血清培养巨噬细胞比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论单核细胞株THP-1经PMA,PMA/ox-LDL诱导后,可分化为巨噬细胞、泡沫细胞。ACAT-1的表达及活性增高在单核细胞向泡沫细胞诱导分化过程中起着重要作用。     

特异性抑制单核细胞中EMMPRIN基因表达的siRNA筛选和鉴定

目的设计合成干扰细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)基因表达的不同小型干扰RNA(siRNA),筛选出能高效抑制单核/巨噬细胞中EMMPRIN表达的siRNA。方法根据人源EMMPRIN mRNA的序列,设计合成3对不同的且能干扰EMMPRIN基因表达的siRNA,将其转染THP-1单核细胞株,采用荧光定量PCR和蛋白印迹法评价基因表达情况。结果设计合成的3对siRNA中的2对siRNA可以特异性抑制单核细胞中EMMPRIN mRNA和蛋白表达(分别减少70%和50%,P<0.05)。结论成功设计合成了针对EMMPRIN基因的siRNA,并从中筛选出能特异且高效阻断EMMPRIN表达的siRNA,为进一步研究EMMPRIN基因对动脉粥样硬化形成的影响及其临床应用奠定了基础。     

LTB4在THP-1源性巨噬细胞中通过MAPK途径上调EMMPRIN的表达

目的 探讨白三烯B4在MAPK信号通路中对细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)表达的影响.方法 将人类单核细胞系THP-1分为6组,用PMA诱导2～6组的THP-1成巨噬细胞,3～6组加入白三烯B4,第4组加入PD98059(ERK1/2抑制剂),第5组加入SB203580(P38抑制剂),第6组加入SP600125(JNK抑制剂),观察EMMPRIN和MMP-9的mR-NA以及EMMPRIN的蛋白变化.结果 LTB4使单核细胞EMMPRIN的mRNA表达增加(P＜0.05)、MMP-9的mRNA表达增加(P＜0.01),及EMMPRIN的蛋白表达明显增加(P＜0.01),加入PD98059后,EMMPRIN的mRNA表达明显下降(P＜0.01),MMP-9的mRNA表达明显下降(P＜0.01),EMMPRIN蛋白表达明显下降(P＜0.01),加入SB203580后,EMMPRIN的mRNA明显下降(P＜0.01),MMP-9的mRNA明显下降(P＜0.01),EMMPRIN蛋白表达明显下降(P＜0.01),加入SP600125后,EMMPRIN的mRNA明显下降(P＜0.05),MMP-9的mRNA明显下降(P＜0.01),EMMPRIN蛋白表达明显下降(P＜0.01).结论 白三烯B4通过激活MAPK信号通路增加THP-1源性巨噬细胞EMMPRIN的表达,可能是其增加巨噬细胞MMPs产生的机制.     

硫酸吲哚酚对THP-1源性泡沫细胞ATP结合转运子A1和G1表达的调控

目的观察硫酸吲哚酚(IS)是否调节巨噬泡沫细胞脂滴的蓄积,以及对巨噬泡沫细胞ATP结合转运子A1(ABCA1)和ATP结合转运子G1(ABCG1)表达的影响。方法体外佛波酯(PMA)诱导人源单核细胞系THP-1分化为巨噬细胞,随后加入氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激下进一步转变为泡沫细胞。巨噬细胞加入不同浓度的IS以及ox-LDL共同作用24 h,油红O染色法观察细胞内脂滴的含量,RT-PCR法检测ABCA1和ABCG1 mRNA水平,Western blotting法检测ABCA1和ABCG1蛋白表达。结果 IS干预可明显促进细胞内脂滴蓄积,下调单核/巨噬细胞泡沫化过程中ABCA1和ABCG1 mRNA和蛋白的表达,且此作用呈浓度依赖性。结论 IS可通过下调ABCA1和ABCG1mRNA和蛋白的表达,增加细胞内脂滴蓄积,从而促进动脉粥样硬化的发生发展。     

IL-1对单核细胞向泡沫细胞诱导分化过程中ACAT-1 mRNA表达的影响

目的:研究IL-1对单核细胞向泡沫细胞诱导分化过程中ACAT-1 mRNA表达的影响.方法:(1)复苏并培养人单核细胞株THP-1细胞并诱导为巨噬细胞和泡沫细胞.(2)RT-PCR法检测A-CAT-1 mRNA在单核细胞、巨噬细胞、泡沫细胞以及泡沫细胞加IL-1和泡沫细胞加IL-1/IL-1单克隆抗体中的表达.结果:(1)单核细胞株THP-1细胞被诱导为巨噬细胞和泡沫细胞.(2)与单核细胞比,巨噬细胞、泡沫细胞以及泡沫细胞加IL-1的ACAT-1 mRNA表达均明显增高,尤以泡沫细胞加IL-1中增高明显;与泡沫细胞加IL-1比,泡沫细胞加IL-1/IL-1单克隆抗体的ACAT-1 mRNA表达下降.结论:(1)IL-1对单核细胞向泡沫细胞诱导分化过程中ACAT-1 mRNA的表达有上调作用,IL-1单克隆抗体可以拮抗这种效应.(2)IL-1可上调ACAT-1 mRNA表达水平,可能是巨噬细胞脂质过负荷后A-CAT-1上调的始动因子之一.     

NF-κB途径介导Chemerin抑制THP-1源性巨噬泡沫细胞ABCAl表达和降低胆固醇外流

目的观察脂肪因子Chemerin是否调节胆固醇流出和巨噬泡沫细胞脂滴蓄积,以及对巨噬泡沫细胞ATP结合盒转运子A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)和酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1(Acyl-CoA:choles-terol acyltransferase-1,ACAT1)表达和NF-κB活化的影响。方法佛波酯(phorbol myristate acetate,PMA)诱导THP-1单核细胞分化为巨噬细胞,随后加入胆固醇和ox-LDL培养促进巨噬细胞转化为巨噬泡沫细胞,免疫荧光染色检测巨噬细胞表面抗原CD68的表达,油红O染色后观察泡沫细胞形态,脂肪因子Chemerin干预巨噬泡沫细胞,应用液体闪烁计数仪检测胆固醇流出变化,油红O染色观察细胞内脂滴变化,实时PCR和Western blot检测ABCA1及ACAT1mR-NA和蛋白表达水平。Sandwich ELISA法检测巨噬泡沫细胞NF-κB活化情况。实时PCR检测NF-κB抑制剂四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯(PDTC)预处理后,Chemerin再干预时ABCA1表达的变化。结果 Chemerin抑制巨噬细胞内胆固醇流出,促进脂滴蓄积,下调ABCA1mRNA和蛋白的表达,增加NF-κB活化,差异有统计学意义(均P<0.05),且ABCA1mRNA表达与Chemerin浓度呈负相关,r=-0.936(P<0.05),NF-κB活化程度与ABCA1mRNA表达呈负相关,r=-0.917(P<0.05),但Chemerin对ACAT1mRNA和蛋白的表达无明显影响,PDTC预处理能够逆转ABCA1mRNA表达抑制。结论 Chemerin下调ABCA1mRNA和蛋白的表达,抑制THP-1巨噬泡沫细胞内胆固醇外流,增加细胞内脂滴蓄积,NF-κB活化可能是Chemerin抑制ABCA1mRNA表达的信号通路之一。