基质金属蛋白酶-2，9，8在成人成牙本质细胞中的表达及转移生长因子对其分泌的影响

目的:观察研究基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)在成牙本质细胞中的表达和调控.方法:利用酶谱、Western blot和免疫组化等方法,研究MMP-2,9,8的表达以及转移生长因子β1(Transforming growth factor beta 1,TGF-β1)作用后MMP-2,9,8的表达变化.结果:酶谱显示MMP-2、MMP-9在成牙本质细胞中均有表达,TGF-β1上调MMP-2下调MMP-9;Western blot显示成牙本质细胞中有MMP-8的表达,TGF-β1增强其表达;免疫组化检测到MMP-8定位表达在成牙本质细胞层.结论:成牙本质细胞是MMP-2,9,8的来源之一;TGF-β1可能调节MMP-2,9,8的表达.     

PPARα配体对泡沫细胞炎性介质分泌的影响

目的在证实泡沫细胞有过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPARα）表达的基础上,探讨其配体对泡沫细胞炎性介质分泌的影响。方法体外诱导THP-1单核细胞分化为巨噬细胞,给予oxLDL进一步诱导其转变为泡沫细胞,应用RT-PCR检测PPARα基因表达;PPARα配体氯贝丁酯（50μmol/L）干预后用ELISA法测定泡沫细胞培养上清液中IL-6、TNF-α、MMP-2、MMP-9浓度,Gelatin Zymography测定MMPs活性。结果巨噬细胞转化为泡沫细胞后其PPARα基因表达无显著变化;氯贝丁酯可显著抑制泡沫细胞IL-6、TNF-α（P<0.05）、MMP-9（P<0.01）的分泌,抑制MMP-9的活性,对MMP-2的分泌和活性无影响。结论PPARα配体抑制致动脉粥样硬化炎性因子的分泌,减少基质金属蛋白酶的释放并抑制其活性,对防治粥样硬化有利。     

MMP-8在健康牙齿和龋齿成牙本质细胞中的表达研究

目的:通过比较有龋和无龋个体中基质金属蛋白酶-8(MMP-8)在成牙本质细胞中的表达,以探讨来源于宿主的MMP-8在龋病发病机制中的作用.方法:20～30岁成人健康第三磨牙40个,随机分为A、B组;龋损第三磨牙40个,随机分为C、D组.A组和c组牙齿用作MMP-8免疫组化实验;B组和D组牙齿用作Western印记检测MMP-8,Qantity One图像分析软件定量条带表达强度值.结果:免疫组化显示在健康和龋病成牙本质细胞层均有MMP-8蛋白表达,健康组中MMP-8表达呈弱阳性,龋病组中MMP-8表达呈强阳性.在健康和龋病成牙本质细胞上清液中Western印记均检测到一条Mr为5×10<'4>的MMP-8蛋白条带,其中龋齿条带强度值显著高于健康牙齿(P<0.01).结论:MMP-8在健康和龋损牙齿中表达强度不同,揭示MMPs可能在龋病的进展过程中发挥作用.     

PPARγ激动剂筛选模型的建立及其应用

目的建立一种简便实用的细胞模型,用于筛选过氧化物酶增殖剂激活受体γ(PPARγ)的新配体激动剂.方法在U937细胞中,共转染PPARγ表达和报告质粒,构建PPARγ激动剂筛选模型,单独转染PPARγ报告质粒作为阴性对照.转染细胞中加入候选药物,24 h后裂解细胞,测定细胞内报告质粒所表达虫荧光素酶的活性,该活性大小即代表药物激动PPARγ的能力. 结果已知的PPARγ配体激动剂吡格列酮使虫荧光素酶活性增强了4.48倍(P<0.001),验证了模型的有效性.高密度脂蛋白(HDL)不能激动PPARγ,而氧化后随剂量增加,使虫荧光素酶活性增强1.33倍(25 μg/mL)和1.78倍(50 μg/mL),但没有达到统计学差异(P=0.058,P=0.054);白藜芦醇使虫荧光素酶强度增加了1.78倍和2.47倍(P=0.033, P=0.01).结论通过细胞共转染PPARγ表达质粒和编码虫荧光素酶的报告质粒,可以建立简便的PPARγ激动剂筛选模型.HDL氧化后可能会产生激动PPARγ的成份,而白藜芦醇具有较强的PPARγ激动能力.     

特异性抑制单核细胞中EMMPRIN基因表达的siRNA筛选和鉴定

目的 设计合成干扰细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)基因表达的不同小型干扰RNA(siRNA),筛选出能高效抑制单核/巨噬细胞中EMMPRIN表达的siRNA.方法 根据人源EMMPRIN mRNA的序列,设计合成3对不同的且能干扰EMMPRIN基因表达的siRNA,将其转染THP-1单核细胞株,采用荧光定量PCR和蛋白印迹法评价基因表达情况.结果 设计合成的3对siRNA中的2对siRNA可以特异性抑制单核细胞中EMMPRIN mRNA和蛋白表达(分别减少70%和50%,P＜0.05).结论 成功设计合成了针对EMMPRIN基因的siRNA,并从中筛选出能特异且高效阻断EMMPRIN表达的siRNA,为进一步研究EMMPRIN基因对动脉粥样硬化形成的影响及其临床应用奠定了基础.     

高胰岛素状态下巨噬细胞PPARγ抗炎活性的变化

目的探讨高胰岛素状态下巨噬细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）抗炎活性的变化。方法体外培养THP1细胞,诱导分化为巨噬细胞,采用吡格列酮和不同浓度胰岛素分组干预,ELISA法测定细胞培养上清液中IL6、TNFα、MMP9浓度,GelatinZymography法测MMP9活性。半定量RTPCR、Westernblot检测巨噬细胞PPARγ基因、蛋白表达。结果PPARγ配体吡格列酮（20μmol/L）作用24h可显著降低巨噬细胞IL6（P<0.01）、TNFα、MMP9的分泌（P<0.05）,抑制MMP9活性（P<0.05）。高胰岛素使吡格列酮抑制巨噬细胞分泌IL6、TNFα、MMP9的作用减弱,此作用与胰岛素浓度有关,呈浓度依赖性（0.25～0.5μmol/L）。而高胰岛素（0.1μmol/L）状态下巨噬细胞PPARγ基因、蛋白的表达均无显著变化。结论高胰岛素可减弱PPARγ配体抑制巨噬细胞分泌IL6、TNFα、MMP9的作用,但并未对巨噬细胞PPARγ基因、蛋白的表达产生影响,提示胰岛素对PPARγ的活性可能存在抑制。     

不同深度牙体窝洞制备对人成牙本质细胞影响的实验研究

目的：建立牙体制洞的体外实验模型，研究不同深度的窝洞对人成牙本质细胞的影响。方法：20～30岁成人健康第三磨牙40个，随机分为4组（3个实验组和1个对照组），分别制浅（A组）、中（B组）、深（C组）3种不同深度窝洞，冠根分开，37℃，50mL／LCO2连续培养2d，每天换液。扫描电镜检测成牙本质细胞形态，显微图像分析系统计算台盼蓝染色率，并进行统计学分析。结果：髓室顶中央区域，牙本质小管开放，仅见极少量的细胞碎片，周围区域成牙本质细胞形态良好；各实验组之间的台盼蓝染色率在统计学上有显著性差异（P〈0．01）。结论：制备窝洞不同深度均对成牙本质细胞造成损伤，随着制洞深度的增加，成牙本质细胞受到的损伤明显加重。     

特异性抑制单核细胞中EMMPRIN基因表达的siRNA筛选和鉴定

目的设计合成干扰细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)基因表达的不同小型干扰RNA(siRNA),筛选出能高效抑制单核/巨噬细胞中EMMPRIN表达的siRNA。方法根据人源EMMPRIN mRNA的序列,设计合成3对不同的且能干扰EMMPRIN基因表达的siRNA,将其转染THP-1单核细胞株,采用荧光定量PCR和蛋白印迹法评价基因表达情况。结果设计合成的3对siRNA中的2对siRNA可以特异性抑制单核细胞中EMMPRIN mRNA和蛋白表达(分别减少70%和50%,P<0.05)。结论成功设计合成了针对EMMPRIN基因的siRNA,并从中筛选出能特异且高效阻断EMMPRIN表达的siRNA,为进一步研究EMMPRIN基因对动脉粥样硬化形成的影响及其临床应用奠定了基础。     

THP1单核细胞分化过程中MMP9表达量的变化

目的 研究单核细胞在向巨噬细胞、泡沫细胞分化过程中基质金属蛋白酶-9(MMP 9)基因和蛋白表达的变化.方法 体外诱导人单核细胞系(THP 1)细胞株分化为巨噬细胞和泡沫细胞,采用荧光定量聚合酶链式反应和Western blotting分别检测单核细胞向巨噬细胞、泡沫细胞分化过程中MMP 9基因和蛋白表达的变化.结果 THP 1单核细胞向巨噬细胞、泡沫细胞分化过程中MMP 9 mRNA表达量分别增加了2.03倍和3.36倍(P<0.05,P<0.01);蛋白表达分别增加了5.86倍和3.68倍(P<0.01,P<0.05).巨噬细胞和泡沫细胞中的MMP 9 mRNA水平无明显差异(P>0.05),但泡沫细胞中蛋白表达量较巨噬细胞有显著减少(P<0.05).结论 经体外诱导分化成的巨噬细胞和泡沫细胞中MMP 9 mRNA、蛋白水平与单核细胞比较呈显著增加,但单核细胞分化为泡沫细胞后其蛋白表达量呈显著下降.     

PPARγ激动剂筛选模型的建立及其应用

目的建立一种简便实用的细胞模型,用于筛选过氧化物酶增殖剂激活受体γ(PPARγ)的新配体激动剂。方法在U937细胞中,共转染PPARγ表达和报告质粒,构建PPARγ激动剂筛选模型,单独转染PPARγ报告质粒作为阴性对照。转染细胞中加入候选药物,24h后裂解细胞,测定细胞内报告质粒所表达虫荧光素酶的活性,该活性大小即代表药物激动PPARγ的能力。结果已知的PPARγ配体激动剂吡格列酮使虫荧光素酶活性增强了4.48倍(P<0.001),验证了模型的有效性。高密度脂蛋白(HDL)不能激动PPARγ,而氧化后随剂量增加,使虫荧光素酶活性增强1.33倍(25μg/mL)和1.78倍(50μg/mL),但没有达到统计学差异(P=0.058,P=0.054);白藜芦醇使虫荧光素酶强度增加了1.78倍和2.47倍(P=0.033,P=0.01)。结论通过细胞共转染PPARγ表达质粒和编码虫荧光素酶的报告质粒,可以建立简便的PPARγ激动剂筛选模型。HDL氧化后可能会产生激动PPARγ的成份,而白藜芦醇具有较强的PPARγ激动能力。