3号染色体短臂21-22区域63个新基因在鼻咽癌组织中的差异表达

目的寻找与鼻咽癌发病密切相关的未知基闪。方法对63个定位于3号染色体短臂21-22 D3S1609-D3S1295区域的单拷贝并代表未知基因的EST簇进行网上克隆，在获取基因大片段或全长cDNA序列的基础上，应用半定量逆转录．聚合酶链反应检测63个未知基因在4种鼻咽癌细胞铢、32例鼻咽部低分化鳞状细胞癌组织和16例鼻咽部慢性炎症组织中的表达状况。结果49个未知基因在鼻咽癌组织和鼻咽部慢性炎症组织问的表达水平无显著性差异；8个未知基因在鼻咽癌和鼻咽部慢性炎症组织中均不表达；2个未知基因在鼻咽癌组织中表达明显增强；4个未知基因在鼻咽癌组织中表达明显减弱，其中Hs．27566基因在鼻咽癌细胞和组织中均显著低表达或不表达。结论在染色体3p21-22D3S1609．D3S1295区域构建了63个未知基因在鼻咽癌的表达差异谱：筛选出6个在鼻咽癌组织中差异表达的未知基因。     

人鼻咽癌不同部位组织相关基因表达谱的研究

目的 筛选鼻咽癌癌变发生过程中的重要基因。方法 应用显微切割和荧光标记探针基因芯片杂交技术,检测鼻咽癌、癌周组织、癌旁组织及鼻咽炎症组织的基因差异表达,扫描仪扫描荧光芯片,图象处理软件分析结果。结果 在检测的3组标本中,存在大量差异表达基因,涉及基因包括信号与蛋白传递、癌基因与原癌基因、免疫相关基因、凋亡基因,以及DNA结合转录和转录因子等范围。结论 鼻咽癌癌变过程中有多个多种类基因参与,说明鼻咽癌癌变过程是一个复杂、多通路的过程。     

MMP20在鼻咽癌中表达及与预后关联性分析

目的 探讨MMP20在鼻咽癌中的表达以及与临床参数、预后之间的关系。方法 收集南方医科大学南方医院病理科共127例鼻咽癌组织和37例正常鼻咽组织,利用免疫组化检测MMP20蛋白表达。采用卡方和Kaplan Meier生存曲线统计分析MMP20蛋白表达变化以及鼻咽癌患者临床参数、预后之间的关系。稳定沉默鼻咽癌细胞MMP20的表达,比较单克隆形成能力。结果 免疫组化分析检测显示,MMP20蛋白在鼻咽癌与正常鼻咽组织的细胞浆中均表达,鼻咽癌组织中的表达明显高于鼻咽组织。MMP20的高表达与鼻咽癌患者的T、N和TNM分期呈明显正相关。MMP20蛋白升高明显缩短鼻咽癌患者的生存时间,显示MMP20表达是预测鼻咽癌患者预后的预测因子。沉默MMP20表达会导致鼻咽癌细胞增殖能力下降。结论 MMP20蛋白在鼻咽癌中高表达并导致了患者预后不良。     

转酮酶样基因TKTL1在人类鼻咽癌发生和转移中的作用

目的 探讨转酮酶样基因TKTL1在人类鼻咽癌发生和转移中的作用.方法 对65例鼻咽癌和9例鼻咽部慢性炎症组织中转酮酶活性进行检测;实时定量PCR检测鼻咽癌和鼻咽部慢性炎症组织中转酮酶基因家族(TKT、TKTL1和TKTL2)mRNA表达水平的变化,并分析TKTL1的表达与鼻咽癌发生和转移的关系.结果 鼻咽癌组织中转酮酶活性较鼻咽部慢性炎症组织明显增强(t=4.12,P=0.00);实时定量PCR结果 示鼻咽癌和鼻咽部慢性炎症组织中TKT和TKTL2 mRNA的表达水平差异无统计学意义(t=1.28、1.62,P=0.32、0.26).然而,鼻咽癌组织中TKTL1的表达水平比鼻咽部慢性炎症组织明显上调(t=6.23,P=0.00),且有淋巴结转移的鼻咽癌组织中TKTL1的表达水平较尤淋巴结转移者明显增强,差异有统计学意义(t=3.28,P=0.00).结论 转酮酶样基因TKTL1在人类鼻咽癌的发生和转移中可能起重要作用,TKTL1有望成为肿瘤治疗研究的新靶点.     

P16和Bcl-2蛋白在鼻咽部鳞状细胞癌的表达及相互关系

目的探讨多发性肿瘤拟制基因（P16）和B细胞淋巴瘤/白血病基因2（Bcl-2）在不同分期鼻咽部鳞状细胞癌组织及鼻咽部炎症组织中的表达情况。方法应用免疫组化SP二步法检测40例不同分期鼻咽部鳞状细胞癌组织和16例鼻咽部慢性炎症组织中P16及Bcl-2蛋白的表达。结果 P16蛋白在鼻咽部炎症组织中高表达,癌组织中低表达,P16的表达与鼻咽癌的临床分期无明显关系,有颈部淋巴结转移的鼻咽癌患者P16基因表达较无颈部淋巴结转移者低,但差异无统计学意义（P〉0.05）。Bcl-2蛋白在癌组织中高表达,炎症组织中低表达。结论 Bcl-2是在鼻咽部鳞状细胞癌组织中高表达的凋亡抑制基因,P16是鼻咽鳞状细胞癌中低表达的抑癌基因。     

鼻咽癌组织中X 连锁凋亡抑制蛋白及caspase-3 和Smac /DIABLO 的表达及意义

目的采用组织芯片技术研究鼻咽癌组织中X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、caspase-3与其拮抗蛋白Smac/DIABLO的表达及其意义。方法以50例鼻咽癌患者鼻咽部活体组织石蜡标本和20例鼻咽部慢性炎症组织石蜡标本为研究对象,利用组织芯片技术同时采用SP免疫组织化学方法检测鼻咽癌组织芯片中XIAP、caspase-3和Smac/DIAB-LO的表达。结果鼻咽癌组织中XIAP的阳性表达高于鼻咽部慢性炎症组织,caspase-3和Smac/DIABLO的阳性表达明显低于鼻咽部慢性炎症组织,差别均有统计学意义(P<0.05)。XIAP阳性的鼻咽癌石蜡标本Smac/DIABLO阳性表达率低于XIAP阴性的鼻咽癌石蜡标本Smac/DIABLO阳性表达率,鼻咽癌组织中XIAP与Smac/DIABLO表达呈负相关(P<0.05)。结论 XIAP在鼻咽癌中高表达,caspase-3、Smac/DIABLO在鼻咽癌中低表达,鼻咽癌中XIAP和Smac/DI-ABLO表达呈负相关。XIAP、caspase-3和Smac/DIABLO可能是鼻咽癌细胞凋亡信号传导网络中的重要一环,与鼻咽癌的发生、发展密切相关。     

鼻咽癌组织中XIAP和Smac/DIABLO的表达及意义

[摘要] 目的 采用组织芯片技术研究鼻咽癌组织中X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）与其拮抗蛋白Smac/DIABLO的表达及其意义。方法 以50例鼻咽癌患者鼻咽部活体组织石蜡标本和20例鼻咽部慢性炎症组织石蜡标本为研究对象,利用组织芯片技术同时采用S-P免疫组织化学方法检测鼻咽癌组织芯片中XIAP和Smac/DIABLO的表达。结果 （1）鼻咽癌中XIAP的阳性表达明显高于鼻咽部慢性炎症组织,差异有统计学意义(P <0.05)。鼻咽癌中Smac/DIABLO的阳性表达均明显低于鼻咽部慢性炎症组织,差异有统计学意义(P <0.05)。（2）Smac/DIABLO在XIAP阳性的鼻咽癌石蜡标本中的阳性表达率低于在XIAP阴性的鼻咽癌石蜡标本中,XIAP和Smac/DIABLO表达均呈明显负相关（P <0.05）。结论 XIAP在鼻咽癌中高表达,Smac/DIABLO在鼻咽癌中低表达,鼻咽癌中XIAP和Smac/DIABLO表达呈负相关。XIAP和Smac/DIABLO可能是鼻咽癌细胞凋亡信号传导网络中的重要一环,其与鼻咽癌的发生、发展密切相关。     

鼻咽癌组织RASSF1A基因的表达

目的探讨RASSF1A基因在鼻咽癌发病过程中的作用。方法采用逆转录-聚合酶链技术在4种鼻咽癌细胞株、32例鼻咽癌组织和16例正常鼻咽部组织中检测RASSF1A基因的表达,并分析鼻咽癌组织在3p21.3 D3S4604微卫星多态性位点的等位基因杂合性丢失状况。结果RASSF1A基因在4种鼻咽癌细胞株中低表达,32例鼻咽癌组织的RASSF1A基因表达显著低于16例正常鼻咽部组织(P=0.001);43.75%(14/32)的鼻咽癌组织在3p21.3 D3S4604位点发生了杂合性丢失。鼻咽癌RASSF1A基因表达与性别、年龄、颈部淋巴结转移、TNM临床分期、D3S4604位点杂合性丢失和血清EB病毒VCA/IgA抗体滴度无显著相关性,但伴远处转移的鼻咽癌组织的RASSF1A表达显著低于无远处转移的鼻咽癌(P=0.014)。结论RASSF1A基因的表达下调可能是鼻咽癌发病过程中的晚期事件,3p21区域可能还存在与鼻咽癌发生密切相关的抑瘤基因。     

CR2和MXLIP在低分化鼻咽癌组织中的差异表达

目的 为了解低分化鼻咽癌组织与非癌症组织之间的基因表达差异,进一步找出有明显差异表达的基因作为诊断鼻咽癌新的分子标志.方法 实验通过14 112个点的cDNA基因表达谱芯片,比较20例低分化鼻咽癌组织和15例鼻咽慢性炎症组织之间的表达差异,并通过荧光实时定量PCR对50例鼻咽癌组织进行验证.结果 基因芯片的分析结果显示,9个基因（q〈0.01）至少在17例（85%）鼻咽癌组织中有2倍差异表达,包括8个下调基因（TAOK3,SLC16A2,PRB4,AMY2B,B3GALT4,MSMB,RPS27,CR2）和1个上调基因（MXLIP）.进一步研究表明,选用CR2和MXLIP对50例低分化鼻咽癌组织荧光实时定量PCR分析与3例鼻咽慢性炎症组织进行比较,与芯片实验结果相同,CR2在41例（82%）鼻咽癌组织中下调,MXLIP在42例（84%）鼻咽癌组织中上调.结论 我们认为这两个基因可以作为诊断低分化鼻咽癌新的标志基因.     

鼻咽癌组织中XIAP和XAF1的表达及意义

[摘要] 目的 采用组织芯片技术研究鼻咽癌组织中凋亡抑制蛋白XIAP与其拮抗蛋白XAF1的表达及其意义。方法 以50例鼻咽癌患者鼻咽部活体组织石蜡标本和20例鼻咽部慢性炎症组织石蜡标本为研究对象,利用组织芯片技术同时采用S-P免疫组织化学方法检测鼻咽癌组织芯片中XIAP和XAF1的表达。结果 （1）鼻咽癌中XIAP的阳性表达明显高于鼻咽部慢性炎症组织,差异有统计学意义(P <0.05)。鼻咽癌中XAF1的阳性表达均明显低于鼻咽部慢性炎症组织,差异有统计学意义(P <0.05);（2）XAF1在XIAP阳性的鼻咽癌石蜡标本中的阳性表达率低于在XIAP阴性的鼻咽癌石蜡标本中,XIAP和XAF1表达均呈明显负相关（P <0.05）。结论 XIAP在鼻咽癌中高表达,XAF1在鼻咽癌中低表达,鼻咽癌中XIAP和XAF1表达呈负相关。XIAP和XAF1可能是鼻咽癌细胞凋亡信号传导网络中的重要一环,其与鼻咽癌的发生、发展密切相关。     

鼻咽癌组织RASSFIA基因的表达

目的 探讨RASSFIA基因在鼻咽癌发病过程中的作用。方法 采用逆转录—聚合酶链技术在4种鼻咽癌细胞株、32例鼻咽癌组织和16例正常鼻咽部组织中检测RASSFIA基因的表达。并分析鼻咽癌组织在3p21.3D3S4604徽卫星多态性位点的等位基因杂合性丢失状况。结果 RASSFIA基因在4种鼻咽癌细胞株中低表达，32例鼻咽癌组织的RASSFIA基因表达显著低于16例正常鼻咽部组织(P=0．001)；43．75％(14／32)的鼻咽癌组织在3p21．3D3S4604位点发生了杂合性丢失。鼻咽癌RASSF1A基因表达与性别、年龄、颈部淋巴结转移、TNM临缶床分期、D3S4604位点杂合性丢失和血清EB病毒VCA／IgA抗体滴度无显著相关性，但伴远处转移的鼻咽癌组织的RASSFIA表达显著低于无远处转移的鼻咽癌(P=0．014)。结论 RASSFIA基因的表达下调可能是鼻咽癌发病过程中的晚期事件，3p21区域可能还存在与鼻咽癌发生密切相关的抑瘤基因。     

人鼻咽癌细胞系中基质金属蛋白酶9的表达及意义

目的 检测MMP9在鼻咽癌细胞株及细胞株裸鼠成瘤瘤块组织中的表达,探讨MMP9的表达与鼻咽癌发生、发展的关系.方法 采用细胞免疫组织化学技术、RT-PCR、Western blot检测鼻咽癌细胞系CNE1、CNE2、HNE1、HNE2和SUNE15株细胞株中MMP9表达;免疫组织化学(SABC 法)检测HNE1和CNE2细胞裸鼠成瘤后瘤块MMP9的表达.结果 5株鼻咽癌细胞株中,免疫组化显示HNE1和SUNE1细胞中MMP9蛋白表达阳性.RT-PCR及Western Blot检测结果显示.HNE1和SUNE1细胞中MMP9 mKNA及蛋白高表达.HNE1和CNE2细胞裸鼠种植成瘤后,5例瘤块中MMP9蛋白均强阳性表达.结论 MMP9在鼻咽癌细胞系中表达阳性,成瘤后表达增强,提示MMP9的表达可能与鼻咽癌侵袭转移有关.     

鼻咽癌同期放化疗抵抗细胞株与母细胞株lncRNA的差异表达谱分析

  目的  分析鼻咽癌同期放化疗抵抗细胞株与亲本细胞株间差异表达的长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA），探索lncRNA在鼻咽癌同期放化疗抵抗中可能发挥的作用。  方法  体外构建鼻咽癌CEN1和CNE2细胞同期放化疗抵抗模型，诱导鼻咽癌细胞同期放化疗抵抗细胞株CEN1CRR和CNE2CRR，应用高通量测序筛选2组细胞株间差异表达的lncRNAs，对差异表达的lncRNAs的靶基因进行GO和KEGG分析。  结果  以Log2FC > 1或 < -1，FDR < 0.05为差异表达标准，和CNE1相比，CNE1CRR差异表达的lncRNAs2746个（358个上调，2063 个下调）；和CNE2相比，CNE2CRR差异表达的lncRNAs3475个（265个上调，520个下调）；此外，387个lncRNAs在CNE1CRR和CNE2CRR中表达同时下调，49个lncRNAs在CNE1CRR和CNE2CRR中同时上调。在GO分析中发现，2组细胞中差异表达lncRNAs的靶基因在生物过程（biological process，BP）、分子功能（molecular function，MF）、细胞成分（cellular component，CC）等方面均有参与。在KEGG分析结果中发现，CNE1组细胞中，差异lncRNAs的靶基因主要富集的信号通路有细胞凋亡、病毒致癌、代谢途径等。CNE2组细胞中，差异lncRNAs的靶基因主要富集的信号通路有代谢途径（硫辛酸、磷酸戊糖、花生四烯酸、醚脂质）、T细胞受体信号通路、核苷酸切除修复等（P < 0.05）。  结论  同期放化疗抵抗细胞株与亲本细胞株的lncRNA表达谱存在明显差异，这些差异表达的lncRNA可能参与了鼻咽癌的同期放化疗抵抗，并为其机制研究奠定基础。     

慢病毒介导的siRNA靶向干扰EIF4G1鼻咽癌稳定细胞株的建立

目的 检测人真核翻译起始因子4G1(EIF4G1)基因在8株鼻咽癌细胞中的差异表达,寻找最高表达的细胞株.构建EIF4G1基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体,建立稳定干扰EIF4G1表达的鼻咽癌细胞株,测定干扰效率.方法 应用荧光定量PCR检测EIF4G1 mRNA在鼻咽癌细胞株5-8F、6-10B、C666-1、CNE1、CNE2、HNE1、HONE1、SUNE1表达水平.构建重组靶向EIF4G1 shRNA慢病毒表达质粒pLenti6/BLOCK-iT-DEST/EIF4G1shRNA.用293FT细胞包装后产生的成熟慢病毒颗粒感染5-8F细胞.经杀稻瘟菌素筛选后,建立稳定表达siRNA的5-8F鼻咽癌细胞株.最后荧光定量PCR检测干扰效率.结果 在8个鼻咽癌细胞株中,EIF4G1显示在5-8F细胞株中表达最高.PCR和测序验证pLenti6/BLOCK-iT-DEST/EIF4G1shRNA重组质粒构建成功;经293FT细胞病毒包装,感染5-8F细胞后,与阴性对照组和未十扰组相比可明显抑制EIF4G1 mRNA水平EIF4G1表达.结论 成功构建TpLenti6/BLOCK-iT-DEST/EIF4G1shRNA慢病毒重组质粒,建立了稳定靶向干扰EIF4G1表达的siRNA5-8F鼻咽癌细胞株.     

建立慢病毒介导的miR-145稳定过表达的鼻咽癌细胞株

目的 构建过表达miR-145的慢病毒载体,建立稳定过表达miR-145的鼻咽癌细胞株.方法 构建慢病毒表达质粒pLVTHM/miR-145;293FT细胞进行慢病毒包装,生产的慢病毒感染鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2,经流式细胞仪筛选后,建立稳定表达miR-145的鼻咽癌细胞株;最后应用荧光定量PCR检测病毒感染后鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2中miR-145的表达水平.结果 荧光定量PCR结果和测序验证pLVTHM/miR-145重组质粒构建成功;包装生产的慢病毒感染鼻咽癌细胞CNE1和CNE2后,与阴性对照组比较,其表达水平分别升高4000倍和4500倍.结论 成功构建了pLVTHM/miR-145慢病毒重组质粒,建立稳定表达miR-145的鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2,为研究miR-145在鼻咽癌发生发展过程中的基因调控和相应的作用机制提供了有用的细胞模型.     

cDNA representational difference analysis of differentially expressed cDNA sequences in human nasopharyngeal carcinoma

ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｓｅａｒｃｈｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄｓｅｑｕｅｎｃｅｓｃｏｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆｈｕｍａｎｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ（ＮＰＣ）,ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｔｈｅｃａｎｄｉ...     

MCL1在鼻咽癌中的表达水平及临床意义

目的 研究髓样细胞白血病蛋白1（myeloid cell leukemia-1 protein,MCL1）在鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞中的表达情况,并分析其表达水平与鼻咽癌患者临床预后指标之间的关系。方法 运用免疫组化方法检测鼻咽癌组织和正常鼻腔黏膜组织中MCL1蛋白的表达差异,并分析MCL1表达与鼻咽癌患者临床病理指标之间的关系;运用Western blot法检测人鼻咽癌细胞系CNE2、CNE1以及人永生化鼻黏膜上皮细胞NP-69中MUC1蛋白表达情况。结果 免疫组化结果显示,鼻咽癌组织中MCL1表达阳性率为58.3%（35/60）,在正常鼻腔黏膜组织中MCL1阳性表达率23.8%（5/21）,鼻咽癌组织的MCL1表达水平显著高于正常鼻腔黏膜组织（P<0.05）;MCL1的表达水平与鼻咽癌患者的T分级、临床分期及淋巴结转移显著相关（P<0.05）,而与患者年龄、性别及分化程度无显著相关性（P>0.05）;同时,MCL1在鼻咽癌细胞系CNE2及CNE1中的表达高于NP69细胞,差异均有统计学意义（P<0.05）;结论 MCL1在鼻咽癌中可能起到促进肿瘤进展的作用,患者的MCL1表达水平可能与其预后相关。