P73基因在鼻咽癌组织中表达的意义

目的:研究鼻咽癌组织中P73基因的表达及其临床意义。方法:运用逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)及单链构象多态性分析技术(SSCP)检测P73mRNA的表达及P73基因的突变情况。运用免疫组化SABC技术检测P73蛋白的表达情况。结果:47例鼻咽癌组织中29例P73mRNA表达阳性,15例鼻咽粘膜慢性炎症组织中3例P73mRNA表达阳性。鼻咽癌组织中P73mRNA的表达与鼻咽粘膜慢性炎症组织相比,其差异具有显著性(P<0.05)。鼻咽癌组织中P73mRNA的表达与TNM分期存在密切关系,Ⅲ~Ⅳ期患者P73mRNA的阳性表达率较Ⅰ~Ⅱ期高(P<0.05)。P73基因在所检测的标本中未发现有突变。免疫组化技术检测证实鼻咽癌中存在P73蛋白的过表达(P<0.05)。结论:鼻咽癌组织中存在P73基因的过表达现象,P73基因的异常表达与鼻咽癌的发生发展存在一定的关系。     

高通量组织微阵列技术在鼻咽癌组织p53基因表达中的应用

组织微阵列 /组织芯片技术 (ｔｉｓｓｕｅｍｉｃｒｏａｒｒａｙ/ｔｉｓｓｕｅｃｈｉｐ)是最近伴随基因芯片技术而发展的一种新方法 ,可在一张玻片上用不同方法一次性完成几百例以上的临床组织标本的基因结构及基因表达的分析 ,是快速、经济地大规模筛查组织中基因结构改变、表达异常的强有力工具[1] 。目前国内未见用这种技术进行基因表达研究的报道。为进一步明确ｐ5 3基因表达与鼻咽癌 (ＮＰＣ)的相关性及探讨组织芯片技术的可行性 ,本研究应用本室构建的组织芯片结合免疫组织化学法检测了 32 0例不同类型的鼻咽活检组织中ｐ5 3基因的表达…     

鼻咽癌p130基因RT-PCR研究

目的了解鼻咽癌组织中抑癌基因p130在mRNA水平上的表达量。方法提取35例鼻咽癌组织及20例鼻咽慢性炎症组织总RNA,采用荧光定量RT-PCR技术检测p130基因mRNA含量。结果表明鼻咽癌组p130基因mRNA的量显著地低于对照组鼻咽慢性炎症组(秩和检验z统计量=2.33,近似χ2统计量=5.47,P值<0.05)。结论p130基因mRNA含量的减少与鼻咽癌有着密切的联系,p130基因在鼻咽癌的发生发展过程中具有重要作用。     

鼻咽癌p130基因RT-PCR研究

目的 了解鼻咽癌组织中抑癌基因p130在mRNA水平上的表达量.方法 提取35例鼻咽癌组织及20例鼻咽慢性炎症组织总RNA,采用荧光定量RT-PCR技术检测p130基因mRNA含量.结果 表明鼻咽癌组p130基因mRNA的量显著地低于对照组鼻咽慢性炎症组(秩和检验z统计量=2.33,近似x2统计量=5.47,P值＜0.05).结论 p130基因mRNA含量的减少与鼻咽癌有着密切的联系,p130基因在鼻咽癌的发生发展过程中具有重要作用.     

p73基因在鼻咽癌组织中的表达与临床意义

目的:探讨p73基因在鼻咽癌组织中的表达及其与临床预后的相关性.方法:采用定量RT-PCR技术检测35例鼻咽癌组织中p73基因的表达程度.结果:定量RT-PCR检出p73基因在26例鼻咽癌组织中呈高表达.在20例中高分化标本中检出13例呈中高表达,在15例低分化标本中检出13例呈中高表达,两者之间差异有统计学意义(P＜0.01);p73基因在9例(9/18)Ⅰ-Ⅱ期鼻咽癌标本中呈中高表达,在17例(17/17)Ⅲ-Ⅳ期鼻咽癌标本中呈中高表达.p73基因表达程度在鼻咽癌Ⅰ-Ⅱ期与Ⅲ-Ⅳ期之间的差异有统计学意义(P＜0.05).结论:p73基因mRNA的表达可能与鼻咽癌分化程度有关,与不良预后有关,与临床分期有关.     

P16抑癌基因在鼻咽癌组织中的表达

目的：为探讨P16抑癌基因与鼻咽癌（NPC)发生发展的关系。方法：采用免疫组化法检测了74例鼻咽癌组织和20例炎性鼻咽癌组织中P16基因的表达,结果：炎性鼻咽癌组织P16阳性率（100％）显著高于鼻咽癌组织（56．76％）（P＜0．01）在Ⅰ-Ⅱ和Ⅲ-Ⅳ期中鼻咽癌P16阳性率分别为66．67％和51．06％（P＞0．05）,在无颈淋巴结转移组（73．33％）显著高于伴有颈淋巴结转移组P16阳性率（45．45％）（P＜0．05）。结论：抑癌基因P16表达可能与鼻癌的发生发展呈负相关。     

肿瘤坏死因子凋亡相关配体基因的克隆和表达

目的：克隆、表达和鉴定肿瘤坏死因子凋亡相关配体(TRAIL)．方法：从培养的人外周血淋巴细胞中提取总RNA，经RT-PCR获得TRAIL基因．将该基因克隆到pGEM-Teasy载体中，测序鉴定．将TRAIL基因插入pBV220表达载体中，42℃诱导表达4～5h，进行SDS-PAGE分析．免疫印迹法鉴定TRAIL蛋白的表达．结果：DNA测序证明，获得了TRAIL基因，其序列与GenBank中报道序列完全一致．SDSPAGE分析表明，TRAIL蛋白获得高效表达，分子质量为17ku，表达量约占菌体总蛋白的300k，．免疫印迹法鉴定显示，该蛋白可与鼠抗人TRAIL mAb产生阳性反应．结论：成功克隆和表达了TRAIL基因．     

人鼻咽癌组织中转录因子相关基因的差异表达分析

目的 用cDNA微阵列膜比较鼻咽癌组织及正常组织的基因表达谱,研究鼻咽癌组织中转录因子相关基因的差异表达,为进一步探讨差异表达基因的调控机制奠定基础.方法 24例鼻咽癌组织总RNA和正常对照总RNA(24例正常鼻咽组织RNA等质量混合)分别经逆转录探针标记与微阵列膜杂交.然后用Pathway4.0软件分析杂交结果,并用RT-PCR反应验证微阵列杂交结果.结果 在1625个鼻咽癌差异表达基因中,共有转录因子相关基因35个,12个基因表达上调,23个基因表达下调.结论 在鼻咽癌组织中,多个转录因子相关基因的表达水平发生了变化,这些转录因子在鼻咽癌组织的基因表达调控中发挥重要作用.     

高密度脂蛋白诱导内皮细胞系差异表达基因的研究

目的：研究高密度脂蛋白（HDL）抗动脉粥样硬化（AS）的分子机理,克隆并分析血管内皮细胞在HDL作用下差异表达的已知和未知基因。方法：应用差异显示逆转录聚合酶链反应技术,分析人脐静脉内皮细胞系（ECV）304经高密度脂蛋白诱导后表达明显差异的cDNA。对差异基因进行序列测定和同源性比较,Northern印迹分析部分差异基因的表达情况。结果：HDL诱导ECV304细胞出现一些上调和下调表达的cDNA,差异表达明显的书籍基因有9个,其中上调表达的基因包括STE20样激酶、PBK1蛋白、转谷氨酰胺酶、肌球蛋白轻链、apobec-1结合蛋白、DAP蛋白;下调表达的基因有核糖体蛋白L7a（RPL7A）、线粒体外膜电压依赖性阴离子通道蛋白基因、甘氨酰胺核糖核苷酸甲酰基转移酶。差异表达明显的未知基因4个。Northern印迹证实,转谷氨酰胺酶基因表达上调50％,apobec-1结合蛋白基因表达上调70％。结论：HDL可诱导ECV304细胞转谷氨酰胺酶、apobec-1结合蛋白表达水平上调。这两个基因表达水平的升高可能与HDL抗动脉粥样硬化作用相关。     

前列腺癌组织PTI-1基因mRNA的表达意义

目的：探讨前列腺癌诱导基因1(PTI-1)在前列腺癌及前列腺增生症组织中的表达及其意义．方法：采用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)检测21例前列腺癌组织、12例前列腺增生症组织及9例正常前列腺组织中PTI-1 mRNA．结果：21例前列腺癌组织中15例阳性表达，阳性率为71．4％；12例前列腺增生症组织及9例正常前列腺组织中无一例阳性表达．结论：RT-PCR检测PTI-1基因mRNA可作为诊断前列腺癌的一种新方法。     

鼻咽癌组织RASSF1A基因的表达

目的探讨RASSF1A基因在鼻咽癌发病过程中的作用。方法采用逆转录-聚合酶链技术在4种鼻咽癌细胞株、32例鼻咽癌组织和16例正常鼻咽部组织中检测RASSF1A基因的表达,并分析鼻咽癌组织在3p21.3 D3S4604微卫星多态性位点的等位基因杂合性丢失状况。结果RASSF1A基因在4种鼻咽癌细胞株中低表达,32例鼻咽癌组织的RASSF1A基因表达显著低于16例正常鼻咽部组织(P=0.001);43.75%(14/32)的鼻咽癌组织在3p21.3 D3S4604位点发生了杂合性丢失。鼻咽癌RASSF1A基因表达与性别、年龄、颈部淋巴结转移、TNM临床分期、D3S4604位点杂合性丢失和血清EB病毒VCA/IgA抗体滴度无显著相关性,但伴远处转移的鼻咽癌组织的RASSF1A表达显著低于无远处转移的鼻咽癌(P=0.014)。结论RASSF1A基因的表达下调可能是鼻咽癌发病过程中的晚期事件,3p21区域可能还存在与鼻咽癌发生密切相关的抑瘤基因。     

RASSF1A基因在肝细胞肝癌中的表达及其临床意义

目的:探讨RASSF1A基因在肝细胞肝癌(简称肝癌)组织中的表达情况并探讨其临床意义。方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测48例肝癌组织及癌旁正常组织RASSF1A基因的转录水平。结果:48例肝癌组织中有32例RASSF1AmRNA表达缺失;但48例相应癌旁组织仅有16例RASSF1AmRNA表达缺失。Logistic逐步回归分析表明患者的年龄、性别、肝功能、血AFP、肝癌分化、肝癌大小、肝癌有无包膜与RASSF1AmRNA是否表达无显著相关性(P>0.05)。但在HBsAg(+)患者的肝癌组织及相应的癌旁组织中RASSF1AmRNA的表达率显著低于HBsAg(-)患者(P<0.01,P<0.05)。结论:RASSF1A表达缺失在肝癌的发生、发展中起重要的作用。     

RASSF1A基因在乳腺癌组织中的表达及意义

目的 探讨RASSF1A基因mRNA在乳腺癌组织中的表达与乳腺癌临床病理特征的关系.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测40例乳腺癌组织和15例乳腺良性病变即乳腺增生病组织中RASSF1A mRNA的表达水平.结果 ①RASSF1A mRNA在乳腺增生病组织中全部表达,在40例乳腺癌组织中有21例表达缺失,缺失率为52.5%;②在乳腺癌组织中淋巴结有转移者RASSF1A mRNA的表达率明显低于淋巴结无转移者,RASSF1A mRNA的表达缺失与淋巴结转移呈负相关(P<0.05);与年龄、组织学分级及雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)及CerbB-2蛋白的表达没有明显的相关性(P>0.05).结论 RASSF1A基因表达缺失可能与乳腺癌的发生、发展过程及其预后存在着一定的相关性.     

莱菔硫烷对鼻咽癌RASSF1A基因甲基化及表达的影响

目的探讨莱菔硫烷（SFN）对鼻咽癌CNE-2细胞RASSF1A甲基化及蛋白表达水平的影响。方法体外培养鼻咽癌CNE-2细胞,用0,5、10、30μM的SFN与其孵育24～96h,用MTT法检测细胞的增值情况;流式细胞术分析细胞周期的改变;采用甲基化特异性PCR检测RASSF1A基因启动子区域的甲基化改变情况;提取SFN处理后细胞的RNA,用逆转录PCR检测RASSF1A的表达水平,并用Western blot检测处理前后RASSF1A蛋白的表达。结果 SFN能以时间和剂量依赖性方式抑制CNE-2细胞增值,并能使细胞周期阻滞于S期和G2/M期。随着SNF浓度的增加,甲基化RASSF1A水平逐渐减弱,非甲基化RASSF1A水平逐渐增多。同时SFN能明显上调RASSF1A的mRNA和蛋白表达水平。结论 SFN能使RASSF1A基因去甲基化,并上调非甲基化基因的表达水平,从而抑制细胞的增值和分化而具有抗肿瘤的效应。     

RASSF1A基因在宫颈癌组织中的表达及意义

目的:探讨RASSF1A基因在宫颈癌发生过程中的作用及其与HPV感染的关系.方法:采用逆转录-聚合酶链技术在39例宫颈癌及12例正常宫颈组织中检测RASSF1A基因的表达,并分析宫颈癌中HPV16/18的感染状况.结果:39例宫颈癌组织RASSF1A基因表达显著低于对照组(P＜0.01);淋巴结转移组RASSF1A表达亦低于淋巴结未转移组(P＜0.05);宫颈癌组HPV16/18的感染率为69.2%(27/39).宫颈癌中RASSF1A基因表达与患者年龄、肿瘤大小、病理分级、临床分期及HPV感染无显著相关性(P＞0.05).结论:RASSF1A基因的表达失活使其丧失了抑癌作用,是促进正常宫颈上皮细胞癌变的一个重要因素.     

RASSF1A基因在子宫内膜癌组织中的表达及意义

目的：探讨RASSF1A（RAS相关区域家族1A）基因转录表达与子宫内膜癌发生、发展的关系。方法：采用逆转录－聚合酶链反应（PT-PCR）方法检测50例子宫内膜癌组织及20例正常子宫内膜组织中RASSF1A mRNA的表达水平。结果：①RASSF1A mRNA在所有正常子宫内膜组织中表达,而在子宫内膜癌组织中存在较高的表达缺失率（54％）;②RASSF1A mRNA的表达缺失与子宫内膜癌手术病理分期、淋巴结转移、肌层浸润及病理组织学类型有明显相关性（P＜0.05）;RASSF1A mRNA表达缺失与年龄和病理分级未见明显相关（P＞0.05）。结论：RASSF1A转录表达缺失可能参与调控子宫内膜癌的发生、发展过程,并进而影响其生物学特点及预后。     

膀胱移行细胞癌中RASSF1A基因的表达及其临床意义

目的研究RASSF1A基因在膀胱移行细胞癌(TCC)中的表达及其临床意义。方法采用逆转录-聚合酶链反应检测45例膀胱TCC及其相应癌周正常组织中RASSF1A基因mRNA表达情况,采用免疫组织化学方法检测38例膀胱TCC及18例癌周正常组织中RASSFIA蛋白表达情况。结果与癌周正常组织相比,60.0%(27/45例)的膀胱TCC组织中发现RASSF1A mRNA表达异常下调。RASSF1A蛋白在膀胱TCC组织中的阳性表达率为36.8%,明显低于癌周正常组织中的83.3%(P<0.05)。不同临床分期和病理分级间RASSF1A mRNA表达异常和RASSF1A蛋白阳性表达的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。结论RASSF1A的失表达可能参与膀胱TCC的发生。     

食管癌组织RASSF1A的表达及其与基因启动子甲基化的关系

目的探讨RASSF1A表达及其基因启动子甲基化在食管癌发生中的作用。方法取40例食管癌患者肿瘤组织及癌旁组织,用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测RASSF1A的mRNA表达,用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测RASSF1A基因启动子的甲基化。结果 RASSF1A mRNA在食管癌组织、癌旁组织表达缺失率分别为77.5%（31/40）、2.5%（1/40）,差异有统计学意义（P〈0.05）。癌旁组织均未发现甲基化,而癌组织中甲基化率为67.5%（27/40）。所有甲基化的食管癌组织RASSF1A mRNA表达缺失。结论食管癌的发生与RASSF1A基因表达缺失有关联,而RASSF1A基因启动子区甲基化是RASSF1A基因表达缺失的原因。     

食管鳞状细胞癌组织中RASSF1A蛋白的表达

目的：检测RASSF1A蛋自在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达情况。方法：采用免疫组化法检测ESCC组织(n=245)和正常食管黏膜组织(n=201)的组织芯片中RASSF1A蛋白的表达情况,并探讨其与ESCC患者年龄、性别、肿瘤细胞分化程度、淋巴结转移、TNM分期、大体分型和5 a生存率的关系。结果：ESCC组...     

RASSF1A基因在前列腺癌中甲基化检测及其表达

目的探讨RASSF1A基因在中国人前列腺癌和前列腺增生组织中的表达及其甲基化检测。方法采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测33例前列腺癌、28例前列腺增生和5例癌旁组织中的RASSF1A mRNA表达,并采用甲基化特异性PCR法分析其甲基化状态。结果48．5％的前列腺癌组织和17．9％的前列腺增生组织中RASSF1A表达缺失,66．7％的肿瘤组织中发现甲基化,高前列腺特异性抗原(PSA)和高TNM者启动子区甲基化的频率明显高于低PSA和低TNM者(P=0．01和0．049)。启动子区甲基化与发病年龄、细胞分化不相关,仅在2例前列腺增生组织中发现甲基化。结论RASSF1A甲基化可作为一个分子标志物,成为诊断肿瘤和预后的新方法。