Nav1．7在福尔马林足底炎性疼痛大鼠模型背根神经节中表达的研究

目的观察电压门控钠离子通道1．7（Nav1．7）在福尔马林足底炎性疼痛大鼠模型背根神经节中的表达。方法SD大鼠24只,随机分为2组,空白对照组（n=12）及福尔马林模型组（n=12）。空白对照组左后足底注射0．1mL生理盐水,模型组于左后足底注射5％福尔马林0．1mL,各组大鼠在指定时间点取出L3-L6节段背根神经节,运用实时荧光定量（RT—PCR）、蛋白质印迹（Westernblot）检测Nay1．7在大鼠背根神经节中的表达水平。结果各时相点中模型组大鼠背根神经节Nav1．7mRNA及蛋白表达显著增加,与空白组比较有显著统计学意义（P〈0．01）。结论福尔马林致炎性疼痛大鼠模型背根神经节中Nav1．7表达增强,与炎性疼痛相关。     

炎性痛-吗啡耐受大鼠背根神经节辣椒素受体表达

目的:观察辣椒素受体(VR1)在慢性炎性痛-吗啡耐受大鼠背根神经节(DRG)表达变化,探讨VR1在吗啡耐受形成过程中的作用和机制.方法:将24只健康雄性SD大鼠制成关节炎模型,随机分为3组,鞘内给予吗啡10μg/kg组(A组),鞘内给予吗啡20μg/kg组(B组),鞘内给予生理盐水组(C组).每日2次,连续7d.以触觉测试包测试50%缩爪阈值,以免疫组化方法检测背根神经节VR1表达.结果:A、B两组在给药第5日形成较稳定的吗啡耐受,其背根神经节VR1表达阳性细胞数较生理盐水组多.结论:背根神经节辣椒素受体可能参与慢性炎性痛大鼠吗啡耐受形成过程.     

Zymosan足底炎性疼痛大鼠模型的建立及其脊髓背角COX-2表达水平变化

目的评价该模型大鼠的疼痛行为学特点和炎性水肿程度,并对该模型大鼠脊髓背角COX-2表达水平进行分析。方法 SD大鼠48只,随机分为3组,即对照组（n=8）、假手术组（n=16）及zymosan组（n=24）。按Meller方法制作zymosan足底炎性疼痛模型,假手术组在左侧后足皮下注射同等容积的PBS。采用电子VonFrey压力测痛仪、热板和电子数显卡尺分别于制模后0.5h、1h、2h、4h、8h、24h和48h测定各组大鼠左侧后足机械刺激缩足阈值、热敏缩足反射阈值和左足最大厚度。各组大鼠在指定时间点处死后取制模侧腰段脊髓背角,采用Western blot方法测定脊髓背角中COX-2表达水平。结果与对照组和假手术组比较,zymosan组大鼠制模侧后足机械刺激缩足阈值和热敏缩足反射阈值显著降低（P〈0.05,P〈0.01）,最大厚度显著增加（P〈0.01）,提示zymosan组大鼠出现机械痛敏、热痛敏和炎性水肿。Zymosan组大鼠制模侧脊髓背角COX-2表达水平显著增加,与对照组和假手术组比较有显著性差异（P〈0.05）。结论 Zymosan足底炎性疼痛大鼠模型可以产生持续的、可信的痛觉过敏,与人体损伤后情况基本一致,并诱导脊髓背角COX-2表达水平增加,是研究组织损伤诱发炎性疼痛机制的较佳选择。     

鞘内注射miRNA-28模拟物减轻CFA慢性炎性疼痛模型大鼠热激疼痛行为

目的对完全弗氏佐剂（CFA）慢性炎性疼痛模型不同时间段的脊髓以及背根神经节miRNA-28表达进行荧光定量PCR分析,鞘内注射miRNA-28模拟物并观察大鼠热激疼痛行为学变化,预测miRNA-28下游作用靶标基因。方法采用CFA制备慢性炎性疼痛SD大鼠模型;从大鼠脊髓和背根神经节组织中提取miRNA,运用RT—qPCR方法对miRNA-28进行定量分析;鞘内微注射miRNA-28模拟物,热激法检测大鼠疼痛行为;使用3种不同的生物信息学预测软件对miRNA-28靶标进行分析;Western—blot方法检测CFA模型大鼠第3天时背根神经节中Nnat蛋白表达。结果miRNA-28在CFA疼痛模型脊髓和背根神经节中均有表达,但表达情况并不-致：miRNA-28在背根神经节表达差异明显,其中以第3天最为显著,下调至对照水平的1．28％;在脊髓组织,2h时miRNA-28已经下调至对照水平的55．56％,第3天时又上调至对照水平的190％,第7天又下调至对照水平的83％。鞘内微注射miRNA-28模拟物后明显减轻CFA大鼠疼痛反应。生物信息学分析表明Nnat可能是miRNA-28作用的靶标基因。CFA模型大鼠第3天时背根神经节中Nnat蛋白明显升高。结论miRNA-28可能在背根神经节水平通过调控Nnat参与慢性炎性疼痛的发生、维持和调控。     

鞘内注射咪唑安定对福尔马林致痛大鼠脊髓c-fos表达的影响

目的：研究鞘内注射咪唑安定对福尔马林致痛大鼠脊髓c-fos表达的影响。方法：雄性SD大鼠32只，随机分为4组（n=8）：对照组（C组）、模型组（F组）、生理盐水组（NS组）及咪唑安定组（M组）。鞘内置管后5d，F组、NS组及M组大鼠于左后足掌部皮下注射5％福尔马林100μL，注射福尔马林前20min，NS组鞘内注射20μL生理盐水，M组鞘内注射4μL（20μg）咪唑安定和16μL生理盐水，C组足底注射生理盐水100μL。采用疼痛加权评分评价疼痛行为学，并在足底注射后2h后将所有动物处死取脊髓膨大处，采用免疫组织化学法观察脊髓背角c—fos表达。结果：与C组比较，F组、NS组脊髓背角c－fos表达增加（P〈0．01）；与F组、NS组比较，M组脊髓背角c—fos表达降低（P〈0．01）。结论：鞘内注射咪唑安定可抑制福尔马林炎性疼痛引起的脊髓中c－fos表达增加，可能与咪唑安定的抗伤害和镇痛作用有关。     

N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基在骨癌痛 小鼠脊髓背角和背根神经节中的表达

目的：通过观察骨癌痛小鼠疼痛行为学变化和脊髓背角与背根神经节N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基（the 2B subunits of N-methyl-D-aspartate receptors,NR2B）的表达以及它们之间的相关性,探讨NR2B在癌性痛产生和维持中的作用。方法：选用45只成年雄性C57BL/6小鼠,随机分为3组,模型组（n=15）：于小鼠股骨远端骨髓腔内接种Lewis肺癌细胞2×106个,接种体积为10 μL;假手术组（n=15）：接种等体积的D-Hank’s液;正常对照组（n=15）：不予任何处理。术后第3天始隔日观察小鼠自发痛行为及测定机械性触诱发痛。术后第7,15,23天,各组任选5只取小鼠术侧后肢,HE染色,光镜下观察肿瘤生长及骨质破坏的程度;取腰段脊髓膨大（L2-4）和L4背根神经节行NR2B免疫组织化学检测。结果：通过小鼠行为学测定和组织学检测证实骨癌痛模型制备成功。NR2B在模型组术侧脊髓背角和背根神经节免疫反应阳性指数各时间点明显高于假手术组和正常对照组（P<0.05）。模型组中术侧第7与15,23天比较差异有统计学意义（P<0.05）。各组小鼠术后第23天,术侧脊髓背角和背根神经节NR2B免疫反应阳性指数与小鼠术侧后爪累计抬足时间明显正相关（分别为r=0.976,P<0.001;r=0.882,P<0.001）;与小鼠术侧机械性缩足阈值明显负相关（分别为r=-0.879,P<0.001;r=-0.760,P=0.001）。结论：骨癌痛小鼠脊髓背角和背根神经节中NR2B受体表达均增加,且与行为学表现有明显的相关性,推测脊髓背角和背根神经节的NR2B受体在小鼠骨癌痛产生和维持中起重要作用。     

当归四逆汤对奥沙利铂神经毒性大鼠背根神经节TRPs通道的影响

目的 探讨当归四逆汤对奥沙利铂神经毒性大鼠背根神经节TRPs通道的影响。方法 使用奥沙利铂腹腔注射造成慢性神经毒性大鼠模型,60只大鼠分空白组、模型组、及当归四逆汤高、中、低剂量组。通过大鼠疼痛行为学、机械疼痛阈值测定检测当归四逆汤对奥沙利铂神经毒性的缓解作用,并进一步通过RT-PCR、Western blot观察大鼠背根神经节TRPs（TRPV1、TRPA1、TRPM8）mRNA及蛋白表达水平变化。结果 大鼠行为学测定显示,与空白组比较,模型组、当归四逆汤低、中剂量组机械疼痛阈值下降（P<0.05）,而高剂量组未出现明显的下降（P＞0.05）。与空白组比较,其余各组大鼠背根神经节TRPA1、TRPM8、TRPV1蛋白表达量显著增加（P<0.01）。与模型组比较,当归四逆汤低剂量组可降低TRPM8蛋白表达（P<0.05）,中剂量组可降低TRPA1（P<0.01）、TRPM8（P<0.01）、TRPV1（P<0.05）蛋白表达,高剂量组明显降低三者蛋白表达量（P<0.01）。与空白组比较,其余各组大鼠背根神经节TRPV1、TRPA1、TRPM8 mRNA表达显著增加（P<0.01）,与模型组比较,当归四逆汤各组均可显著下调三者表达（P<0.01）。结论 当归四逆汤可以预防奥沙利铂慢性神经毒性,减缓大鼠机械疼痛阈值下降程度,其机制可能与下调TRPs通道蛋白表达有关。      

抑制前扣带皮层mTOR活性对福尔马林炎性痛大鼠痛情绪的影响

目的观察特异性抑制前扣带皮层（ACC）脑区哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）活性对福尔马林炎性痛大鼠痛情绪反应的影响。方法将24只大鼠随机分为福尔马林模型组（F组）、雷帕霉素组（R组）和DMSO组（D组）,每组8只,在大鼠足底注射福尔马林建立炎性痛模型,将疼痛刺激与条件位置回避训练结合,观察抑制ACC脑区mTOR活性对痛情绪行为学和福尔马林疼痛评分的影响。结果F组和D组大鼠训练后在福尔马林炎性痛匹配的条件室内停留时间明显短于训练之前（t=5.714、7.916,均P＜0.01）。而R组大鼠训练前后在条件室内停留时间无统计学差异（t=1.287,P＞0.05）。3组大鼠回避分数比较差异有统计学意义（F=5.458,P＜0.05）。其中,R组回避分数显著低于F组和D组（t=3.235、2.200,均P＜0.05）。3组大鼠间福尔马林疼痛评分比较差异无统计学意义（F=1.041,P＞0.05）。结论抑制ACC脑区mTOR活性可削弱福尔马林炎性痛诱导的痛相关负性情绪。     

经典瞬时感受器电位通道在炎性痛及神经病理性痛大鼠背根神经节表达水平的差异

目的 探讨背根神经节细胞经典瞬时感受器电位通道家族（TRPC）各亚型在炎性痛及神经病理性痛中表达是否存在差异性.方法 选用Sprague-Dawley雄性大鼠,随机分为两大组：炎性痛组和神经病理性痛组.炎性痛组又随机分为：空白对照组,生理盐水对照组,蜜蜂毒炎性痛模型组;神经病理性痛组又随机分为：空白对照组,假手术组,坐骨神经分支选择性结扎模型组.测定各组大鼠机械刺激缩足反射阈值和热刺激缩足潜伏期;然后分别于蜜蜂毒处理后2h及神经结扎后1周,检测各组大鼠背根神经节细胞内TRPC家族各亚型mRNA表达水平和各组背根神经节细胞内TRPC家族相应亚型蛋白表达水平.结果 实时定量基因扩增荧光检测技术显示,背根神经节细胞TRPC3、4、5亚型的mRNA表达水平在蜜蜂毒炎性痛组显著增加（P＜0.001）;而在神经病理性痛组背根神经节细胞TRPC2 mRNA表达水平显著提高（P ＜0.001）,同时TRPC3 mRNA表达水平却显著降低（P＜0.05）.免疫组化结果显示蜜蜂毒炎性痛组大鼠背根神经节内TRPC3、4、5免疫阳性细胞数显著增加;而神经病理性痛组大鼠背根神经节内TRPC2免疫阳性细胞数显著增加.结论 蜜蜂毒炎性痛模型及坐骨神经分支选择性结扎模型大鼠背根神经节细胞TRPC通道各亚型基因及蛋白表达水平存在差异,提示TRPC通道各亚型在炎性痛及神经病理性痛的发病中可能发挥着不同的作用.     

GDNF在慢性收缩性损伤大鼠脊髓背根神经节中的蛋白表达

目的探讨胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）在慢性收缩性损伤（CCI）所致神经病理性疼痛大鼠的L4背根神经节中的蛋白表达。方法实验1：24只SD大鼠,随机分为正常组（Naive组）、假手术组（Sham组）和CCI组（每组n=8）。Naive组不做任何手术;Sham组仅暴露坐骨神经;CCI组按Bennett法结扎右侧坐骨神经主干制备CCI模型。分别测定Sham组和CCI组术前2天（基础值）及术后第1、3、5、7、14、21天（Naive组则在相对应的时间点）大鼠同侧（本实验为右侧）后足机械缩足反射阈值（MWT）和热缩足反射潜伏期（PWL）。实验2：18只SD大鼠随机分为正常组（Naive组）、假手术组（Sham组）和CCI组（每组n=6）。CCI组制备CCI模型,术后第7天处死大鼠,取同侧L4背根神经节;Naive组不做任何手术,直接取右侧L4背根神经节;Sham组仅暴露坐骨神经,术后第7天处死大鼠,直接取右侧L4背根神经节。采用Western blot法检测脊髓L4背根神经节GDNF的蛋白表达。结果实验1：与Sham组相比,CCI组大鼠从术后第3天开始至术后21天内各时间点MWT和PWL均显著降低（P〈0.05或P〈0.01）。实验2：与Sham组相比,CCI组在L4背根神经节的GDNF表达明显减少（P〈0.01）。结论CCI大鼠的L4背根神经节的GDNF表达减少,可能参与CCI所致神经病理性疼痛的发病机制。     

右美托咪定对炎症性疼痛大鼠的超前镇痛作用

目的:观察鞘内注射右美托咪定(dexmedetomidine,DEX)对炎症性疼痛大鼠的镇痛作用以及对大鼠脊髓背角P物质(substance P,SP)表达的影响;明确DEX对炎症性疼痛大鼠具有超前镇痛效应。方法:建立福尔马林诱导的炎症性疼痛SD大鼠模型并给予鞘内注射DEX;观察大鼠疼痛行为学变化;免疫组织化学法和免疫印迹法检测大鼠脊髓背角(L4-6)SP阳性表达变化。结果:炎症性疼痛大鼠疼痛行为学评分增加,脊髓背角SP阳性表达上调;给予鞘内注射DEX可降低炎症性疼痛大鼠疼痛行为学评分以及脊髓背角SP阳性的表达(P均<0.001);鞘内预注射DEX大鼠的疼痛行为学评分和脊髓背角SP表达低于DEX后处理组(P均<0.001)。结论:鞘内注射DEX通过抑制炎症性疼痛大鼠脊髓背角SP表达产生镇痛作用,该作用具有超前镇痛效应。     

丙帕他莫对福尔马林致痛大鼠行为学及脊髓c-fos蛋白表达的影响

目的通过观察比较福尔马林致痛大鼠行为学和脊髓背角c-Fos样免疫反应神经元（FLIN）数量的变化,探讨静脉注射丙帕他莫的镇痛效能与机制。方法雄性SD大鼠30只,随机均分为5组,生理盐水组（NS组）、福尔马林组（F组）、丙帕他莫组（B组）、丙帕他莫预处理组（BF组）和福尔马林丙帕他莫组（FB组）。前4组中NS组和B组在注射NS、丙帕他莫10 min后分别于右后足趾皮下注射NS 100μl,F组和BF组分别在注射NS、丙帕他莫10 min后均注射5%福尔马林100μl。FB组给予福尔马林痛刺激10 min后静脉注射丙帕他莫480 mg/kg。各组行清醒静脉穿刺,注入NS或不同剂量的丙帕他莫后,观察行为表现,注射后立即以5 min为一时间段连续记录1 h内的缩腿、舔咬时间。足底注射后2 h取一脊髓节段做c-Fos免疫组化染色,计算FLIN数量。结果①BF组第一期急性早反应时间短于F组（P〈0.0 5）;FB组第二期时间短于F组（P〈0.05）。Fos蛋白表达NS组和B组未见或偶见淡染FLIN。F组见大量FLIN主要分布在Ⅰ、Ⅱ层及Ⅴ、Ⅵ层。BF组各区FLIN均减少（P〈0.01）。FB组各区FLIN均少于F组相应区域（P〈0.01）。结论静脉注射丙帕他莫能有效抑制大鼠的伤害性行为和致痛侧脊髓背角c-fos蛋白的表达。     

炎性痛大鼠脊髓和背根节P2X_3受体的表达变化

目的观察足底皮下注射角叉菜胶致炎后大鼠行为学及脊髓背角和背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)P2X3受体表达的变化。方法通过热辐射刺激法及von Frey纤维丝测定大鼠痛阈,应用免疫组化技术观察足底皮下注射角叉菜胶后不同时间其相应节段(L4～L6)脊髓及背根神经节P2X3受体表达的变化。结果足底皮下注射角叉菜胶后动物出现热痛敏和机械性痛敏,热痛阈和机械痛阈均下降,于12 h达最低,72 h后恢复至正常水平。免疫组化显示相应节段(L4～L6)脊髓背角P2X3受体免疫反应在注射角叉菜胶24 h后明显增强(P<0.01),72 h表达强度最高,168 h恢复至正常,并且相应节段背根神经节P2X3受体阳性神经元数12 h开始明显增加(P<0.01),持续至72 h,168 h恢复至正常。结论角叉菜胶所致炎性痛大鼠,脊髓背角和背根神经节P2X3受体活化,表达明显上调,表明P2X3受体在炎性痛的发生、发展中起重要作用。     

癌痛平对福尔马林致痛模型大鼠脊髓背角c-fos表达及P物质含量的影响

[目的]观察癌痛平对福尔马林致痛模型大鼠脊髓背角c-fos基因表达及P物质(SP)含量的影响.[方法]选用SD大鼠50只,随机分成5组:空白对照组,模型组,曲马多组(剂量为0.06 g/kg),癌痛平高、低剂量组(剂量分别为36、18 g/kg);采用福尔马林右侧后瓜掌心皮下注射法复制致痛模型,取脊髓L3～L5节段,采用免疫组化法观测各组大鼠脊髓背角浅层fos蛋白表达及SP含量.[结果]模型组大鼠脊髓背角浅层中fos免疫反应阳性神经元数目及SP免疫阳性反应物的D值均显著增加(P<0.01);癌痛平高剂量组可显著降低fos免疫反应阳性神经数目及SP免疫阳性反应物的D值(P<0.01).[结论]癌痛平可能通过减少脊髓背角神经元对传入的伤害性刺激的反应发挥镇痛作用.     

γ-氨基丁酸及其受体在慢性神经病理痛大鼠背根神经节中的表达及意义

目的:探讨大鼠脊髓背根神经节(DRG)γ-氨基丁酸(GABA)及其受体在慢性神经病理痛中的表达及意义。方法:20只SD大鼠行L5脊神经结扎(SNL)制备慢性神经病理疼痛模型,SABC法检测脊髓背根神经节GABA及其受体GABAAα1的表达,另取10只行假手术对照。结果:SNL组背根神经节大中神经元GABA及受体GABAA表达水平均明显下降(P<0.05)。结论:神经痛发生可能与DRG上GABA能神经元减少、GABAA受体表达下调致GABA能传递减弱有关。     

小剂量氯胺酮对慢性神经痛大鼠的镇痛效应和背根神经节P2X3受体表达的影响

【 目的 观测腹腔注射小剂量氯胺酮对慢性神经痛大鼠镇痛效应和背根神经节P2X3受体表达的影响，以探讨其在神经性疼痛中的作用。方法 大鼠随机分为4组：空白对照组(C组)、假手术组(S组)、腹腔注射生理盐水组(NS组)与氯胺酮组(K组)，每组8只。在大鼠右后足检测冷刺激反应、热痛敏阈基础值后，腹腔注射10%水合氯醛400 mg∕kg进行麻醉。NS组和K组构建大鼠右侧坐骨神经慢性结扎损伤模型，S组暴露坐骨神经但不结扎，C组不进行手术。手术后K组每天上午10时腹腔注射10mg·kg-1氯胺酮(用生理盐水稀释至0.5ml)，NS组则腹腔注射等量生理盐水，连续2周。14d后测定各组大鼠右后足冷刺激反应、热痛敏阈值。尔后各组取手术侧L4背根神经节，并采用免疫组化法观测P2X3受体的表达。结果 手术后14 d，NS组和K组大鼠右足热痛敏阈值均明显低于C组和S组（P<0.05），冷刺激反应则显著高于C组和S组（P<0.05）；但K组大鼠右足热痛敏阈值明显高于NS组，而冷刺激反应明显低于NS组(P<0.05)；NS组和 K组大鼠背根神经节P2X3受体免疫反应阳性细胞数量多于C组和S组，但K组显著少于NS组比较则明显降低(P<0.05)；NS组与S组大鼠背根神经节神经元P2X3受体免疫组化评分高于C组和S组，而K组却低于NS组，(P<0.05)。结论 腹腔注射小剂量氯胺酮可提高慢性神经性疼痛大鼠痛敏阈值及减弱冷刺激反应，其作用机制可能与减少背根神经节神经元P2X3受体表达有关。 【关键词】背根神经节 神经痛 氯胺酮 三磷酸腺苷 P2X3     

μ型阿片受体参与CFA大鼠慢性炎性痛的外周调控

目的观察大鼠慢性炎性痛时背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)μ型阿片受体(mu opioid receptor,MOR)表达的变化及炎症局部注射MOR激动剂和拮抗剂对痛阈的干预作用,探讨MOR在慢性炎性疼痛中的作用。方法足底注射弗氏完全佐剂(complete freund’s adjuvant,CFA)制备大鼠慢性炎性痛模型,采用免疫组化法检测DRG MOR阳性细胞的表达;经大鼠足跖背部分别注射MOR激动剂、拮抗剂,采用辐射热法检测给药前后大鼠痛阈的变化。结果足底注射CFA诱导出大鼠慢性炎性痛,在造模后第18天,痛阈依然低于正常对照组;免疫组化结果表明,与正常对照组相比,CFA大鼠DRG MOR阳性细胞表达增多(P<0.01);足跖背部注射MOR激动剂减轻CFA大鼠的疼痛,对正常大鼠痛阈无影响;足跖背部注射MOR拮抗剂加重CFA大鼠的疼痛,对正常大鼠痛阈无影响。结论 DRG神经元MOR在慢性炎性痛时表达上调,参与慢性炎性痛的外周调控,可能有助于防止慢性痛的进一步加重。