稳定敲降NF-YB基因HeLa细胞系的构建

目的：利用慢病毒介导的RNA干扰（RNAi）技术，构建稳定敲降NF-YB基因的HeLa细胞系。方法：设计shRNA-NF-YB引物，利用分子克隆技术构建H1/GFP-Puro-shRNA-NF-YB质粒，转染293T后收集病毒感染HeLa细胞；用嘌呤霉素筛选细胞得到稳定敲降细胞株；利用Western blot和实时荧光定量PCR对细胞系进行鉴定。结果：构建的质粒经测序后与设计的引物对比序列一致，Western blot和实时荧光定量PCR结果表明构建细胞的NF-YB蛋白和mRNA表达抑制效果明显。结论：本实验成功构建了NF-YB-shRNA-HeLa细胞系，获得了特异性NF-YB基因敲降的HeLa细胞。     

卡维地洛对糖尿病肾病血液透析患者心功能的影响

目的:探讨卡维地洛对糖尿病肾病的维持血液透析患者左心功能的影响。方法:回顾性分析2009年10月至2013年6月期广东省人民医院肾内科糖尿病肾病血液透析患者,根据是否给予卡维地洛将患者分为两组,用心脏彩色超声评估治疗1年后心功能变化,并观察两组生存率。结果:入选72例患者,其中卡维地洛组14例,对照组58例。治疗前后,卡维地洛组的左室射血分数改善,而对照组无改善。但两组生存率无统计学差异。结论:卡维地洛能改善糖尿病肾病血液透析患者的左室射血分数。     

稳定敲降NF-YB基因HeLa细胞系的构建

目的：利用慢病毒介导的RNA干扰（RNAi）技术,构建稳定敲降NF-YB基因的HeLa细胞系。方法：设计shRNA-NF-YB引物,利用分子克隆技术构建H1/GFP-Puro-shRNA-NF-YB质粒,转染293T后收集病毒感染HeLa细胞;用嘌呤霉素筛选细胞得到稳定敲降细胞株;利用Western blot和实时荧光定量PCR对细胞系进行鉴定。结果：构建的质粒经测序后与设计的引物对比序列一致,Western blot和实时荧光定量PCR结果表明构建细胞的NF-YB蛋白和mRNA表达抑制效果明显。结论：本实验成功构建了NF-YB-shRNA-HeLa细胞系,获得了特异性NF-YB基因敲降的HeLa细胞。     

CRISPR/Cas9系统在视网膜发育与遗传性视网膜疾病研究中的应用

CRISPR/Cas9系统作为第三代基因编辑工具的代表,操作简便、效率高、成本低,应用前景极其广阔.该系统能够对基因组中特定的核苷酸序列切割,尤其可用于纠正机体的异常基因突变.利用该系统不仅可阐述视网膜发育过程关键基因的调控功能,以及视网膜变性过程中相关信号通路改变的分子机制,更为重要的是运用该系统可修复异常的基因突变.本文主要论述CRISPR/Cas9系统在人类视网膜发育及遗传性视网膜变性疾病发病机制研究中的应用,以及在视网膜变性疾病患者个体化基因治疗方面的应用前景.     

炎性痛大鼠脊髓和背根节P2X_3受体的表达变化

目的观察足底皮下注射角叉菜胶致炎后大鼠行为学及脊髓背角和背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)P2X3受体表达的变化。方法通过热辐射刺激法及von Frey纤维丝测定大鼠痛阈,应用免疫组化技术观察足底皮下注射角叉菜胶后不同时间其相应节段(L4～L6)脊髓及背根神经节P2X3受体表达的变化。结果足底皮下注射角叉菜胶后动物出现热痛敏和机械性痛敏,热痛阈和机械痛阈均下降,于12 h达最低,72 h后恢复至正常水平。免疫组化显示相应节段(L4～L6)脊髓背角P2X3受体免疫反应在注射角叉菜胶24 h后明显增强(P<0.01),72 h表达强度最高,168 h恢复至正常,并且相应节段背根神经节P2X3受体阳性神经元数12 h开始明显增加(P<0.01),持续至72 h,168 h恢复至正常。结论角叉菜胶所致炎性痛大鼠,脊髓背角和背根神经节P2X3受体活化,表达明显上调,表明P2X3受体在炎性痛的发生、发展中起重要作用。     

HPLC法测定银黄含片中绿原酸和黄芩苷的含量

目的测定银黄含片中绿原酸和黄芩苷的含量。方法采用反相高效液相色谱法,D iamonsilTMC18柱,甲醇-水-磷酸(体积比52∶48∶0.1)为流动相,流速为0.9 mL.m in-1;检测波长324 nm;柱温为室温。结果绿原酸在1.50~45.00μg.mL-1浓度范围内呈良好的线性关系,平均回收率为98.1%,方法精密度(RSD)为0.38%(n=5)。黄芩苷在45.00~135.0μg.mL-1浓度范围内呈良好的线性关系,平均回收率为98.9%,方法精密度(RSD)为0.14%(n=5)。结论该法简便、准确,能有效地控制该制剂的质量。     

NGF基因治疗阿尔茨海默氏病的基础和临床研究

过去二十多年的研究表明，神经营养因子对神经发育和成年神经系统的疾病过程都有重要的影响。在神经退行性变动物模型中，发现神经系统的生长因子能阻止或减少神经元的退变，因此已经开始了有关的临床试验。其中的关键问题是生长因子的给药方法：在靶部位必须有足够高的浓度才能有效地发挥作用，但是药物必须局限于特定的脑区以避免疼痛、体重下降等副作用。近年来分子药物研究进展使得给与特定的生长因子的治疗方案逐渐变成现实，基因治疗的几种选择方法已经或即将开始试验。本就神经营养因子基因治疗神经退行性变的研究作一综述，重点放在目前已经进入Ⅰ期临床试验的神经生长因子基因治疗阿尔茨海默氏病方面。