白藜芦醇对肝脂肪积累的抑制作用及其分子机制

目的研究白藜芦醇对SIRT基因家族表达的影响,探讨白藜芦醇抑制不同条件引起脂肪积累的分子机制。方法分别用高糖、高糖＋白藜芦醇、高脂、高脂＋白藜芦醇的培养基处理肝细胞HL7702,油红O染色法检测细胞内脂肪积累水平;后提取各组蛋白质,Western blotting方法检测不同组间SIRT基因家族各成员的表达情况。结果白藜芦醇能明显降低高脂引起的脂肪积累,对高糖引起的脂肪积累作用不明显;在高脂条件下,白藜芦醇可以促使SIRT1、SIRT3、SIRT4和SIRT5的表达增加,使SIRT7表达降低;在高糖条件下,白藜芦醇可以促使SIRT1、SIRT4、SIRT5和SIRT7的表达增加。结论 SIRT1、SIRT3和SIRT7是白藜芦醇抑制脂肪积累的关键基因。     

慢病毒过表达小鼠miRNA143减轻CFA炎性疼痛模型小鼠

目的:本文通过构建miRNA143过表达慢病毒载体及包装,并进行鞘内注射研究过表达miRNA143对小鼠热激疼痛行为的影响,探讨miRNA与疼痛的关系。方法:PCR扩增前体miRNA143,酶切,连接,转化后鉴定重组子,鞘内注射过表达miRNA143慢病毒,热激测量小鼠疼痛反应。结果:成功构建miRNA143过表达载体,并包装成功,小鼠鞘内注射后明显提高CFA炎性疼模型鼠疼阈。结论:miRNA143是一个与疼痛信号传递关系密切的小RNA。     

鞘内注射miRNA-28模拟物减轻CFA慢性炎性疼痛模型大鼠热激疼痛行为

目的对完全弗氏佐剂（CFA）慢性炎性疼痛模型不同时间段的脊髓以及背根神经节miRNA-28表达进行荧光定量PCR分析,鞘内注射miRNA-28模拟物并观察大鼠热激疼痛行为学变化,预测miRNA-28下游作用靶标基因。方法采用CFA制备慢性炎性疼痛SD大鼠模型;从大鼠脊髓和背根神经节组织中提取miRNA,运用RT—qPCR方法对miRNA-28进行定量分析;鞘内微注射miRNA-28模拟物,热激法检测大鼠疼痛行为;使用3种不同的生物信息学预测软件对miRNA-28靶标进行分析;Western—blot方法检测CFA模型大鼠第3天时背根神经节中Nnat蛋白表达。结果miRNA-28在CFA疼痛模型脊髓和背根神经节中均有表达,但表达情况并不-致：miRNA-28在背根神经节表达差异明显,其中以第3天最为显著,下调至对照水平的1．28％;在脊髓组织,2h时miRNA-28已经下调至对照水平的55．56％,第3天时又上调至对照水平的190％,第7天又下调至对照水平的83％。鞘内微注射miRNA-28模拟物后明显减轻CFA大鼠疼痛反应。生物信息学分析表明Nnat可能是miRNA-28作用的靶标基因。CFA模型大鼠第3天时背根神经节中Nnat蛋白明显升高。结论miRNA-28可能在背根神经节水平通过调控Nnat参与慢性炎性疼痛的发生、维持和调控。     

3个神经组织特异miRNA在不同疼痛中的差异表达及其靶标预测

目的制备慢性炎性疼痛、神经病理疼痛和急性炎性疼痛3种SD大鼠模型,定量检测和分析miR-135b、miR-145和miR-429的表达,结合生物信息学分析预测其作用靶标基因。方法分别采用CFA、CCI和5％甲醛法制备慢性炎性疼痛、神经病理疼痛和急性炎性疼痛动物模型。从大鼠脊髓和背根组织中提取miRNA,并使用反转录方法将其反转为cDNA。使用定量PCR方法对miRNA进行定量分析。使用3个生物信息学预测软件对miR-135b靶标进行分析。结果miR-135b、miR-145和miR-429在不同的疼痛模型中的脊髓和背根组织中均有表达,但表达差异并不一致,其中miR-135b表达差异最显著。miR-135b在慢性炎性疼痛模型的脊髓和背根中的表达分别被上调0．65倍和下调4．3倍,在神经病理疼痛模型的脊髓和背根中的表达分别被上调5．5倍和3倍,而在急性炎性疼痛模型的脊髓和背根的表达中分别被下调1倍和0．6倍。信息学分析表明miR-135b作用的靶标基因为复蛋白基因（Cplxl）、配子生成素结合蛋白2基因（Ggnbp2）、克鲁拜尔基因（Klf4）和多配体蛋白聚糖结合蛋白基因（Sdcbp）。结论miR-135b可能与疼痛发生和维持相关。