生物蛋白胶外支架预防移植静脉早期损伤的实验研究

目的以生物蛋白胶作为外周支持,研究其对兔移植静脉的影响,从而寻找更适合临床的外支架材料。方法24只雄性新西兰大耳白兔随机分为非支架组（NS组n=12）和生物蛋白胶支架组（FS组n=12）。建立兔颈外静脉颈总动脉旁路移植术模型。FS组给予生物蛋白胶作为外支架。术后28天取出移植静脉,进行超微结构、组织病理分析和免疫组织化学分析。结果超微结构显示与NS组相比,FS组移植静脉损伤程度明显减轻。免疫组化结果显示与NS组相比,FS组移植静脉细胞增殖核抗原表达明显受到抑制 NS组内皮层损伤严重,有淋巴细胞侵润,而FS组内皮层则几乎完好无损（P〈0.01） 在NS组平滑肌细胞增殖活跃且向内膜迁移,FS组平滑肌细胞增殖受到抑制,且向外膜迁移 在FS组移植静脉外膜有丰富的成熟微小血管网形成,但是在NS组,微小血管数量则非常少。结论生物蛋白胶外支架能给兔移植静脉提供足够的外周支持,明显缓解移植静脉植入动脉循环后的早期损伤。该作用与保护血管内皮完整、抑制增殖细胞核抗原表达、促使平滑肌细胞向外膜迁移和形成外膜新生血管网有关。     

用自体心包行静脉周支持对静脉移植物内膜增生的影响

目的探讨自体心包外周支持对静脉移植物内膜增生的影响。方法取犬一侧颈外静脉，对半剪成两段后分别吻合在双侧股动脉上，其中一侧静脉移植物外包裹自体心包（实验组），另一侧为单纯的静脉移植（对照组）。术后2、4周分别切除移植静脉，计算机图像分析系统测量和计算内膜厚度、内膜面积，进行扫描电镜检查，用免疫组织化学方法检测静脉移植物平滑肌增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。结果实验组静脉移植术后2、4周内膜厚度和内膜截面积明显低于对照组（P〈0．01）。实验组静脉移植物术后2、4周的PCNA指数也明显低于对照组（P〈0．01；P〈0．05）。扫描电镜检查显示实验组静脉移植物内皮层破坏程度轻于对照组。结论自体心包外周支持能抑制静脉移植物内膜的增生。     

C-myc siRNA抑制大鼠自体移植静脉再狭窄的研究

目的静脉移植术后c-myc基因持续高表达是导致血管内膜增生进而再狭窄的原因之一。文中探讨通过局部给药方法给予针对c-myc基因的小分子干扰RNA(siRNA)对自体移植静脉内膜增生的影响。方法建立SD大鼠自体颈外静脉-颈总动脉移植模型。32只大鼠按移植静脉外膜局部给药不同处理方式方法分为未处理组(No treatment组)、凝胶组(Gel组)、无义序列组(scramble sequence group,SCR组)、c-myc RNA干扰组(C-myc siRNA组),于术后3周处死大鼠取移植静脉,光学显微镜下测量内膜厚度,免疫组化染色检测移植静脉增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、c-myc蛋白的表达,Q-RT-PCR检测移植静脉c-myc mRNA的含量。结果 C-myc siRNA组内膜厚度[(15.0±2.2)μm]显著低于No treatment组[(58.3±8.3)μm]、SCR组[(60.5±6.1)μm]和Gel组[(63.5±5.4)μm]。C-myc siRNA组静脉内膜区和中膜区PCNA阳性细胞率显著低于SCR组[分别为(8.4±2.2)%vs(68.5±5.0)%,P<0.05和(15.0±3.1)%vs(55.2±7.5)%,P<0.05],c-myc蛋白阳性细胞率C-myc siRNA组显著低于SCR组[(30.6±2.6)%vs(48.5±3.5)%,P<0.05]。C-myc siRNA组移植静脉中c-myc mRNA的表达相对量显著低于SCR组(0.48±0.05 vs 1.00±0.12,P<0.05)。结论C-myc siRNA能抑制移植静脉中平滑肌细胞的增殖,抑制内膜的增生,减轻移植静脉再狭窄程度。     

可降解外套管抑制自体移植静脉内膜增生的研究

目的:研究可降解的外套管束缚自体移植静脉对减轻桥静脉内膜、中层增厚的作用,探讨其防止或延缓桥静脉再狭窄的机制。方法:建立犬自体股静脉至股动脉的端-端静脉移植模型,其中一侧桥静脉外加聚乳酸-聚乙醇酸(PLGA)做成的圆柱形外套管(外套管组),对侧单纯静脉移植作为对照组。超声多普勒观察在体移植血管的通畅性。术后2、4、6、8、24周再次手术取桥静脉。光镜观察移植静脉中段内膜、中层厚度,胶原、弹力纤维变化;透射电镜观察静脉壁基底膜、细胞排列、细胞增殖、凋亡,细胞骨架结构,细胞外基质(ECM)变化等;免疫组化观察静脉壁细胞增殖、凋亡及分布。结果:术后40条静脉均通畅,吻合口无狭窄。对照组术后2周见内膜、中层增厚;随时间延长,增厚更加明显。外套管组术后2周内膜、中层稍增厚;4~24周持续增厚,但各时间点均明显小于对照组(P<0.05,P<0.01);对照组术后2周见中层平滑肌、外膜弹力纤维断裂严重,而外套管组无明显断裂。新生静脉内膜由平滑肌细胞(SMCs)和大量ECM构成,中层主要为SMCs和ECM;术后2周,静脉壁细胞增殖和凋亡率都较高,主要分布在内膜和中层,外套管组明显低于对照组(P<0.01),4周以后两者显著下降,凋亡率高于增殖率(P<0.05)。结论:可降解外套管在术后早期可保持静脉结构的完整性,减轻管壁结构破     

Changes of Ca^2＋ activated potassium channels and cellular proliferation in autoge-nous vein grafts

Objective: To investigate changes of Ca2+ activated potassium channels ( KCa) in autogenous vein grafts. Methods: Contraction of venous ring was measured by means of perfusion in vitro. The intimal rabbits proliferation of vascular and proliferation of cultured smooth muscle cells ( vascular smooth muscle cells, VSMCs) were observed by the means of computerised image analysis and MTT method respectively. Furthermore, whole cell mode of patch clamp was used to record KCa of VSMCs isolated from autogenous vein grafts. Results: One week after transplantation there were no significant differences of contraction and intimal relative thickness between autogenous vein grafts and control. Contraction and intimal relative thickness of autogenous vein graft were significantly increased 2 weeks after transplantation (P < 0. 05 , n = 8 vs control) , and they was more enhanced 4 weeks after vein transplantation ( P < 0. 01 , n =8 vs control ). TEA( blocker of Ca2+ activated potassium channels) increased MTT A490 nm     

血管外支架预防静脉桥血管再狭窄的研究进展

冠状动脉旁路移植术(CABG)后，静脉桥的再狭窄是亟需解决的问题。静脉桥管壁过度扩张导致管壁损伤，血管平滑肌细胞增生并向内膜迁移，内膜与中膜增厚，并在此基础上形成粥样斑块，是静脉桥晚期再狭窄的重要原因.静脉桥外放置血管外支架可限制管壁过度扩张，减轻管壁损伤，有效抑制增生的血管新内膜及内膜下泡沫细胞的形成，预防静脉桥的再狭窄，是提高CABG后静脉桥远期通畅率的一种可行的方法。     

五甲基槲皮素对行颈静脉移植的心肌重构大鼠的治疗作用

目的研究五甲基槲皮素（PMQ）对行自体颈静脉移植的心肌重构大鼠模型的治疗作用。方法 30只SD大鼠随机分为模型组、溶剂组和治疗组,建立大鼠颈部自体静脉移植模型后,每晨分别给予生理盐水、溶剂和25 mg/kgPMQ灌胃,均于第15天开始皮下注射血管紧张素Ⅱ[AngⅡ,288μg/（kg·d）],于21 d后取材。测量心脏指数、左心指数,测量心肌羟脯氨酸含量,免疫组化测量胶原Ⅰ、Ⅲ容积分数（CVF）比值CVFⅠ/Ⅲ;测量新生内膜和中膜的厚度比及面积比。结果 PMQ能显著抑制心肌的肥厚及纤维化,并能抑制移植静脉内膜的增生,而溶剂则无此作用。结论 PMQ对心肌重构及移植静脉内膜增生均有改善作用,有潜力成为冠状动脉旁路移植术（CABG）术后的治疗药物。     

抑制C—myc基因表达对移植血管狭窄的影响

目的观察放射菌素D对移植血管中C-myc基因表达及内膜增殖的影响。方法建立大鼠自体静脉移植模型，实验组分别于术前、术后应用不同剂量放射菌素D（0.015，0.15mg/kg），对照组仅做血管移植。分别于术后2h及1周切取移植静脉，应用原位杂交方法检测C-mycmRNA表达，应用计算机图像分析仪测量内膜厚度。结果高剂量组C-mycmRNA表达较对照组明显减少（6.5%，12.5%；P<0.01），移植血管内膜增殖受到明显抑制（18.7，28.5μm；P<0.01）。结论大剂量应用放射菌素D可以抑制C-mycmRNA表达，从而抑制移植血管内膜增殖。早期应答基因C-myc表达在诱导平滑肌细胞增殖中起着重要作用。     

大鼠自体静脉移植后内膜增生与平滑肌细胞增值

研究大鼠颈外静脉移植入颈总动脉后内膜增生（IH）的发病机制。应用组织切片的特殊染色，单克隆抗PCNA抗体及抗Dm抗体的免疫组化方法观察IH的发生过程。结果：①术后1d移植静脉的内膜消失，术后2d出现IH并逐渐增生，IH中可见大量平滑肌细胞（SMC），术后12周IH的面积与术后18周元显著差异；②IH中SMC的Dm呈阳性；③IH中SMC的PCNA指数于术后2d骤然升高，术后2周达高峰。结论：IH发生在移植术后2d，逐渐增厚至术后12周方停止，术后早期发生的IH是由中膜的SMC移行至内膜并增殖所致。SMC增殖的高峰在术后第2周。     

骨形态发生蛋白-4在高糖环境下静脉桥增殖重构进程中的作用研究

目的 观察糖尿病大鼠自体静脉桥的形态学变化以及骨形态发生蛋白4(bone morphogenic protein4,BMP4)和增殖细胞抗原Ki67在其管壁中的表达与分布情况,初步探讨BMP4在高糖环境下静脉桥增殖重构进程中的潜在作用。方法 选用8周龄的48只雄性SpragueDawley大鼠,随机分配为非糖尿病组(即血糖正常组, n=24)及糖尿病组( n=24),采用高脂高糖饮食联合链脲佐菌素的诱导方法构建糖尿病大鼠模型。两组大鼠均建立单侧颈外静脉颈总动脉桥接模型,每组分别于术前,术后1周、2周和4周获取大鼠静脉桥( n=6)。应用HE染色切片测算大鼠静脉桥血管壁的形态学参数,免疫组化观察Ki67及BMP4在管壁中的表达及分布情况,逆转录聚合酶链式反应(RTPCR)和免疫印迹法(Western blot)检测BMP4基因和蛋白在静脉桥中的表达量。结果 在大鼠静脉桥增殖重构进程中,管壁随时间进展不断增厚,而糖尿病大鼠术后内膜和中膜厚度均高于同期的正常大鼠（ P<0.05）。免疫组化提示Ki67表达于大鼠静脉桥管壁平滑肌细胞的胞核,Ki67的阳性表达随桥血管增殖重构进程逐渐增高,而术后糖尿病大鼠静脉桥内Ki67的阳性细胞数高于同期的正常大鼠（ P<0.05）。免疫组化提示BMP4表达于大鼠静脉桥管壁平滑肌细胞的胞浆,结合RTPCR及Western blot检测发现,正常大鼠术后静脉桥中仅有少量BMP4的表达,而糖尿病大鼠静脉桥管壁内BMP4的阳性细胞数以及在基因和蛋白水平的表达量均随时间进展逐渐增高,并高于术后同期的正常大鼠（ P<0.05）。结论 糖尿病大鼠静脉移植术后桥血管增殖性重构改变与管壁内BMP4的高表达密切相关,而BMP4可能在高糖环境下静脉桥加速失效进程中发挥了重要的促进作用。     

反义mTOR基因局部转染对移植静脉内膜增生的影响

目的:观察反义雷帕霉素靶蛋白(mTOR)基因转染对移植静脉内膜增生的影响。方法:聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA)和聚乙烯醇(PVA)包载制备纳米级粒子混合物。建立自体静脉移植模型,随机分成转基因组、空载体组、对照组。转基因组转染纳米粒子包载的反义mTOR基因,空载体组转染纳米粒子包载的空载体,对照组不予特殊处理。分别于术后3、7、14、28d取材,常规HE、弹力纤维VG染色,RT-PCR、免疫组织化学染色、Western blot检测mTOR基因的mRNA及蛋白的变化,TUNEL法观察血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的动态变化。结果:转基因组内膜中mTOR蛋白产物表达较其他组明显减少(P<0.05);转基因组内膜增生程度在术后7、14、28d较其他组明显减少(P<0.01);转基因组凋亡细胞较其他组明显增高(P<0.05)。结论:反义mTOR基因的表达能够有效抑制自体移植静脉内膜的增生,促进VSMC的凋亡。     

家兔静脉移植桥血管内膜c-myc蛋白的表达

目的 :研究c -myc基因在冠脉旁路移植术静脉桥中的表达。方法 :2 5只新西兰大耳白兔随机分为 5组 ,每组 5只。将颈外静脉间置于同侧颈总动脉 ,分别在术后 6h ,2d ,7d ,14d ,2 8d取静脉桥。应用免疫组化和形态学方法观察不同时间c -myc蛋白的表达 ,采用计算机图像分析法测量静脉桥内膜、中膜厚度及其比值。结果 :7d时静脉桥内膜和中膜厚度较 6h明显增厚 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。 14d ,2 8d时静脉桥内膜和中膜厚度较7d没有明显变化 ,差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。移植后 6h至 7d ,c -myc蛋白血管平滑肌细胞逐渐增多 ,于 7d达高峰 (P <0 .0 1)。移植后 14d ,2 8dc -myc蛋白血管平滑肌细胞开始下降 ,与 7d相比差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。结论 :c-myc蛋白表达与内膜增殖有密切联系 ,可作为血管损伤后内膜增殖的早期监测指标     

局部RNA干扰下调磷脂酰肌醇3激酶-Akt信号通路抑制大鼠颈静脉颈动脉间置模型静脉移植血管新生内膜增生

目的 探讨局部干扰磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）p110β亚单位对移植血管新生内膜增生的作用。方法 大鼠颈静脉分支-颈动脉间置模型,通过Pluronic F-127-质粒缓释系统在血管吻合完成后局部RNA干扰。分6组：第1组：25％Pluronic F-127组,第2组：pU6-Pik3cb—shRNA-1组,第3组：pU6-Pik3cb-shRNA-2组,第4组：1／2（shRNA1＋shRNA2）组,第5组：pGenesil-1质粒错配shRNA组,第6组：渥曼青霉素阳性对照组。实验时分别将200μl含有50μg shRNA质粒,或50μg渥曼青霉素,或空白Pluronic F-127凝胶均匀地涂在移植桥血管的周围。每组30只SD大鼠,分别于1、3、7、14、28d取材苏木精-伊红染色观察内膜厚度;术后3d进行荧光定量PCR和Western印迹法测定PI3K p110β亚单位mRNA和其下游效应分子磷酸化Akt和mTOR。结果 Pluronic F-127质粒缓释系统平滑肌细胞转染效率为60％,内皮细胞达90％以上,pU6-Pik3cb-shRNA和渥曼青霉素转染后Pik3cb mRNA和其下游效应分子磷酸化Akt和mTOR下调,移植血管内膜增生减轻。结论 靶向Pik3cb的shRNA下调PI3K-Akt—mTOR信号通路,减轻移植血管新生内膜增生。     

含β射线的软性血管外模型对移植血管内膜增生及平滑肌增殖的抑 …

目的 观察含β射线＾３２磷（＾３２Ｐ）的软性血管外模型（ＳＥＭ）对移植血管内膜增生（ＩＨ）及平滑肌细胞（ＳＭＣ）增殖的抑制作用。方法 作者在２４吸家兔股静脉－股动脉移植模型上,应用内皮素Ｉ受体基因（ＥＴＡｃＤＮＡ）原位分子杂交及计算机图像分析主动脉在不同条件下（分对照组、阿斯匹林（ＡＳＰ）组和＾３２Ｐ组）,术后（１,２,４,１２周）不同时间内定量观察ＥＴＡｃＤＮＡ表达情况及内膜相对厚度。结果（１）     

自体心包外支架预防静脉移植物再狭窄的动物模型的建立

目的:建立自体心包外支架包裹静脉移植物减轻内膜增生的动物模型,探讨自体心包外支架预防静脉移植物再狭窄的可行性。方法:以“no-touch”方法取犬一侧颈外静脉,对半剪成两段后分别吻合在双侧股动脉上,其中一侧静脉移植物外包裹自体心包(实验组),另一侧为单纯的静脉移植(对照组)。术后2周、4周分别切取移植静脉,行HE和WEIGERT染色,图像分析系统测量和计算内膜厚度、内膜面积。免疫组化法检测静脉移植物平滑肌细胞增殖细胞核抗原(PCNA)的表达水平。结果:除1条犬死亡外,余12条成活,所有动静脉吻合口无狭窄。实验组静脉移植物术后2周、4周内膜厚度、内膜截面积和PCNA指数均明显低于对照组(P<0.01)。结论:该动物模型设计合理,自体心包可作为静脉外支架的材料,能明显减轻内膜的增生,减少平滑肌细胞的增生。     

雷帕霉素纳米粒局部处理兔离体静脉对防治其移植后狭窄的作用

目的 研究用纳米缓释技术处理的雷帕霉素(RPM-NP)对移植静脉狭窄的防治作用.方法 选取家兔40只,建立兔颈外静脉间位移植至颈总动脉的移植静脉模型,按处理方式不同,分为4组:药物纳米局部干预组(RPM-NP局部处理颈外静脉,n=10,A组)、药物纳米全身干预组(RPMNP周围静脉滴注,n=10,B组)、空白纳米局部干预组(空白纳米粒局部处理颈外静脉,n=10,C组)和未干预组(不做上述处理,n=10,D组).术后28 d,切取各组移植静脉和对侧正常静脉,病理学检测移植静脉内膜厚度、内径、内膜/中膜厚度比以及胶原容积指数.结果 移植静脉的组织病理学检测结果表明,A、B、C、D组移植静脉和对侧正常静脉的内膜/中膜厚度比分别为0.26±0.02、0.73±0.05、0.71 ±0.04、0.69±0.03、0.24±0.01,胶原容积指数比分别为0.24±0.03、0.56±0.06、0.53±0.07、0.49±0.08、0.21 ±0.01.B、C、D组的组织病理学(移植静脉内膜厚度、内径、内膜/中膜厚度比以及胶原容积指数)与对侧正常静脉组比较,均出现明显的病理学改变,差异均有统计学意义(均P＜0.05);3组之间移植静脉的组织病理学结果比较,差异均无统计学意义(均P＞0.05).而A组移植静脉的组织病理学结果与对侧正常静脉比较,差异无统计学意义(P＞0.05);与其他3组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 采用纳米缓释技术处理的雷帕霉素,对离体的移植静脉行管腔内局部处理,能抑制移植静脉内膜增生,防治移植静脉狭窄.     

兔自体静脉移植物的中膜平滑肌细胞超微结构变化

目的：观察臬体静脉移植物的中膜平没肌细胞超微结构变化及其增生特点,为内膜增生的防治提供实验依据。方法：以兔右颈外静脉间置于同侧颈总动脉为模形,术后３,７,１４,２８d分别获取移植段静脉,在透射电镜下观察其中膜平滑机细胞超微结构的变化。结果：术后３d时未见移植段静脉中膜平滑肌细胞增生,７d时可见增生,１４d时达高峰,可见正 在分裂 中的平滑肌细胞呈哑铃形,胞质内内质网和线粒体等丰富,核仁明显变大。２８d     

局部应用肝细胞生长因子对静脉移植物内膜增生的影响

目的:探讨局部应用肝细胞生长因子静脉移植物内膜增生的影响。方法:取犬一侧颈外静脉,对半剪成两段后分别吻合在双侧股动脉上,其中一侧静脉移植物在移植前用肝细胞生长因子处理(实验组),另一侧为单纯的静脉移植(对照组)。术后2周、4周分别切除移植静脉,计算机图像分析系统测量和计算内膜厚度、内膜面积,进行扫描电镜检查,用免疫组织化学方法检测静脉移植物平滑肌细胞增殖细胞核抗(PCNA)的表达。结果:实验组静脉移植物术后2周、4周内膜厚度和内膜截面积明显低于对照组(P<0.01)。实验组静脉移植物术后2周、4周的PCNA指数也明显低于对照组(P<0.01;P<0.05)。扫描电镜检查显示实验组静脉移植物内皮层破坏程度轻于对照组。结论:局部应用肝细胞生长因子能抑制静脉移植物内膜的增生。     

静脉移植桥血管内膜PCNA蛋白的表达

目的 :研究PCNA对冠脉动脉旁路移植术再狭窄的作用。方法 :2 5只健康纯种新西兰大耳白兔将按体重随机分五组 ,每组 5只。将颈外静脉间置于同侧颈总动脉 ,分别在术后 6h ,2d ,7d ,14d ,2 8d取材。应用免疫组织化学染色法和形态学分析观察不同时间PCNA阳性细胞数的表达 ,采用计算机图象分析法测量管腔内膜 ,中膜厚度及其比值。结果 :实验过程中无实验动物死亡。吻合口完成时各吻合口均通畅。 7d内膜和中膜厚度较 6h明显增厚 ,有显著性差异 (P <0 .0 1) ;在 14d、2 8d时内膜和中膜厚度较 7d没有明显变化 ,无显著性差异 (P >0 .0 5)。移植后 6h至 7d ,在血管平滑肌细胞 (VSMC)中 ,PCNA蛋白逐渐增多 ,于 7d达高峰 (P <0 .0 1)。移植后 14d ,2 8d在VSMC中PCNA蛋白开始下降 ,与 7d相比差异有显著意义 (P <0 .0 1)。结论 :PCNA阳性细胞数在移植后 7d达高峰。与内膜增殖的高峰期相吻合 ,提示PCNA蛋白表达与内膜增殖有密切联系 ,可做为一个早期反应血管损伤后内膜增殖的指标。PCNA蛋白的表达对冠脉动脉旁路移植术再狭窄起着重要作用     

基质金属蛋白酶与自体移植静脉再狭窄

自体移植静脉再狭窄严重影响冠状动脉旁路移植术远期疗效 ,基质金属蛋白酶 (MMP)是一族细胞外基质降解酶 ,近年来发现它们在自体移植静脉再狭窄过程中发挥了重要作用。自体静脉移植后MMPs的表达及活性增强 ,通过影响基质转换及血管壁细胞功能而促进内膜增生 ,并参与移植静脉收缩性再构。非选择性MMP抑制剂可减轻内膜增生 ,预防移植静脉再狭窄。