炎症积水的输卵管上皮组织中Toll样受体及信号转导通路的表达

目的 分析炎症积水的输卵管上皮组织中Toll样受体（TLR）基因和关键信号转导分子的表达格局.方法 根据沙眼衣原体IgG检测（CAT）结果,将输卵管炎症积水患者分为CAT阳性组（n=20）和CAT阴性组（n=8）;另设正常对照组（n=13）.运用实时定量PCR方法.分析输卵管上皮组织中TLR1～10及NF-KB、MyD88、TRAF、IRAK mRNA的表达.结果 CAT阳性组和阴性组TLR2 mRNA表达均显著低于对照组（P〈0.001）;而CAT阳性组与阴性组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）.CAT阳性组TLR4 mRNA表达显著低于对照组（P〈0.001）和CAT阴性组（P〈0.05）;而CAT阴性组与对照组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）.对照组MyD88 mRNA表达明显高于CAT阳性组（P〈0.01）和CAT阴性组（P〈0.05）;而CAT阳性组与阴性组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）.结论 输卵管炎症积水可能与既往输卵管感染后机体自身免疫损伤及感染局部TLR2、4介导的免疫反应不足有关.     

多索茶碱联合定掌汤治疗AECOPD的效果及对NLRP3mRNA、TLR4-MyD88通路的影响

目的:探究多索茶碱联合定掌汤治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)的效果及对NL-RP3 mRNA、TLR4MyD88通路的影响。方法:选择AECOPD患者120例,随机分为两组(n=60)。对照组使用多索茶碱治疗,观察组在对照组基础上联合定掌汤定掌汤治疗。比较两组血气指标、肺功能指标,检测并比较两组血清白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-18(IL-18)以及外周血淋巴细胞NLRP3 mR-NA和TLR4MyD88通路相关蛋白表达水平。结果:观察组的有效率显著高于对照组(P<0.05)。治疗后两组血气指标均显著改善(P<0.05),观察组PaO_2高于对照组而和PaCO_2显著低于对照组(P<0.05)。治疗后两组肺功能指标均显著升高(P<0.05),观察组FEV1和PEF均显著高于对照组(P<0.05)。治疗后两组IL-1和IL-18均显著降低(P<0.05),观察组IL-1和IL-18均显著低于对照组(P<0.05)。治疗前两组NLRP3mRNA水平无显著差异(P>0.05),治疗后均显著降低(P<0.05),治疗后观察组外周血淋巴细胞NLRP3 mRNA水平显著低于对照组(P<0.05)。治疗前两组TLR4、MyD88蛋白水平比较无显著差异(P>0.05),治疗后均显著降低(P<0.05),治疗后观察组外周血淋巴细胞TLR4、MyD88蛋白水平显著低于对照组(P<0.05)。结论:定掌汤联合多索茶碱对AECOPD患者具有更好的临床疗效,可更好的改善血气指标和肺功能。定掌汤可显著的抑制淋巴细胞中TLR4-MyD88通路并下调NLRP3 mRNA的水平。     

子宫内膜异位症患者内膜组织中TLR4及MyD88的表达

目的:探讨Toll样受体4(TLR4)介导的髓样分化因子88(MyD88)通路在正常子宫内膜、子宫内膜异位症(EMs)患者在位内膜及异位内膜组织中的表达及其临床意义。方法:选取EMs患者(EMs组)45例(Ⅰ、Ⅱ期15例,Ⅲ、Ⅳ期30例),取其异位内膜组织45例(异位内膜组)、在位内膜组织30例(在位内膜组),另取同期因子宫纵隔行宫腔镜手术患者的正常内膜组织30例(对照组)。采用半定量RT-PCR及免疫组化SP法检测TLR4及MyD88 mRNA和蛋白在上述组织中的表达情况。结果:异位内膜组、在位内膜组及对照组TLR4与MyD88 mRNA和蛋白的表达水平比较,差异有统计学意义(FmRNA=37.541、38.669,F蛋白=46.707、31.046,P均<0.001),且异位内膜组和在位内膜组均高于对照组,异位内膜组高于在位内膜组(P均<0.01)。EMsⅠ、Ⅱ期和Ⅲ、Ⅳ期患者异位内膜组织中TLR4与MyD88 mRNA及蛋白的表达水平比较,差异均无统计学意义(tmRNA=1.373、1.574,t蛋白=0.299、0.066,P均>0.05)。在位内膜组中TLR4与MyD88 mRNA及蛋白的表达均呈正相关(r分别为0.594和0.560,P均<0.001),异位内膜组中TLR4与MyD88 mRNA及蛋白的表达均呈正相关(r分别为0.812和0.639,P均<0.001)。结论:TLR4及MyD88的高表达可能在EMs的发病机制中起着重要作用。     

TOLL样受体9/髓样分化因子88信号通路在系统性红斑狼疮的变化及意义

目的 探讨TOLL样受体9(TLR9)/髓样分化因子88(MyD88)信号通路在系统性红斑狼疮(SLE)的变化及意义.方法 选择35例SLE患者和15例正常对照者,分离外周血单个核细胞(PBMC),并以寡脱氧核苷酸(CpG ODN)2216刺激,RT-PCR检测TLR9、MyD88 mRNA表达水平,ELISA检测上清液中IFN-α水平.结果 SLE患者PBMC中TLR9、MyD88 mRNA水平明显高于正常对照(P＜0.01);活动患者TLR9、MyD88 mRNA水平明显高于稳定患者(P＜0.01),TLR9 mRNA水平与疾病活动度评分(SLEDAI)正相关(rs=0.471,P＜0.05),与C3、C4负相关(rs=-0.479,rs=-0.493,P＜0.05).CpG刺激后SLE患者PBMC中TLR9、MyD88 mRNA水平明显升高(P＜0.01、P＜0.05);SLE患者培养上清IFN-α的水平显著升高(P＜0.01).结论 SLE患者TLR9/MyD88信号通路明显活化,参与了SLE的发病.     

MyD88、TLR4和STAT3在肝细胞癌组织中的表达及意义

目的 探讨TLR4、MyD88、STAT3在肝细胞癌组织中的表达及生物学意义.方法 采用免疫组化方法检测TLR4、MyD88、STAT3在82例肝癌组织及其对应的癌旁肝组织中的表达水平.结合肝癌临床病理指标分析相关性.结果 TLR4、MyD88、STAT3蛋白在癌组织中的阳性表达率为76.8％(63/82)、67.1％(55/82)、69.5％(57/82),高于在癌旁肝组织中的阳性表达率25.9％( 12/82)、12％(9/82)、8.5 ％(7/82),差异均具有统计学意义(P＜0.05);在肝癌组织中TLR4、MyD88、STAT3的阳性表达呈正相关[TLR4和MyD88 (r=0.612,P =0.011),MyD88和STAT3(r=0.578,P =0.002),TLR4和STAT3 (r=0.542,P=0.016)]. MyD88和STAT3表达与性别、分化程度、有无HBV感染和肝硬化有关(P＜0.05),而与肿瘤大小、有无静脉浸润无关(P＞0.05).结论 TLR4、MyD88、STAT3表达上调,导致肝癌细胞增殖和免疫逃逸是肝癌发生发展的重要分子机制.     

UC患者PBMC中TLR4、NF-κB水平的变化及其临床意义

目的 探讨溃疡性结肠炎(UC)患者外周血单核细胞(PBMC)中TOLL样受体(TLR)4、NF-κB水平的变化及在UC发病中的可能机制.方法 选取武警浙江省总队医院嘉兴医院消化科2014年1月至2015年1月收治的UC患者30例作为观察组,另选取该院体检科健康体检者10例作为对照组.采用流式细胞仪检测外周血CD14+单核细胞表面TLR4阳性表达率,RT-PCR检测TLR4、髓样分化因子88(MyD88)、NF-κB(P65) mRNA表达水平,Western blot检测TLR4、MyD88、NF-κB(P65)蛋白水平.结果 观察组外周血CD14+单核细胞表面TLR4阳性表达率明显高于对照组(P＜0.05);对照组TLR4、MyD88、NF-κB(P65) mRNA及蛋白水平明显低于观察组(P＜0.01);TLR4、MyD88、NF-κB(P65)蛋白水平与UC严重程度呈正相关.结论 UC患者PBMC中TLR4、NF-κB明显增高,临床可通过检测TLR4、NF-κB水平判断UC的发展程度.     

髓样分化因子88在子痫前期患者血浆中的表达

目的探讨髓样分化因子88(MyD88)在子痫前期患者血浆中的表达及其与子痫前期的关系。方法 32例子痫前期患者分为轻度子痫前期组和重度子痫前期组,每组16例,选择同期正常晚期孕妇16例作为对照组。采用反转录聚合酶链反应和酶联免疫吸附测定法检测血浆中MyD88 mRNA和蛋白水平。结果轻度和重度子痫前期组患者血浆中MyD88 mRNA及蛋白水平显著高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);轻度子痫前期组与重度子痫前期组患者血浆中MyD88 mRNA及蛋白水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 MyD88可能参与了子痫前期的发病过程。     

青藤碱对佐剂性关节炎大鼠TLR4/MyD88信号通路的影响

目的:探讨青藤碱对佐剂性关节炎大鼠TLR4/MyD88信号通路诱导炎症的影响。方法:选择清洁级SD大鼠40只,随机分为模型组、青藤碱组、甲氨蝶呤组及正常对照组。前3组大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂诱发大鼠佐剂性关节炎模型,正常对照组大鼠右后足跖皮内注射等量0.9%氯化钠注射液。4组分别干预4周后,取膝关节滑膜,采用Real-time PCR法检测TLR4 mRNA、MyD88 mRNA表达,ELISA法检测炎性因子TNF-α。结果:模型组大鼠膝关节滑膜组织TLR4 mRNA、MyD88 mRNA及炎性因子TNF-α表达均较正常对照组明显升高(P<0.01)。经青藤碱治疗后,TLR4 mRNA、MyD88 mRNA及炎性因子TNF-α表达均较模型组明显下降(P<0.01)。结论:青藤碱可改善佐剂性关节炎大鼠的关节炎症,该作用可能与抑制TLR4/MyD88信号通路有关。     

Smac和Survivin基因在急性白血病中的表达及临床意义

目的 检测急性白血病(AL)患者Smac、Survivin基因mRNA的表达,以探讨其与AL的发生、发展、疗效及预后的关系.方法 采用RT-PCR技术检测74例AL患者Smac、Survivin基因mRNA的表达情况.10例健康人作为对照组.K562细胞株为阳性对照.结果 4组阳性率及Smac mRNA、Survivin mRNA表达水平比较均有统计学意义(P<0.01);初诊组、复发组高于对照组和完全缓解组(P<0.05);初诊组与复发组、对照组与完全缓解组之间则无统计学意义(P>0.05).治疗后,Smac、Survivin阴性表达者其完全缓解率明显高于阳性表达患者(P<0.05).2种基因mRNA表达水平呈正相关关系(r=0.828,P<0.01).结论 2基因的表达与AL发生、发展相关,是监测病情进展及判断预后的重要分子标志物;二者的表达与化疗药物的敏感性密切相关,可能是导致AL细胞对化疗药物不敏感的原因之一.     

舍曲林在抑郁症大鼠模型抗抑郁中的作用及大鼠海马凋亡信号通路相关蛋白的差异性表达

〔目的〕探讨舍曲林在抑郁症大鼠模型抗抑郁中的作用及大鼠海马凋亡信号通路相关蛋白表达水平的差异.〔方法〕选择54只健康成年雄性SD级大鼠为研究对象,随机数字表法随机分为对照组、模型组和舍曲林组,各18只.应用慢性不可预见性温和刺激(CUMS)法对模型组和舍曲林组建立抑郁症大鼠模型,对照组大鼠不给予处理.用Western blot法和qRT-PCR法检测各组大鼠海马B淋巴细胞瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2的相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-9及Toll样受体4(TLR4)、MyD88蛋白含量及mRNA表达水平.〔结果〕① 对照组、模型组和舍曲林组建模前大鼠糖水偏好实验(SPT)偏好度、旷场实验(OFT)水平得分和垂直得分、鼠悬尾实验(TST)不动时间、强迫游泳测试实验(FST)不动时间比较差异均无统计学意义(P>0.05).建模后模型组SPT偏好度显著降低,OBT水平运动得分和垂直运动得分均显著减小,FTST和FST不动时间均显著延长,与建模前比较差异均存在统计学意义(P<0.05),对照组上述行为学变化指标与建模前比较均无明显变化(P>0.05);建模后舍曲林组SPT偏好度、OBT水平运动得分和垂直运动得分及FTST和FST时间与模型组比较差异均有统计学意义(P<0.05).② 模型组大鼠海马CA1区锥体细胞肿胀、排列稀疏,细胞间隙增加,神经元数量减少,细胞胞浆中的尼氏体数量减少.舍曲林组大鼠海马CA1区神经元损伤表现相比模型组显著改善.③ 建模后模型组脑组织TLR4、MyD88及Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白含量和mRNA表达水平较建模前均明显升高,Bcl-2显著降低,而舍曲林组与模型组比较TLR4、MyD88及Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白含量和mRNA表达水平明显降低,Bcl-2则显著升高(P<0.05).〔结论〕舍曲林能明显改善慢性应激抑郁症大鼠抑郁样行为,减轻大鼠神经元损伤和凋亡,其作用机制可能与其对凋亡信号通路Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白异常表达的调节和对TLR4/MyD88通路活化的抑制作用有关.     

混合人血清IgG亚类分离的研究

本文对混合人血清中IgG四个亚类提供了系统的分离方法。首先用DEAE-Sephadex A 50从血清中分离IgG作为亚类分离的材料。然后用DEAE-纤维素柱分离IgG4。再用CM-纤维素柱分离出IgG2,最后用Protein A-Sepharose CL-4B 将IgGl与IgG3分离。     

总IgG和特异性IgG相关性初探

为探讨特异性ＩｇＧ和ＩｇＧ的相关性,用常规方法检测多份血清总ＩｇＧ,抗核抗体（ＡＮＡ）,抗双链ＤＮＡ抗体（ｄｓＤＮＡ）,抗盐水可提取核抗原（ＥＮＡ）抗体、巨细胞病毒（ＣＭＶ）特异性抗体、单纯疱疹病毒Ⅰ型（ＨＳＶ－Ⅰ）特异性抗体及抗链球菌溶血素“０”抗体（ＡＳＯ）和抗“Ｈ”。结果显示：两种自身抗体（ＡＮＡ,抗ＥＮＡ抗体）及ＣＭＶ抗体各阳性组总ＩｇＧ水平明显高于各阴性组,有显著性差异;Ｓｍ和（或）ｄｓ     

RA患者血清IgG抗体特异结合的噬菌体模拟肽的筛选

目的 从噬菌体随机12肽库中,筛选能与RA患者血清IgG抗体特异结合的RA相关抗原表位的噬菌体模拟肽,并寻找对RA敏感性和特异性均高的模拟肽.方法 提纯30例RA患者血清IgG抗体,以此作为筛选配基,对噬菌体12肽库进行4轮免疫筛选,通过ELISA方法对随机挑取噬菌体克隆进行初步鉴定,取混合阳性克隆利用Dot-ELISA方法分析15例RA患者和15例正常人血清的敏感性和特异性.结果 经4轮免疫淘洗后,特异结合的噬菌体富集增加近100倍.随机挑取的11个噬菌体克隆,经鉴定均能与IgG抗体特异性结合,阳性率100%.混合的阳性克隆分别与15例RA患者和15例正常人血清反应,15例RA患者血清全部为阳性,正常人血清只有1例为阳性,敏感性为100%,特异性为93.3%.结论 利用RA患者血清IgG抗体筛选噬菌体随机12肽库,能获得对RA敏感性和特异性均高的噬菌体多肽,故有望利用该技术开发新的RA特异性实验室诊断指标,为制备RA特异性诊断试剂盒提供实验基础.     

ELISA检测结核IgG抗体对结核病的诊断价值

目的 探讨血清抗结核分支杆菌抗体对活动性结核病的诊断价值。方法 采用快速酶联吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测血清抗ＰＰＤ－ＩｇＧ在各类结核病中的特异性，敏感性及与痰菌，病情的关系。结果 血清抗ＰＰＤ－ＩｇＧ诊断结核病的特异性为８９．８％，敏感性为８２．９％，其阳性率与痰菌关系不大，与病情变化有一定的相关性。结论 血清抗ＰＰＤ－ＩｇＧ检测是 性结核病一项有价值的诊断方法，并可用于评价结核病一项有价值的诊断方     

IgG不规则抗体快速试剂法在临床鉴定Rh血型中的应用

目的：预防母婴Rh血型不合所致的Rh系HDN,避免由Rh血型不合引起的输血反应，确保临床用血安全。方法：使用IgG不规则抗体快速试剂替代菠萝酶，能简便、快速、准确地确定Rh血型。结果：用该法检测1000例23-55岁妇女的Rh血型，与菠萝酶法比较，结果更为灵敏准确。结论：与传统的酶法，抗人球法相比，IgG不规则抗体快速试剂法的优点在于操作简单易行，结果准确可靠、灵敏度高、重复性好，实验用时短、成本低、容易被患者接受，特别适合于急诊病例。     

虎血清免疫球蛋白(IgG)的纯化及纯度、活性鉴定

目的建立高纯度、高活性的虎血清IgG纯化方法。方法用饱和硫酸铵沉淀虎血清得到IgG粗品;结合Hitrap Protein A亲和层析预装柱及阴离子交换层析法对粗品IgG进一步分离纯化,采用PAGE电泳和Western-Blot免疫印迹法鉴定IgG纯度和免疫活性。结果80 mL虎血清亲和纯化得到84 mg IgG,阴离子交换层析纯化得到30 mg虎的IgG纯品。结论建立了简便快速、纯度高、活性好的虎血清IgG的分离纯化方法,为虎血清IgG二级抗体的制备提供了高纯度、活性好的一级抗体免疫原。     

长爪沙鼠IgG的纯化及抗血清的制备

目的纯化长爪沙鼠血清IgG,制备兔抗长爪沙鼠IgG抗血清。方法采用Hitrap Protein G亲和层析预装柱来纯化长爪沙鼠血清IgG;通过SDS-PAGE电泳和Western-Blotting免疫印迹法对长爪沙鼠血清IgG进行纯度鉴定,免疫兔子制备抗血清。结果7 mL长爪沙鼠血清纯化得到11 mg IgG;电泳和免疫印迹测定,IgG纯度大于95%;用纯化的IgG作抗原制备了兔抗血清,免疫双扩散测定效价达1∶32。结论建立了长爪沙鼠血清IgG的纯化方法,制备了长爪沙鼠IgG抗血清,证实长爪沙鼠血清IgG和Protein G具有较高的亲和性。     

金标渗滤法测定囊虫特异性抗体试剂盒的研制

目的 研制简易、快速、准确的囊虫病诊断试剂盒，并对其诊断价值进行考核评价。方法 以猪囊尾蚴的囊液粗提液为检测用抗原，以胶体金标记的金黄色葡萄球菌蛋白A（SPA）为探针，采用自行设计的渗滤装置制备金标渗滤法（DIGFA）检测试剂盒。检测不同病人血清中囊虫特异性IgG抗体，并以囊虫IgG抗体ELISA检测试剂盒考核其敏感性和特异性。结果 用金标试剂盒检测58人份囊虫病患者血清和100人份健康者血清，其敏感性为98.3％（57/58）；特异性为100％（100/100）。用该试剂盒检测25人份包虫病患者血清，6份呈弱阳性，交叉反应率为24％；检测30人份血吸虫病人血清，10人份肺吸虫病人血清，10人份肠道线虫病人血清，均无交叉反应。与ELISA试剂盒检测结果比较，符合率为98．7％，无显著性差异（χ^2=0．0545，P〉0．05）。结论 金标渗滤法快速检测囊虫特异性抗体试剂盒敏感性高、特异性强，可与ELISA法相媲美，且操作更为简便、快速，结果判读容易，特别适合临床检测和现场查病。     

过敏性紫癜患儿不同时间尿微量蛋白检测的临床意义

过敏性紫癜(HSP)是小儿常见的以毛细血管炎为主的变态反应性疾病,多见于4岁左右儿童。过敏性紫癜的病理性改变以微血管炎症反应为特征,病变累及皮肤、肠管、关节和肾脏等多器官组织。早期肾脏损伤轻微,很少出现临床症状,常规的检查手段不能及早发现,早期诊断HSP肾损伤对于早期药物干预和改善预后十分重要。而尿系列微量蛋白检测可以灵敏地反映HSP早期的肾损害。本文通过46例HSP患儿在不同时间段进行尿微量白蛋白(MA)、β2-微球蛋白(β2-MG)、α2-微球蛋白(α2-MG)、IgG测定,以探讨尿微量蛋白检测在小儿过敏性紫癜肾损害的临床意义。1资料和方法1.1诊断标准依据《实用儿科学》第7版HSP临床诊     

人参提取物增加金葡菌苗对豚鼠B细胞免疫反应

目的:研究人参提取物作为免疫佐剂,对机体B细胞免疫功能的增强作用.方法:将不同剂量人参提取物加入菌苗抗原混合后,先后免疫和攻击豚鼠,测定各阶段的血清IgG,同时设单纯菌苗和Al(OH)3加菌苗的对照组.结果:在对照组提高B细胞免疫功能的基础上,人参提取物各实验组平均再增加70%;人参提取物在一定的浓度范围内作用较强;实验组IgG含量上升的时间比对照组提前1～2 w;人参提取物G实验组的效果大于P组.结论:人参提取物可显著地增强菌苗对机体的免疫作用.