大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌连续分离株β-内酰胺酶基因研究

目的了解大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌连续分离株β-内酰胺酶基因存在状况。方法采用PCR检测浙江地区二家医院大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌连续分离株21种β-内酰胺酶基因。结果检出TEM、SHV、LEN、CTX-M-1 cluster、CTX-M-9 cluster、OXA-1 cluster、OXA-10 cluster、LAP、DHA、ACT-1等β-内酰胺酶基因，并在国内外首次从大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌中发现LAPβ-内酰胺酶基因。结论浙江地区二家医院大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌连续分离株β-内酰胺酶基因携带率高。存在新的β-内酰胺酶基因（LAP）。     

新生儿医院感染肺炎克雷伯菌耐药性及β-内酰胺酶编码基因检测

目的 了解新生儿医院感染肺炎克雷伯菌的耐药性和耐药基因特点.方法 应用K-B法对17株肺炎克雷伯菌进行16种抗菌药物敏感性试验,检测β-内酰胺酶基因TEM、SHV、PER、VEB、GES、CARB、CTX-M-1群,碳青霉烯酶基因OXA-23群、OXA-24群、OXA-51群、OXA-58群,金属β-内酰胺酶基因IMP、VIM、SPM、GIM,AmlpC酶基因ADC、DHA.结果 17株肺炎克雷伯菌对氨苄西林、头孢曲松、头孢唑啉、头孢他啶高度耐药,而对氨基糖苷类和喹诺酮类药物敏感性较高,碳青霉烯类亚胺培南敏感率达100%;17株中β-内酰胺酶基因TEM阳性9株、SHV阳性1株:碳青霉烯酶基因、金属β-内酰胺酶基因均阴性;AmpC酶基因DHA阳性3株.结论 新生儿疑似肺炎克雷伯菌败血症时,亚胺培南可能是现阶段最好的选择.     

肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因型分布

目的阐明广州地区肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因型分布。方法用药敏纸片法对67株耐三代头孢菌素类抗生素的肺炎克雷伯菌进行超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)表型筛选,采用PCR检测β-内酰胺酶耐药基因,对部分ESBLs菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)。结果 67株菌中有58株菌ESBLs表型阳性,β-内酰胺酶基因检测显示,44株产CTX-M、43株产SHV(其中10株产超广谱的SHV)、14株产OXA-1群、38株产TEM,7株菌产AmpC。产CTX-M的菌株有20株产CTX-M-1群(包括15株产CTX-M-15)和24株产CTX-M-9群(包括14株产CTXM-14)。PFGE结果显示产ESBLs菌株同源性低。结论广州地区耐三代头孢肺炎克雷伯菌以产CTX-M-1群和CTX-M-9群ESBLs为主。     

郑州地区大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶基因型分布

目的:研究郑州地区大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因型分布.方法:收集郑州大学第一附属医院、第三附属医院检验科细菌室2007年至2008年分离的产ESBLs大肠埃希菌138株,采用PCR技术进行ESBLs型别检测.结果:138株大肠埃希菌中共检出TEM(102株)、SHV(87珠)、CTX.M-1(42株)、CTX-M-14(66株)、CTX-M-25(9株)、CTX-M-38(6株)、OXA-1(12株)和OXA-20(3株)8种型别,其中以TEM型最为多见(74.9%).同一菌株可携带1-5种ESBLs基因型别,1种基因型别中TEM为多见(13.0%),2种基因型别中以SHV+CTX-M-14为多见(10.9%),3种基因型别中以SHV+TEM+CTX-M-1为多见(10.9%),4种基因型别中以SHV+TEM+CTX-M-1+CTX-M-14为多见(8.7%),5种基因型别为SHV+TEM+CTX-M-14+CTX-M-25+CTX-M-1(2.2%).结论:郑州地区ESBk基因型别以TEM型为主,同一菌株可携带多种型别ESBLs.     

鲍曼不动杆菌耐药性与β-内酰胺酶基因研究

目的：了解临床分离鲍曼不动杆菌的耐药性和β-内酰胺酶基因分布情况。方法：采用VITEK-60全自动细菌分析仪对215株鲍曼不动杆菌临床分离株进行药敏检测,并通过特异性的PCR和DNA序列测定方法检测试验菌的β-内酰胺酶相关基因。结果：鲍曼不动杆菌对酶抑制剂复合制剂头孢哌酮/舒巴坦的敏感率最高,为54.1%,对亚胺培南、美洛培南的敏感率分别为46.4%、39.3%,对其他药物的敏感率均很低,对三代头孢的敏感率均低于20%;215株鲍曼不动杆菌中,27株扩增到超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）基因,占12.6%,包括TEM 16株,占7.4%,SHV 4株,占1.9%,CTX-M-1 4株,占1.9%,OXAⅡ3株,占1.4%,经测序分型分别为TEM-1型、SHV-1型、OXA-21型、CTX-M-15型和CTX-M-22型,未检测到VEB、GES、CTX-M-2、CTX-M-8、CTX-M-9、TLA、IBC、OXA-10、OXAⅠ、OXAⅢ、OXAⅣ、OXAⅤ等基因。129株扩增到头孢菌素酶（AmpC）基因,占60.0%,其中ADC阳性82株,占38.1%,DHA、EBC、ACC、CIT基因阳性株分别为35株（占16.3%）、8株（占3.7%）、3株（占1.4%）和1株（占0.5%）,未检测到MOX、FOX、CARB基因;215株菌株中检出OXA-23阳性98株,占45.6%。结论：临床分离鲍曼不动杆菌耐药严重,其携带TEM、ADC、DHA、OXA-23等多种β-内酰胺酶相关基因。     

ICU产ESBLs大肠埃希菌耐药性及基因型分析

目的了解医院重症监护病房(ICU)产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌的耐药性及β-内酰胺酶基因型分布特点。方法采用BD Phoenix 100全自动微生物分析仪进行细菌鉴定和药物敏感试验,聚合酶链反应检测β-内酰胺类耐药相关基因,包括TEM、CTX-M-1群、DHA、SHV、oprD2、GES、OXA和VIM。结果 51株产ESBLs大肠埃希菌呈现多重耐药,对亚胺培南、哌拉西林-他唑巴坦和阿米卡星的耐药率分别为2.0%、8.0%和11.8%,其余14种抗生素的耐药率为54.9%~100.0%。51株产ESBLs大肠埃希菌共检出TEM、CTX-M-1群、SHV和oprD2等4种β-内酰胺酶基因,其阳性率分别为76.50%、37.3%、5.9%和31.4%。结论 ICU分离的产ESBLs大肠埃希菌多重耐药严重,携带的β-内酰胺酶基因以TEM为主。     

阴沟肠杆菌耐药性与AMEs及BLa基因研究

目的了解分离的阴沟肠杆菌耐药性及氨基糖苷类修饰酶、β-内酰胺酶相关基因存在状况，给防治提供参考。方法采用MicroScan微生物鉴定系统Neg Combo Panel Type 21阴性复合板微量肉汤法测定临床分离的20株阴沟肠杆菌对抗菌药物的敏感性，采用聚合酶链反应方法分析氨基糖苷类修饰酶及β-内酰胺酶编码基因。结果20株菌均呈严重多重耐药，仅对亚胺培南高度敏感（耐药率5.0％），哌拉西林／他唑巴坦耐药率50．0％，对包括3、4代头孢在内的其他β-内酰胺类及氨基糖苷类抗生素耐药率90．0％～100．0％，对复方新诺明耐药率100％；20株菌均检出氨基糖苷类修饰酶基因，未检出aac（3）-Ⅲ和aac（3）-Ⅳ基因；19株（95．0％）菌检出β-内酰胺酶相关基因，TEM和DHA基因阳性率均为70％，9株菌（45．0％）同时检出TEM和DHA基因，未检出SHV、OXA、PER、VEB和GES基因。结论广州地区医院感染阴沟肠杆菌多重耐药严重，氨基糖苷类修饰酶基因、DHA型质粒AmpC酶基因和TEM型β-内酰胺酶基因携带率高，在介导细菌耐药方面起重要作用。     

鲍曼不动杆菌耐药基因的初步研究

目的 了解鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii, Ab)中β-内酰胺酶和氯己定－磺胺耐药基因存在状况。方法 对20株Ab菌采用K-B纸片扩散法进行了抗菌药物敏感性的测定,采用聚合酶链反应(PCR)检测TEM、ADC、DHA、SHV、PER等5种β-内酰胺酶基因和氯己定－磺胺（qacE△1-sul1）耐药基因。结果 20株Ab菌中TEM基因阳性12株(60%)、ADC基因阳性11株(55％)、DHA基因阳性10株(50％)、SHV基因阳性1株(5%),PER基因阴性,qacE△1-sul1基因阳性14株(70%)。结论 该20株菌β-内酰胺类抗菌药物耐药与产β-内酰胺酶密切相关,氯己定－磺胺基因携带率亦较高。     

深圳市大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶的基因分型

目的分析深圳市大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的主要基因型。方法对50株产ESBLs大肠埃希菌分别用TEM、SHV、CTX-M和OXA-1群基因引物进行PCR扩增,并对PCR产物进行序列分析。结果 92%菌株检出CTX-M型ESBLs,测序结果显示,以CTX-M-14型ESBLs为主,其次为CTX-M-55型。结论 CTX-M-14型和CTX-M-55型是深圳地区大肠埃希菌ESBLs的主要基因型。     

铜绿假单胞菌EsBLs基因分布及同源性分析

目的 研究温州医学院附属第一医院临床分离铜绿假单胞菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)产生情况、基因分布及流行特性,为临床合理使用抗菌药物、控制耐药性的传播提供理论依据。方法 选取2005～2009年每年6～9月临床连续分离非重复铜绿假单胞菌共169株。PCR方法检测超广谱β-内酰胺酶基因(TEM、SHV、VEB、PER、GES、TLA、IBC、CTX-M-1、CTX-M-2、CTX-M-8、CTX-M-9、OXA Ⅰ、OXAⅡ、OXAⅢ、OXAⅣ和OXAV)。采用脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)分析产超广谱β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌株间的同源性。结果 169株铜绿假单胞菌,经PCR方法检测,检出产超广谱β-内酰胺酶菌株84株,阳性率为49.7％;169株PA中检出TEM、CTX-M-9、CTX-M-1、CTX-M-2、OXA Ⅰ、OXAⅣ、GES、OXAⅡ基因型各占32.0％,5.3％,4.7％,2.4％,1.8％,1.8％,1.2％,0.6％。在54株TEM阳性PA中,挑取同一病区不同患者不同标本分离的铜绿假单胞菌共21株,利用PFGE分析其同源性,多呈现散发流行,仅三株具有同源性。结论 铜绿假单胞菌超广谱β-内酰胺酶基因型以TEM为主,GES、CTX-M-1、CTX-M-2、CTX-M-9、OXA Ⅰ、OXAⅡ、OXAⅣ等基因都有检出,未检出PER基因。脉冲场凝胶电泳结果显示,本院临床分离的铜绿假单胞菌大多无同源性,呈散发流行趋势,个别病区存在轻微的克隆播散现象。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌耐药性及基因型分析

目的:了解某医院分离产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌的耐药性和基因型,为临床合理用药提供依据。方法:收集大肠埃希菌544株,其中161株为产ESBLs菌株。采用VITEK 2 Compact分析仪进行药敏检测,双纸片协同试验确证产ESBLs菌株,PCR法扩增耐药基因。结果:产ESBLs菌株对多数抗菌药物的耐药率高于不产ESBLs菌株（P<0.05~P<0.01）。161株产EBSLs菌株携带CTX-M-9型基因98株、TEM型84株、CTX-M-1型62株、OXA-2型15株、OXA-10型7株、SHV型5株。CTX-M-1型和TEM+CTX-M-1型菌株对头孢他啶的耐药率分别为43.5%、59.1%明显高于CTX-M-9型和TEM+CTX-M-9型菌株15%、11.8%的耐药率（P<0.05和P<0.01）。结论:该院产ESBLs大肠埃希菌的基因型主要为CTX-M与TEM型,产ESBLs菌株对多数抗菌药物的耐药性高于不产ESBLs菌株。     

铜绿假单胞菌β-内酰胺类抗菌药物耐药相关基因研究

目的:了解十堰地区铜绿假单胞菌β-内酰胺类药物的耐药表型和基因分布情况,并探讨基因型与表型的相关性。方法:用VITEK 2 Compact高级专家系统判定2011年1～9月分离的896株铜绿假单胞菌对β-内酰胺类药物的耐药表型,用PCR检测25株铜绿假单胞菌的13种β-内酰胺酶基因。结果:896株铜绿假单胞菌对β-内酰胺酶类药物的耐药表型有9种,连续分离的25株铜绿假单胞菌中耐药表型有4种,主要表型均为高水平耐药+碳青霉烯酶(不渗透性),分别占47%和48%。检出阳性的8种耐药基因包括bla OXA-10、bla DHA、bla SHV、blaCARB、bla GIM、bla GES、bla TEM,阳性率分别为4%、4%、20%、12%、8%、8%、16%,另bla oprD2基因缺失率为60%,未检出bla IMP、bla VIM、bla PER、bla VEB和bla SPM。结论:本院铜绿假单胞菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药与携带bla OXA-10、bla DHA、bla SHV、bla CARB、bla GIM、bla GES、bla TEM基因以及膜孔蛋白基因oprD2基因缺失有关,这也是本地区β-内酰胺类药物耐药的主要原因。     

多重耐药鲍曼不动杆菌抗菌药物、消毒剂耐药基因研究

目的了解多重耐药的鲍曼不动杆菌（ABA）11簇β-内酰胺酶、3簇金属β-内酰胺酶、4簇OXA类碳青烯酶、2簇AmpC酶、6簇氨基糖苷类修饰酶基因和消毒剂耐药基因携带状况。方法采用PCR检测203株多重耐药的ABA菌耐药基因。结果203株中ADC阳性186株（91．6％）、TEM阳性124株（61．1％）、OXA-23cluster阳性66株（32．5％）、SHV阳性18株（8．9％）、PER阳性6株（3．0％）、DHA阳性1株t（0．5％）；ant（3”）-I阳性189株（93．1％）、aac（6’）一Ib阳性118株（58_3％）、aac（3）-I阳性114株（56．2％）、aac（6’）-II阳性13株（6．4％）、ant（2”）-I阳性13株（6．4％）、aac（3）-II阳性10株（4．9％）；qacE△1阳性164株（80．8％）。结论多重耐药的ABA菌β-内酰胺酶、OXA类碳青烯酶、AmpC酶、氨基糖苷类修饰酶基因携带率高。     

长春地区部分医院革兰阴性杆菌超广谱β-内酰胺酶的基因类型及分布

目的:了解长春地区部分医院超广谱β-内酰胺酶 (ESBLs)基因在革兰阴性杆菌中的分布及类型,为合理使用抗生素提供依据。方法：对165株临床分离革兰阴性杆菌采用 PCR方法分别扩增SHV、TEM和CTX基因片段。PCR产物经测序后,登录GenBank查询并比较基因类型。结果：在165株革兰阴性杆菌中检出耐药基因及多重耐药基因68株, 其中 TEM型检出率最高（12.12%）,其余依次为CTX-M-1型（4.24%）,SHV型（3.64%）和CTX-M-9型（3.03%）;同时检出 SHV+TEM型、TEM+CTX-M-1型、TEM+CTX-M-9型、TEM+CTX-M-1+CTX-M-9型和 SHV+TEM+CTX -M-1+CTX-M-9型等多组多重耐药基因。随机选择扩增阳性的 PCR产物进行测序,得到 SHV-11亚型、TEM-1亚型、CTX-M-3亚型、CTX-M-15亚型、CTX-M-14和CTX-M-18亚型。结论:长春地区部分医院革兰阴性杆菌ESBLs的基因类型主要为TEM-1亚型、SHV-11亚型、CTX-M-14亚型和CTX-M-18亚型。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的基因型分型及耐药分析

[目的]了解大连市中心医院临床分离的产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌耐药基因型及耐药情况。[方法]收集该院2005年11月-2006年2月连续不重复产ESBLs大肠埃希菌40株,采用美国国家临床实验室标准化委员会推荐的表型确认方法进行筛选。在此基础上,分别用针对TEM、SHV、CTX-M-Ⅰ、CTX-M-Ⅱ、CTX-M-Ⅲ、CTX-M-Ⅳ型β-内酰胺酶基因的六对特异性引物对每株细菌进行聚合酶链反应（PCR）,毛细管电泳方法检测所有产ESBLs大肠埃希菌的TEM、SHV、CTX-M基因。应用K-B纸片扩散法检测产ESBLs大肠埃希菌对临床常用抗生素的耐药性。[结果]毛细管电泳结果显示,40株产ESBLs大肠埃希菌中,仅携带一种基因型的分别为SHV型1株（2.50%）,CTX-M-Ⅰ型7株（17.50%）,CTX-M-Ⅱ型7株（17.50%）,CTX-M-Ⅲ型2株（5.00%）,CTX-M-Ⅳ型4株（10.00%）。有18株（46.15%）同时携带两种或两种以上基因型,且多为CTX-M型与TEM型或SHV型共同存在;药物敏感试验结果显示,产ESBLs大肠埃希菌对β-内酰胺类抗生素均表现出较高的耐药性,对碳青霉烯类药物（亚胺培南和美洛培南）的耐药率最低。[结论]该院产ESBLs大肠埃希菌近期流行的主要基因型别为CTX-M型,而且多基因携带情况常见;碳青霉烯类抗生素是目前治疗产ESBLs大肠埃希菌最有效的药物。     

鲍曼不动杆菌β-内酰胺酶耐药基因研究

目的了解鲍曼不动杆菌(A.baumannii,AB)β-内酰胺酶耐药基因表达和传播情况。方法应用PCR技术对我院血液标本分离的17株AB菌进行β-内酰胺酶基因测定,应用K-B法进行抗菌药物敏感性试验。结果17株AB菌有10株为泛耐药株。对头孢菌素类抗生素高度耐药,对哌拉西林/他唑巴坦、亚胺培南及美洛培南等也有较高耐药率,以头孢哌酮/舒巴坦敏感性最高。17株中TEM阳性13株,OXA-23群阳性10株,ADC阳性12株,其余基因均阴性。13株检出β-内酰胺酶基因,10株TEM OXA-23群 ADC 3种β-内酰胺酶基因阳性。结论我院AB菌不仅具有多重耐药性,而且TEM、OX-A-23群及ADC等β-内酰胺酶基因携带率高。OXA-23群基因的获得和传播与β-内酰胺类药物的滥用有关。     

产CTX-M-55-like型β-内酰胺酶同时伴膜孔蛋白ompC基因新突变等多株大肠埃希菌新菌株的发现

目的:调查大肠埃希菌(Escherichia coli,ECO)尿液分离株中β-内酰胺酶和膜孔蛋白ompC基因的存在和变异情况。方法:收集南京医科大学第一附属医院2006年1月～2008年10月患者尿液标本中分离到的ECO菌共60株,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析21种β-内酰胺酶基因和膜孔蛋白ompC基因。结果:在60株ECO菌中,TEM基因阳性51株(85.0%),经测序比对均为TEM-1-like;OXA-1群基因阳性6株(10.0%),经测序比对均为OXA-30-like;CTX-M-1群基因阳性38株(63.3%),经测序比对均为CTX-M-55-like。膜孔蛋白ompC基因经测序比对60株中有6株(10.0%)无突变,其余54株均有突变(突变率90.0%),其中6株经BLASTn比对确认为新的突变类型。结论:产CTX-M-55-like型β-内酰胺酶和膜孔蛋白ompC基因是本组ECO菌对β-酰胺类抗菌药物产生耐药的重要原因。6株ompC基因新的突变类型中,3株为同时携带TEM-1-like、CTX-M-55-like基因的新菌株;2株为携带了TEM-1-like基因的新菌株;1株...     

大肠埃希菌对阿莫西林／克拉维酸耐药机制的研究

目的探讨大肠埃希菌对阿莫西林／克拉维酸的耐药特点和机制,从而为临床合理用药及减少耐药的发生和耐药基因传播提供实验研究依据。方法将对氨苄西林／舒巴坦耐药的大肠埃希菌544株,随机选取276株进行阿莫西林／克拉维酸纸片的筛查,对筛出的耐药菌株采用琼脂对倍稀释法进行MIC值测定和PCR扩增分析。对符合耐酶抑制剂β-内酰胺酶耐药表型的大肠埃希菌进行TEM型β-内酰胺酶基因的克隆表达。采用多重PCR技术对耐阿莫西林／克拉维酸大肠埃希菌进行TEM、SHV、OXA型三种β-内酰胺酶的筛查。结果TEM型46株,SHV型1株,0xA型6株,TEM型和SHV型均阳性1株,TEM型和OXA型均阳性5株。产TEM型β-内酰胺酶中TEM-1型最常见,耐酶抑制剂TEM型β-内酰胺酶（IRT）未发现。结论TEM-1型广谱酶的高产是华西医院大肠埃希菌对阿莫西林／克拉维酸耐药主要机制,本研究首次在西南地区发现OXA-1,是造成耐药的重要原因。     

院内感染耐药黄杆菌携带β-内酰胺酶基因的研究

目的探讨临床分离黄杆菌耐药株携带β-内酰胺酶(bla)基因类型及基因介导方式.方法研究对象为临床分离所得的6株黄杆菌临床耐药株.产β-内酰胺酶情况采用纸片法定性检测;细菌质粒和染色体以市售试剂盒抽提;酶编码基因类型用PCR检测分析.结果6株黄杆菌均产bla,在其染色体、质粒上共发现7种不同类型的bla基因,其中菌株02-23存在染色体和质粒共同介导的PSE-1基因,02-237存在质粒介导的SHV、PSE-1基因,02-244存在质粒介导的TEM、AmpC.PSE-1基因,02-258除存在由质粒介导的SHV、OXA-1、CTX-M-1基因外,尚由染色体介导SHV、TEM基因,02-332存在染色体介导的TEM基因,02-372存在质粒介导的OXA-1、Sme-1基因.结论西南医院临床分离的耐药黄杆菌携带bla酶基因种类较多,可由质粒、染色体分别介导或两者共同介导,耐药株的产生可能与大量、长疗程使用抗生素有关.     

革兰阴性杆菌TEM型β-内酰胺酶耐药基因研究

目的 了解中南大学3所附属医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)革兰阴性杆菌TEM型耐药基因的检出及流行情况.方法 收集254株多重耐药革兰阴性杆菌,采用双纸片协同法(DDS)进行ESBLs表型确证,多重PCR.法扩增blaTEM、blaSHV、blaOXA-1基因,TEM特异性引物对其整个开放阅读框进行扩增并对PCIL产物测序,通过BLAST分析确定基因型;并对携带有TEM基因的革兰阴性菌株用随机扩增多态DNA(RAPD)方法进行菌株的同源性分析.结果 经多重PCR扩增,105株肠杆菌获得阳性结果,其中85株菌携带TEM基因,26株菌携带SHV基因,10株菌携带OXA-1基因;6株非发酵菌获得阳性结果,均携带TEM基因,且全部为TEM-1型广谱β-内酰胺酶.携带blaTEM耐药基因的菌株所含RAPD类型:大肠埃希菌12种,肺炎克雷伯菌6种,阴沟肠杆菌7种.结论 TEM-1型β-内酰胺酶是湖南地区主要流行的TEM型酶;大肠埃希菌产TEM酶情况尤为突出;在同一医院以及同一病区存在TEM-1型β-内酰胺酶的克隆传播.