小鼠子宫内膜干细胞的研究

目的 通过标记滞留细胞技术检测昆明小鼠子宫内膜干细胞的存在及其分布规律。方法 取出生3d雌性乳鼠皮下注射BrdU 50ug/g体重,连续3d。分别在1 、2 、3 、4 、6 和8周取子宫。采用免疫组化SP法检测子宫内膜BrdU的表达情况,并在高倍镜下计算阳性细胞百分率。 结果 BrdU阳性细胞在第1周时在内膜上皮及基质部都广泛表达，但阳性细胞的数量随时间逐渐下降，至第8周时则主要位于基质部血管周围以及基质与肌层交界处。结论 小鼠子宫内膜基质中存在成体干细胞。 【关键词】 子宫内膜；标记滞留细胞 ；BrdU ；干细胞； 免疫组化     

巨噬细胞移动抑制因子在围植入期小鼠子宫内膜中的表达

目的探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在围植入期小鼠子宫内膜中的表达分布状况及其意义。方法应用免疫组化SP法检测妊娠1～8d小鼠子宫内膜MIF的表达情况,并以动情期非妊娠小鼠子宫做对照。结果在小鼠子宫内膜的所有组织均可检测到MIF的表达,主要表达于腺上皮、腔上皮及基质中的细胞团。MIF在妊娠1～3d表达较强,妊娠4～5d表达较弱,主要表达于子宫内膜的腔上皮和腺上皮;妊娠6～8d,MIF表达再次增强,但主要表达于基蜕膜和次级蜕膜区。结论妊娠1～8d小鼠子宫持续表达MIF,提示MIF可能参与小鼠胚泡植入及胚泡植入后的发育过程。     

血管内皮生长因子在围植入期小鼠子宫内膜中的表达

目的 观察血管内皮生长因子(VEGF)在围植入期小鼠子宫内膜的表达分布状况和规律.方法 应用免疫组化SP法检测妊娠3～6 d昆明小鼠围植入期子宫内膜VEGF的表达情况,并以动情期未孕小鼠子宫做对照.结果 在小鼠子宫内膜中可检测到VEGF的表达,其表达具有时间特异性和细胞特异性.孕3 d,VEGF在子宫内膜的腔上皮和基质细胞中呈弱表达;孕4～5 d,VEGF在基质细胞和腔上皮上表达最强;孕6 d,VEGF表达较强,但主要表达于蜕膜细胞.结论 围植入期小鼠子宫内膜持续表达VEGF,且在植入前后表达最强,提示VEGF可能在小鼠胚胎的植入过程中发挥重要作用.     

β半乳糖凝集素-3在胚泡植入早期小鼠子宫内膜中的表达

目的 探讨β半乳糖凝集素-3 (Galectin-3)在植入早期小鼠子宫内膜中的表达分布状况及其意义.方法 应用免疫组化SP法检测妊娠1～5 d小鼠子宫内膜Galectin-3的表达情况,并以动情期非妊娠小鼠子宫做对照.结果 小鼠子宫内膜的所有组织中均有Galectin-3表达,主要表达于腺上皮、腔上皮和基质细胞中.随着小鼠妊娠天数的增加,Galectin-3的表达也逐渐增高,在植入窗口期(妊娠4～5 d)达高峰.结论 Galectin-3在妊娠1～5 d小鼠子宫内膜持续表达,提示在小鼠胚泡植入早期,Galectin-3参与了胚泡的植入过程,在胚泡和子宫内膜的识别过程中发挥重要作用.     

胰岛素样生长因子结合蛋白-4在围植入期小鼠子宫内膜的表达及意义

目的 检测胰岛素样生长因子结合蛋白-4(IGFBP-4)在围植入期小鼠子宫内膜的表达分布及其生物学作用.方法取未孕动情期、真孕及假孕3～6 d小鼠子宫做切片,采用免疫组化SP法检测IGFBP-4在小鼠子宫内膜的表达情况.结果 IGFBP-4在小鼠子宫内膜主要分布于腺上皮细胞、腔上皮细胞、基质细胞及蜕膜细胞.IGFBP-4在真孕组小鼠子宫内膜于孕3 d出现阳性表达;孕4～5 d中等强度表达;孕6 d表达最强,主要分布于整个蜕膜区细胞.未孕动情期小鼠子宫内膜IGFBP-4呈弱表达.假孕组小鼠子宫内膜IGFBP-4只在孕5～6 d有微弱表达.真孕组小鼠子宫内膜IGFBP-4表达明显强于同期假孕组.结论 IGFBP-4在围植入期小鼠子宫内膜持续表达,提示IGFBP-4可能在小鼠胚泡植入过程发挥重要生物学作用.     

维生素D受体在小鼠子宫内膜中的表达及功能研究

目的 研究维生素D受体(VDR)在小鼠子宫内膜中的表达及其对胚胎着床的影响。方法 免疫组化及Western Blot法检测孕1～6 d小鼠子宫内膜VDR表达;孕2 d小鼠一侧子宫角注入25μl 1 mM Calcifediol(VDR抑制剂)处理,另一侧子宫角注入等体积溶剂对照,孕4 d收获小鼠子宫组织,检测子宫内膜接受态标志分子白血病抑制因子(LIF)和整合素ανβ3的表达,或孕6 d观察胚胎着床情况。结果 VDR在孕1～5 d小鼠子宫内膜中的表达呈现动态变化,孕1～2 d主要在上皮表达,基质表达较弱,孕3～4 d开始基质表达逐渐增强,孕5 d达到高峰,孕6 d着床区VDR表达显著高于非着床区(P<0.01);与对照侧比较,VDR抑制剂Calcifediol处理组孕4 d小鼠子宫内膜LIF和整合素ανβ3蛋白的表达均显著下降(P<0.05),孕6 d胚胎着床数亦明显下降(P﹤0.05)。结论 VDR在孕1～6 d小鼠子宫内膜中呈动态表达,着床区VDR表达显著高于非着床区,而抑制子宫内膜VDR可降低子宫接受态使胚胎着床受损。     

植入前小鼠子宫内膜整合素α4的表达及超微结构特点

目的观察植入前小鼠子宫内膜整合素α4的表达分布状况及超微结构。方法用免疫化SP法检测妊娠1~4d小鼠子宫内膜整合素α4的表达;用透射电镜观察植入前小鼠子宫内膜的超微结构。结果整合素α4主要表达于子宫内膜腔上皮及腺上皮,表达强弱不等,于妊娠第4天表达最强。透射电镜观察妊娠第4天子宫内膜腔上皮和腺上皮内线粒体、粗面内质网、分泌颗粒等丰富,内膜间质水肿,基质细胞肥大变圆,胞质内富含糖原、脂滴。结论妊娠1~4d小鼠子宫内膜持续表达整合素α4;妊娠第4天子宫内膜腔上皮、腺上皮和基质细胞处于植入前分泌功能旺盛阶段。提示整合素α4可能参与小鼠胚泡植入过程,其表达强弱与植入前子宫内膜的发育同步化。     

小鼠孕早期Cyclin-E表达规律及意义

目的:探讨细胞周期素E(Cyclin-E)在早孕小鼠子宫内膜的的表达及其对小鼠胚胎着床数的影响.方法:应用RT-PCR及免疫组织化学的方法检测早孕小鼠子宫内膜细胞Cyclin-E基因和蛋白的表达规律;观察子宫角注射抗Cyclin-E抗体后对小鼠胚胎着床数的影响.结果:妊娠第1～7d小鼠子宫内膜组织均有Cyclin-E表达,自妊娠2d起表达增强,5d表达量达高峰.小鼠妊娠期Cyclin-E在子宫内膜腔上皮、腺上皮及内膜基质中均有表达.单侧子宫抗Cyclin-E抗体注射后双侧胚胎着床数差值较对照组(注射等体积生理盐水)明显增大.结论:在小鼠胚胎着床过程中,Cyclin-E可能参与调节子宫内膜的增殖分化,在子宫内膜蜕膜化及胚胎着床过程发挥作用.     

组氨酸三聚体核苷结合蛋白1(Hint1)在胚胎植入中的作用

目的：检测组氨酸三聚体核苷结合蛋白1（histidine triad nucleotide binding protein 1,Hint1）基因在小鼠早期妊娠过程中子宫内膜中的表达规律;探究Hint1基因在小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化过程的作用。方法：应用免疫组化、原位杂交、Western blot和RT-qPCR检测Hint1在早期妊娠、假孕和人工诱导蜕膜化模型小鼠子宫中的表达;siRNA敲低原代分离的小鼠子宫内膜基质细胞Hint1的表达。LC-MS分析Hint1对基质细胞蜕膜化过程中脂质组学的影响。结果：在妊娠的第1至第8天Hint1表达逐渐升高,且在胚胎植入部位的表达明显高于非植入点;体内人工诱导蜕膜化小鼠子宫内膜Hint1的表达明显高于未发生蜕膜化的对照子宫;利用siRNA干扰小鼠子宫内膜基质细胞中Hint1的表达可显著影响其蜕膜化过程及脂质代谢。结论：Hint1在基质细胞蜕膜化过程中表达升高,并可能与蜕膜化过程中基质细胞的脂质代谢相关。     

生长激素释放激素拮抗剂对人异位子宫内膜抑制增殖作用与cAMP信号通路相关

目的 研究生长激素释放激素拮抗剂对异位子宫内膜细胞增殖的作用及与cAMP信号通路的关系.方法 异位子宫内膜组织采自子宫内膜异位症的妇女,分离异位子宫内膜基质细胞(ESC).并加入GHRH拮抗剂JV-1-36培养.GHRH,GHRH受体(GHRH-R)和GHRH-R剪接变异体(SV)1 mRNA由反转录聚合酶链反应(RT-PC R)检测,细胞增殖通过细胞对BrdU的摄入来检测,放免法检测细胞内cAMP水平.结果 GHRH-R mRNA表达于ESC,而不表达于正常子宫内膜组织;SV1 mRNA表达于正常子宫内膜及ESC.GHRH拮抗剂JV-1-36能降低异位子宫内膜基质细胞cAMP,减少细胞BrdU摄入.结论 GHRH拮抗剂JV-1-36能抑制异位子宫内膜基质细胞增殖,其机制可能与cAMP信号通路有关.     

溴脱氧尿苷标记滞留细胞在SD大鼠足垫皮肤及汗腺的分布

目的：将溴脱氧尿苷（BrdU）作为标记滞留细胞（LRCs）标记物,通过对皮肤组织中LRCs的检测,证实干细胞的存在及其分布。方法：SD大鼠予50 mg·kg^-1·次^-1BrdU腹腔注射,每天4次,每次间隔2h,连续2d。最后一次注射后第6周,处死之,取双后足垫。免疫组化染色对表达BrdU细胞进行检测。结果：BrdU阳性细胞散在分布于真皮层的外泌汗腺蟠状分泌部、弯曲和直导管部。BrdU阳性细胞表达率在外泌汗腺（4.2±1.3）%）明显高于在表皮基底层（0.5±0.1）‰）（P〈0.05）。结论：大鼠后足垫外泌汗腺中存在的这些干细胞或许在皮肤及其附件损伤修复中发挥重要作用。     

激活素A在围植入期小鼠子宫内膜的表达

目的 探讨激活素A(activin-A)在围植入期小鼠子宫内膜中表达的分布及生物学意义.方法 应用免疫组化SP法和图像分析方法检测分析孕2～6 d小鼠子宫内膜activin-A的表达情况,并以未孕动情期及假孕2～6 d小鼠子宫内膜作对照.结果 activin-A主要表达于小鼠子宫内膜的腔上皮、腺上皮和基质细胞.acti...     

DNA永生化链和肿瘤干细胞关系的初步研究

目的:探讨DNA永生化链的分配方式与肿瘤干细胞之间的关系.方法:采用启动和促进两阶段化学诱癌方法在小鼠背部诱导皮肤肿瘤;用溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺入法检测DNA永生化链在发育期、成年期小鼠皮肤成体干细胞及皮肤肿瘤干细胞中的滞留时间;图像分析DNA含量方法检测肿瘤细胞倍体变化.结果:诱癌4mo后,40只小鼠中有17只背部分别长出1～3个皮肤肿瘤.BrdU阳性细胞变化情况检测显示,24h后发育期、成年期标记的小鼠皮肤上皮细胞和肿瘤组织的细胞均为阳性,阳性部位为细胞核;60d后发育期标记的小鼠皮肤上皮中仍有少数细胞为阳性,它们主要存在于毛囊的隆突部位(bulge),少数位于皮肤基底层.标记后30d检测成年期标记的小鼠皮肤上皮细胞,结果均为阴性.标记后30d检测肿瘤组织发现仍有少数细胞BrdU阳性,这些肿瘤细胞主要分布在肿瘤实质组织和间质组织的交界部位;标记后60d检测,肿瘤组织中不再有BrdU阳性细胞.图像分析DNA含量方法发现上述17例小鼠肿瘤都是非整倍体核型.结论:小鼠皮肤成体干细胞存在DNA永生化链,其在有丝分裂过程中发生非随机分配,肿瘤干细胞中可能存在DNA永生化链,其分配方式趋向随机分配.     

着床前小鼠子宫内膜及胚泡中IL-8RB蛋白的定位表达及意义

目的:研究着床前小鼠子宫内膜及胚泡中白细胞介素-8B型受体(Interleukin-8 receptor B,IL-8RB)的表达情况.方法:应用免疫组织化学技术,观察IL-8RB蛋白在妊娠4d小鼠子宫内膜及胚泡的表达部位;HE染色后光镜下观察子宫内膜的形态结构特点. 结果:IL-8RB表达于妊娠4d小鼠子宫内膜的腔上皮细胞、腺上皮细胞和基质中;胚泡的内细胞团和滋养层细胞亦有阳性表达.HE染色可见妊娠4d基质中有大量中性粒细胞浸润,而腔上皮中未见中性粒细胞.结论:IL-8RB可能通过与其配体IL-8结合而参与胚泡滋养层细胞与子宫内膜上皮细胞之间的相互作用.     

分化抑制因子3在胚胎植入中的作用

目的：检测分化抑制因子３（inhibitors of differentiation 3,Id3）基因在小鼠早期妊娠模型和人工诱导蜕膜化模型中子宫内膜中的表达规律;探究Id3基因在小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化过程的作用。方法：应用Western blot及qRT-PCR检测Id3在早期妊娠和人工诱导蜕膜化模型小鼠子宫中的表达;利用分离的原代小鼠子宫内膜基质细胞体外诱导蜕膜化、过表达Id3基因,分析Id3对基质细胞蜕膜化的影响。结果：Id3在小鼠早期妊娠模型中高表达于子宫内膜容受期形成阶段（孕第4天）（P蛋白质=0.001,PmRNA=0.001）,胚胎着床后基质细胞发生分化的蜕膜化子宫中表达较低（PD5蛋白质=0.026,PD5mRNA=0.038）;体内人工诱导蜕膜化小鼠子宫内膜Id3的表达明显低于未发生蜕膜化的对照子宫（P蛋白质=0.005,PmRNA=0.000）;体外人工诱导蜕膜化可抑制Id3基因的表达（P蛋白质=0.000,PmRNA=0.001）;过表达Id3可以明显降低体外子宫内膜基质细胞蜕膜化过程;Stat3信号参与调控Id3的表达调控子宫内膜基质细胞蜕膜化过程。结论：Id3参与小鼠胚胎植入并调控子宫内膜基质细胞蜕膜化过程。     

脑梗死后神经干细胞的原位增殖及其可塑性

目的研究成年大鼠脑梗死后自体神经干细胞的原位增殖,并探讨其可塑性.方法雄性Wistar大鼠共68只,分对照组(n=8),脑梗死后1、3、7、14、28 d组,每组12只.免疫组织化学方法动态检测大鼠脑内5-溴脱氧尿苷嘧啶(BrdU)、Brdu/多唾液酸神经细胞黏附分子(PSA-NCAM)的表达.结果与对照组相比,室下区和海马BrdU阳性细胞在脑梗死后1 d开始增加(P＜0.05),7 d达到高峰,14 d后开始下降,但仍高于对照组(P＜0.05),28 d后接近正常水平;室下区和海马BrdU/PSA-NCAM阳性细胞在脑梗死后7 d开始增加(P＜0.05),14 d达到高峰,28 d后开始下降,但仍高于对照组(P＜0.05),大约占同期BrdU阳性细胞数60%.结论脑梗死可激活自体神经干细胞原位增殖,并且大多数增殖的神经干细胞具有可塑性.     

Dicer基因在早孕小鼠子宫内膜中的表达

目的：检测Dicer基因在早孕小鼠子宫内膜组织中的表达规律,为阐明其在胚胎着床中的作用打下基础。方法：利用实时荧光定量PCR、免疫组化和Western blot分别检测未孕、假孕及孕d1~d7小鼠子宫内膜中Dicer基因mRNA和蛋白质的表达。结果：在小鼠着床窗期及着床后（d4～d7）,小鼠子宫内膜中Dicer基因mRNA和蛋白质表达均明显升高,d5达到高峰（PmRNA=0.000,P蛋白= 0.000）;且Dicer表达主要定位于子宫内膜基质细胞。结论：Dicer基因在早孕小鼠子宫内膜组织中的表达存在时间与空间差异,这种规律性表达所调控的细胞生长、增殖和分化可能是胚胎正常着床的分子机制之一。     

调经助孕胶囊对促排卵周期小鼠子宫内膜αvβ3、MMP9及TIMP1表达的影响

目的:探讨调经助孕胶囊对促排卵周期小鼠子宫内膜整合素αvβ3、基质金属蛋白酶(MMP-9)及其抑制物(TIMP-1)表达的影响。方法:60只8～9 w龄昆明种小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、实验组各20只。给予相应药物灌胃10 d后,造模,雌雄合笼。于妊娠第5天获取子宫内膜,检测小鼠子宫内膜整合素αvβ3蛋白表达及MMP9/TIMP1 mRNA表达。结果:模型对照组小鼠着床期子宫内膜MMP9及TIMP1的表达低于空白对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。实验组小鼠着床期子宫内膜MMP9、TIMP1及其比值均高于模型对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。模型对照组小鼠着床期子宫内膜整合素αvβ3表达明显低于空白对照组,差异具有统计学意义(P0.05);实验组小鼠着床期子宫内膜αvβ3表达明显高于模型对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:促排卵可导致着床期子宫内膜MMP9及TIMP1mRNA表达下降,影响MMP9/TIMP1比值,整合素αvβ3蛋白表达下降,可能是促排卵影响子宫内膜容受性的机制之一。调经助孕胶囊可增加促排卵周期着床期小鼠子宫内膜整合素αvβ3蛋白表达,MMP9、TIMP1 mRNA表达,调节MMP9/TIMP1平衡。     

白细胞介素-8在着床前后小鼠子宫内膜及胚胎的定位研究

目的:研究着床前后小鼠子宫内膜及胚胎白细胞介素-8(Interleukin-8,IL-8)的定位变化.方法:应用免疫组织化学技术,观察IL-8在妊娠4d和妊娠8d小鼠子宫内膜及胚胎的表达部位.结果:妊娠4d(着床前),IL-8主要表达在子宫内膜的腔上皮、腺上皮和基质;胚泡的内细胞团和滋养层细胞亦有阳性表达.妊娠8d(着床后),子宫内膜的腔上皮IL-8表达呈阴性,腺上皮和蜕膜细胞均呈弱阳性;胚胎IL-8表达呈阴性.结论:IL-8可能参与胚泡着床的过程,但与胚胎分化、发育无密切关系.