雷帕霉素对乳腺癌多药耐药细胞的耐药逆转作用初探

目的探讨雷帕霉素对乳腺癌多药耐药细胞系MCF-7／ADR的耐药逆转作用。方法MTT法测定10μM雷帕霉素、阿霉素（10、50、100、500、1000、5000、20000、40000、100000ng／mL）、雷帕霉素联合阿霉素对MCF-7和MCF-7／ADR细胞的增殖率的影响。结果对于MCF-7细胞的增殖率,10μM雷帕霉素对其无显著影响;500ng／mL及以上浓度的阿霉素显著降低增殖率;联合10μM雷帕霉素后,能降低增殖率的浓度仍是500ng／mL及以上。对于MCF-7／ADR细胞,10μM雷帕霉素对其增殖率无显著影响;40000ng／mL及以上浓度的阿霉素降低其增殖率;联合10μM雷帕霉素后,1000ng／mL及以上浓度的阿霉素能降低其增殖率。结论雷帕霉素对MCF-7／ADR细胞有耐药逆转作用。     

三黄抗氧化方抑制乳腺癌MCF-7细胞氧化应激与增殖的实验研究

目的探查三黄抗氧化方抑制乳腺癌MCF-7细胞氧化应激与增殖的疗效。方法将实验分为空白组：MCF-7细胞培养;实验组按黄芪、制大黄、片姜黄比例分：实验组1：1：1：1,实验组2：3：1：1,实验组3：6：1：l;氧化应激组：以过氧化氢模拟细胞氧化应激状态;乙酰谷氨酸液（NAC）还原组：氧化应激组中加入NAC还原应激反应;免疫荧光法评价其抗MCF-7细胞产生反应性氧化物疗效及ELISA法评价氧化应激后细胞培养液中VEGF含量;同时MTT法评价三黄抗氧化方抑制MCF-7细胞的增殖率。结果实验组2抗氧化氧化应激结果优于其他两组,并显著降低细胞培养液中VEGF水平;同时各实验组MCF-7细胞增殖率得到显著抑制并呈现明显的浓度依耐性,相对空白组,实验组1～3在8mg／ml浓度下分别抑制MCF-7细胞增殖达57％、67％及56％,实验组2的MCF-7细胞增殖抑制率显著高于实验组1与3,有统计学差异（P〈0．01）。结论三黄抗氧化方抑制MCF-7细胞氧化应激同时抑制其增殖率,并降低氧化应激引起的VEGF表达。     

半枝莲中野黄芩苷对乳腺癌MCF-7细胞增殖及侵袭能力的影响

目的研究半枝莲中主要成分野黄芩苷对乳腺癌MCF-7细胞增殖及侵袭能力的影响。方法体外培养乳腺癌MCF-7细胞,采用MTT法观察野黄芩苷对乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用;采用Transwell体外侵袭转移模型检测野黄芩苷对乳腺癌MCF-7细胞侵袭能力的抑制作用。结果野黄芩苷在10～80μg/mL浓度范围有明显抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖的作用;野黄芩苷可明显抑制乳腺癌MCF-7细胞的侵袭能力,且呈一定的量效应关系。结论野黄芩苷具有明显抑制体外培养乳腺癌MCF-7细胞增殖及侵袭的作用。     

抑制TRIM24基因表达对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的抑制作用

目的：探讨抑制TRIM24基因表达对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响,阐明TRIM24基因在乳腺癌发生发展中的作用。方法：以脂质体法转染TRIM24 siRNA和阴性对照NC-siRNA至MCF-7细胞作为si-TRIM24组和NC-siRNA组,以未转染的MCF-7细胞作为对照组。qRT-PCR和Western blotting法检测转染48 h后各组MCF-7细胞中TRIM24 mRNA和蛋白表达水平,MTT法检测各组MCF-7细胞增殖能力,流式细胞术检测各组MCF-7细胞凋亡率,Transwell实验检测各组MCF-7细胞侵袭和迁移数。结果：与对照组和NC-siRNA组比较,si-TRIM24组MCF-7细胞中TRIM24 mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,MCF-7细胞增殖能力降低（P<0.05）,MCF-7细胞凋亡率明显升高（P<0.05）,MCF-7细胞侵袭和迁移数明显减少（P<0.05）。结论：抑制TRIM24基因表达能够明显抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖、侵袭和迁移,且能够诱导细胞凋亡。     

阿司匹林对MCF-7细胞uPA表达的影响

目的观察阿司匹林对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响,探讨阿司匹林新的抗肿瘤作用机制。方法MTT法检测不同浓度的阿司匹林（2．5、5．0和10．0mmol／L）作用于人乳腺癌细胞株MCF-7不同时间（24、48和72h）的细胞增殖抑制率;应用Western blot检测阿司匹林对MCF-7乳腺癌细胞尿激酶型纤维蛋白溶酶原激活剂（urokinase type plasminogen activator,uPA）表达。结果阿司匹林各剂量组细胞增殖抑制率随药物浓度的增加、作用时间的延长而提高（P〈0．01）;MCF-7细胞uPA的蛋白表达量随药物浓度的增加、作用时间的延长而降低。结论阿司匹林有抑制人乳腺癌细胞MCF-7增殖的作用,并且呈时间依赖性和剂量依赖性;阿司匹林可以抑制MCF-7细胞的uPA表达,这可能是阿司匹林抗乳腺癌的分子机制之一。     

高表达蛋白LATS1对乳腺癌MCF-7细胞增殖能力的影响

目的 观察高表达蛋白LATS1(Large tumor suppressor,homolog 1)对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响.方法 构建含有绿色荧光蛋白GFP的LATS1质粒GFP-C1-LATS1;将构建好的GFP-C1-LATS1质粒转染MCF-7细胞,36 h后荧光显微镜下观察质粒转染效率;然后通过四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测转染后1~4 d细胞增殖率;通过细胞克隆形成实验检测在乳腺癌MCF-7中高表达LATS1后对细胞克隆形成的影响;最后通过5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺入法检测高表达LATS1对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响.结果 质粒GFP-C1-LATS1构建成功,GFP-C1-LATS1质粒转染效率为80%左右;Western blot检测结果 表明,与空质粒对照GFP-C1相比,转染GFP-C1-LATS1后蛋白LATS1明显高表达;MTT结果 表明高表达蛋白LATS1明显抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖;细胞克隆形成实验表明高表达蛋白LATS1后明显抑制细胞克隆的形成,对照组和高表达LATS1组的克隆数分别为(136±30)和(53±12)个(P＜0.05);BrdU掺入结果 显示,在MCF-7细胞中,阴性对照组的细胞增殖率为(24±2)%,而高表达蛋白LATS1后细胞增殖率为(13±1)%,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 高表达蛋白LATS1可明显抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖.     

MST1R抑制剂BMS-777607对乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制和凋亡诱导作用

目的：探讨巨噬细胞刺激1受体（MST1R）抑制剂BMS-777607对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响,并阐明其作用机制。方法：采用不同浓度BMS-777607处理乳腺癌MCF-7细胞,将细胞分为对照组（0 μmol·L^-1 BMS-777607组）和0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、15.0及20.0 μmol·L^-1 BMS-777607组。采用MTT法检测各组MCF-7细胞增殖率,克隆形成实验检测各组MCF-7细胞存活率,EDU成像和EDU流式细胞术检测各组MCF-7细胞增殖率,Hoechst33342染色法检测各组MCF-7细胞凋亡形态表现,流式细胞术检测各组MCF-7细胞凋亡率,Western blotting法检测各组MCF-7细胞中ERK、p-ERK、Akt、p-Akt、PARP、Cleaved PARP、Bax、Caspase-3、Cleaved Caspase-3、Caspase-9和Cleaved Caspase-9蛋白表达水平。结果：MTT检测,与对照组比较,5和10 μmol·L^-1BMS-777607组MCF-7细胞增殖率升高（P<0.05或P<0.01）。克隆形成实验,与对照组比较,5和20 μmol·L^-1BMS-777607组MCF-7细胞存活率升高（P<0.05或P<0.01）。EDU掺入法检测,与对照组比较,10和20 μmol·L^-1BMS-777607组MCF-7细胞增殖率升高（P<0.05或P<0.01）。Hoechst33342荧光染色,对照组MCF-7细胞核淡染,10μmol·L^-1BMS-777607组MCF-7细胞核少部分浓染、明亮,20 μmol·L^-1BMS-777607组MCF-7细胞核大部分浓染,细胞核染色质固缩、明亮。双染流式细胞术检测,与对照组比较,10和20 μmol·L^-1BMS-777607组MCF-7细胞凋亡率降低（P<0.05）。Western blotting法检测,与对照组比较,10、15和20 μmol·L^-1BMS-777607组MCF-7细胞中p-ERK和p-Akt蛋白表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）,PARP、CleavedPARP、Bax、CleavedCaspase-3及CleavedCaspase-9蛋白表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）。结论：MST1R抑制剂BMS-777607能够抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制与抑制p-ERK和p-Akt表达和促进CleavedPARP、Bax、CleavedCaspase-9及CleavedCaspase-3表达有关。     

MicroRNA-143对人乳腺癌MCF-7细胞侵袭和迁移的影响

目的探讨microRNA-143（miR-143）对人乳腺癌MCF-7细胞侵袭、迁移和增殖的影响。方法在脂质体介导下将miR-143抑制剂（miR-143 inhibitors）转染入MCF-7细胞,以inhibitor negative control（inhibitor NC）作为阴性对照。通过MTS试剂盒检测细胞增殖能力,以Transwel 侵袭实验和迁移实验分别检测细胞侵袭能力和迁移能力。结果（1）miR-143 inhibitors组与inhibitor NC组间细胞增殖活性无明显差异（P＞0.05）;（2）Transwel 侵袭及迁移实验显示转染miR-143 inhibitors后,MCF-7细胞的侵袭及迁移能力均明显增强（P＜0.05）。结论 miR-143对人乳腺癌MCF-7细胞的侵袭及迁移能力存在负性调控作用,可能成为乳腺癌治疗的潜在靶点。     

槲皮素对乳腺癌MCF-7细胞电离辐射敏感性的影响

目的：探讨槲皮素对乳腺癌MCF-7细胞辐射敏感性的影响。方法：对体外培养的乳腺癌MCF-7细胞,随机分为A、B两组,A组42℃热休克处理2h,诱导热休克蛋白表达,B组热处理前lh加入终浓度为50、100、150μmol／L的槲皮素,然后42℃热休克处理2h。4h后分别用X射线0、2、4、6、8、10、15Gy辐照后继续培养。MTr比色法检测细胞增殖变化,克隆形成实验观察细胞存活率。取经A、B组（150ll,mol／L）处理条件处理后的MCF-7细胞,采用流式细胞术AnnexinV／PI双标法来测定细胞凋亡。结果：终浓度为50、100、150μmol／L的槲皮素可以抑制MCF-7细胞增殖,对2～10Gy照射剂量起到增敏作用。细胞克隆形成实验表明在实验浓度范围内,槲皮素可以降低细胞存活率,对X射线增敏作用有-定的浓度依赖关系,浓度越大,对X射线的增敏作用越强。流式细胞术AnnexinV／PI双标法测定结果显示。槲皮素可以诱导MCF-7细胞凋亡增加。结论：槲皮素能够抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖和克隆的形成,诱导细胞凋亡。     

通络散结丸药物血清对乳腺癌MCF-7细胞生长的抑制作用

目的:通过观察通络散结丸药物血清对乳腺癌MCF-7细胞的芳香化酶和雌激素受体基因的表达、细胞增殖周期及细胞凋亡的影响,探讨通络散结丸治疗乳腺肿块性疾病的可能机制。方法:制备通络散结丸含药动物血清,以体外培养的MCF-7细胞为研究对象,以qRT-PCR法检测乳腺癌细胞芳香化酶CYP19及雌激素受体ER mRNA表达水平;流式细胞术(FCM)测定细胞增殖周期和凋亡水平;MTS实验测定细胞生长曲线。结果:与空白对照组比较,含药血清组作用细胞24 h后能明显抑制乳腺癌细胞株MCF-7的CYP19 mRNA、ER mRNA表达水平,表达水平分别降低0.346和0.128倍;药物血清作用48 h后S期和G2/M期细胞所占比例降低,尤以S期最为显著,相应的G0/G1期细胞增加,药物血清抑制了细胞增殖的正常进行;凋亡实验示细胞早期凋亡率和晚期凋亡率均增加,药物血清组总体凋亡率高于对照组;药物血清作用细胞48 h以后细胞生长曲线幅度开始明显低于对照组,在96 h时抑制效果最明显。结论:通络散结丸药物血清影响乳腺癌MCF-7细胞的雌激素合成及其作用发挥,同时抑制细胞生长。     

不同方式加热联合甲基莲心碱对耐药乳腺癌MCF一7／Adr细胞r／H2AX及mdr一1／P—gP表达的影响

目的：检测不同模式加热联合甲基莲心碱（neferine,Nef）对耐药乳腺癌MCF一7／Adr细胞的增殖抑制及3,H2AX和mdr一1／P—gp表达的影响。方法：采用MTT法检测金属模块加热、培养基加热、烤箱加热及水浴加热等不同模式加热联合10仙g／mLNef对经阿霉素培养的MCF-7／Adr细胞的增殖抑制,实时定量PCR检测mdr一,mRNA的表达,Western印迹法检测rH2AX及P糖蛋白（P—glycoprotein,P—gP）的表达。结果：42℃及450C不同模式加热组较37℃培养组MCF一7／Adr细胞吸光度值明显下降,mdr一1／P—gP表达下降,rH2AX表达上调（均P〈0．01）。加热联合10μg／mLNef组较单纯热疗组及单纯10斗∥mLNef组MCF~／Adr细胞吸光度值明显下降（均P〈0．01）,mdr一1／P—gP表达下降,rH2AX表达上调（均P〈0．05）。42℃及45℃不同模式加热组比较,水浴加热组P—gp表达下降及rH2AX表达上调最为明显（P〈0．05）。结论：加热能增加阿霉素对MCF一7／Adr细胞的细胞毒性反应,能明显增加McF-7／Adr细胞DNA损伤且随温度升高而加剧：MCF-7／Adr细胞对不同模式的加热反应可能不同;热疗联合Nef能增敏阿霉素的化学治疗效果。     

吉西他滨对体外乳腺肿瘤细胞抑制及其MTA1 mRNA表达的影响

目的：探讨吉西他滨对体外培养的乳腺肿瘤MCF－7细胞株抑制作用及其作用机制。方法 将浓度为25 mg／mL、50 mg／mL、100 mg／mL、200 mg／mL和400 mg／mL吉西他滨培养液分为5组：A组、B组、C组、D组和E组。 A组、B组、C组、D组和E组均作用于体外传代培养对数生长期乳腺肿瘤细胞株MCF－7细胞24 h;使用四甲基偶氮唑盐（ MTT）法检测5组各对乳腺肿瘤细胞株MCF－7的生长抑制率;用实时定量聚合酶链反应（ PCR）检测5组各对乳腺肿瘤MCF－7细胞株肿瘤转移相关基因1（MTA1）mRNA的相对表达量。结果 A组、B组、C组、D组和E组对乳腺肿瘤MCF－7细胞株抑制率A组＜B组＜C组＜D组＜E组,差异均有统计学意义（P＜0．05）;C组、D组和E组MTA1 mRNA的相对表达量均人低于空白对照组,且这3组的MTA1 mR－NA的相对表达量依次降低,差异均有统计学意义（P＜0．01）。结论 吉西他滨能抑制乳腺肿瘤MCF－7细胞株增殖,且有剂量依赖性,其主要作用机制是通过下调MTA1 mRNA的表达,从而发挥抑制乳腺肿瘤MCF－7细胞株转移与抗乳腺肿瘤作用。     

黄芪解毒汤诱导乳腺癌细胞凋亡及对β-catenin、C-myc基因表达影响的研究

目的 探讨黄芪解毒汤体外干预人乳腺癌细胞MCF-7凋亡及对β-catenin、C-myc基因表达的影响,及该方抑制乳腺癌复发转移的可能机制.方法 培养MCF-7细胞并将其分为黄芪解毒汤组、阿霉素组及空白对照组.以黄芪解毒汤浓缩液、阿霉素液及细胞培养液分别干预各组MCF-7细胞24 h后,以流式细胞仪检测其对MCF-7乳腺癌细胞凋亡的影响,实时荧光定量PCR检测其对β-catenin,C-myc基因表达的影响.结果 与空白对照组比较,黄芪解毒汤组、阿霉素组可明显诱导MCF-7细胞的凋亡(P<0.01);黄芪解毒汤组及阿霉素组β-catenin、C-myc表达量明显低于空白对照组(P<0.01).结论黄芪解毒可诱导乳腺癌细胞MCF-7凋亡,显著降低β-catenin、C-myc基因表达,该结果为黄芪解毒汤在乳腺癌术后治疗中的应用提供实验依据.     

Nanog表达上调促进乳腺癌细胞MCF-7的增殖和侵袭

目的：观察Nanog高表达对乳腺癌细胞MCF-7生物学特性的影响。方法：构建重组质粒pcDNA3.1（-）-Nanog,利用免疫荧光观察Nanog高表达后,乳腺癌细胞MCF-7中Nanog的定位。利用平皿克隆分离法获得Nanog高表达的乳腺癌细胞系MCF-7。应用克隆形成实验、Transwell迁移和侵袭实验观察Nanog高表达对乳腺癌细胞MCF-7生物学特性的影响。结果：Nanog在MCF-7细胞中定位于核,Nanog高表达后,乳腺癌细胞MCF-7的增殖、迁移和侵袭能力显著增强。结论：Nanog能够促进乳腺癌细胞MCF-7的增殖、迁移和侵袭能力。     

膜雌激素对乳腺癌MCF-7细胞生长的调控及其对其表皮生长因子受体表达水平的影响

目的：探讨膜雌激素持续作用对乳腺癌细胞生长调控的影响及其可能的分子机制。方法采用MTT法测不同浓度的膜雌激素对乳腺癌细胞MCF-7生长的影响。分别采用MTT法和RT-PCR法分析不同的信号抑制剂调控后,膜雌激素对乳腺癌细胞MCF-7生长及其EGFR mRNA表达水平的影响。结果终浓度为10-7M和10-12M的膜雌激素持续作用能诱导乳腺癌MCF-7细胞的增殖。膜G蛋白藕联受体阻断剂苏拉明和EGFR阻断剂AG-1478能明显抑制膜雌激素对MCF-7细胞生长的诱导作用。苏拉明和AG-1478能抑制膜雌激素持续作用上调MCF-7细胞中EGFRmRNA表达的作用。结论雌激素膜持续效应能刺激乳腺癌细胞的增殖,这一作用是通过膜G蛋白藕联受体和EGFR通路来完成的。     

α-苦瓜素体内抗人乳腺癌MCF-7移植瘤实验

目的 观察α-苦瓜素（α-momorchain,α-MMC）体内抗人乳腺癌MCF-7移植瘤效果,初步探讨其抗肿瘤机制。方法 建立人乳腺癌MCF-7移植瘤模型,根据腹腔注射的不同剂量α-MMC（0.53、0.8、1.2mg/kg）分为低、中、高3个剂量组,3次/周,对照组腹腔注射0.2mL的PBS溶剂,4组均连续用药6周,每周测量肿瘤大小,以相对肿瘤体积（relative tumor volume,RTV）和相对肿瘤增殖率[relative tumor growth rate,T/C（%）]来判断α-MMC抗肿瘤效果,采用TUNEL原位细胞法检测肿瘤细胞凋亡情况。结果 3个α-MMC剂量给药组的RTV与对照组相比差异均有统计学意义（P〈0.05）,T/C（%）分别为69.06%、39.03%和33.89%,其中高、中剂量组抗肿瘤效应显著。TUNEL染色法显示,α-MMC呈剂量依赖性增加肿瘤细胞的凋亡。结论 α-MMC能有效抑制人乳腺癌MCF-7移植瘤生长,其作用机制可能是通过诱导肿瘤细胞凋亡而实现。     

羟基喜树碱对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨羟基喜树碱在体外对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响,为乳腺癌的临床用药提供实验依据。方法：将不同浓度（10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L）的羟基喜树碱作用于人乳腺癌MCF-7细胞48 h,并设不加羟基喜树碱溶液的MCF-7细胞作为对照组,用MTT法测定MCF-7细胞的增殖情况,用Hoechst33258染色检测MCF-7细胞的凋亡情况,以RT-PCR检测羟基喜树碱对MCF-7细胞Casepase-3 mRNA表达的影响。结果：与对照组比较,50μmol/L、100μmol/L及200μmol/L羟基喜树碱对细胞增殖均有抑制作用（P〈0.05、P〈0.01）,尤以200μmol/L的抑制作用最明显,其抑制率呈浓度依赖性增加。荧光显微镜观察显示,100μmol/L及200μmol/L羟基喜树碱处理组中可见典型的凋亡形态学改变。与对照组比较,各羟基喜树碱处理组中MCF-7细胞Caspase-3 mRNA表达水平均升高（P〈0.05、P〈0.01）,并呈浓度依赖性升高趋势。结论：羟基喜树碱可在体外抑制MCF-7细胞增殖,并通过Caspase-3途径诱导细胞凋亡,达到抑制肿瘤细胞生长的作用。     

氯化汞诱导MCF-7人乳腺癌细胞增殖的实验研究

目的 :评价氯化汞对MCF 7人乳腺癌细胞的增殖作用。方法 :观察不同浓度的氯化汞对MCF- 7人乳腺癌细胞的增殖作用。结果 :1× 10 7mol/L氯化汞使MCF 7人乳腺癌细胞增殖达最大 ,为阴性对照组的 3 .0 8倍 ,氯化汞的相对增殖效率为雌二醇的 5 9.8% ,相对增殖能力为 0 .0 1,其增殖作用可被雌激素受体拮抗剂I Cll 82 .780完全阻断。结论 :氯化汞可诱导MCF- 7人乳腺癌细胞增殖。     

Survivin反义核酸对乳腺癌细胞增殖的影响

目的：探讨Survivin反义核酸对乳腺癌细胞增殖的影响。方法：本实验分6组，分别以脂质体介导反义寡核苷酸、无义寡核苷酸及RPMI 1640培养液作为空白的对照组，转染人乳腺癌MCF-7细胞系，采用Realtime RT-PCR，Western blot方法检测各组MCF-7细胞Survivin蛋白及mRNA的表达情况，测定转染后细胞贴壁率变化，研究Survivin反义寡核苷酸对MCF-7细胞的生长抑制作用。结果：脂质体介导Survivin反义寡核苷酸转染人乳腺癌MCF-7细胞后，细胞内Survivin蛋白及mRNA表达显著降低，通过Realtime RT-PCR检测MCF-7细胞经作用后其Survivin mRNA起始拷贝数明显下降；同时细胞贴壁率降低达32．96％，细胞生长抑制率最高达73．62％，ASOND／LiP组与NODN／LiP组和LiP组差异有显著性（P＜0．05）。结论：脂质体介导转染的反义寡核苷酸可在Survivin蛋白及mRNA水平有效地降低乳腺癌MCF-7细胞内Survivin的表达，并能够有效抑制乳腺癌细胞的增殖活性，提示Survivin靶向治疗可能成为乳腺癌综合治疗的一种重要方法。