甲型副伤寒杆菌ompX基因原核表达及表达产物免疫原性鉴定

目的构建甲型副伤寒杆菌外膜蛋白基因ompX的原核表达系统,确定其重组表达产物rOmpX免疫原性。方法采用PCR从甲型副伤寒杆菌标准株50001扩增目的基因并构建其原核表达系统,IPTG诱导表达目的蛋白,提取并纯化表达产物。采用免疫扩散法和Western blot鉴定其免疫原性。结果成功构建了ompX的原核表达系统,rOmpX表达量约为细菌总蛋白的28%。rOmpX免疫家兔可产生抗体并能与重组蛋白rOmpX产生阳性Western blot杂交信号。结论成功构建甲型副伤寒杆菌外膜蛋白基因ompX的原核表达系统,rOmpX具有良好的免疫原性,可作为甲型副伤寒杆菌基因工程疫苗候选抗原之一。     

问号钩端螺旋体经线粒体相关信号通路诱导巨噬细胞凋亡的研究

目的 确定线粒体相关信号转导途径在问号钩端螺旋体(简称钩体)诱导小鼠单核-巨噬细胞凋亡过程中的作用.方法 建立问号钩体黄疸出血群赖株诱导小鼠单核-巨噬样细胞株J774A.1凋亡模型.采用透射电镜观察感染细胞线粒体病变情况,JC-1染色法检测感染细胞线粒体膜电位变化,荧光探针DCFH-DA检测感染细胞内活性氧(ROS)水平.采用试剂盒检测感染细胞caspase-8和caspage-9活性变化.流式细胞术检测感染细胞凋亡情况以及cagpage阻断剂阻断凋亡的效果.采用Western blot检测线粒体内和胞质中的细胞色素c(cytc)以及凋亡诱导因子(Air)、核酸内切酶G(EndoG)和Smac水平.应用免疫荧光染色法检测AIF和EndoG从细胞质至核内的转位.结果 问号钩体赖株可诱导J774A.1细胞凋亡.感染细胞的线粒体有明显病变,线粒体膜电位降低且胞内活性氧水平升高.感染细胞caspage-8活化,caspase-9则否,但caspase阻断剂不能完全阻断细胞凋亡.感染细胞AIF和EndoG从线粒体释放至胞质并转位至细胞核内.未检测到感染细胞胞质内CytC水平升高及Smac的释放.结论 线粒体可通过非caspase途径的AIF和EndoG参与问号钩体诱导单核一巨噬细胞凋亡的过程.     

基于淋病奈瑟菌外膜蛋白pIA-pIB融合基因重组产物酶联免疫吸附试验的建立和应用

2005年6月天津市武清区汊沽港镇发生以发热、腹泻、恶心、呕吐和脓血便为主要症状的病例,共确诊患者1189例,经流行病学调查确认是一起由于生活饮用水源污染而导致的福氏志贺痢疾杆菌3a型细菌性痢疾(菌痢)的暴发.     

山楂果核挥发油体内抗菌作用研究

摘要 目的 观察山楂果核挥发油体内抗菌效果,为实际应用提供科学依据。方法 采用稀释法对山楂果核挥发油细胞毒试验的安全浓度进行检测;建立小鼠体内感染模型,对该挥发油的50%有效抗菌浓度进行检测。结果 4%（挥发油/100 ml）即浓度为80 μg/ml及以下浓度的挥发油在观察期限内未出现细胞毒性反应;山楂果核挥发油对于金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌感染小鼠败血症有保护作用,半数有效浓度分别为15.4 μg/ml、 31.9 μg/ml和35.1 μg/ml。结论 山楂果核提取物对试验菌株引起的体内感染均有较好的保护性,可以作为抗菌剂的参考组分。     

结直肠癌组织缺陷基因的杂合性缺失及其意义

目的：探讨结直肠癌组织缺陷基因DCC的缺失与结直肠癌临床病理特征之间的关系。方法：采用聚合酶链反应方法(polymerase chain reaction，PCR)对23例结直肠癌组织新鲜标本DCC基因杂合性缺失(loss of heterozygosity，LOH)进行研究。结果：1)结直肠癌患者标本中18例为杂合子，其中7例存在DCC基因杂合缺失情况；2)其DCC杂合缺失与肿瘤淋巴结转移的情况关系密切，有淋巴结转移的患者DCC的杂合缺失为6例，占所有存在杂合病例数的85．7％。结论：DCC基因的杂合缺失可能对肿瘤的转移起促进作用。     

葛根素对炎症反应综合征大鼠的治疗作用

目的 建立全身炎症反应综合征(SIRS)大鼠模型,探讨葛根素治疗实验性SIRS的效果及其机制.方法 采用腹腔注射酵母多糖-石蜡悬液(ZPS)制备SD大鼠SIRS模型.通过SIRS大鼠静脉注射葛根素后动物死亡率变化,了解葛根素治疗实验性SIRS的效果.采用ELISA定量检测试剂盒了解葛根素对SIRS大鼠外周血中TNF-α、IL-6和IL-10水平的调控作用.采用单因素方差分析和χ2检验对实验数据进行统计学分析.结果 750 mg/kg和1000 mg/kg酵母多糖ZPS均可诱导大鼠发生SIRS.腹腔注射1000 mg/kg酵母多糖ZPS的大鼠死亡率为75.0%,静脉注射62.5 mg/kg葛根素后死亡率可降至16.7%(P＜0.01).大鼠腹腔注射750 mg/kg酵母多糖ZPS后24 h,外周血中TNF-α、IL-6和IL-10浓度分别为(30.87±6.81)pg/ml、(525.20±92.45)pg/ml和(1.37±0.17)ng/ml,静脉注射62.5 mg/kg葛根素后TNF-α、IL-6和IL-10浓度分别为(16.71±3.75)pg/ml、(399.30±77.87)pg/ml和(1.95±0.17)ng/ml.结论 本研究建立了稳定的SIRS大鼠模型.葛根素对实验性SIRS有良好疗效,下调促炎因子TNF-α和IL-6水平,上调抗炎因子IL-10水平可能是葛根素抗SIRS的作用机制之一.     

雷帕霉素与环孢素A对人乳腺癌细胞的耐药逆转作用比较

目的比较雷帕霉素与环孢素A对人乳腺癌细胞的耐药逆转作用。方法 MTT法测定人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR的耐药倍数。乳腺癌敏感细胞株MCF-7/S和耐药细胞株MCF-7/ADR各自分为:对照组:加入不同浓度阿霉素;实验组:加入不同浓度的阿霉素+不同浓度的雷帕霉素或者不同浓度的阿霉素+不同浓度的环孢素A;空白组。MTT法观察细胞抑制率,并算得半数抑制浓度,得出耐药逆转倍数。用免疫荧光法测得加入阿霉素的MCF-7/ADR细胞株在不同浓度的雷帕霉素或者环孢素A作用下,细胞内的阿霉素浓度。结果 (1)MCF-7/ADR细胞株的耐药倍数为12.13。(2)对于MCF-7/S细胞株,雷帕霉素和环孢素A的耐药逆转倍数均为1。(3)对于MCF-7/ADR细胞株,10μmol/L环孢素A使阿霉素的IC50显著降低(P<0.05),逆转倍数为1.6,并且随着浓度的增加,IC50逐渐降低,逆转倍数有逐渐增高的趋势;1μmol/L雷帕霉素使阿霉素的IC50显著降低(P<0.05),逆转倍数为1.6,并且随着浓度的增加,IC50逐渐降低,逆转倍数有逐渐增高的趋势。(4)10μmol/L的环孢素A和1μmol/L的雷帕霉素,开始增加乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR细胞内的阿霉素浓度,并且随着浓度的增加,阿霉素浓度增加。相同浓度的药物作用下,雷帕霉素组的细胞内阿霉素浓度较环孢素A高。结论雷帕霉素能逆转MCF-7/ADR细胞株的耐药性,且效果较环孢素A好。     

医学高职高专院校科研实验平台建设的思考

高校科研实验平台建设,是高校科研的重要支撑系统.特别是高职高专院校,在科研基础相对薄弱,科研人才相对短缺的现状下,加强科研实验平台建设尤显重要.高职高专学校可根据各自学科建设与专业建设特点,建立若干个研究平台,培育科研团队与科研成果.在平台建设中,要把握平台建设的基本原则与运行机制,充分发挥实验平台的教学、科研与服务社会的功能,体现其社会效益与经济效益,在师资培养、学术科研、服务社会等方面发挥其优势.     

两种植物挥发油体外抗菌作用试验观察

目的观察金银花和山楂果核挥发油体外抗菌效果,为实际应用提供科学依据。方法采用稀释法对两种植物挥发油体外最小抑菌浓度和最小杀菌浓度进行了测定。结果金银花挥发油对革兰阴性菌株的MIC50和MIC90值均≥128μg/ml,对金黄色葡萄球菌MIC90值≥128μg/ml、MIC50值为64μg/ml。山楂果核挥发油对所有试验菌株的MIC50值在16～64μg/ml范围;MIC90值在64～128μg/ml。山楂果核挥发油作用15 min,对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌MBC值在32～64μg/ml范围;金银花挥发油作用60 min,对上述两种细菌MBC值为64μg/ml。结论两种植物挥发油对试验菌株都具有良好的体外抗菌效果,但其MIC和MBC值均明显高于两种对照药物。     

浙江省钱塘江流域抗生素抗性基因监测分析

目的研究钱塘江流域抗生素抗性基因分布情况。方法本研究以钱塘江流域上游、中游、下游共18份水样为研究对象,监测四环素、磺胺二甲嘧啶、氨苄青霉素的耐药菌分布,用PCR检测代表抗性基因tet A、sul I和ctx-1,用荧光定量PCR检测其Ct值和相对表达量,分析钱塘江流域耐药菌变化趋势。结果 18份水样中氨苄青霉素、磺胺二甲嘧啶、四环素的耐药菌生长阳性率分别为100.00%、88.89%和61.11%;PCR检测各水样混合微生物DNA中tet A、sul I和ctx-1,目的条带阳性率分别为70.59%、47.06%和52.94%;荧光定量PCR结果显示自上游到中游,对三类抗生素耐药性均呈上升趋势,居民区河水耐药菌表达量平均多于钱塘江水,而sul I相对表达量最高。结论钱塘江流域存在tet A、sul I和ctx-1等ARGs的污染,变化趋势与人为活动的富集污染程度、地理环境有关。