外周血hTERT mRNA表达与进展期结直肠癌术后复发及预后的关系

目的 探讨进展期结直肠癌（CRC）患者外周血人端粒酶逆转录酶（hTERT） mRNA表达量与术后复发及预后的关系.方法 以实时荧光定量RT-PCR定量检测85例进展期CRC患者根治术前、术后1个月及30例健康对照者外周血hTERT mRNA表达量;术后随访3年,CRC复发患者及未复发患者复查外周血hTERT mRNA表达量.结果进展期CRC组术前外周血hTERT mRNA表达量显著高于正常对照组[（6.22 ±5.85）2-△△Ct vs （0.45 ±0.27）2-△△Ct,P ＜0.01],术后1个月外周血hTERT mRNA表达量显著降低（P＜0.01）.术后复发组外周血hTERT mRNA表达量显著高于术后1个月组和未复发组[（5.07 ±2.87）2-△△Ctvs（1.83±1.08）2-△△Ct,（2.15 ±1.49）2-△△Ct,（P＜0.01）].单因素分析显示肿瘤分化程度、肿瘤大小、淋巴结转移率及有无肝转移是影响进展期CRC患者术前外周血hTERT mRNA表达水平升高的因素（P＜0.05或P＜ 0.01）.Logistic多因素回归分析显示肿瘤分化程度、淋巴结转移及肝转移为影响进展期CRC术前外周血hTERT mRNA表达升高的独立危险因素;随着术前外周血hTERT mRNA表达量的升高,CRC患者术后3年复发率逐步升高,术后生存率逐步降低.结论术前外周血hTERTmRNA表达量与进展期CRC重要病理特征相关,是影响预后的重要因素,可作为预后评价指标;术后外周血hTERT mRNA表达量升高与术后复发相关.     

sEHi对急性冠脉综合征患者单个核细胞脂肪酸合酶表达及炎症反应的影响

目的 探讨可溶性环氧化物水解酶抑制剂(sEHi)对急性冠脉综合征(ACS)患者外周血单个核细胞脂肪酸合酶(FASN)表达的影响.方法 入选ACS患者35例为ACS组,体检健康者30名为对照组.于入院后24h内分别测定血脂谱、空腹血糖、心肌酶谱和超敏C反应蛋白(hs-CRP).同时分离培养外周血单个核细胞,以不同浓度可溶性环氧化物水解酶抑制剂(t-AUCB)干预,用实时荧光定量PCR、蛋白印迹法分别测定FASN及IL-6的mRNA及蛋白表达水平.结果 (1)ACS组血清hs-CRP浓度为(5.6±4.1)mg/L,与对照组(1.3±0.9 )mg/L比较显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05);与对照组比较,ACS组单个核细胞内FASN、IL-6 mRNA及蛋白的表达水平均显著升高(相对表达量:FASN mRNA:1比1.709±0.272,FASN蛋白:0.407±0.065比1.298±0.087;IL-6mRNA:1比2.302±0.200,IL-6蛋白:0.715±0.058比1.146±0.083,P＜0.05),且FASN、IL-6 mRNA表达量分别与血清hs-CRP浓度呈正相关(r=0.714,P＜0.01;r=0.685,P＜0.01).(2) t-AUCB可呈剂量依赖性抑制ACS组单个核细胞的FASN和IL-6 mRNA与蛋白表达,t-AUCB干预组与空白对照组(t-AUCB)比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05)(其中t-AUCB 0、10、50、100 μmol/L组中,FASNmRNA相对表达量分别为:1,0.813±0.038,0.564±0.100,0.293±0.043;FASN分别为:0.957±0.280,0.935±0.275,0.855±0.253,0.685±0.206.结论 ACS患者体内有较高的炎症水平,其外周血单个核细胞中FASN的表达水平与体内炎症反应密切相关,t-AUCB抑制单个核细胞内的FASN表达及炎症反应,可能起到稳定斑块的作用.     

类风湿关节炎患者TH17细胞及其相关细胞因子的表达及临床意义

目的 探讨类风湿关节炎(RA)患者TH17细胞及其相关细胞因子的表达及临床意义.方法 收集大连医科大学附属第一医院门诊RA初治活动期患者的外周血标本32例为活动期RA组,健康献血者30例为健康对照组,所有受试者清晨空腹坐位肘静脉采血.应用酶联免疫吸附法(ELISA)及反转录PCR(RT-PCR)法,分别检测外周血血清中IL-17水平和外周血单个核细胞(PBMC)中IL-17mRNA表达水平;将PBMC一组不加刺激,另一组用佛波酯(50 ng/mL)和离子霉素(1μg/mL)刺激4h后,流式细胞仪检测TH17细胞数量.结果 活动期RA患者血清IL-17水平(15.76 ±0.62) pg/mL与健康对照组(8.67±0.12) pg/mL比较,差异有显著性意义(P＜0.05).活动期RA患者PBMC的IL-17mRNA表达水平(1.94±0.46)与健康对照组(0.84±0.16)比较,差异有显著性意义(P＜0.05).RA组血清IL-17水平与mRNA表达水平呈正相关(r=0.70,P＜0.05),且与疾病活动程度(DAS28)评分呈正相关(r=0.99,P＜0.05).活动期RA患者外周血TH17细胞比例(2.50±0.54)％与健康对照组(0.03±0.00)％比较,差异有显著性意义(P＜0.05).但刺激组(3.23±0.05)％与无刺激组(2.50±0.54)％比较,差异无显著性意义(P＞0.05).RA患者组TH17细胞数量与疾病活动程度(DAS28)评分呈正相关(r=0.96,P＜0.05).结论 活动期RA患者TH17细胞及其主要效应性细胞因子IL-17在细胞、蛋白和基因表达水平上均明显升高并与疾病活动程度呈正相关,对临床制定治疗方案、判断疗效有指导意义.     

维生素D受体与MCP-1在系统性红斑狼疮患者中的表达及意义

目的 观察维生素Ｄ受体（VDR）在系统性红斑狼疮患者（SLE）中的表达以及与单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的关系。方 法 共计纳入中南湘雅三医院肾脏风湿科住院SLE患者60 例和募集28 例健康志愿者作为研究对象。使用实时荧光定量聚合链反应方法（QRT-PCR）检测外周血单个核细胞（PBMC）的VDR mRNA和MCP-1 mRNA,Western blot检测VDR蛋白表达,ELISA法检测外周血MCP-1水平,使用单因素方差分析、Pearson相关分析进行统计学分析。结果 我们发现SLE患者PBMC的VDR mRNA及蛋白表达量均显著低于正常对照组（P<0.01）,活动组低于非活动组（P<0.05）;SLE患者PBMC的MCP-1mRNA及血清水平显著高于正常对照组（P<0.01）,活动组高于非活动组（P<0.01）;Pearson相关分析显示PBMC VDR mRNA与SLE疾病活动指数（SLEDAI）呈负相关（r=-0.417,P=0.001）;VDR mRNA与MCP-1 mRNA、VDR蛋白与血清MCP-1浓度分别呈负相关（r=-0.554,P=0.000;r=-0.400,P=0.028）。结论 本研究表明SLE患者PBMC的VDR表达下调与SLE疾病活动度成负相关,且可通过影响MCP-1的表达在SLE发病过程中发挥重要作用。     

基质金属蛋白酶及其组织抑制物在子痫前期患者胎盘中的基因表达

目的研究子痫前期患者胎盘组织中基质金属蛋白酶(MMP-9、MMP-2)及其组织抑制物(TIMP-1、TIMP-2)基因mRNA表达,探讨其与子痫前期发病、进展的关系.方法采用半定量RT-PCR方法对30例正常晚期妊娠和50例子痫前期患者(包括24例轻度和26例重度)胎盘组织中MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2的mRNA水平进行检测.结果子痫前期组胎盘组织的MMP-9基因表达水平显著下降(P＜0.01),重度子痫前期组MMP-9基因表达水平尤低(0.07±0.05).尽管随病情的加重MMP-2mRNA水平呈现逐渐下降趋势,但没有统计学差异(P＞0.05).子痫前期组胎盘组织中的TIMP-1mRNA水平明显高于正常晚期妊娠者(P＜0.01),重度子痫前期组更高(1.49±0.21).子痫前期组胎盘组织TIMP-2mRNA表达显著降低(1.14±0.36),P＜0.01),并有随病情加重逐渐下降的趋势.结论随子痫前期患者病情的加重,胎盘组织的促浸润基因(MMP-2和MMP-9)表达水平降低,抑侵润基因(TIMP-1)的表达水平升高.子痫前期患者浸润相关基因的表达水平与子痫前期病情密切相关.     

增殖诱导配体mRNA在系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞的表达

目的 检测增殖诱导配体（APRIL）mRNA在系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单个核细胞（PBMC）的表达水平，探讨APRIL在SLE发病中的意义。方法 采用半定量RT-PCR法检测36例SLE患者及17例正常人PBMC的APRILmRNA表达，并与SLE疾病活动指数（SLEDAI）进行相关性分析。结果 SLE患者活动期组和非活动期组APRIL mRNA表达水平均明显高于正常对照组（P〈0．05或P〈0．01），活动期组较非活动期组增高更明显（P〈0．01）；SLE患者APRILmRNA表达水平与SLEDAI评分呈正相关（r=0．6725，P〈0．01）。结论 SLE患者APRILmRNA表达水平的增高，可能在SLE的发病机制中具有重要作用。     

IL-27在溃疡性结肠炎患者血液中的表达及意义

目的检测溃疡性结肠炎（UC）患者血液中IL-27mRNA的表达，探讨其在UC发病中的作用。方法收集我院2008年1月～2010年12月消化内科诊治的UC患者34例，另取健康对照34例，Trizol提取血液细胞总RNA，Real—time荧光定量PCR检测IL-27基因的表达。结果健康对照与UC患者血液中均能检测到IL-27基因的表达．UC患者和健康对照IL-27基因的△Ct值分别为（6．22±1．38）和（11．35±2．46），差异有高度统计学意义（P〈0．01）。不同病变程度UC患者之间IL-27mRNA的表达差异有统计学意义（P〈0．05），Pearson相关性分析显示血液中IL-27基因的表达与UC患者的病变程度成正相关（r=0．49，P〈0．01）。结论溃疡性结肠炎血清中IL-27高表达，且其水平的高低与临床的病变程度相关，IL-27可能参与UC的发病并在UC患者肠道的损伤中发挥着重要的调节作用。     

CD147对体外破骨细胞分化过程中基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-9分泌的影响

目的 建立体外破骨细胞(osteoclasts,OCs)诱导分化模型,研究CD147对体外破骨细胞分化过程中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases 2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases 9,MMP-9)合成与分泌的影响.方法 采用健康成...     

小鼠肝脏部分缺血再灌注过程中Toll样受体2的激活及意义

目的探索Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)在小鼠肝脏部分缺血肝叶中的激活,分析TLR2的激活与肝功能损伤之间的关系.方法BALB/c小鼠复制肝脏部分缺血再灌注(缺血1h再灌注4h)损伤动物模型(I/R组),假手术对照组(SH组)同样行开腹手术但不夹闭血管.采用实时荧光定量PCR(Real-time-PCR)方法定量检测缺血肝叶中TLR2mRNA的表达变化,同时采用Western blot检测缺血肝脏组织中TLR2蛋白的表达变化,检测门静脉血浆丙氨酸氨基转移酶(pALT)水平.结果肝脏部分缺血1h再灌注4h后,I/R组与SH组小鼠缺血肝叶TLR2 mRNA的表达(△Ct值)分别为(1.06±0.91)vs(5.08±1.32)(P＜0.01),由于△Ct值越小则基因表达水平越高,说明缺血再灌注过程中缺血肝叶TLR2mRNA的表达水平增高.且I/R组小鼠缺血肝叶TLR2蛋白的表达(OD值)水平较SH组高[(433.91±25.53)vs(102.86±13.58),P＜0.01],I/R组中门静脉血清ALT水平升高[(848.33±271.37)μ/Lvs(42.39±14.75)μ/L,P＜0.01].结论TLR2在肝脏缺血再灌注过程中缺血肝叶的表达增强,且这种变化与肝功能的损伤相关.     

Modulation of Matrix Metalloproteinase and TIMP-1 Expression by TGF-β1 in Cultured Human RPE Cells

In order to investigate the effects of TGF-β1 on the expression of MMP-2, -9 and TIMP1 in human retinal pigment epithelial (RPE) cells, the third-sixth passage cultured RPE cells were treated with TGF-β~ at different concentrations (0.01, 0. 1, 1.0, 10 ng/mL), the expression of MMP-2, -9 and TIMP-1 mRNA was detected by semi-quantitative RT-PCR assays. MMP-2, -9 and TIMP-1 mRNA were expressed in the cultured RPE cells. The values of MMP-2/β-actin in the cells treated with 0.1, 1.0, 10 ng/mL TGF-β1 were 1.04±0.04, 1.07±0.02 and 1.11±0.03, respectively, significantly higher than in the control group (0. 96±0.03, P＜0. 05-0. 01). The expression of MMP-2 mRNA could be up-regulated by TGF-β1, in a dose-dependent manner. The expression of MMP-9 mRNA in the cultured RPE cells was slightly up-regulated by various TGF-β1 concentrations treatment. The values of TIMP-1/β-actin in the cells treated with 0.01 and 0. 1 ng/mL TGF-β1 were 0. 85±0.01 and 0.97 ± 0.02 respectively, significantly lower than in the control group (1.07±0.04, P＜0.01), indicating that the expression of TIMP-1 mRNA was down-regulated by TGF-β1 at low concentrations. But along with the increase of TGF-β1 concentrations (1.0 and 10 ng/mL), the expression of TIMP-1 mRNA was slightly up-regulated, not significantly different from that in the control group (P＞0.05). It was concluded that TGF-β1 might play an important role in the up-regulation of the expression of MMP-2 in RPE cells and result in a directional shift in the balance between MMP and TIMP. This may be facilitated for RPE cells to migrate in the pathogenesis of vitreoretinopathy.     

慢性肾功能衰竭血清对兔主动脉内皮细胞增殖、凋亡及核因子κB信号通路活化的作用

目的 探讨慢性肾功能衰竭(CRF)血清对兔主动脉内皮细胞(AEC)增殖、凋亡和核因子κB信号通路活化及其下游炎症因子表达的影响.方法 建立CRF兔模型,采集其血清;不同浓度的CRF血清刺激原代培养的兔AEC后,四甲基偶氮噻唑盐检测细胞增殖,Hoechst33342染色观察细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞周期;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹法分别检测核因子κB、IκB mRNA及蛋白和肿瘤坏死因子(TNF)α蛋白表达;免疫荧光观察核因子κB P65核转位、电泳迁移率变异试验(EMSA)检测核因子κB DNA结合活性;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养液中TNF-α和白细胞介素(IL)6浓度.结果 (1)在较低浓度(≤10%)时,CRF血清对AEC的增殖有明显的促进作用,但血清浓度继续增加后,对AEC的增殖作用却明显减弱,促凋亡作用却增强,与对照组相比,差异均有统计学意义(均P＜0.01).(2)10%CRF血清刺激后,与对照组相比,核因子κB mRNA(0.35:±0.05比0.26±0.02)及蛋白(1.67±0.15比0.41±0.05)表达均高;IκB mRNA(0.13±0.03比0.24±0.04)和蛋白(0.29±0.06比0.65±0.08)表达均低;核因子κB P65发生核转位;核因子κB DNA结合活性高(均P＜0.01).与对照组相比,10%CRF血清刺激后AEC分泌TNF-α和IL-6高,细胞中TNF-α蛋白表达高(0.37±0.04比0.14±0.03)(均P＜0.01).结论 CRF血清可导致AEC活化,低浓度导致AEC增殖,高浓度导致细胞凋亡;促增殖作用可能与其活化了核因子κB信号通路有关.这为进一步采取措施,防治CRF加速性动脉粥样硬化提供了一定的理论和实验依据.     

Fibulin-1在女性压力性尿失禁患者盆底组织中的表达及意义

目的 探讨压力性尿失禁( SUI)患者阴道前壁中Fibulin-1与SUI发生的关系.方法 采用实时荧光定量-PCR、免疫蛋白印迹方法测定25例压力性尿失禁患者(SUI组)阴道前壁组织中Fibulin-1的蛋白及mRNA表达水平,择同期27例非卵巢功能性肿瘤和宫颈病变患者作为对照(对照组).结果 RT-PCR结果显示Fibulin-1mRNA表达水平△Ct值在SUI组织(0.456 5±0.220 6)明显低于对照组组织(0.246 8±0.5017) (F =0.241,P＜0.001);Fibulin-1 mRNA表达水平△Ct值在SUI绝经前组组织(0.373 2±0.158 2)明显低于绝经前对照组组织(1.157 5±0.1542)(F=0.212,P＜0.001);Fibulin-1 mRNA表达水平△Ct值在SUI绝经后组组织(0.557 3±0.2219)与绝经后对照组组织(0.5326±0.2221)都很微弱,(F=1.099,P＞0.05).结论 SUI患者的盆底支持结构的退行性病变与组织中的Fibulin-I低下有关.     

自发性高血压大鼠Klotho与MMP-9, TIMP-1和 PAI-1基因的表达及福辛普利和缬沙坦对其的干预作用

目的：观察自发性高血压大鼠（spontaneously hypertensive rats,SHR）肾脏组织中Klotho、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1（tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1）和纤溶酶原激活物抑制剂-1（plasminogen activator inhibitor,PAI-1）基因的表达状况,探讨其在高血压肾间质纤维化中的作用及福辛普利和缬沙坦的肾保护作用机制。 方法：22周龄雄性SHR 20只随机分为4组（每组5只）：高血压组（SHR组）、fosinopril组［Fos组,10 mg/( kg·d)灌胃］,Valsartan组［Val组,50 mg/( kg·d)灌胃］和fosinopril+valsartan组［Fos＋Val组,fosinopril 10 mg/( kg·d)+valsartan 50 mg/( kg·d)灌胃］。22周龄雄性Wistar Kyoto大鼠（WKY组）5只作为对照组。用药物干预连续喂养8周,分别用RT-PCR和Western 印迹检测肾脏组织中Klotho,MMP-9,TIMP-1和PAI-1 mRNA和蛋白的表达水平。 结果：SHR组肾脏组织Klotho mRNA和蛋白表达较WKY组明显下调(P＜0.01),而MMP-9,TIMP-1和PAI-1mRNA和蛋白的表达较WKY组均明显上调(P＜0.01);用fosinopril和/或valsartan干预后,可上调Klotho mRNA在Fos,Fos＋Val组(P＜0.01）和Val组(P＜0.05）的表达,上调Klotho 蛋白在Val,Fos＋Val组(P＜0.01）和Fos组(P＜0.05）的表达。同时下调MMP-9,TIMP-1,PAI-1 mRNA和蛋白在Fos,Val,Fos＋Val组的表达(P＜0.01）。相关分析表明：Klotho mRNA和蛋白的表达与MMP-9,TIMP-1,PAI-1 mRNA (r值分别为-0.864,-0.725和-0.785,P＜0.01)和蛋白（r值分别为-0. 614,-0.579和-0.552,P＜0.05）的表达均呈负相关。 结论：高血压肾损害与抗衰老基因Klotho和基质降解相关基因MMP-9,TIMP-1,PAI-1关系密切;Klotho基因与MMP-9,TIMP-1和PAI-1基因的表达呈负相关。上调抗衰老基因Klotho表达的药物fosinopril 和/或valsartan可改善Klotho-MMPs/TIMPs-PAI-1的表达,这可能是其抗肾纤维化的重要机制。     

抑郁情绪障碍对围术期老年冠心病患者外周血单核细胞CD40表达及血浆白细胞介素-8的影响

目的 观察合并抑郁情绪障碍的老年冠心病(CHD)患者围术期外周血单核细胞表面CD40表达及血浆白细胞介素8(IL-8)浓度的变化,探讨抑郁情绪障碍和冠心病间的相关免疫学机制。方法 选择2009年12月至2010年12月河北医科大学第三医院高龄冠心病患者100例,冠状动脉粥样硬化性心脏病诊断明确,无认知障碍。所有患者均行单节段腰后路全椎板减压植骨融合内固定术。术前1d采用汉密尔顿抑郁和焦虑量表评定患者的抑郁和焦虑评分,并据此将患者分为3组：无抑郁组（A组,n =30）：抑郁评分≤20分,且焦虑评分≤6分;抑郁干预组（B组,n=35）：为抑郁评分≥30分,且焦虑评分≤6分,白术前1d至术后第7天进行心理辅助治疗;抑郁非干预组（C组,n=35）：抑郁评分≥30分,且焦虑评分≤6分。术前1d及术后第7天抽取外周静脉血测定单核细胞表面CD40表达及血浆IL-8浓度。并于术后第7天再次测定抑郁评分。结果 术后B组的抑郁评分(25.1±2.9)低于术前(33.2±1.4)和C组(34.2±0.8,P＜0.05);术前A组的CD40荧光强度(123±18)低于B、C组（197±23,204±26）,(P＜0.05),术后A组(132 ±20)低于B组(147±19),但B组低于C组(212±18,P＜0.05),且CD40荧光强度和抑郁总分呈显著性正相关(r=0.597,P＜0.01);术前A组的IL-8浓度(85 ng/L±16 ng/L)低于B、C组(151 ng/L±18 ng/L,164 ng/L±22 ng/L),(P＜0.01),B和C组差异无统计学意义,但术后B组( 158 ng/L±19 ng/L)低于C组(197 ng/L±24 ng/L,P＜0.05),且血浆IL-8浓度与抑郁总分呈显著性止相关(r=0.751,P＜0.01)。结论 抑郁情绪障碍可能会造成围术期老年冠心病患者血浆IL-8分泌增多及单核细胞CD40表达上调。     

心钠素对高血压大鼠动脉平滑肌细胞离子泵活性和基因表达的影响

目的 探讨心钠素(ANP)对自发性高血压大鼠(SHR)动脉平滑肌细胞膜(ASMC)Na+,K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性及Na+,K+-ATP酶α,亚单位、Ca+-ATP)酶亚型1(PMCA1)mRNA表达的影响.方法 对SHR大鼠,予不同浓度ANP和血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)干预,通过放射免疫、生化酶学和逆转录-聚合酶链反应等方法,检测ASMC的ANP、AngⅡ含量,ATP酶活性及其mRNA表达变化并设WKY大鼠为对照.结果 SHR大鼠ANP含量比WKY大鼠下降[(7.3±2.4)pg·10-6比(19.3±3.3) Pg·10-6,P＜0.01],Ang Ⅱ含量增加[(57±4)pg·10-6比(44±4) pg·10-6,P＜0.01],Na+,K+-ATP酶、Ca2+-A11)酶活性及Na+,K+-ATP酶α1亚单位、PMCA1 mRNA表达均显著降低[Na+,K+-ATP:(4.3±0.8) μmol·h-1·mg-1比(5.3±1.0) μmol·h-1·mg-1,Ca2+-ATP酶:(3.2±0.7)μmol·h-1·mg-1比(4.5±0.7) μmol·h-1·mg-1,α1亚单位:0.524±0.025比0.704±0.116,PMCA1:0.193±0.030比0.547±0.045](P＜0.05～P＜0.01).ANP可增加SHR大鼠Na+,K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性及Na+,K+-ATP酶α1,亚单位及PMCA1 mRNA表达(均P＜0.01),Ang Ⅱ则抑制Ca2+-ATP酶活性和PMCA1 mRNA表达(P＜0.05～P＜0.01),仅1×10-7 mol/L AngⅡ抑制Na+,K+-ATP酶活性及α1亚单位mRNA表达,ANP能拮抗AngⅡ对两种ATP酶活性及其mRNA表达的效应.ANP也能拮抗AngⅡ对WKY大鼠Ca2+-ATP酶活性及PMCA1mRNA表达的效应,对Na+,K+-ATP酶活性及α1亚单位mRNA表达无影响(P＞0.05).结论 高血压大鼠ASMC两种ATP酶活性和基因表达下降与局部ANP和AngⅡ分泌异常有关,ANP能拮抗AngⅡ对两种ATP酶活性和基因表达的效应.     

脂联素对自发性2型糖尿病大鼠肝脏脂代谢的影响

目的 探讨脂联素(APN)对自发性2型糖尿病大鼠肝脏脂代谢的影响及其分子信号机制.方法 自发性2型糖尿病大鼠20只(糖尿病组),同系健康对照鼠10只(对照组).于8、32和40周分批处死.检测不同鼠龄空腹血糖、血浆胰岛素和血脂水平.肝组织甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)含量以酶法检测,反转录-PCR检测肝组织乙酰辅酶A羧化酶(AAC)和同醇调节元件结合蛋白-1( SREBP-1) mRNA水平,ELISA法检测血浆和肝组织内APN蛋白水平.免疫沉淀后行Western印迹法检测肝组织胰岛素受体底物-2磷酸化( py-I RS2)表达水平.结果 32周开始糖尿病组大鼠表现出明显的胰岛素抵抗和脂代谢紊乱特征.糖尿病组大鼠肝组织TG和TC含量随鼠龄增加有增高趋势,显著高于对照组[40周TG( 1.88±0.11) mmol/L比(0.51±0.07) mmol/L,TC (0.94±0.17)比(0.69±0.14) mmol/L,P＜0.01].糖尿病组大鼠肝组织AAC和SREBP-1 mRNA水平在各鼠龄均显著高于对照组(P＜0.05).糖尿病组大鼠血浆APN水平在8周龄显著低于对照组[(2.38±0.23)ng/ml比(3.1±0.17) ng/ml,P＜0.05],随鼠龄增加而升高[32周(1.51±0.05) ng/ml比(2.84±0.34) ng/ml,40周(1.24±0.04) ng/ml比(2.64±0.49) ng/ml,P＜0.01].肝组织APN在不同鼠龄均显著低于对照组[8、32和40周分别为(2.24±0.18) μg/g比(2.68±0.13) μg/g,(2.04±0.19)μg/g比(2.51 ±0.14) μg/g,(1.76±0.12) μg/g比(2.47±0.21) μg/g,P＜0.05].肝组织py-IRS2表达水平显著低于同龄对照组(P＜0.05).肝组织APN水平与py-IRS2呈正相关(r=0.542,P＜0.001),与肝组织ACC、SREBP-1mRNA、TG、TC含量呈负相关(r=-0.431,- 0.396,-0.353,-0.349,P＜0.05).结论 APN可能通过调控糖尿病大鼠肝脏IRS-2磷酸化水平影响肝组织的胰岛素信号通路,调节肝脏的脂代谢功能.     

急性痛风性关节炎患者治疗前后外周血单核细胞NLRP3炎性体mRNA表达及血清IL-6水平的研究

目的：检测急性痛风性关节炎(acute gouty arthritis, AGA)患者治疗前后外周血单核细胞(peripheral blood mono-cytes, PBMCs)中NLRP3炎性体[NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱天冬酶-1(caspase-1)]mRNA表达水平及血清白介素(IL)-6水平的变化,探讨该炎性体及IL-6在AGA发病中可能的作用机制。方法根据美国风湿病协会(ACR)1997年制定的诊断标准,随机选取来自该院2014年8月—2016年2月的门诊AGA患者100例(观察组,T),同时随机选取相同时间段青岛本地居民健康查体者100名(对照组,C)。用RT-PCR法检测对照组和观察组治疗前(D0)及应用药物治疗后第3天(D3)、第7天(D7)、第14(D14)天NLRP3炎性体mRNA表达水平,同时用ELISA法测定相应IL-6水平。结果与对照组(0.130±0.070)相比,NLRP3 mRNA表达水平在D0(0.077±0.039)、D3(0.086±0.046)及D7(0.103±0.054)均显著降低,差异有统计学意义(P﹤0.01);与对照组(0.011±0.006)相比,观察组各阶段ASC mRNA表达水平均显著升高,差异有统计学意义,其中D0(0.028±0.016)、D3(0.030±0.020)及D7(0.017±0.012) vs C(P﹤0.01)、D14(0.013±0.007) vs C(P﹤0.05);与对照组(0.119±0.061)相比,caspase-1 mRNA表达水平在D0(0.047±0.030)及D3(0.052±0.030)显著降低,差异有统计学意义(P﹤0.01)。观察组血清IL-6水平(pg/ml)与对照组(10.21±3.62)相比在各阶段均显著升高,差异有统计学意义,其中D0(48.87±19.25)、D3(49.84±21.14)、D7(43.81±18.30) vs C(P﹤0.01),D14(11.40±4.55) vs C(P﹤0.05)。结论 NLRP3炎性体及IL-6在AGA患者治疗过程中水平异常,提示它们在AGA发病中参与了炎症反应过程,在炎症机制中可能发挥了重要作用。     

fas介导系统性红斑狼疮患者Foxp3+CD4+CD25+Treg细胞凋亡的研究

目的 探讨fas凋亡信号传导途径在系统性红斑狼疮(SLE)患者Foxp3+CD4+CD25+Treg凋亡异常中的作用.方法 选取活动期SLE患者25例、缓解期SLE患者20例及健康对照25名为研究对象,检测所有研究对象外周血Foxp3+CD4+CD25+Treg表面fas的表达,同时分析CD4+CD25+T细胞Foxp3表达.并分别将fas表达率及Foxp3表达率与病情活动性(SLEDAI评分)进行相关分析.结果 (1)外周血Foxp3+CD4+CD25+Treg上fas的表达:活动期SLE组为(23.72±2.35)%,缓解期SLE组为(14.0±2.1)%,对照组为(10.1±1.2)%,在活动期SLE组明显高于缓解期SLE组(P＜0.01)和对照组(P＜0.01),而缓解期SLE组与对照组差异无统计学意义(P＞0.05),fas在Foxp3+CD4+CD25+Treg上的表达与SLEDAI评分呈正相关(r=0.336,P＜0.05).(2)外周血CD4+CD25+T细胞Foxp3的表达:活动期SLE组为(2.83±0.30)%,缓解期SLE组为(5.38±0.63)%,对照组为(8.12-±0.70)%.活动期SLE组外周血 CD4+CD25+T细胞Foxp3表达明显低于缓解期SLE组(P＜0.01)和对照组(P＜0.01);而缓解期SLE组亦低于对照组(P＜0.05).外周血Foxp3表达与SLEDAI评分呈负相关(r=-0.581,P＜0.01).(3)Foxp3与fas的表达呈负相关(r=-0.349,P＜0.01).结论 SLE患者中存在由fas介导的Foxp3+CD4+CD25+Treg的过度凋亡,这可能是导致SLE病情活动的机制之一.

Abstract：

Objective To explore the role of fas apoptosis signal transduction pathway in the abnormal apoptosis of Foxp3 + CD4 + CD25 + Treg in patients with systemic lupus erythematosus ( SLE ).Methods Twenty-five active SLE patients, 20 remission SLE patients and 25 controls were selected. The level of fas expression on peripheral blood Foxp3 + CD4 + CD25 + Treg surface was detected in SLE patients.And analyzed the expression rate of Foxp3 on CD4 + CD25 + T cells was analyzed to explore the relationship between the expression rate and disease activity. Results ( 1 ) The expression rate of fas on Foxp3 + CD4 +CD25 + Treg was (23.72 ± 2. 35 )% , ( 14. 0 ± 2. 1 )% in active and remission SLE groups respectively versus ( 10. 1 ± 1.2)% in control group. The fas expression rate of active SLE group was significantly higher than those of remission SLE group( P ＜ 0. 01 ) and control group ( P ＜ 0. 01 ). And the remission SLE and control groups were not statistically significant ( P ＞0. 05 ). The expression rate of fas on the Foxp3 + CD4 +CD25 + Treg was positively correlated with the SLEDAI ( SLE disease activity index ) score ( r = 0. 336, P ＜0.05). (2) The expression rate of Foxp3 on CD4 +CD25 +T cells was (2.83 ±0.30)%, (5.38 ±0. 63 ) % in active and remission SLE groups respectively versus ( 8. 12 ± 0. 70 ) % in control group. The expression rate of Foxp3 was significantly lower in active SLE group than that in remission SLE group ( P ＜0. 01 )and control group( P ＜0. 01 ). And the Foxp3 expression rate of remission group was also lower than that of control group ( P ＜ 0.05 ). The expression rate of Foxp3 was negatively correlated with the SLEDAI score (r = -0. 581, P ＜ 0. 01 ). (3) The expression rate of Foxp3 was negatively correlated with fas (r=- 0. 349, P ＜ 0. 01 ). Conclusion The abnormal apoptosis of Foxp3 + CD4 + CD25 + Treg mediated by the fas apoptosis signal transduction pathway may be one of the pathogenic mechanisms of disease activity in SLE patients.