安罗替尼对肺腺癌细胞株A549放射敏感性的影响及机制

  目的  研究安罗替尼对肺腺癌细胞放疗增敏作用及机制。  方法  采用安罗替尼处理人肺腺癌细胞株A549，使用CCK8法测定安罗替尼对细胞增殖的影响；采用克隆形成实验测定安罗替尼联合放疗对细胞的生长抑制作用；使用流式细胞术测定细胞周期和细胞凋亡的变化；采用免疫荧光测定安罗替尼联合放疗对细胞内DNA损伤的影响；采用Western blot检测细胞内DNA损伤标志因子DNA-PKcs的表达变化。  结果  安罗替尼对人肺腺癌细胞A549增殖具有抑制作用，第2、3、4、5天，（P < 0.05）。体外培养克隆形成实验显示，安罗替尼联合放疗组的准予剂量（Dq）、平均致死剂量（D0）及4 Gy照射时的存活分数（SF）均明显低于单纯放疗组（P < 0.05）。安罗替尼能够使细胞阻滞于G1/G0期，与放疗联合作用后，进一步降低了G2和S期细胞比例。安罗替尼能够增加放疗诱导的细胞凋亡比例（31.94±2.25）%和（44.44±2.30）%，（P < 0.001），增加γH2AX阳性细胞数量（25.67±2.52）%和(54.67±3.79）%，（P < 0.001）。安罗替尼能够降低放疗诱导的DNA断裂损伤标志因子DNA-PKcs的表达强度（0.90±0.06）和（0.40±0.06），（P < 0.001）。  结论  安罗替尼具有放疗增敏作用，其机制可能与减少G2/S期细胞、增加细胞凋亡和维持DNA持续损伤有关。     

ABT737通过延迟宫颈癌细胞放射后DNA损伤修复及诱导凋亡而增敏放疗

【目的】 探讨类似BH-3的小分子物质ABT737诱导增敏放疗的作用及其分子机制?【方法】噻唑蓝法(MTT)检测不同浓度ABT737对HeLa细胞的生长抑制作用;细胞克隆形成实验检测ABT737联合放疗对放疗的增敏作用;免疫荧光法检测γ-H2AX观察DNA损伤修复情况;流式细胞术检测细胞凋亡;免疫印迹法检测Caspase-3?PARP的表达观察凋亡?【结果】与对照组相比,ABT737能显著抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖(P < 0.05),并呈浓度依赖性,其IC50为15.7 μmol/L?体外培养克隆形成实验结果显示放疗+ABT737不同用药时间组的DEF值均大于1,放疗+8 μmol/L ABT737持续用药组为1.88,放疗+12 μmol/L ABT737用药72 h组为1.13,细胞存活分数(SF值)持续用药组为0.84,用药72 h组SF值为0.82;免疫荧光结果显示ABT737联合放疗处理HeLa细胞1 h后,放射线导致的γ-H2AX聚焦点数量及有γ-H2AX聚焦点生成的细胞数量均明显增加,上述处理24 h后,单纯放疗组γ-H2AX焦点消失,而联用ABT737处理组仍可观察到γ-H2AX焦点聚集?流式细胞术结果显示,单纯放疗组早期凋亡率(Annexin V+,PI-)为23.3%,ABT737联合放疗可以明显提高放射线诱导的细胞凋亡,早期凋亡率最高达50.3%?免疫印迹结果显示10 ?滋mol/L ABT737与2 Gy放射联合作用于Hela细胞后,凋亡蛋白cleaved Caspase-3与cleaved PARP的表达较单纯放疗组增加?【结论】 ABT737对宫颈癌Hela细胞具有放疗增敏作用,其机制与ABT737可延迟宫颈癌细胞放疗后DNA损伤修复及诱导凋亡有关?     

蛋白激酶CK2基因表达沉默对鼻咽癌细胞放射增敏作用

目的 研究蛋白激酶CK2表达沉默对鼻咽癌细胞放射增敏作用,并探讨其可能机制.方法 通过RNA干扰技术下调鼻咽癌5-8F细胞中CK2α蛋白表达,利用Western blotting方法验证干扰效果;利用克隆形成实验观察CK2表达沉默后对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响;应用免疫荧光方法检测γ-H2AX灶点形成;Annexin-V和PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 通过RNA干扰技术可以有效沉默CK2α表达.克隆形成实验结果显示CK2α表达沉默后,鼻咽癌细胞形成克隆能力明显下降,对X线的敏感性明显增加;1 Gy照射后15min,CK2α沉默的细胞γ-H2AX灶点数目明显增加;CK2α沉默的细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.01).结论 蛋白激酶CK2与鼻咽癌放射敏感性密切相关,CK2可能是一个非常有潜力的鼻咽癌治疗靶点.

Abstract：

Objective To investigate the effect of protein kinase CK2 gene silencing on the radiosensitization in human nasopharyngeal carcinoma (NPC) cells and its possible mechanism. Methods RNA interference (RNAi) technique was used to down-regulate the protein kinase CK2α expression in 5-8F cells, and clonogenic assay was employed to observe the changes in the radiosensitivity of the cells. DNA double-strand break was assessed by immunofluorescence staining of γ-H2AX foci,and the cell apoptosis was examined using Annexin V-FITC/PI double-staining flow cytometry. Results CK2α protein was successfully silenced by siRNA. CK2α knockdown significantly decreased the clonogenic activity and increased the radiosensitivity of the NPC cells. After a 15-min exposure of the cells to 1 Gy radiation, significant difference occurred in the γ-H2AX foci between CK2α knockdown cells and the control cells (P<0.01). CK2α silencing significantly increased the cell apoptosis after the exposure (P<0.01). Conclusion Protein kinase CK2 plays an important role in the radiosensitivity of the NPC cells, and suppression of its expression might be a potential therapeutic approach of cancer.     

圣和散对神经胶质瘤细胞DNA放射损伤修复的抑制作用(英文)

目的:探讨圣和散对由γ射线引起的神经胶质瘤大鼠模型细胞DNA损伤修复的抑制作用,并与其对正常人星形胶质细胞的作用相比较。方法:神经胶质瘤细胞和正常人星形胶质细胞均施以圣和散及放射治疗。通过MTT比色法检测SHP对细胞生长的抑制作用,γH2AX作为检测DAN损伤和修复的特异指标。结果:SHP能抑制射线所致的DNA双链断裂,提高正常人星形胶质细胞DNA的修复能力,增强神经胶质瘤细胞对射线的敏感性,经圣和散预处理的放疗后的神经胶质瘤细胞γH2AX焦点形成数量减少;放疗联合SHP抑制神经胶质瘤细胞扩增的作用优于单用放疗。结论:圣和散能提高正常人类星形胶质细胞的放射耐受性,增强神经胶质瘤细胞对射线的敏感性。     

Contribution of Decreased Expression of Ku70 to Enhanced Radiosensitivity by Sodium Butyrate in Glioblastoma Cell Line（U251）

The present study investigated the enhanced radiosensitivity of U-251 cells induced by sodium butyrate(NaB) and its possible mechanisms.Increased radiosensitivity of U251 cells was examined by clonogenic cell survival assays.The expression of Ku70 mRNA and protein was detected by using RT-PCR and Western blotting respectively.γ-H2AX foci were measured at different time points after ionizing irradiation alone or combined with NaB treatment.The results showed that cell survival rate was significantly reduced,both D0 and Dq values were decreased(D0:1.43 Gy vs.1.76 Gy;Dq:1.22 Gy vs.2.05 Gy) after the combined treatment as compared with irradiation alone,and sensitivity enhancing ratio(SER) reached 1.23.The average number of γ-H2AX foci per cell receiving the combined treatment was significantly increased at different time points,and the expression levels of Ku70 mRNA and protein were suppressed by NaB in a dose-dependent manner.It was concluded that enhanced radiosensitivity induced by NaB involves an inhibited expression of Ku70 and an increase in γ-H2AX foci,which suggests decreased ability in DSB repair.     

DNA损伤应答靶向抑制剂对卵巢癌细胞的化疗增敏作用

目的 观察DNA损伤应答抑制剂及其联合常规化疗药物（顺铂等）在卵巢癌耐药细胞株OVCAR-8中的作用,研究其化疗致敏效应。方法 利用针对DNA损伤应答关键信号蛋白质的抑制剂,与顺铂等连用处理卵巢癌细胞,分析这些药物处理方式对卵巢癌细胞的杀伤能力。MTT法检测不同药物作用后OVCAR-8的增殖抑制情况;免疫荧光法检测OVCAR-8中磷酸化组蛋白2A变体（γH2AX）和p53结合蛋白1（53BP1）的表达,观察二者在DNA损伤位点的募集和形成灶点的能力。结果 毛细血管扩张共济失调突变蛋白（ATM）/ATM和Rad 3相关蛋白（ATR）抑制剂与顺铂联用能抑制损伤修复机制的活化,明显减弱OVCAR-8细胞的增殖活力（P<0.01）,促进其凋亡;在羟基脲和Wortmannin联合处理时,OVCAR-8细胞的ATR转导信号（如γH2AX）减弱,细胞生存率明显降低（P<0.05）;多聚ADP-核糖聚合酶（PARP）抑制剂与顺铂联合处理OVCAR-8细胞未发现明显的增敏作用（P>0.05）。结论 适当的DNA损伤应答抑制剂有潜力提高常规化疗药物的抗肿瘤效果,以达到快速清除肿瘤细胞和防止产生耐药性的效果。     

Inhibition of Ciliogenesis Enhances the Cellular Sensitivity to Temozolomide and Ionizing Radiation in Human Glioblastoma Cells

Objective To investigate the function of primary cilia in regulating the cellular response to temozolomide(TMZ) and ionizing radiation(IR) in glioblastoma(GBM).Methods GBM cells were treated with TMZ or X-ray/carbon ion. The primary cilia were examined by immunostaining with Arl13 b and γ-tubulin, and the cellular resistance ability was measured by cell viability assay or survival fraction assay. Combining with cilia ablation by IFT88 depletion or chloral hydrate and induction by lithium chlorid...     

电离辐射对沉默ATRX的HeLa细胞DNA损伤修复的影响

目的：靶向沉默宫颈癌HeLa细胞中α-地中海贫血/精神发育迟滞综合征X染色相关蛋白（ATRX）,检测电离辐射对ATRX、γH2AX和Rad51蛋白表达及γH2AX和Rad51焦点数的影响,探讨ATRX参与辐射后HeLa细胞DNA损伤修复的作用。方法： 3条ATRX-shRNA和阴性对照（Control-shRNA）的慢病毒载体转染293T细胞,收集慢病毒并感染HeLa细胞,利用puromycin筛选获得稳定沉默ATRX的细胞系,分别命名为shA₁-HeLa、shA₂-HeLa、shA₃-HeLa和shCon-HeLa,采用Western blotting法检测沉默ATRX效率以及电离辐射后ATRX、γH2AX和Rad51蛋白的表达,采用免疫荧光技术观察shCon-HeLa和shA₁-HeLa组中γH2AX和Rad51焦点并计数其数量。结果： shCon-HeLa细胞中可见ATRX蛋白表达,而shA₁-HeLa、shA₂-HeLa和shA₃-HeLa细胞中均无ATRX蛋白表达,表明沉默效率较高。在2和8 Gy剂量照射后1、6和24 h,shCon-HeLa组ATRX蛋白表达量逐渐升高,24 h时表达量最高,且8 Gy照射后1、6和24 h表达量均较高。4 Gy照射后0~6 h,与shCon-HeLa组比较,shA₁-HeLa组γH2AX焦点数在1 h明显升高（P<0.05）,而后逐渐降低,但在6 h焦点数仍明显高于shCon-HeLa组（P<0.01）;Rad51焦点数与γH2AX焦点数变化相一致,与shCon-HeLa组比较,shA₁-HeLa组Rad51焦点数在1 h明显升高（P<0.05）,在6 h时shA₁-HeLa焦点数仍明显高于shCon-HeLa组（P<0.01）。4 Gy照射后0~16 h,shA₁-HeLa组细胞中γH2AX和Rad51蛋白表达量均较shCon-HeLa组增加。结论：成功获得稳定沉默ATRX的HeLa细胞模型,电离辐射可诱导ATRX蛋白表达量增加,且沉默ATRX的HeLa细胞中γH2AX和Rad51焦点数及蛋白表达量均高于对照组,提示ATRX参与了辐射诱导的DNA损伤修复过程。     

上皮性卵巢癌细胞原代培养及放化疗相关的DNA损伤应答机制的研究

目的 通过上皮性卵巢癌组织细胞原代培养,检测DNA损伤应答过程中相关蛋白细胞定位的动态变化。方法 选取临床新鲜卵巢上皮性肿瘤标本28例（交界性浆液囊腺瘤6例,高分化浆液腺癌5例,中分化浆液腺癌6例,低分化浆液腺癌11例）,组织块经胶原酶A消化后培养,比较不同培养基（MCDB/M199培养基、原代细胞专用培养基、DMEM培养基）对原代肿瘤细胞正常形态维持、增殖潜力及纤维化的影响。离子射线（X光）、喜树碱（CPT）处理诱导细胞DNA损伤,间接免疫荧光法检测ATM蛋白激酶依赖性信号转导通路中DNA损伤（双链断裂）应答相关蛋白〔p53结合蛋白1（53BP1),磷酸化组蛋白H2AX(γ-H2AX)〕的应答特征。结果 MCDB/M199培养基有利于卵巢上皮性肿瘤细胞维持正常形态并减缓纤维化。未经处理前各级别卵巢肿瘤原代细胞中均存在不同程度的内源性损伤(53BP1、γ-H2AX灶点),且随着肿瘤细胞恶性程度的增加,53BP1、γ-H2AX灶点逐渐增多（P <0.05）。X光、CPT可以在卵巢癌原代细胞中诱导大量DNA损伤,提示原代培养的细胞有经典的DNA损伤应答反应。结论 成功建立了卵巢上皮性肿瘤直接分离培养方法,在卵巢上皮性肿瘤发展过程中,ATM转导通路检验点信号可被内源性损伤激活,CPT、X线处理会造成上皮性卵巢癌原代细胞中ATM通路的进一步激活来抑制肿瘤增殖,阻止肿瘤进展。     

KLF4在伽马刀照射所致大鼠放射性脑损伤中的作用机制

目的研究伽马刀立体定向照射大鼠正常脑组织后星形胶质细胞中KLF4及γ-H2AX随照射剂量变化的表达,探讨KLF4与放射性脑损伤的关系。方法成年雄性Wistar大鼠30只,按随机数字表法分为6组,每组5只,分别以不同照射剂量(0、10、20、30、40、50 Gy)照射大鼠右侧尾壳核,照射30 min后处死,并分析不同照射剂量下KLF4、γ-H2AX阳性细胞占星形胶质细胞的百分比,分析KLF4和γ-H2AX的表达与照射剂量之间、KLF4与γ-H2AX之间的线性回归关系。结果 KLF4、γ-H2AX阳性细胞占星形胶质细胞的百分比随照射剂量增加而上升(P<0.05),且KLF4、γ-H2AX的表达与照射剂量、KLF4与γ-H2AX均有显著线性关系(P<0.05)。结论 KLF4与辐射所致大鼠脑星形胶质细胞DNA双链损伤关系密切,其可能是辐射致DNA损伤的关键分子,通过引起DNA双链损伤导致放射性脑损伤。     

AKT抑制剂对鼻咽癌细胞株CNE1的放疗增敏作用

【目的】 探讨Akt抑制剂124005对人鼻咽癌细胞CNE1放射增敏效应及其潜在机制。【方法】 CCK8法检测不同浓度124005对人鼻咽癌CNE1细胞的抑制作用,计算IC50值,选择低于IC50的药物浓度作为增敏浓度,集落形成实验检测放射线加或不加124005以及124005+放射线组联合或不联合自噬抑制剂3-MA对CNE1细胞生存曲线的影响,间接免疫荧光法检测γ-H2AX观察DNA损伤修复和GFP-LC3转染CNE1中自噬标志物LC3的聚集,流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡、免疫印迹法(Western blot)检测Caspase-3、PARP、Beclin 1和LC3-Ⅱ的表达,并检测AKT及下游信号通路的表达,探索Akt抑制剂124005放射增敏效应及其潜在机制。【结果】 124005对CNE1 IC50值为30.5 μmol/L。集落形成实验显示,DEF值放疗+8 μmol/L 124005持续用药组为1.92,放疗+12.5 μmol/L 124005用药72 h组为1.12,共聚焦显微镜观察显示124005联合放疗显著增加了CNE1细胞照射后细胞核内γ-H2AX焦点的聚集和转染GFP-LC3质粒的CNE1细胞内LC3的点状聚集、流式检测124005可以明显提高放射线诱导的CNE1细胞凋亡,凋亡率最高达52.9%。Western blot显示124005可以显著抑制放射后p-AKT及下游p-GSK-3?茁和p-PRAS40的表达,增加放射引起的cleaved caspase-3和cleaved PARP以及Beclin 1和LC3-Ⅱ的表达,应用3-MA可降低124005处理后LC3-Ⅱ的表达水平?放射+124005再联用3 mmol/L 3-MA组的DEF值为1.69,明显低于单纯放射+124005组(DEF=1.97)。 【结论】 124005通过对AKT以及下游通路的抑制,抑制DNA损伤修复,同时增加凋亡和自噬来起到对CNE1细胞株放射增敏的效应。     

γ-H2AX与肿瘤治疗

DNA双链断裂后可诱导位于丝氨酸-139位C端保守区域内的H2AX磷酸化形成γH2AX,组蛋白H2AX在DNA损伤修复、细胞周期检查点调控、基因组稳定的维持和肿瘤抑制中起着重要作用。随着研究的不断深入,其在医学中的应用将越来越广泛。     

AGGF1在结直肠癌细胞DNA损伤修复及化疗敏感性中的作用

目的研究血管生成因子AGGF1在人结直肠癌细胞DNA损伤修复及化疗抵抗中的作用及机制。方法顺铂诱导结直肠 癌细胞株HCT116 细胞DNA损伤模型,运用siAGGF1 及siNC 转染结直肠癌细胞干扰AFFF1 的表达。Western blot 实验检测 AGGF1、γH2AX基因表达水平,免疫荧光法检测顺铂诱导HCT116细胞DNA损伤（双链断裂）后,γH2AX和AGGF1在损伤位点 的募集情况;MTS法检测损伤细胞的增殖情况;免疫组织化学方法检测结直肠癌及癌旁正常组织中AGGF1的表达水平。结果 Western blot结果显示顺铂处理HCT116细胞明显下调AGGF1表达,干扰AGGF1的表达抑制了γH2AX和NBS1;免疫荧光实 验表明AGGF1和γH2AX共定位,细胞增殖实验表明结直肠癌细胞对化疗的敏感性增加（P<0.01）;AGGF1在结直肠癌组织中表 达高于相应癌旁组织（P<0.01）,表明其可能与肿瘤的恶性表型相关。结论下调AGGF1基因可抑制结直肠癌细胞的DNA损伤 修复,提高其对化疗的敏感性,机制上可能与NBS1磷酸化相关。     

γ-H2AX的表达对初诊多发性骨髓瘤患者的预后影响

目的 探讨初诊多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓中γ-H2AX的表达水平及其与患者预后的关系.方法 选择该院初诊的MM患者为病例组,非造血系统肿瘤并经骨髓涂片和活检检查未见明显形态异常者为对照组.采用免疫组织化学染色检测病例组和对照组骨髓中γ-H2AX的表达水平,IPP半定量分析并比较其表达差异,并根据病例组γ-H2AX的表达量将其分为强表达和弱表达两组,探究γ-H2AX表达量与MM患者预后的关系.结果 病例组患者骨髓中γ-H2AX表达显著高于对照组(P＜0.05);且强表达组MM患者γ-H2AX的表达水平明显强于弱表达组(P＜0.05).结论 γ-H2AX在MM患者的骨髓组织中表达水平增多,其强表达预示MM患者较短的生存时间.     

吉西他滨对放射相关DNA损伤修复的影响

目的研究吉西他滨（GEM）在体外对胰腺癌细胞的放疗增敏作用及机制。方法体外培养胰腺癌Pancl细胞株,将其分为空白对照组、单纯照射组、吉西他滨组及吉西他滨联合放疗组（联合放疗组）。采用源皮距（SSD）为100cm,剂量2、4和6Gy的4MV—X线进行细胞照射;运用MTT实验方法选出细胞生长抑制率≤10％的药物浓度（IC10）,即GEM的最佳实验浓度;克隆形成实验观察空白对照组、GEM组、单纯放疗组及联合放疗组胰腺癌细胞Pancl体外增殖情况。流式细胞仪分析上述各组细胞的细胞周期和凋亡改变。免疫印迹法分别检测空白对照组、GEM组、单纯放疗组及联合放疗组DNA损伤以及损伤修复指标ν-H2AX、Rad51、Ku80及p-ATM蛋白的表达。结果GEM在体外具有放射增敏作用。MTT结果显示,GEM在0．04～0．06μmol／L之间为最佳实验浓度。射线照射后,GEM能显著降低胰腺癌细胞的克隆形成能力,即增殖能力。凋亡结果显示,与GEM组及单独放疗组比较,联合放疗组Pancl细胞的凋亡数明显增加,其凋亡率差异有统计学意义（P＜0．05）;细胞周期检测结果表明,GEM作用于胰腺癌细胞后,S期细胞水平明显升高。胰腺癌细胞DNA损伤指标ν-H2AX蛋白表达水平在GEM组,单纯放疗组及联合放疗组均增加,联合放疗组较GEM组有进一步升高。与空白对照组、单纯照射组、GEM组比较,联合放疗纽胰腺癌细胞中DNA损伤修复指标Rad51、Ku80及p-ATM蛋白的表达均降低。结论GEM对胰腺癌放射治疗有增敏作用。其机制涉及诱导细胞凋亡,改变Pancl细胞生长周期,并通过抑制射线照射后胰腺癌细胞DNA损伤修复,间接对胰腺癌的放疗起增敏作用。     

电离辐射对Jurkat细胞γ-H2AX蛋白表达的影响

目的：探讨电离辐射诱导Jurkat细胞γ-H2AX蛋白表达的影响。方法：采用流式细胞术（FCM）分别检测2.0 Gy X线照射后不同时间点（0、0.5、1.0、4.0、8.0、16.0及24.0 h）和0.5、1.0、2.0、4.0及6.0 Gy不同剂量X线照射后Jurkat细胞γ-H2AX表达变化,并于量效实验同时进行Jurkat细胞凋亡率检测。结果：与假照组比较,2.0 Gy X线照射后Jurkat细胞γ-H2AX表达水平于1.0 h内达最大值,1.0 h后开始呈时间依赖性下降,16.0 h仍高于假照水平（P<0.01）,24.0 h降至与对照无明显差异;不同剂量X线照射后1.0 h,Jurkat细胞γ-H2AX的表达水平在0.5 Gy以内没有明显变化,0.5 Gy以后呈剂量依赖性升高,4.0 Gy时达最高水平（P<0.01）,6.0 Gy时表达略下降;不同剂量X线照射后8.0 h,γ-H2AX表达在0～4.0 Gy范围内随剂量增大而逐渐升高,4.0 Gy时达到最高水平（P<0.01）,6.0 Gy时表达有所下降。结论：X射线能诱导Jurkat细胞γ-H2AX表达增高,在一定范围内存在时间和剂量依赖关系。     

DNA双链损伤修复机制在糖尿病致动脉粥样硬化中的作用研究

【摘要】 目的 探讨DNA双链损伤修复机制在糖尿病致动脉粥样硬化中的作用。方法 将Wistar雄性大鼠随机分为3组,即正常对照组（A组）,主动脉内膜球囊损伤组（B组）,糖尿病模型+主动脉内膜球囊损伤组（C组）。C组采用链脲霉素（STZ）一次性腹腔注射建立糖尿病模型,注射STZ 72 h后,B组与C组大鼠均被施行主动脉球囊损伤术,术后分别予以高脂饲料饲养;A组予以基础饲养,每周监测血糖水平及体质量变化。分别于术后2周、4周、6周、8周,取大鼠主动脉进行老化β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色、HE染色,并计算主动脉内膜面积、中膜面积、内中膜面积比,免疫组织化学染色检测磷酸化共济失调毛细血管扩张突变基因（ATM）、磷酸化细胞周期检测点激酶2（CHK2）、磷酸化P53、磷酸化组蛋白2A变异体（γ-H2AX）的表达。结果 术后2周,A组大鼠主动脉内膜老化SA-β-gal染色呈阴性,B组和C组大鼠老化SA-β-gal染色阳性区域较少且散在分布;HE染色示B组和C组大鼠主动脉内膜开始出现少量增生。术后4周,B组和C组大鼠主动脉内膜老化SA-β-gal染色呈阳性;HE染色示C组大鼠主动脉内膜增厚明显,主动脉内膜面积较A组和B组增加（P <0.05）。术后6周,C组大鼠主动脉内膜老化SA-β-gal染色呈阳性且面积较B组增加;HE染色示C组大鼠主动脉壁形成典型动脉粥样硬化斑块,斑块内平滑肌细胞排列紊乱,泡沫细胞聚集,管腔狭窄,与A组、B组相比,主动脉内中膜面积比增加（P <0.05）。术后8周,C组大鼠主动脉内膜老化染色阳性面积较B组增加;HE染色示C组大鼠主动脉腔明显狭窄,增生部分突入管腔,内膜面积、内中膜面积比较A组和B组增加（P <0.05）;免疫组化染色示C组大鼠主动脉内膜中γ-H2AX、磷酸化ATM、磷酸化CHK2、磷酸化P53表达均呈阳性,上述蛋白在B组大鼠主动脉内膜中表达均呈弱阳性。结论 糖尿病状态下,血管内皮细胞衰老激活,DNA双链损伤加剧,双链损伤修复机制参与了糖尿病致动脉粥样硬化的发生发展。     

自噬参与促进AFB1致肝细胞DNA损伤的修复进程

目的探讨黄曲霉毒素B1(AFB1)肝毒性修复进程中细胞自噬的作用。方法以经50μmol/L AFB1预处理24 h的永生化人正常肝L02细胞建立模型,检测AFB1处理撤除不同时间点的细胞DNA双链损伤指标γH2AX蛋白和自噬标志物LC3-Ⅱ蛋白的表达水平;采用免疫荧光法检测AFB1撤除后细胞中γH2AX蛋白荧光焦点和自噬体形成情况;在AFB1撤除后联合应用自噬抑制剂3-MA进行干预实验,检测细胞内γH2AX蛋白的表达水平。结果L02细胞中γH2AX蛋白的动态表达在AFB1处理撤除12 h后达到最高,并在24 h后逐渐降低;自噬蛋白LC3-Ⅱ和自噬体的形成在AFB1处理撤除后逐渐增强;3-MA可明显减缓AFB1撤处理后细胞内γH2AX蛋白的降低进程。结论细胞自噬参与了AFB1诱导肝细胞毒性损伤的修复进程,与促进DNA损伤的修复有关。     

TSA可能通过抑制APE1 BER功能增强顺铂的肺腺癌细胞毒性

目的 探讨曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对顺铂诱导的细胞毒性的影响.方法 给予0、250、500 nmol/L TSA预处理A549细胞24 h后,分别联合0、5、10、15 μmol/L顺铂处理A549细胞24 h后,通过0、0.5、1、2μmol/L APE1 InhibitorⅢ调控APE1 BER功能,应用CCK-8方法检测细胞增殖率,AP内切酶活性实验检测APE1 BER功能,通过流式细胞仪检测细胞凋亡水平,immunoblot检测γ-H2AX表达水平.结果 TSA联合顺铂处理A549细胞明显增强顺铂的细胞增殖抑制,并促进顺铂诱导的细胞凋亡;随着TSA浓度的升高APE1内切酶活性逐渐减弱,TSA联合顺铂促进顺铂诱导的γ-H2AX表达;利用inhibitorⅢ抑制APE1内切酶活性,促进顺铂诱导细胞增殖抑制和凋亡水平.结论 TSA可能通过抑制APE1 BER功能增强顺铂诱导的细胞毒性反应.     

脑胶质瘤放射敏感性基因研究的进展

脑胶质瘤是颅内常见的恶性肿瘤之一.在脑胶质瘤的综合治疗方法中,放射治疗与手术治疗一样占有重要地位.脑胶质瘤对放射线的敏感程度直接影响放射治疗疗效.脑胶质瘤内在的放射敏感性基因及其引起的细胞凋亡、细胞周期的变化和放射线导致的DNA损伤修复等,都与脑胶质瘤的放射敏感性密切相关.与细胞凋亡相关基因和DNA修复相关基因相关的脑胶质瘤放射敏感性基因,正逐渐成为人们研究的热点,还有其他的一些脑胶质瘤放射敏感性基因也受到人们的关注.现就脑胶质瘤放射敏感性基因研究的现状和进展作一综述.