电离辐射对成纤维细胞中透明质酸蛋白及透明质酸酶1mRNA表达水平的影响

目的:观察电离辐射对成纤维细胞中透明质酸（HA）蛋白及透明质酸酶1（HAase1） mRNA表达水平的影响,并探讨其在放射性臂丛神经损伤发病机制中的作用。方法: 成纤维细胞分别采用0.5、1.0、2.0、4.0和6.0 Gy X射线照射,作为 5个剂量组,同时设假照射对照组（0 Gy）。透射电镜观察0、2.0、4.0和6.0 Gy X射线照射后48 h成纤维细胞的形态变化。采用ELISA法和RT-PCR法检测0、0.5、1.0、2.0、4.0、和6.0 Gy X射线照射后24及48 h成纤维细胞中HA蛋白及HAase1 mRNA表达水平的变化。结果：2.0 Gy X射线照射后48 h细胞染色质凝聚,有空泡形成;4.0 Gy X射线照射后48 h细胞核凹陷、染色质断裂;6.0 Gy X射线照射后细胞核凹陷、染色质固缩、出现空泡,部分胞浆溶解。不同剂量X射线照射后24 h HA蛋白表达均明显增高,与0 Gy组比较差异有统计学意义(P<0.05);0.5～2.0 Gy X射线照射后48 h HA蛋白表达变化不明显,4.0和6.0 Gy组与 0 Gy组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。0～6.0 Gy X射线照射后24 h HAase1 mRNA水平明显增高,与0 Gy组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。1.0、4.0和6.0 Gy X射线照射后48 h HAase1 mRNA水平明显增高,与0 Gy组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论：电离辐射可诱导人成纤维细胞中HA蛋白表达和HAase1 mRNA水平增高,可能对放射性臂丛神经损伤的发生发展起到一定的作用。     

电离辐射对Jurkat T细胞周期进程的影响

目的：探讨电离辐射诱导Jurkat T细胞损伤过程中细胞周期进程的变化规律。方法：采用流式细胞术 (FCM) 检测低剂量（0.075 Gy）和较大剂量（0.5、1.0、2.0、4.0及6.0 Gy）X射线照射后Jurkat T细胞周期进程变化的时间-效应关系和剂量-效应关系。结果：时间-效应关系研究发现,2.0 Gy X射线照射后Jurkat T细胞相继发生S期延迟和G₂期阻滞,S期细胞百分率于照射后立即增加(P<0.001),而G₂+M期细胞百分率照射后8 h开始显著增加（P<0.001）。剂量-效应关系研究发现,75 mGy低剂量X射线照射即可诱导Jurkat T细胞发生S期延迟（P<0.001）和G₂期阻滞（P<0.05）;0.5~6.0 Gy较大剂量X射线照射后,Jurkat T细胞发生S期延迟和G₂期阻滞。与假照组相比较,G₀/G₁期细胞百分率显著降低（P<0.001）,在0.5~6.0 Gy内具有剂量依赖性,而S期和G₂+M期细胞百分率显著升高（P<0.05或P<0.001）。结论：X射线照射可以改变Jurkat T细胞周期进程,诱导其相继发生S期延迟和G₂期阻滞,在0.5~6.0 Gy内具有剂量依赖性。     

X射线对Jurkat和EL-4细胞周期进程的影响

目的：探讨较大剂量X射线照射对Jurkat和EL-4 2种T淋巴细胞周期进程的影响。方法：采用碘化丙啶（PI）荧光标记及流式细胞术（FCM）分别检测2.0 Gy X射线照射后不同时间点（0、4、8、16、24和48 h）Jurkat与EL-4细胞周期进程变化的时间-效应关系和1.0、2.0和4.0 Gy不同剂量X射线照射后两者的剂量-效应关系。结果：与各时间点对应的假照组比较,2.0 Gy X射线照射后Jurkat细胞G₀/G₁期和S期细胞百分率降低（P<0.01）,G₂+M期细胞百分率增高（P<0.01）,于照射后24 h变化最为显著;EL-4细胞G₂+M期细胞百分率于照射后4 ~ 8 h增高（P<0.01）,G₀/G₁期细胞百分率于照射后8 ~ 48 h增高（P<0.05或P<0.01）,S期细胞百分率于照射后8 ~ 24 h降低（P<0.01）。1.0 ~ 4.0 Gy X射线照射后16 h,随着剂量的增加,与假照组比较,Jurkat细胞G₀/G₁期和S期细胞百分率降低（P<0.05或P<0.01）,G₂+M期细胞百分率增加（P<0.01）;随着剂量的增加,与假照组比较,EL-4细胞G₀/G₁期细胞百分率升高（P<0.01）,S期细胞百分率降低（P<0.01）,G₂+M期细胞百分率仅在4.0 Gy X射线照射后显著增高（P<0.01）。结论：1.0 ~ 4.0 Gy X射线照射可以改变Jurkat与EL-4细胞周期进程,诱导Jurkat细胞发生G₂期阻滞,EL-4细胞发生G₁期和G₂期阻滞。     

pshuttle-Egr-1-hSmac质粒联合X线照射对乳腺癌MDA-MB-435细胞增殖的抑制作用

目的:构建pshuttle-Egr-1-hSmac质粒并转染人乳腺癌MDA-MB-435细胞,观察其抑制肿瘤细胞的辐射增敏作用。方法：转染pshuttle-Egr-1-hSmac质粒的MDA-MB-435细胞经过2 Gy X线照射不同时间（4、8、12、24 和48 h）和0.5 ~ 5.0 Gy X线照射后24 h收集细胞,采用RT-PCR和Western blotting法检测Smac mRNA及其蛋白表达。将细胞分为对照组、pshuttle质粒组、pshuttle-Egr-1-hSmac 质粒组、2 Gy 组、pshuttle+2.0 Gy组 和pshuttle-Egr-1-hSmac+ 2.0 Gy组,MTT法检测各组细胞增殖;克隆形成实验检测细胞存活能力;Annexin Ⅴ-FITC双染法检测细胞凋亡;PI单染法检测细胞周期。结果:对照组和pshuttle质粒组MDA-MB-435细胞中Smac mRNA无表达,而pshuttle-Egr-1-hSmac质粒组MDA-MB-435细胞Smac mRNA表达水平随时间延长逐渐升高,于24和48 h时表达水平最高;经0.5 ~ 5.0 Gy X线照射后24 h MDA-MB-435细胞Smac mRNA表达水平随照射剂量增加而逐渐增加,在2.0和5.0 Gy X线照射后Smac mRNA表达水平最高。pshuttle-Egr-1-hSmac质粒组4、8、12和24 h后Smac蛋白表达水平逐渐升高,24 h后表达水平最高。经过0、0.5、1.0、2.0和5.0 Gy X线照射后24 h Smac蛋白表达水平逐渐升高,尤其以5.0 Gy X线照射时表达水平最高。MTT法检测时程效应,2.0 Gy、pshuttle+2.0 Gy和pshuttle-Egr-1-hSmac+2.0 Gy质粒组24、48和72 h细胞A490值明显低于对照组（P<0.01）;剂量效应,pshuttle-Egr-1-hSmac质粒组1.0～5.0 Gy X线照射后,MDA-MB-435细胞A490值明显低于0 Gy X线照射(P<0.05或P<0.01)。pshuttle-Egr-1-hSmac质粒组细胞存活分数明显低于对照组（P<0.01）。pshuttle-Egr-1-hSmac+2.0 Gy组细胞凋亡率明显高于2.0 Gy组（P<0.01）,G0/G1期和S期细胞百分率明显低于2.0 Gy照射组（P<0.01）,G2/M期细胞百分率明显高于2.0 Gy组（P<0.01）。结论：X线照射能增加pshuttle-Egr-1-hSmac质粒转染的MDA-MB-435细胞有效表达Smac mRNA及蛋白,能抑制细胞存活,且诱导G2/M期阻滞和凋亡增加;Smac基因联合放射治疗可明显增加乳腺癌细胞的放射敏感性。     

辐射对淋巴瘤EL-4细胞p21基因转录及蛋白表达的影响

目的观察辐射对淋巴瘤EL-4细胞P21蛋白表达及基因转录的影响。方法应用RT-PCR方法检测经辐射诱导的淋巴瘤EL-4细胞中p21基因转录的时程和量效变化,采用流式细胞术检测P21蛋白表达的时程和量效变化。结果 4.0Gy X射线照射后p21基因转录水平立即增高,至照射后4 h达峰值,持续至照射后24 h。4.0 Gy X射线照射后8 h EL-4细胞p21蛋白表达开始增高,24 h达峰值,持续至照后72 h(<0.01)。0.5～6.0 Gy X射线照射后4 h,EL-4细胞p21基因转录水平均高于对照组,其中以4.0 Gy X射线照射后基因转录水平最高,1.0～6.0Gy X射线照射后,EL-4细胞p21蛋白表达均明显增高(<0.05)。结论辐射可诱导淋巴瘤EL-4细胞P21蛋白表达及基因转录,并呈时间和剂量依赖关系。     

离辐射对小鼠EL-4淋巴瘤细胞caspase-3蛋白表达的影响

目的：观察电离辐射对caspase-3蛋白表达的影响。方法：采用体外传代培养的小鼠EL-4淋巴瘤细胞为实验材料；采用单克隆抗体免疫荧光标记，FACScan流式细胞仪(FCM)检测蛋白表达的变化；采用PI荧光标记及FCM测定细胞凋亡的变化；量效实验, 观察0.5、1.0、2.0、4.0及6.0 Gy X射线照射后24 h EL-4细胞caspase-3蛋白表达及细胞凋亡的变化；时效实验, 观察4.0 Gy照射后2、4、8、12、24、48及72 h EL-4细胞caspase-3蛋白表达的变化。结果：量效实验表明，0.5、2.0、4.0及6.0 Gy X射线照射后24 h EL-4细胞中caspase-3蛋白表达均明显增高，与假照射对照组比较，差异具有显著性 (P<0.05或P<0.01)。0.5、1.0及4.0 Gy 照射后24 h EL-4细胞凋亡明显增高，与假照射对照组比较，差异具有显著性 (P<0.05或P<0.01)。 时效实验表明，4.0 Gy照射后8、12及24 h EL-4细胞中caspase-3蛋白表达均明显增高, 与同时间点假照射对照组比较，差异具有显著性 (P<0.01或P<0.001)。结论：电离辐射可诱导EL-4细胞caspase-3蛋白表达增高。同时诱导EL-4细胞凋亡。     

不同剂量X射线诱导体内及体外小鼠巨噬细胞CD14的剂量效应关系

目的：观察不同剂量X射线照射在体内及体外对小鼠巨噬细胞CD14表达的影响。方法：采用流式细胞术检测巨噬细胞表面CD14阳性细胞数。体内实验选择16 h、体外实验选择4 h,低剂量为0.05～0.20 Gy、高剂量为0.5～6.0 Gy。 结果：整体照射时,低剂量X射线使CD14表达明显增强,而较高剂量X射线（大于2.0 Gy）明显抑制CD14表达;在体外照射时,0.075 Gy和2.000 Gy以内的较高剂量X射线也使CD14表达明显增强,而4.0~6.0 Gy 的剂量使J774A.1细胞的CD14表达明显受到抑制。 结论：低剂量X射线在体内及体外均能诱导小鼠巨噬细胞的CD14表达;小于2.0 Gy时也能增强CD14的表达,而剂量大于2.0 Gy时CD14的表达呈剂量依赖性下降,而且在体外的变化更明显。     

不同剂量X射线诱导小鼠腹腔巨噬细胞IL-18表达的量效关系

目的：观察X射线照射对小鼠腹腔巨噬细胞IL-18表达的影响。方法：昆明种小白鼠80只,随机分为10组（每组8只）,即假照组、 4个单次低剂量X射线照射组（0.05、0.075、0.1 和0.2 Gy）和5个单次高剂量X射线照射组（0.5、1.0、2.0、4.0及6.0 Gy）,X 线全身照射（WBI）后16 h处死小鼠,取腹腔巨噬细胞,用RPMI 1640培养基,在37℃、5％ CO₂培养箱中培养72 h,留取上清液,采用ELISA法检测小鼠腹腔巨噬细胞IL-18的分泌量。结果：0.05 Gy X射线WBI后,IL-18的表达有所增高,检测值为(59.53±3.68)ng•L^-1,与假照组(51.29 ±3.26)ng•L^-1比较差异无显著性（P＞0.05）;0.075 Gy X射线WBI后,IL-18的表达量增高至(122.78±8.07)ng•L^-1,与假照组比较差异有显著性(P<0.01);随着X射线辐射剂量增加至0.1、0.2 、0.5和1.0 Gy,IL-18的表达量增高至(135.32±5.27)、(149.40±16.54)、(200.42±15.42)及(347.59 ±17.88)ng•L^-1,1.0 Gy照射达到峰值,随后IL-18表达呈下降趋势;2.0、4.0及6.0 Gy WBI后,IL-18的表达量分别为(229.49±14.68)、(253.79±6.69)及(223.32 ±20.85)ng•L^-1,均高于假照组(P<0.01)。结论：高、低剂量X射线照射均能诱导小鼠腹腔巨噬细胞IL-18的表达。     

X射线对小鼠脾细胞内P16、cyclin D1和CDK4表达的影响

目的:探讨X射线对小鼠脾细胞内P16、cyclin D1和CDK4表达的影响.方法:采用细胞间接荧光标记法、FACScan流式细胞仪检测不同剂量X射线全身照射后小鼠脾细胞内P16、cyclin D1和CDK4三种蛋白表达的时程变化和量效关系.结果:2.0 Gy X射线照后24 h小鼠脾细胞P16表达明显高于假照组;CDK4表达水平在照后8 h明显降低,持续至照后72 h仍低于正常水平.周期蛋白cyclin D1表达轻度下调.不同剂量照射后P16蛋白表达呈剂量依赖性增加,1.0～4.0 Gy组与假照射组相比显著增多(P＜0.05,P＜0.01);cyclin D1蛋白表达随剂量升高有降低趋势;CDK4亦呈剂量依赖性降低,0.5～6.0 Gy组与假照组比较差异具有显著性(P＜0.05,P＜0.01).结论:P16/cyclin D1/CDK4/pRb通路在电离辐射诱导脾细胞G1期阻滞中可能起十分重要作用.     

电离辐射对Jurkat T细胞凋亡与坏死的影响

目的：研究电离辐射诱导Jurkat T细胞凋亡与细胞坏死的变化规律,探讨电离辐射作用后细胞的死亡模式与机理。方法：采用Annexin V-EGFP和PI 双染、流式细胞术(FCM)检测不同剂量（0.075、0.500、1.000、2.000、4.000和6.000 Gy）X射线照射后Jurkat T细胞凋亡与细胞坏死的时间-效应关系和剂量-效应关系。结果：时间-效应关系,2.000 Gy X射线照射后,与假照组比较,Jurkat细胞凋亡百分率在照射后18 h显著增加,至24 h始终维持在较高水平（P＜0.001）;细胞坏死百分率于照射后4 h显著增加,12 h 达峰值,至48 h始终维持在较高水平（P＜0.001）。剂量-效应关系,0.075Gy X射线照射后18 h,Jurkat T细胞凋亡百分率和细胞坏死百分率与假照组相比较未见明显变化（P＞0.05）。2.000~6.000 Gy较大剂量X射线照射后18 h,细胞凋亡百分率和细胞坏死百分率与假照组比较均呈剂量依赖性增加（P＜0.001）。结论：2.000 Gy以上剂量X射线可以诱导Jurkat T细胞发生凋亡和坏死,细胞坏死比细胞凋亡出现时间更早,持续时间更长。     

KLF4在伽马刀照射所致大鼠放射性脑损伤中的作用机制

目的研究伽马刀立体定向照射大鼠正常脑组织后星形胶质细胞中KLF4及γ-H2AX随照射剂量变化的表达,探讨KLF4与放射性脑损伤的关系。方法成年雄性Wistar大鼠30只,按随机数字表法分为6组,每组5只,分别以不同照射剂量(0、10、20、30、40、50 Gy)照射大鼠右侧尾壳核,照射30 min后处死,并分析不同照射剂量下KLF4、γ-H2AX阳性细胞占星形胶质细胞的百分比,分析KLF4和γ-H2AX的表达与照射剂量之间、KLF4与γ-H2AX之间的线性回归关系。结果 KLF4、γ-H2AX阳性细胞占星形胶质细胞的百分比随照射剂量增加而上升(P<0.05),且KLF4、γ-H2AX的表达与照射剂量、KLF4与γ-H2AX均有显著线性关系(P<0.05)。结论 KLF4与辐射所致大鼠脑星形胶质细胞DNA双链损伤关系密切,其可能是辐射致DNA损伤的关键分子,通过引起DNA双链损伤导致放射性脑损伤。     

X射线对新生儿脐血VEGF的影响

目的 研究X射线对脐血细胞中血管内皮细胞生长因子（VEGF）的影响。方法 使用不同剂量（0、2、4、8、16Gy）的X射线照射脐血。用逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）法及定量PCR法研究照射后体外培养24h的脐血细胞中的VEGF mRNA表达水平。结果 经2、4、8、16GyX射线照射后24h,脐血细胞中的VEGF mRNA表达水平较正常对照组均显著升高,其中4.0GyX射线照射后24h的脐血VEGF mRNA表达水平升高最显著。结论 不同剂量X射线照射后,脐血细胞中VEGF mRNA表达增强,可能对细胞具有辐射防护作用。     

pNEgr-mIL-12真核表达重组质粒的构建及在COS-7细胞和黑色素瘤B16细胞中的表达

目的:构建含辐射敏感启动子的pNEgr-mIL-12真核表达载体,转染哺乳动物细胞后经不同剂量X射线照射,检测mIL-12的表达.方法:限制性内切酶酶切构建pNEgr-mIL-12表达载体;脂质体转染法转染COS-7细胞和B16细胞;ELISA法检测mIL-12p70表达.结果:①pNEgrmIL-12重组质粒转染瞬时表达细胞COS-7细胞,经不同剂量X射线照射后,照射组mIL-12表达量比未照射组明显增高(P＜0.05,P＜0.001),约为未照组的1.5～2.5倍;在2.0 Gy照后表达增高最为明显,表达于照后4 h达峰值,在观察的72h内保持于较高水平;②转染pNEgr-mIL-12的B16细胞于2.0 Gy照后增高明显,为未照射组的1.5倍;并且经2.0 Gy X射线照射后随时间延长表达水平逐渐增高;低至0.05 Gy的剂量对两种细胞亦均有激活作用.结论:pNEgr-mIL-12重组质粒具有辐射激活下游基因表达的功能,且经不同剂量X射线照射后表达均有增强,尤以2.0 Gy照射组作用明显,但在低剂量50、75、100 mGy照后表达水平增高与对照组差异均有显著性.     

携带TRAIL基因的条件复制型腺病毒载体的构建及其辐射诱导表达

目的：构建携带早期生长反应基因-1（Egr-1）启动子和肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）基因的条件复制型腺病毒载体pAd-Egr1-TRAIL-hTERT-E1A-E1Bp-E1B55K,观察其联合2.0 Gy X射线照射对人乳腺癌MDA-MB-231细胞TRAIL表达的影响。方法：以pMD18T-Egr1为模板,成功克隆Egr-1序列,将TRAIL基因置于下游,构建条件复制型腺病毒载体pShuttle-Egr1-TRAIL-hTERT-E1A-E1Bp-E1B55K（CRAd.pEgr1-TRAIL）,病毒包装后感染细胞,给予X线照射,利用Real time PCR法检测TRAIL mRNA　表达水平,ELISA法检测TRAIL蛋白表达水平。实验设对照（control）组、2 Gy组、空病毒（CRAd.p）组、CRAd.p + 2 Gy组、CRAd.p-Egr1-TRAIL组和CRAd.p-Egr1-TRAIL + 2 Gy组。结果：成功构建pAd-Egr1-TRAIL-hTERT-E1A-E1Bp-E1B55K,并进行了病毒包装。以病毒滴度5感染复数（MOI）感染MDA-MB-231细胞24 h后给予2.0 Gy X射线照射,4 h后MDA-MB-231各组细胞中TRAIL mRNA表达水平开始升高,8h后各组表达达峰值;CRAd.pEgr1-TRAIL + 2.0 Gy组mRNA表达水平升高最为明显,约为对照组的160倍（P<0.01）,随后表达水平逐渐下降;6 h后各组MDA-MB-231细胞中TRAIL蛋白表达水平开始升高,24 h后各组TRAIL蛋白表达水平达峰值,48 h后TRAIL蛋白表达水平下降,但仍未降至正常水平;与其他各组比较,CRAd.pEgr1-TRAIL + 2.0 Gy组TRAIL蛋白表达水平升高最明显（P<0.01）。结论：成功获得条件复制型腺病毒载体,联合2.0 Gy X射线照射可使MDA-MB-231细胞中TRAIL mRNA和蛋白表达水平升高。     

Egr1介导的人截短型凋亡诱导因子表达载体的构建及其在乳腺癌MCF-7细胞中的辐射诱导表达规律

目的: 克隆人截短型凋亡诱导因子（AIF）cDNA序列,并构建早期生长反应因子1（Egr1）介导的重组表达载体pcDNA3.1-Egr1-AIFΔ1-480（pEgr1-AIFΔ1-480）,观察其在人乳腺癌MCF-7细胞中的辐射诱导表达规律。方法: 以人白血病Jurkat细胞mRNA为模板,RT-PCR法扩增获得人AIFΔ1-480,与pMD18T载体连接后行全自动测序,限制性内切酶切取pMD19T-Egr1中Egr1片段,并利用基因重组技术构建Egr1启动子介导的人AIFΔ1-480表达质粒pEgr1-AIFΔ1-480。实验分为对照组、 pcDNA3.1组、pAIFΔ1-480组和 pEgr1-AIFΔ1-480组。各组质粒分别转染MCF-7细胞,Western blotting法检测AIF及AIFΔ1-480蛋白的辐射诱导表达时程-效应（2.0 Gy照射后0、2、4、12、24和48 h）和剂量-效应（0、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0 Gy照射后24 h）规律。结果: 经测序证实,RT-PCR获得的人AIFΔ1-480基因与预期一致,pEgr1-AIFΔ1-480经PCR和酶切鉴定完全正确;各组MCF-7细胞经2.0 Gy照射后0～48 h,AIF蛋白在各组中均有表达,从4 h开始显著增加,4、12、24和48 h各组AIF表达与0 h组比较差异有统计学意义（P<0.05）,48 h达到最大;而在pAIFΔ1-480和pEgr1-AIFΔ1-480组,AIFΔ1-480从2 h开始表达,4、12、28和48 h各组AIFΔ1-480表达与2 h比较差异有统计学意义（P<0.05）,24 h达到峰值;而且24和48 h时pEgr1-AIFΔ1-480组AIFΔ1-480表达较pAIFΔ1-480组显著增加（P<0.05）。各组MCF-7细胞经0～5.0 Gy照射后24 h,各组均有AIF蛋白表达,而AIFΔ1-480只在pAIFΔ1-480和pEgr1-AIFΔ1-480组表达,二者均随着剂量增加而增加,0.2、0.5、1.0、2.0和5.0 Gy照射后各组AIF表达与0 Gy比较差异有统计学意义（P<0.05）,在5.0 Gy照射时达到最大,相同照射剂量pEgr1-AIFΔ1-480组AIFΔ1-480表达高于pAIFΔ1-480组。结论: 成功构建Egr1介导的人截短型AIF重组表达载体pEgr1-AIFΔ1-480, AIF和AIFΔ1-480蛋白在MCF-7细胞中的表达随照射时间延长和照射剂量增加而增加。     

电离辐射对HepG2细胞系细胞周期的影响

目的:探讨放疗对人肝癌细胞系HepG2细胞细胞周期的影响.方法:以人肝癌细胞系HepG2细胞为研究对象:分别以2Gy、4Gy、6Gy、8Gy和10Gy吸收剂量的6MV-X线照射HepG2细胞,照射后培养24h;以4Gy吸收剂量的6MV-X线照射HepG2细胞,照射后分别培养6h、12h、24h和48h;以未予射线照射的同步培养细胞为对照.采用流式细胞技术检测不同照射剂量及照射后不同时间点HepG2细胞细胞周期的变化.结果:2Gy、4Gy、6Gy、8Gy和10Gy剂量6MV-X线照射后培养24h,HepG2细胞表现为随着照射剂量的增加,G1期细胞百分率下降;6Gy、8Gy和10Gy剂量组HepG2细胞表现为G2/M期阻滞.4GyX线照射后培养6h,即可观察到G2/M期阻滞,阻滞峰值为正常的56倍;然后细胞被释放,再度进入细胞周期或死亡.结论:不同剂量X线照射人肝癌细胞系HepG2细胞,大分割剂量组主要诱导G2/M期阻滞;4Gy剂量射线照射后,S期细胞阻滞明显,并与G2/M期阻滞同步解除,阻滞解除后启动增殖或进入凋亡.     

X线对肺癌细胞株A549 XRCC2和XRCC3表达水平的影响

目的:研究X线对肺癌细胞X线修复交叉互补基因2((X-ray repair cross complementing gene 2,XRCC2))与XRCC3表达水平的影响,探讨DNA同源重组修复机制在肺癌放疗过程中的作用?方法:以噻唑蓝还原法(MTT)检测X线对肺腺癌细胞株A549抑制率的影响,实时荧光定量RT-PCR技术检测 X线处理肺癌细胞(人肺腺癌细胞株 A549)后XRCC2和XRCC3 mRNA的表达水平?结果:肺癌细胞抑制率多数情况下随X线照射时间的延长及照射剂量的增大,细胞增殖抑制率增加,呈照射时间依赖性(P < 0.05)和剂量依赖性(P < 0.05),除了16 Gy组与32 Gy组比较无统计学意义(P=0.211)?X线照射后肺癌细胞XRCC2与XRCC3 mRNA的表达水平均先增高后降低,在照射后48 h表达水平达高峰(P < 0.05),且随着照射剂量的增大,XRCC2与XRCC3 mRNA的表达水平也随之增加(P < 0.05)?结论:X线照射可引起肺癌细胞XRCC2与XRCC3 mRNA表达水平的明显改变,表明DNA同源重组修复机制可能在肺癌放疗耐受中起了重要的作用?     

电离辐射和5-氟尿嘧啶对EL-4细胞周期的解偶联作用

目的：研究电离辐射和5-氟尿嘧啶（5-FU）对EL-4细胞周期解偶联的时间-效应关系和剂量-效应关系。方法：取指数生长期EL-4细胞,采用不同照射剂量（0、1.0、2.0和4.0 Gy）电离辐射和不同浓度5-FU（0、0.001、0.010、0.100和1.000 mg•L^-1）处理EL-4细胞,于0、4、8、16、24和48 h后分别收集细胞,碘化丙啶（PI）荧光标记及流式细胞术（FCM）检测细胞倍体变化。结果：与假照组比较,2.0 Gy X射线照射后,EL-4细胞二倍体细胞百分率在照射后8~24 h显著增加（P<0.05或P<0.01）,48 h恢复至正常水平;四倍体细胞百分率在照射后8~48 h显著降低（P<0.05或P<0.01）;八倍体细胞百分率在照射后16~24 h显著降低（P<0.05）。1.0~4.0 Gy X射线照射后16 h,与假照组比较,二倍体细胞百分率剂量依赖性增加（P<0.05或P<0.01）,四倍体细胞百分率呈剂量依赖性下降（P<0.01）,八倍体细胞百分率变化不显著。0.100 mg•L^-1 5-FU 给药后,与0 mg•L^-1组比较,EL-4细胞二倍体细胞百分率在给药后16~48 h显著降低（P<0.01）;四倍体细胞百分率在给药后8~24 h显著增加（P<0.05 或 P<0.01）,48 h回降;八倍体细胞百分率在给药后4~16 h显著增加（P<0.05）。不同剂量5-FU给药后16 h,与0 mg•L^-1组比较,EL-4细胞二倍体细胞百分率显著降低（P<0.05或P<0.01）,四倍体细胞百分率显著增加（P<0.05或P<0.01）,二者变化在0.001~1.000 mg•L^-1剂量范围内呈剂量依赖性;八倍体细胞百分率仅在0.010和0.100 mg•L^-1组显著增加（P<0.05或P<0.01）。结论：1.0~4.0　Gy电离辐射无诱导EL-4细胞发生细胞周期解偶联作用,0.010~0.100 mg•L^-1 5-FU可以诱导EL-4细胞发生细胞周期解偶联。     

沉默PeroxiredoxinⅠ基因增强乳腺癌细胞放射敏感性及其作用机制的实验研究

目的采用RNA干扰技术沉默过氧化物酶Ⅰ(peroxiredoxinⅠ,PrxⅠ)基因,观察乳腺癌MCF-7细胞对X线敏感性变化,探讨其作用机制。方法将PrxⅠshRNA真核表达载体pGPU6-PrxⅠ和阴性对照质粒pGPU6-HK转染入乳腺癌MCF-7细胞中,经G418稳定筛选后RT-PCR和Western blot检测PrxⅠ表达变化。6 MV X线照射6 Gy后48 h,流式细胞术检测细胞的活性氧水平、细胞周期和细胞凋亡;MTT法测定细胞增殖能力;克隆形成实验观察克隆形成率,计算Do、N、Dq、SF2及放射增敏比(sensitive enhancement ratio,SER)等放射生物学参数,Western blot法检测Rad51及γ-H2AX蛋白变化。结果获得2个稳定转染细胞株:pGPU6-HK和pGPU6-PrxⅠ。RT-PCR和Western bolt检测显示pGPU6-PrxⅠ组中PrxⅠmRNA和蛋白表达均明显抑制。6 Gy的X线照射48 h后,pGPU6-PrxⅠ及联合照射(ionizing radiation,IR)组细胞中的活性氧水平、G1期细胞和细胞凋亡明显增加,而细胞增殖能力和S期...     

Construction of Egr1-mediated human truncated apoptosis inducing factor expression vector and its expression regularity induced by radiation in breast cancer MCF-7 cells

目的:克隆人截短型凋亡诱导因子(AIF) cDNA序列,并构建早期生长反应因子1(Egr1)介导的重组表达载体pcDNA3.1-Egr1-AIF△1-480(pEgr1-AIF△1 -480),观察其在人乳腺癌MCF-7细胞中的辐射诱导表达规律.方法:以人白血病Jurkat细胞mRNA为模板,RT-PCR法扩增获得人AIF△1-480,与pMD18T载体连接后行全自动测序,限制性内切酶切取pMD19T-Egr1中Egr1片段,并利用基因重组技术构建Egr1启动子介导的人AIF△1-480表达质粒pEgr1-AIR1-480.实验分为对照组、pcDNA3.1组、pAIF△1-480组和pEgr1-AIF△1-480组.各组质粒分别转染MCF-7细胞,Western blotting法检测AIF及AIF△1 -480蛋白的辐射诱导表达时程-效应(2.0 Gy照射后0、2、4、12、24和48 h)和剂量-效应(0、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0 Gy照射后24 h)规律.结果:经测序证实,RT-PCR获得的人AIF△1-480基因与预期一致,pEgr1-AIF△1-480经PCR和酶切鉴定完全正确;各组MCF-7细胞经2.0 Gy照射后0～48 h,AIF蛋白在各组中均有表达,从4h开始显著增加,4、12、24和48 h各组AIF表达与0h组比较差异有统计学意义(P＜0.05),48 h达到最大;而在pAIF△1-480和pEgr1-AIF△1-480组,AIF△1-480从2h开始表达,4、12、28和48 h各组AIF△1-480表达与2h比较差异有统计学意义(P＜0.05),24 h达到峰值;而且24和48 h时pEgr1-AIF△1-480组AIF△1-480表达较pAIF△△1-480组显著增加(P＜0.05).各组MCF-7细胞经0～5.0 Gy照射后24 h,各组均有AIF蛋白表达,而AIF△1-480只在pAIF△1-480和pEgr1-AIF△1-480组表达,二者均随着剂量增加而增加,0.2、0.5、1.0、2.0和5.0 Gy照射后各组AIF表达与0 Gy比较差异有统计学意义(P＜0.05),在5.0 Gy照射时达到最大,相同照射剂量pEgr1-AIF△1-480组AIF△1-480表达高于pAIF△1-480组.结论:成功构建Egr1介导的人截短型AIF重组表达载体pEgr1-AIF△1-480,AIF和AIF△1 -480蛋白在MCF-7细胞中的表达随照射时间延长和照射剂量增加而增加.