纳米雄黄脂质体的制备、特性检测和体外抗肿瘤细胞作用的研究

目的: 研究纳米雄黄脂质体的制备方法并对其特性进行检测.方法: 采用化学沉淀法先制备纳米级雄黄,薄膜分散-高压均质法制备纳米雄黄脂质体.用电子显微镜、能谱仪、原子荧光光谱仪、激光粒度分析仪对其进行特性研究,并研究其体外抗肿瘤细胞的能力.结果: 薄膜分散-高压均质法制备的雄黄纳米脂质体平均粒径为102.3 nm,分散性良好,球形或卵球形.能谱仪证实其中含有砷和硫的成分,脂质体的药物包封率为82.78%.体外作用于HepG2肝癌细胞显示其有良好的抑制生长作用.结论: 采用上述方法可以成功制备纳米级别的雄黄脂质体,粒径较小,符合纳米制剂的要求,稳定性良好,药物包封率高,并且具备良好的抗肿瘤细胞的作用.纳米雄黄脂质体是一种新型纳米级剂型,为传统中药在抗肿瘤方面的应用提供了新的思路.     

磁性阿克拉霉素纳米粒的研制和理化性质

目的制备纳米级磁性阿克拉霉素微粒，考察其理化性质和磁场响应性。方法运用化学沉淀法制备Fe3O4纳米颗粒，并与阿克拉霉素水溶液分散在正己烷油相体系。采用反相微乳液界面聚合的方法生成聚合物将水液滴包埋，由此制备内含磁性颗粒和阿克拉霉素的磁性纳米载药系统，并通过扫描电镜、透射电镜、动态光散射磁强计等考察磁性阿克拉霉素纳米粒的理化性质及体内外磁场响应性。结果磁性阿克拉霉素纳米粒平均粒径210m，阿克拉霉素载药率100％，包封率362％。制备过程中的各参数包括单体用量、体系油水相体积比例、有机溶剂的种类和乳化剂的用量等都会影响磁性阿克拉霉素纳米粒粒径和阿克拉霉素包封率。制备后4℃保存，3个月稳定性好。结论磁性阿克拉霉素纳米粒粒径小，载药率和包封率高，体外具有良好的磁场响应性。     

壳聚糖-猪牙皂皂苷纳米微球的制备及其工艺优化

目的以壳聚糖(CS)为载体制备壳聚糖-猪牙皂皂苷纳米微球(CS-SFGS-NPs),并考察其理化性质和体外释药性能。方法提取猪牙皂皂苷,利用紫外分光光度法测定皂苷含量。采用离子交联法制备壳聚糖-猪牙皂皂苷纳米微球,并以壳聚糖质量浓度、三聚磷酸钠(TPP)质量浓度、投料质量比为考察对象,以平均粒径、包封率为评价指标优化壳聚糖-猪牙皂皂苷纳米微球处方;采用Malvern粒度仪测定壳聚糖-猪牙皂皂苷纳米微球的粒径分布和Zeta电位,透射电子显微镜考察其形态;以透析法考察壳聚糖-猪牙皂皂苷纳米微球的体外释药行为。结果壳聚糖-猪牙皂皂苷纳米微球的最优处方:壳聚糖质量浓度为2.0 mg/m L、三聚磷酸钠质量浓度为1.5 mg/m L、壳聚糖-猪牙皂皂苷投料比为4∶1;制备的壳聚糖-猪牙皂皂苷纳米微球的包封率为84.7%±3.6%、粒径为(182.6±35.4)nm、Zeta电位为(+23.1±4.6)mV;透射电镜结果显示所制备的壳聚糖-猪牙皂皂苷纳米微球为类球形颗粒,大小分布较为均匀;壳聚糖-猪牙皂皂苷纳米微球在0.5h内的释放量低于40%。结论通过对处方的优化,制备得到的壳聚糖-猪牙皂皂苷纳米微球具有合适的粒径和包封率,并能达到缓释效果。     

三硫化二砷纳米微球的扫描电镜观察和图像分析

目的：对制备的砷类中药雌黄（三硫化二砷）纳米微球进行表征，为进一步探索纳米雌黄的抗癌机理提供实验基础。方法：（1）以砒霜、硫代乙酰胺、盐酸为原料，采用化学法制备雌黄纳米微球；（2）用扫描电镜、X射线能谱、图像分析系统对雌黄纳米微球进行分析表征。结果：实验制备的雌黄纳米微球电镜下呈圆形或椭圆形，分散性较好，图像分析系统示平均粒径为440nm。结论：采用化学法可制备雌黄纳米微球。     

反相微乳液法制备纳米四氧化三铁颗粒

目的 通过反相微乳液法制备纳米四氧化三铁(Fe3O4).方法 通过拟三角相图,确定环已烷、Triton X-100、正丁醇及水4组分体系的油包水型微乳液,电导率测定及染料扩散法判断体系为油包水(W/O)型反相微乳.利用该微乳液的"微型水池"制备了纳米级Fe3O4黑色颗粒,优化各反应物量的比例.通过红外谱图、电子扫描电镜、元素分析对所制备的Fe3O4纳米颗粒进行了表征.结果 确定拟三角相图中微乳液的区域,得到最适组分比例.当各反应物物质的量的比例n(Fe3+)∶n(Fe2+)∶n(OH-)=3∶2∶24时得到纯的Fe3O4黑色粉末.扫描电镜图显示实验结果的Fe3O4粒径<100 nm.结论 本实验配制了正已烷、Triton X-100、正丁醇、水组分体系反相微乳,并通过该体系制备了纳米Fe3O4.     

液相免疫体系胶体金粒径的选择及其应用

目的探讨不同粒径的金颗粒标记对液相免疫测定体系的影响。方法制备10、21、50nm三种不同粒径的金纳米颗粒并用于标记人绒毛膜促性腺激素（hCG）抗体,采用分光光度法和共振散射光谱法对金标抗和胶体金标记的免疫复合物分析测定。结果 10nm的胶体金标记体系具有较好的标记效率,工作曲线线性关系良好,用于实际样品测定,结果满意。结论胶体金标记的液相免疫共振散射光谱法测定体系宜选用粒径8～15nm的金颗粒。     

载肝癌细胞GPC3抗体的纳米级脂质超声微泡制备及体外寻靶研究

目的：探索制备载肝癌细胞磷酯酰肌醇蛋白多糖-3（glypican-3,GPC3）抗体的新型纳米级脂质超声微泡造影剂的方法,并评价其体外对肝癌细胞的靶向结合效果。方法：以机械振荡法制备纳米级脂质微泡,并通过光学显微镜及电子显微镜检测纳米微泡大小形态、粒径分布;生物素-亲和素桥接肝癌细胞GPC3抗体与纳米级脂质超声微泡,流式细胞仪检测微泡与抗体结合效率;免疫组化检测常见3种肝癌细胞的GPC3阳性表达;微泡体外与肝癌细胞靶向结合,激光共聚焦显微镜检测寻靶效果。结果：纳米脂质微泡呈圆形,分布均匀,无明显聚集,粒径范围约350~450 nm。微泡与抗体结合效率达85.05%,人SMMC-7721、HepG2及Huh7肝癌细胞GPC3表达阳性,激光共聚焦显微镜显示载GPC3抗体纳米级脂质微泡可与肝癌细胞特异性结合。结论：本研究成功制备了具备靶向性的新型纳米级脂质超声微泡,生物素-亲和素桥接GPC3抗体可特异性结合肝癌细胞,达到靶向性识别效果,为微泡的靶向诊断及治疗研究奠定了基础。     

靶向治疗用Fe_3O_4 及其白蛋白包被磁性纳米粒子的制备

目的制备用于肿瘤靶向治疗的Fe3O4及其白蛋白包被的磁性纳米粒子.方法采用部分还原法制备Fe3O4纳米粒子,通过微乳化方法制备了白蛋白包被的Fe3O4磁性纳米颗粒.结果Fe3O4粒径为10nm左右,X-射线粉末衍射分析显示Fe3O4纳米磁性微粒是典型的尖晶石构型;白蛋白包被的磁性纳米粒子直径在200nm左右.结论Fe3O4及其白蛋白包被的磁性纳米粒子适于用于肿瘤靶向治疗的进一步研究.     

新型纳米微泡超声造影剂的制备及超声显像研究

【目的】 制备可稳定显像的新型小粒径纳米级超声微泡造影剂,并评价其体内外超声显像效果。【方法】 通过薄膜-水化、声振-通气及多级分离等多步骤方法制备纳米级脂质微泡,并针对制备过程中的主要影响因素设计了正交试验,筛选出粒径小、重复性好的实验条件。通过光学显微镜及Zeta粒径仪检测纳米微泡大小形态、粒径分布,体外及动物体内超声显像检测其增强显像效果。【结果】 纳米脂质微泡呈圆形,分布均匀,无明显聚集,粒径范围238.6 ~ 340.7 nm,均值为 (276.0 ± 24.1)nm,Zata电位:(-14.0 ± 0.6)mV。体外超声检测在超声造影状态下能持续稳定显像,进入到二维灰阶状态时,瞬间破坏完全,显像效果消失,粒径变小。体内超声显像在造影状态下纳米微泡可明显增强大鼠肝脏、肾脏回声信号。【结论】 通过本研究方法成功制备了粒径小、可稳定显像的新型纳米级超声造影剂,在二维灰阶高机械指数状态下该纳米微泡造影剂可被瞬间破坏,这为进一步肿瘤组织血管外靶向显像及肿瘤局部药物释放研究奠定基础。     

蜂毒素全氟碳纳米囊的制备及评价

目的 制备蜂毒素全氟碳纳米囊,考察其外观特征、粒径、Zeta电位、电镜形态、包封率及稳定性.方法 以全氟碳为纳米核心,通过高压均质法制备蜂毒素纳米囊.采用透射电镜和激光粒度分析仪检测纳米颗粒形态、粒径及Zeta电位,双波长考马斯亮蓝法测定纳米颗粒载药包封率.将制备的蜂毒素全氟碳纳米囊乳液置于4℃下密封贮藏30 d,以纳...     

Induction of SiHa Cells Apoptosis by Nanometer Realgar Suspension and Its Mechanism

The effects of nanometer realgar uterine cervix cancer cell line SiHa cells and suspension on proliferation and apoptosis of human oncogenic genes HPV16E6/E7 were investigated. A ＂micro-jet effiux＂ strategy was used for the preparation of nanometer realgar suspension. SiHa cells were treated with nanometer Realgar suspension in various concentrations （6.25, 12.5, 25 and 50 mg/L） for different durations （12, 24, 48 and 72 h）. The inhibitive effect of nanometer realgar suspension on growth of SiHa cells was detected by MTT method. Special morphological changes of apoptosis were observed by transmission electron microscopy （TEM） and DNA fragments electrophoresis. The apoptotic rate was quantified by flow cytometry （FCM）. The expression of HPV 16E6/E7 mRNA and protein was assayed by RT-PCR and Western blot respectively. The results showed after being treated with 25--50 mg/L nanometer realgar suspension for 48 h, the survival rate of SiHa cells was decreased, and apoptotic rate markedly increased in a time- and concentration-dependent manner. TEM and DNA electrophoresis revealed the special morphological changes of apoptosis. The apoptotic rate of SiHa cells treated with nanometer realgar suspension was significantly higher than in the control group （P〈0.01）, and G0/G1 phase arrest appeared following treatment with nanometer realgar suspension in 25 and 50 mg/L for 48 h. RT-PCR and Western blot assay indicated that nanometer realgar suspension reduced the HPV16E6/E7 gene expression. Nanometer realgar suspension could inhibit the proliferation and induce apoptosis of SiHa cells. The mechanism may be related to the down-regulation of the HPV16E6/E7 gene expression.     

Induction of SiHa Cells Cells Apoptosis by Nanometer Realgar Suspension and Its Mechanism

The effects of nanometer realgar suspension on proliferation and apoptosis of human uterine cervix cancer cell line SiHa cells and oncogenic genes HPV16E6/E7 were investigated. A "micro-jet efflux" strategy was used for the preparation of nanometer realgar suspension. SiHa cells were treated with nanometer Realgar suspension in various concentrations (6.25,12.5,25 and 50mg/L) for different durations (12,24,48 and 72h). The inhibitive effect of nanometer realgar suspension on growth of SiHa cells was detected by MIT method. Special morphological changes of apoptosis were observed by transmission electron microscopy (TEM) and DNA fragments electrophoresis. The apoptotic rate was quantified by flow cytometry (FCM). The expression of HPV16E6/E7 mRNA and protein was assayed by RT-PCR and Western blot respectively. The results showed after being treated with 25-50mg/L nanometer realgar suspension for 48h, the survival rate of SiHa cells was decreased, and apoptotic rate markedly increased in a time- and concentration-dependent manner. TEM and DNA electrophoresis revealed the special morphological changes of apoptosis. The apoptotic rate of SiHa cells treated with nanometer realgar suspension was significantly higher than in the control group (P<0.01), and G0/G1 phase arrest appeared following treatment with nanometer realgar suspension in 25 and 50mg/L for 48h.RT-PCR and Western blot assay indicated that nanometer realgar suspension reduced the HPV16E6/E7 gene expression. Nanometer realgar suspension could inhibit the proliferation and induce apoptosis of SiHa cells. The mechanism may be related to the down-regulation of the HPV16E6/E7 gene expression.     

魔芋超细及纳米粉末的减肥特性研究

目的　考察魔芋超细及纳米粉末对营养性肥胖大鼠的减肥作用。方法　用紫外可见分光光度法测定大鼠血液中的甘油三酯、胆固醇和高密度脂蛋白含量 ,用分光光度法测定大鼠血糖值 ,通过测量体重变化及 L ee's系数考察魔芋超细及纳米粉末的减肥效果。结果　与魔芋精粉及魔芋多糖相比 ,魔芋超细及纳米粉末可明显降低营养性肥胖大鼠的体重和 L ee's系数 (P<0 .0 5 ) ,还可明显降低营养性肥胖大鼠血液中的甘油三酯、胆固醇和高密度脂蛋白含量 (P<0 .0 5 )。结论　魔芋超细及纳米粉末具有比魔芋精粉及魔芋多糖更明显的减肥作用。     

纳米雄黄肾毒性的代谢组学研究

采用色谱-质谱联用的代谢组学方法分析纳米雄黄对大鼠肾脏中内源性小分子代谢物的影响,研究代谢物谱变化与肾毒性之间的关联性,为纳米雄黄毒性机制的深入研究、纳米雄黄药物的临床应用提供依据。将SD大鼠随机分为溶媒对照组、雄黄低中高剂量组和纳米雄黄低中高剂量组(40,200,1 000 mg/kg)共7组,连续灌胃28 d后处死大鼠,收集血清和肾脏样本。经血生化和组织病理学检查,证实纳米雄黄可导致肾脏损伤,且受损程度呈剂量依赖性。同时采用LC-MS和GC-MS对肾脏中代谢物变化进行整体表征,利用模式识别进行数据挖掘,发现高剂量纳米雄黄组大鼠肾脏样本中半胱氨酸、蛋氨酸、脯氨酸及LysoPE、LysoPC等32个代谢物含量较对照组均发生明显改变,提示上述代谢物与纳米雄黄肾毒性相关,为潜在毒性标志物。代谢通路分析结果表明,纳米雄黄对肾脏的毒性机制可能与氨基酸和脂质代谢等有关。     

复方黄黛片、雄黄与砷酸钠的毒性比较

目的比较含砷的复方黄黛片、雄黄与砷酸钠的毒性。方法小鼠一次性灌胃给药,8h后检测血生化及肝肾病理变化;测定肝肾组织中的砷蓄积量及砷毒性敏感基因的表达。结果砷酸钠组肝肾砷蓄积量显著增加,并伴肝肾功能和病理损伤,MT-1、MT-2、HO-1和IL-1β基因表达明显上调。复方黄黛片组和雄黄组的肝肾功能及病理检查与正常对照组相似,未见异常。二者砷蓄积量仅为砷酸钠组的1/25;上述基因表达仅轻微升高。结论复方黄黛片与雄黄的急性毒性远小于砷酸钠,不宜单用总砷含量评价含砷中成药的毒性。     

雄黄诱导K562／ADM细胞凋亡的研究

探讨雄黄诱导多药耐药细胞Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞凋亡的能力,并初步探讨其分子机制,方法：采用荧光标记形态学观察,流式细胞仪进行ＤＮＡ分析及测定细胞表面ｐ－ｇｐ的表达。结果显示：雄黄能明显诱导Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞凋亡,且在４８ｈ后ｐ－ｇｐ的表达下调。     

雄黄诱导卵巢癌细胞珠SKOV3和COC1凋亡的实验研究

目的:探讨雄黄对卵巢癌细胞株SKOV3和COC1增殖能力的影响及可能机理。方法:采用不同浓度雄黄溶液作用于两珠细胞,用MTT法检测生长抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率及分析细胞周期;原位末端标记法(TUNEL)观察细胞凋亡形态学。结果:不同浓度的雄黄溶液对卵巢癌细胞株SKOV3及COC1均有不同程度的生长抑制作用,具有浓度和时间依赖性,且COC1比SKOV3对雄黄更敏感。结论:雄黄对卵巢癌细胞有生长抑制作用,诱导细胞发生G1期阻滞是雄黄抑制卵巢癌细胞生长作用的可能机制之一。     

雄黄外用对三阴性乳腺癌上皮间质转化的调控作用研究

  目的  研究中药雄黄外用对三阴性乳腺癌上皮间质转化的作用及调控机制。  方法  采用人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞构建裸鼠人乳腺癌移植瘤模型后, 将裸鼠随机分为模型组、雄黄外用组、卡培他滨片组, 干预6周后取材。通过HE染色、免疫组化、Western blot、qPCR等方法观察雄黄外用对乳腺癌肿瘤上皮间质转化的调控作用, 同时对动物血常规, 肝、肾功能指标进行检测。  结果  雄黄外用可使乳腺癌组织出现一定程度的坏死, 抑瘤率为30.2%;与模型组比较, 雄黄外用组裸鼠肝、肾功能及血常规检测等未见明显异常; 肿瘤组织免疫组化结果提示, 雄黄外用可增强上皮钙黏蛋白(E-cadherin)表达, 降低波形蛋白(Vimentin)表达; Western blot和qPCR结果提示: 与模型组比较, 雄黄外用可上调肿瘤组织中E-cadherin表达, 减弱Vimentin、Twist1、TGF-β1的表达, 差异具有统计学意义(P < 0.05)。  结论  雄黄外用可抑制人三阴性乳腺癌移植瘤在体生长, 其机制与增强E-cadherin表达, 降低Vimentin、Twist1、TGF-β1的表达, 实现对乳腺癌上皮间质转化的调控相关。      

与时俱进的中药现代化制备技术——郭立玮教授谈纳米中药与微米中药

阐述了纳米及微米中药的概念与作用特点，介绍了南京中医药大学植物药深加工工程研究中心中药超细微化研究的进展，并针对中药超细微化的关键技术问题提出了有关设想。