丝裂素活化蛋白激酶参与AngⅡ诱导心肌细胞血小板衍生生长因子受体的表达

目的探讨丝裂素活化蛋白激酶在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌细胞血小板衍生生长因子受体-β(PDGF-β)表达中的作用.方法分离纯化培养的乳鼠心肌细胞,以10-7mol@L-1AngII刺激为AngII组;以10-5 mol@L-1 PD98059(一种丝裂素活化蛋白激酶抑制剂)预孵育30min10-7后再用AngII刺激为PD98059组,以正常的乳鼠心肌细胞为对照组;免疫印迹法测定培养24 h时心肌细胞PDGF-β受体的含量.结果AngII刺激培养24 h的乳鼠心肌细胞PDGF-β受体表达增强(P＜0.05),PD98059可部分抑制AngⅡ对PDGF-β受体表达的诱导作用.结论丝裂素活化蛋白激酶参与AngⅡ上调心肌细胞PDGF-β受体表达的信号转导途径.     

磷脂酶C在血管紧张素II诱导心肌细胞血小板衍生 生长因子受体表达中的作用

目的　探讨磷脂酶C在血管紧张素II(AngII)诱导心肌细胞血小板衍生生长因子受体 - β(PDGF - β)表达中的作用。 方法　分离纯化培养的乳鼠心肌细胞 ,以 10 -7mol·L-1AngII刺激为AngII组 ,以 10 -5mol·L-1U73 12 2 (一种特异性磷脂酶C抑制剂 )预孵育 3 0min为U73 12 2组 ,以正常的乳鼠心肌细胞为对照组 ,免疫印迹法测定培养 6h时心肌细胞PDGF- β受体的含量。 结果　AngII刺激培养 6h的乳鼠心肌细胞PDGF - β受体表达增强 (P <0 .0 5 ) ,U73 12 2可部分抑制AngII对PDGF - β受体表达的诱导作用。 结论　磷脂酶C参与AngII上调心肌细胞PDGF - β受体表达的信号转导途径     

不同水平干预对AngII作用心肌细胞活力的影响

目的 :通过使用血管紧张素II(AngII)两种亚型受体AT1 R、AT2 R拮抗剂 (Valsartan和CGP4 2 112A)及丝裂素活化蛋白激酶 (MAPK)特异阻断剂 ,观察对心肌细胞活力的影响 ,探讨从受体和MAPK信号不同水平的阻断是否能有效干预心肌细胞能量代谢 ,为寻找新的心衰预防与治疗药物提供实验依据。方法 :应用MTT比色法测定AngII对培养心肌细胞活力的影响和AngII受体拮抗剂及MAPK抑制剂的干预作用。 结果 :AngII刺激心肌细胞在10 8～ 10 5mol/L浓度范围 ,一定时间内呈浓度依赖性增加心肌细胞活力变化 ;使用Valsartan、PD980 5 9可有效抑制AngII引起的心肌细胞活力改变 ;CGP4 2 112A干预后对AngII作用无明显影响。 结论 :AngII的作用主要通过AT1 R介导 ;与细胞增殖、分化密切相关的ERK信号介入了心肌细胞能量代谢的过程 ,这对了解AngII在心功能不全代偿和心力衰竭发生中的作用及临床上探讨细胞信号系统不同层面对心衰进行干预具有重要参考价值。     

丝裂素活化蛋白激酶在AngⅡ上调培养的血管平滑肌细胞转化生长因子-β受体表达中的作用

目的:探讨丝裂素活化蛋白激酶在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)转化生长因子-β受体(TGF-βR1)上调中的作用。方法:培养大鼠主动脉VSMC,以10-7mol/L AngⅡ刺激作为AngⅡ组,AngⅡ刺激前分别应用10-5mol/L氯沙坦(Losartan)、PD98059预处理,以正常的VSMC为对照组,细胞免疫化学法测定培养12h时VSMC TGF-βR1的含量。结果:与对照组相比,AngⅡ刺激培养12h的VSMC TGF-βR1表达上调(P<0.01);AngⅡ受体AT1型拮抗剂Losartan使TGF-βR1表达显著降低(P<0.01),丝裂素活化蛋白激酶抑制剂PD98059能显著降低TGF-βR1表达(P<0.05)。结论:AngⅡ通过AT1上调TGF-βR1的表达,丝裂原活化蛋白激酶参与AngⅡ的胞内信号转导。     

不同水平干预对AngⅡ作用心肌细胞活力的影响

目的：通过使用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)两种亚型受体AT1-R、AT2-R拮抗剂(Valsartan和CGP42112A)及丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)特异阻断剂，观察对心肌细胞活力的影响，探讨从受体和MAPK信号不同水平的阻断是否能有效干预心肌细胞能量代谢，为寻找新的心衰预防与治疗药物提供实验依据。方法：应用MTT比色法测定AngⅡ对培养心肌细胞活力的影响和AngII受体拮抗剂及MAPK抑制剂的干预作用。结果：AngⅡ刺激心肌细胞在10^-8～10^-5mol／L浓度范围，一定时间内呈浓度依赖性增加心肌细胞活力变化；使用Valsartan、PD98059可有效抑制AngII引起的心肌细胞活力改变；CGP42112A干预后对AngⅡ作用无明显影响。结论：AngⅡ的作用主要通过AT1-R介导；与细胞增殖、分化密切相关的ERK信号介入了心肌细胞能量代谢的过程，这对了解AngⅡ在心功能不全代偿和心力衰竭发生中的作用及临床上探讨细胞信号系统不同层面对心衰进行干预具有重要参考价值。     

碱性成纤维细胞生长因子拮抗大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的机制

目的 :研究碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor ,bFGF)拮抗大鼠心肌细胞缺氧 /复氧(hypoxia/reoxygenation ,H/R)损伤的机制。 方法 :H/R处理的大鼠心肌细胞的孵育液中 ,对照组不加任何处理因素 ,其它各组分别加bFGF(10 μg·L-1)、bFGF与丝裂素活化蛋白激酶 (mitogen activatedproteinkinase,MAPK)抑制剂PD980 5 9(5 0 μmol·L-1)、蛋白激酶C(proteinkinaseC ,PKC)抑制剂H7(40 μmol·L-1)、一氧化氮合酶 (nitricoxidesynthase ,NOS)抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯 (NG nitro L argininemethylester,L NAME ,5 0 μmol·L-1)。孵育完毕 ,测定细胞活力、ATP含量及孵育液中乳酸脱氢酶 (lactatedehydrogenase,LDH)含量。 结果 :H/R组心肌细胞活力较对照组降低 32 % (P <0 .0 1) ,细胞ATP含量减少 5 8% (P <0 .0 1) ,孵育液中LDH活性增加 5 .8倍 (P <0 .0 1) ;bFGF组心肌细胞活力较H/R组增高 17% (P <0 .0 1) ,细胞ATP含量增加 45 % (P <0 .0 1) ,孵育液中LDH活性降低 31% (P <0 .0 1) ,细胞PKC、MAPK活性分别增加 32 % (P <0 .0 1)和 10 % (P <0 .0 5 )。PD980 5 9、H7、PD980 5 9+H7及L NAME各组心肌细胞活力较bFGF组分别降低 13%、17%、2 4%和 2 7% (均P <0 .0 1) ,细胞ATP含量分别减少 2     

血管紧张素Ⅱ诱导乳鼠心肌细胞凋亡

目的:观察血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AⅡ)对心肌细胞凋亡的诱导作用及其作用受体.方法:体外培养的Wistar乳鼠心肌细胞,以AⅡ10-11～10-5 mol*L-1孵育24 h,采用流式细胞术及TUNEL方法检测凋亡细胞;然后加入AⅡⅠ型受体阻断剂氯沙坦与AⅡ共同孵育,观察其对AⅡ诱导的心肌细胞凋亡的影响.结果: AⅡ 10-11 mol*L-1组凋亡细胞数量与对照组差异无显著性[(14.63±3.18)% vs (10.55±2.67)%, P>0.05]; AⅡ10-9 mol*L-1组凋亡心肌细胞数量显著高于对照组[(22.18±3.59)% vs (10.55±2.67)%, P<0.01]; AⅡ浓度为10-9 mol*L-1、10-7 mol*L-1和10-5 mol*L-1三组间,凋亡细胞数量差异无显著性[(22.18±3.59)%, (19.07±3.27)%, (25.06±5.64)%,P>0.05].氯沙坦抑制AⅡ诱导的心肌细胞凋亡[(12.87±4.31)% vs(19.07±3.27)%,P<0.05].TUNEL染色支持以上结果.结论:血管紧张素Ⅱ可以诱导乳鼠心肌细胞凋亡,其作用可能通过AⅡⅠ型受体介导.     

钠尿肽抑制SD乳鼠心肌细胞增殖

目的　比较心房钠尿肽 (ANP)、血管钠肽 (VNP)及C-型钠尿肽 (CNP)抑制心肌细胞增殖的效应 .方法　体外培养 SD乳鼠心肌细胞 ,用蛋白激酶 C激动剂佛波酯 (PMA)刺激心肌细胞增殖 ,以总蛋白含量和噻唑蓝 (MTT)比色吸光度值为指标 ,观察 3种钠尿肽抑制心肌细胞增殖的效应 .结果　PMA(10 - 9～ 10 - 7mol· L- 1 )致使心肌细胞的总蛋白含量和MTT吸光度值显著升高 (P<0 .0 5 ) ,ANP(10 - 8～ 10 - 6 mol·L- 1 ) ,VNP和 CNP(10 - 7～ 10 - 6 mol· L- 1 )均可显著降低PMA(10 - 8mol· L- 1 )刺激的心肌细胞总蛋白含量和 MTT吸光度值 (P<0 .0 5 ) .结论　 PMA对心肌细胞有促增殖作用 ,ANP,VNP和 CNP均可抑制 PMA刺激的心肌细胞增殖 ,抑制效应以 ANP最强     

血管紧张素Ⅱ诱导乳鼠心肌细胞凋亡的研究

目的观察血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ, AngⅡ)/1型受体拮抗剂(AT1R antagonist)对心肌细胞凋亡的影响及其机制.方法体外培养的Wistar乳鼠心肌细胞,培养96 h后随机分为3组,对照组:无血清培养2、6、12、24 h;AngⅡ组:以10-7 mol/LangⅡ刺激2、6、 12、 24 h,用TUNEL方法检测凋亡细胞数,免疫组化观察Bcl-2蛋白染色,荧光法检测caspase-3活性;AngⅡ AT1R拮抗剂伊贝沙坦(Irbesartan)组:以10-7 mol/LangⅡ与10-5 mol/L伊贝沙坦共同孵育,观察其对心肌细胞凋亡的影响.结果随着时间的延长AngⅡ组TUNEL染色凋亡心肌细胞数量显著增高;同时伴有Bcl-2蛋白表达下降,caspase-3活性增高;加入伊贝沙坦后,TUNEL染色凋亡细胞数下降,caspase-3活性下降.结论血管紧张素Ⅱ可以诱导乳鼠心肌细胞凋亡,伊贝沙坦抑制AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡,其作用可能通过1型受体介导,AngⅡ诱导心肌细胞凋亡是以caspase依赖方式,Bcl-2蛋白参与调节.     

钙调蛋白激酶Ⅱ信号转导途径在血管紧张素Ⅱ致心肌肥大反应中的调控作用

目的 研究钙调蛋白激酶Ⅱ(CAMKⅡ)途径在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导乳鼠心肌细胞肥大反应中的作用.方法 原代培养乳鼠心肌细胞,分为对照组(不加任何干预因素),肥厚组(Ang Ⅱ刺激心肌细胞肥大),缬沙坦组(缬沙坦直接作用于心肌细胞)和预处理组(缬沙坦进行干预30 min后,加入AngⅡ刺激心肌细胞).测定心肌细胞3H-亮氨酸掺入作为心肌细胞肥大的指标;用RT-PCR和Western blot法检测心肌细胞CAMK Ⅱδ的mRNA和蛋白质表达的水平.结果 ①AngⅡ在10-9～10-6 mol/L范围内剂量依赖性地增加乳鼠心肌细胞的3H-亮氨酸掺入.选择10-7 mol/L AngⅡ作用心肌细胞48 h为成功的心肌细胞肥厚模型.② AngⅡ(10-7 mol/L)处理心肌细胞48 h,可使3H-亮氨酸掺入明显增加,该作用可被缬沙坦明显抑制.③与对照组相比,肥厚组心肌的CAMKⅡδ mRNA水平显著增加;而缬沙坦预处理组较之肥厚组则显著下降.④与对照组相比,肥厚组心肌的CAMK Ⅱδ的蛋白质表达显著增加;而缬沙坦预处理组的CAMKⅡδ蛋白质表达水平较之肥厚组则显著下降.结论 ①CAMKⅡ信号转导通路激活是AngⅡ介导的心肌肥大反应重要环节之一.②缬沙坦抑制Ang Ⅱ介导心肌肥大反应的机制可能部分是通过抑制CAMKⅡδ的表达而实现的.     

血管紧张素ⅡⅠ型受体反义寡核苷酸体外逆转心肌细胞肥大

目的:用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)Ⅰ型受体(AT1R)反义寡核苷酸(AS ODN)逆转心肌细胞肥大。方法:将培养的乳鼠心肌细胞分为正常组、AngⅡ组、AT1R AS ODN组,观察AngⅡ及AT1R AS ODN对心肌细胞 c jun基因表达、总蛋白合成、体积、搏动频率的影响。结果:AngⅡ可引起心肌细胞 c jun基因表达增多、搏动频率增快、体积增大、总蛋白合成增加。AT1R AS ODN能逆转 AngⅡ的上述作用。结论:AT1R AS ODN能有效逆转 AngⅡ诱导的心肌细胞肥大。     

mAKAPp在Angll促新生大鼠心肌细胞 肥大中的作用及其机制

目的研究mAKAPβ蛋白在AngⅡ促新生大鼠心肌细胞肥大中的作用及其机制。方法观察AngⅡ刺激下大鼠心室肌细胞形态学变化及细胞内mAKAPβ蛋白表达水平的变化。使用RNA干扰技术抑制mAKAPβ蛋白表达,观察在此条件下AngⅡ促新生大鼠心肌细胞肥大作用的变化,同时观察ERK2蛋白磷酸化水平的变化。结果在AngⅡ刺激下,大鼠心肌细胞面积明显增大,ANP表达水平明显升高,P-ERK水平明显升高,但mAKAPβ蛋白表达水平无明显改变。使用RNA干扰技术抑制mAKAPβ蛋白表达后,AngⅡ促新生大鼠心肌细胞肥大的表现明显减弱甚至消失。结论AngⅡ有明显的促新生大鼠心肌细胞肥大作用,mAKPβ蛋白在此过程中发挥着重要作用。     

Effect of Atorvastatin on Expression of Peroxisome Proliferator-activated Receptor Beta/delta in AngiotensinⅡ-induced Hypertrophic Myocardial CellsIn Vitro

Objective To explore the effect of atorvastatin on cardiac hypertrophy and to determine the potential mechanism involved. Methods Anin vitro cardiomyocyte hypertrophy from neonatal rats was induced with angiotensinⅡ (AngⅡ) stimulation. Before AngⅡ stimulation, the cultured rat cardiac myocytes were pretreated with atorvastatin at different concentrations (0.1, 1, and 10μmol/L). The following parameters were evaluated: the myocyte surface area,3H-leucine incorporation into myocytes, mRNA expressions of atrial natriuretic peptide, brain natriuretic peptide, matrix metalloproteinase 9, matrix metalloproteinase 2, and interleukin-1β, mRNA and protein expressions of theδ/β peroxisome proliferator-activated receptor (PPAR) subtypes. Results It was shown that atorvastatin could ameliorate AngⅡ-induced neonatal cardiomyocyte hypertrophy in the area of cardiomyocytes,3H-leucine incorporation, and the expression of atrial natriuretic peptide and brain natriuretic peptide markedly. Meanwhile, atorvastatin also inhibited the augmented mRNA level of several cytokines in hypertrophic myocytes. Furthermore, the down-regulated expression of PPAR-δ/β at both the mRNA and protein levels in hypertrophic myocytes could be significantly reversed by atorvastatin treatment. Conclusions Atorvastatin could improve AngⅡ-induced cardiac hypertrophy and inhibit the expression of cytokines. Such effect might be partly achieved through activation of the PPAR-δ/β pathway.     

PPARα／PGC—lα信号通路对大鼠肥大心肌细胞能量代谢的影响

目的：探讨过氧化物酶体增殖物活化受体仪（PPARα）／过氧化物酶体增殖物激活受体,辅激活子la（PGC一1仅）信号通路对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导大鼠肥大心肌细胞能量代谢的影响。方法：将原代培养的新生大鼠心肌细胞分为对照组（C组）、Ang刺激组（AngⅡ组）、PPARa激活剂及非诺贝特预处理组,即（AngII＋F）组,C组予生理盐水处理,AngII组加入AngⅡ（终浓度10mmol／L）刺激24h建立肥厚心肌细胞模型,（AngⅡ＋F）组心肌细胞在AnglI刺激前24h加非诺贝特（10Ixmol／L）预处理;HE染色后采用软件检测细胞表面积,用Western-blot检测心肌细胞中PPARa、PGC-1仅和腺苷酸转运体（ANT）蛋白表达水平,用高效液相层析法（HPLC）测量线粒体内腺苷酸含量,氚标iE--磷酸腺苷（3H-ADP）掺入法检测线粒体膜ANT转运活性。结果：与AngII组相比,非诺贝特可使PGC·la、ANT表达上调（P〈0．05）,细胞内线粒体内高能磷酸盐含量则未发现有显著变化（P〉O．05）,但显著逆转了AnglI诱导的心肌细胞肥大,改善了AnglI引起的ANT转运活性下降（P〈0．05）。结论：PPARa／PGC-la信号通路激活能有效预防心肌细胞肥大,可改善心肌能量代谢,对缺血后心肌有保护作用。     

吡哆胺和替米沙坦对血管紧张素II诱导的大鼠心肌细胞氧化应激的影响

 目的 探讨吡哆胺和替米沙坦对血管紧张素II诱导的大鼠心肌细胞氧化应激的影响。方法 大鼠心肌细胞培养并随机分为正常对照组【C组】,血管紧张素Ⅱ组【10-6mol/L,AngⅡ组】,吡哆胺组【吡哆胺（10 mmol/L）+ AngⅡ（ 10-6mol/L）,P组】,替米沙坦组【替米沙坦（10-6mol/L）+ AngⅡ （10-6mol/L）,T组】,联合治疗组【替米沙坦（10-6mol/L)＋吡哆胺（10 mmol/L）+ AngⅡ（ 10-6mol/L）,TP组】。 流式细胞仪检测细胞上清液中的活性氧簇（ROS）浓度,硫代巴比妥酸法（TBA）测定丙二醛（MDA）浓度,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物岐化酶（SOD）活力,荧光实时定量PCR方法检测心肌细胞所表达的晚期糖基化终产物受体（RAGE）mRNA表达量。 结果 与AngⅡ组比较,T组、P组及TP组MDA、ROS浓度均显著降低、SOD活力显著升高（P<0.05）;与T组比较,P组、TP组的ROS浓度明显降低、SOD活力明显升高（P<0.05）;与AngⅡ组比较,T组、P组和TP组RAGE mRNA表达量明显降低（P<0.01）;与T组、P组比较,TP组的RAGE mRNA表达进一步降低（P<0.05）。结论 吡哆胺和替米沙坦协同下调大鼠心肌细胞RAGE mRNA的表达,二者均可改善氧化应激,但吡哆胺较替米沙坦强。     

Ghrelin对血管紧张素Ⅱ诱导的脐静脉内皮细胞 氧化应激和内皮功能损伤的影响

目的：探讨促生长激素释放肽（ghrelin）对血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ, Ang Ⅱ）诱导的离体培养的脐静脉内皮细胞（human umbilicus vein endothelial cell-12,HUVEC-12）损伤的保护作用。方法：(1)在培养的人脐静脉内皮细胞中加入10-9~10-6mol/L AngⅡ共培养24 h,或用10-9~10-6mol/L ghrelin预处理2 h后与10-6mol/L AngⅡ共培养24 h。用MTT法测量内皮细胞活力和用AnnexinV-FITC凋亡试剂盒在流式细胞仪下测量内皮细胞凋亡率。(2)HUVEC用10-9,10-8,10-7,10-6mol/L AngⅡ分别培养3,6,12或24 h,10-9,10-8,10-7或10-6 mol/L ghrelin预处理2 h后与10-6mol/L AngⅡ共培养24 h。生长激素促分泌剂受体1a(growth hormone secretagogue receptor 1a,GHSR1a)受体阻断剂 ［D-Lys3］GHRP-6加入 10-6 mol/L ghrelin预处理2 h后与10-6mol/L AngⅡ共培养24 h组,DCF荧光探针法测细胞内活性氧（reactive oxygen species, ROS）。(3)HUVEC分别与 10-9,10-8,10-7或10-6mol/L AngⅡ和 ghrelin共培养24 h,与10-6mol/L AngⅡ孵育3,6,12或24 h,或10-9,10-8,10-7或10-6mol/L ghrelin预处理30 min,1 h或2 h后与10-6mol/LAngⅡ培养24 h,加入丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶信号通路（mitogen-activated protein kinase /extracullar signal regulated kinase 1/2,MAPK/ERK1/2）信号通路抑制剂PD98058、磷脂酰肌醇3-激酶/丝-苏氨酸激酶（phosphoinositide-3-kinase/serine threonine kinase,PI3K/Akt ）阻断剂 wortmannin和［D-Lys3］GHRP-6 共培养24 h,与用AngⅡ和ghrelin孵育的HUVEC 比较上清液中NO产量,HUVEC用ghrelin,PD98059, wortmannin, ［D-Lys3］GHRP-6预处理2 h后与10-6mol/L AngⅡ共培养24 h,或用ghrelin加上PD98059,wortmannin及［D-Lys3］GHRP-6预处理2 h后与10-6mol/L AngⅡ共培养24 h。内皮细胞上清中的一氧化氮（nitric oxide, NO）用Griess法测量。(4)HUVEC用空白对照或AngⅡ在有或没有用ghrelin或ghrelin和wortmannin 一起预处理的情况下孵育,用免疫印迹法（Western blot ）测量内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase, eNOS）的蛋白表达及丝苏氨酸激酶（serine threonine kinase,Akt）磷酸化蛋白表达。结果：AngⅡ引起内皮细胞损伤,增加HUVEC细胞凋亡率,减少培养的HUVEC细胞上清中NO含量,而ghrelin保护HUVEC免受AngⅡ损伤;Ghrelin减少与AngⅡ共同孵育的HUVEC ROS的产生。这种作用被［D-Lys3］GHRP-6消除。PD98059能阻止AngⅡ导致的HUVEC分泌NO减少,Wortmannin和［D-Lys3］GHRP-6消除Ghrelin保护HUVEC释放NO的作用;AngⅡ减少eNOS 的表达,但ghrelin能增加eNOS表达,Wortmannin消除Ghrelin的这种作用;Ghrelin 能刺激p-Akt的表达并在10~20 min达到高峰。结论：Ghrelin在AngⅡ导致的HUVEC损伤中起保护作用,其机制与通过GHSR1a受体减少氧化应激、增加eNOS蛋白表达和激活PI3K/Akt信号通路有关。     

硫化氢对淀粉样前体蛋白代谢途径的影响

目的:观察硫化氢(H2S)对PC12细胞淀粉样前体蛋白(APP)代谢途径的影响,探讨可能的细胞信号机制.方法:用不同浓度硫氢化钠(NaHS,50、100和200 μmol·L-1)作用PC12细胞1和18 h,Western blotting法检测APP、C99、C83、磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(PI3...